抗MYCT-1单克隆抗体的制备及鉴定
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究表 明 ＭＹ Ｔ１基 因广 泛 表 达 于多 种 正 常组 织 ， Ｃ－ 在
１２ ４ 克 隆 细胞 株 的筛 选培 养 ．．
包 被用 抗 原 为合
成多 肽 ， 闭后加 入杂交瘤 培养 上 清 ， Ｓ２０细胞 封 以 ｐ／ 培养 上清液作 为 阴性 对 照 。二 抗 为羊 抗小 鼠 Ｉ ｇ Ｇ—
Ｈ Ｐ标记 物 ， Ｔ Ｂ底 物显 色后 ， 标仪 测 定 Ａ ５ Ｒ 经 Ｍ 酶 ４０
胃癌 、 喉癌 、 肝癌 、 腺 癌 等多 种 恶性 肿 瘤 组织 中表 乳 达下 调［－ｊ ２ ５。为进一 步研 究 ＭＹ Ｔ１ 因的生 物 学 Ｃ－基 功能及 肿瘤发 生 、 展 中的作 用 ， 室利用体 外合 成 发 本 多肽作 为抗原 ， 制备 了抗 ＭＹ Ｔ１单克 隆抗 体 ， 对 Ｃ． 并 其进行 鉴定 。
龄， 雌性 ， 质量 ｌ ２ ） 购 自北 京生 物制 品研 究所 ７— ０ｇ ，
动 物部 。
１ ２ 方 法 ．
１２７ Ｗｅｔｎｂｏ检 测 ｍ ｂ的特异性 ．． ｓｒ ｌ ｅ ｔ Ａ
将 Ｋ 蛋 ｕ【
白及 ⅪＨ Ｙ Ｔ １ Ｍ Ｃ － 融合 蛋 白经 Ｓ ＳＰ Ｇ Ｄ ．Ａ Ｅ电泳 后 ， 电
标准 ， 扩大培 养后液 氮冻存 。
１２５ 小 鼠腹水 的制备 ．．
先腹腔注射 ０５ｍ 高压 ． ｌ
１１ 材 料 Ｍ Ｃ 一 多 肽 、ｐ ／ ． Ｙ Ｔ１ Ｓ２ ０小 鼠骨 髓 瘤 细 胞
株 由本室 制备保 存 ； Ｌ Ｋ Ｈ载体 、 氏佐 剂 、 Ｄ 弗 Ｅ Ｃ法 双 功能交联 剂购 自 Ｓ ｍ 公 司 ； ｉ ａ ｇ 次黄 嘌 呤 氨基 蝶 呤一 胸
积混合 ， 下 多 点 注射 免 疫 Ｂ Ｌ ／ 皮 Ａ Ｂ ｃ小 鼠。每 ３周
一
次 ， ３次 。２周后 进 行加 强 免疫 ，０ ｇ 化抗 共 １０ 纯 末 次 免 疫 ３ｄ 的 后
０融 合 ， ４天开 始 出 现 融合 细 胞 。经 Ｅ ＩＡ方 法 第 ＬＳ 检测 ， Ａ ５ 大 于 阴性 对照 （ｐ／ 凡 ４０值 Ｓ２０细 胞 培 养 上 清 ） 倍 以上 者 ， ２ 初步 判定 为阳性 克隆 。计 数杂交瘤 细胞 阳性 孔数 ， 算 其 与 成功 生 长 杂交 瘤 细胞 孔 数 计 之 比 ， 得 杂 交瘤 细 胞 阳性率 为 ４ ６ 计算 ．％。选 取 １ ０ 个 强 阳性 孔 ， 行克 隆化 ， 通过组织 芯 片对培养上 进 并 清进 行检 测分 析 ， 中一 个克 隆 阳性 组 织反 应 率 达 其 到 １０ ０ ％。将 此细胞 株体 外 继续 培 养 １ 月后 液 氮 个 冻存 ， 复苏后仍 能稳 定分泌抗 ＭＹ Ｔ１ 体 。 Ｃ ．抗
转至 硝酸纤 维素膜 ， 一抗 为 制备 的 Ｍ Ｃ － ｍ ｂ １ Ｙ Ｔ１ Ａ （ ：
１ ｏ） 释 ， ｏ稀 ｏ 二抗 为 Ｈ Ｐ羊抗 鼠多 抗 （ ： ｏ ） Ｒ一 １ ５ｏｏ 稀 释 ，Ｃ 显 色 。 ＥＬ
２ 结果
１２ １ 多肽与载体偶联 将 Ｍ Ｃ － 多肽与载体 ． Ｙ Ｔ１ 蛋 白 ｌＨ 偶 联 制 备 完 全 抗 原 ， 用 双 功 能 交 联 剂 （ Ｉ 采
１ 材料 和方 法
值 。凡 Ａ ５ ４０值大 于阴性对 照 ２ 以上者 ， 倍 初步判 定 为 阳性 克隆 。选 择 阳性 孔 用 有 限 稀 释 法进 行 ３—４ 次亚 克隆 ， 立 稳 定 分 泌 抗 Ｍ Ｃ ． 抗 体 的杂 交 瘤 建 Ｙ Ｔ１
细胞株 ， 至所有 杂 交瘤 细 胞 上清 液 均呈 阳性 为建 株
１２６ ｍ ｂ效 价测定 ．． Ａ
Ｅ ＩＡ效 价 ： ＬＳ 用抗 原包 被 酶
标 板 ， 水 ｍ ｂ及 杂交 瘤细 胞上 清 １ １０稀释 后进 腹 Ａ ：０
行 ２倍 系列 稀释 ， 阴性 对照 ， 设 按常规 Ｅ ＩＡ测 其效 ＬＳ
价。
自北 京 万 泰 生 物 公 司 ； Ａ Ｂ ｃ纯 系小 鼠 （ Ｂ Ｌ／ ６—８周
・・。—
Байду номын сангаас
—
７ ４ －— ５ － － — －
Ｃ ｉ ａ ａ ， ｙ，０１ Ｖ ｝１ Ｎ ５ ｈｎＪＬｂ Ｄｉ印 Ｍａ ２ ０， ｏ ４， ｏ．
文章编号 ：０７ ２７２ １）５ ７４ ２ １０ —４８ （００ ０ —０５ —０
抗 Ｍ Ｃ 一 单 克 隆抗体 的制备 及 鉴 定 Ｙ Ｔ１
邱广斌 ， 刘 政
Ｅ Ｃ法 ， Ｄ 按说 明书 步骤操作 。
１２ ２ 动物 免疫 ．． 将 １０ｔ 纯 化抗 原 和佐 剂 等 体 ０ ｇ ｔ
２ １ ＭＹ Ｔ １ｍ ｂ杂 交 瘤 细 胞 系 的 建 立 使 用 ． Ｃ ． Ａ Ｐ Ｇ ５０对 免疫后 小 鼠的脾细胞 与骨髓瘤 细胞 ｓ２ Ｅ １０ ｐ／
腺嘧啶核苷 （ Ａ ） Ｈ Ｔ 及次黄嘌呤一 胸腺嘧啶核苷 （ Ｔ Ｈ）
购 自 Ｈ ｃ ｎ 公 司 ； Ｅ Ｉ０ ｙｌ ｅ ｏ Ｐ Ｇ ５ ０购 自 Ｒ ｃｅ公 司 ； 根 ｏｈ 辣 过氧化物 酶 （ Ｒ ） Ｈ Ｐ 山羊 抗小 鼠 ＩＧ购 自 ＰＥ Ｃ ｇ ＩＲ Ｅ公 司 ； 鼠 ｍＡ 小 ｂ分 型检测 试剂 盒购 自 Ｒ ｃｅ 司 ； Ｃ ｏｈ 公 ＥＬ 检 测试剂 盒 贿 自 Ｐｒｉ ｌ ｅ’ 司 ； ＬＳ ｅ ｎ ｍｒ ｋＥ 公 Ｅ ＩＡ显 色 液购
灭菌过的液体石腊于 Ｂｌ ｃ ２ ａ ／ 鼠， 周后腹腔注射 １ ｂ × １６ 杂 交 瘤 细胞 ， 种 细胞 ７一ｌ 后 可 产 生 腹 ０个 接 Ｏ天
水， 待腹 水尽 可能 多 ， 而小 鼠频 于死 亡 之前 ， 死小 处
鼠， 用滴管 将腹 水 吸入 试管 中 ，０００ｒｍｎ离 心 １ １ ０ ／ ｉ ０ ｍｎ ｉ。吸取 上清分 装后 一７ ￣ 冷冻保 存 ［ ０Ｃ 。
（ 阳军区 ２２医院 检验科 ， 沈 ０ 辽宁 沈阳 １ ０３ １ ０） ０
Ｍ Ｃ －（ ｙ ｒｅ １基 因是 我室 克隆 的新候 选 Ｙ Ｔ１ｍ ｃｔｇｔ ） ａ 抑癌 基 因 ， ｅＢｎ Ｇｎ ａｋ登 录 号 Ｎ ０５０［ 曾 命 名 Ｍ一２１７¨， Ｍ Ｌ （ ｙ ｒｅ ｆｍ ｌｙｇａ ｃｉ￣ ｅｓ。前 期 研 Ｔ Ｃ ｍ ｃｔｇｔｒ ｒ ｅｌ ａｃｒ ｌ） ａ ｏ ａ ｎ ｌ ｃ ｌ
１２ ４ 克 隆 细胞 株 的筛 选培 养 ．．
包 被用 抗 原 为合
成多 肽 ， 闭后加 入杂交瘤 培养 上 清 ， Ｓ２０细胞 封 以 ｐ／ 培养 上清液作 为 阴性 对 照 。二 抗 为羊 抗小 鼠 Ｉ ｇ Ｇ—
Ｈ Ｐ标记 物 ， Ｔ Ｂ底 物显 色后 ， 标仪 测 定 Ａ ５ Ｒ 经 Ｍ 酶 ４０
胃癌 、 喉癌 、 肝癌 、 腺 癌 等多 种 恶性 肿 瘤 组织 中表 乳 达下 调［－ｊ ２ ５。为进一 步研 究 ＭＹ Ｔ１ 因的生 物 学 Ｃ－基 功能及 肿瘤发 生 、 展 中的作 用 ， 室利用体 外合 成 发 本 多肽作 为抗原 ， 制备 了抗 ＭＹ Ｔ１单克 隆抗 体 ， 对 Ｃ． 并 其进行 鉴定 。
龄， 雌性 ， 质量 ｌ ２ ） 购 自北 京生 物制 品研 究所 ７— ０ｇ ，
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１ ２ 方 法 ．
１２７ Ｗｅｔｎｂｏ检 测 ｍ ｂ的特异性 ．． ｓｒ ｌ ｅ ｔ Ａ
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白及 ⅪＨ Ｙ Ｔ １ Ｍ Ｃ － 融合 蛋 白经 Ｓ ＳＰ Ｇ Ｄ ．Ａ Ｅ电泳 后 ， 电
标准 ， 扩大培 养后液 氮冻存 。
１２５ 小 鼠腹水 的制备 ．．
先腹腔注射 ０５ｍ 高压 ． ｌ
１１ 材 料 Ｍ Ｃ 一 多 肽 、ｐ ／ ． Ｙ Ｔ１ Ｓ２ ０小 鼠骨 髓 瘤 细 胞
株 由本室 制备保 存 ； Ｌ Ｋ Ｈ载体 、 氏佐 剂 、 Ｄ 弗 Ｅ Ｃ法 双 功能交联 剂购 自 Ｓ ｍ 公 司 ； ｉ ａ ｇ 次黄 嘌 呤 氨基 蝶 呤一 胸
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次 ， ３次 。２周后 进 行加 强 免疫 ，０ ｇ 化抗 共 １０ 纯 末 次 免 疫 ３ｄ 的 后
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转至 硝酸纤 维素膜 ， 一抗 为 制备 的 Ｍ Ｃ － ｍ ｂ １ Ｙ Ｔ１ Ａ （ ：
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２ 结果
１２ １ 多肽与载体偶联 将 Ｍ Ｃ － 多肽与载体 ． Ｙ Ｔ１ 蛋 白 ｌＨ 偶 联 制 备 完 全 抗 原 ， 用 双 功 能 交 联 剂 （ Ｉ 采
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购 自 Ｈ ｃ ｎ 公 司 ； Ｅ Ｉ０ ｙｌ ｅ ｏ Ｐ Ｇ ５ ０购 自 Ｒ ｃｅ公 司 ； 根 ｏｈ 辣 过氧化物 酶 （ Ｒ ） Ｈ Ｐ 山羊 抗小 鼠 ＩＧ购 自 ＰＥ Ｃ ｇ ＩＲ Ｅ公 司 ； 鼠 ｍＡ 小 ｂ分 型检测 试剂 盒购 自 Ｒ ｃｅ 司 ； Ｃ ｏｈ 公 ＥＬ 检 测试剂 盒 贿 自 Ｐｒｉ ｌ ｅ’ 司 ； ＬＳ ｅ ｎ ｍｒ ｋＥ 公 Ｅ ＩＡ显 色 液购
灭菌过的液体石腊于 Ｂｌ ｃ ２ ａ ／ 鼠， 周后腹腔注射 １ ｂ × １６ 杂 交 瘤 细胞 ， 种 细胞 ７一ｌ 后 可 产 生 腹 ０个 接 Ｏ天
水， 待腹 水尽 可能 多 ， 而小 鼠频 于死 亡 之前 ， 死小 处
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（ 阳军区 ２２医院 检验科 ， 沈 ０ 辽宁 沈阳 １ ０３ １ ０） ０
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