核糖核酸酶活力的测定

四、RNA生物功能的多样性：
1、RNA在遗传信息的翻译中起着决定的作用 mRNA 信使(messenger)和模板(template) tRNA 转运(transfer)和信息转换(adaptor) rRNA 装配 (assembler)和催化(catalyst)
第十九页，编辑于星期五：九点 五十四分。
• 延伸
1992年,Holler证明转肽反应是由核糖体大亚基rRNA 所催化,核糖体蛋白质被认为只起辅助作用
第二十页，编辑于星期五：九点 五十四分。
2、RNA具有重要的催化功能（核酶）及其他 持家功能（house—keeping function）
第二十一页，编辑于星期五：九点 五十四分。
核酶(Ribozyme)
载酯蛋白BmRNA编辑 3）粘菌线粒体转录物中单个C的添加 4）A→I（或G），U→G（或A）的转变
5）核苷酸的共转录添加
6）3/端多聚腺嘌呤化产生终止密码子
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• RNA的编辑----gRNA的作用
g
g
g
第三十九页，编辑于星期五：九点 五十四分。
RNA编辑的意义
1）1981年Cech 等人在研
究四膜虫前体rRNA拼接机 制发现自我催化，且 L-19 （395核甘酸）有催化作用
2）1983年Altmam和Pace 两家实验室研究核糖核酸 酶P（RNaseP）发现其中 M1 RNA具有核糖核酸酶 活性
第二十二页，编辑于星期五：九点 五十四分。
Cech小组 —— 四膜虫的26s rRNA
•具有高度的专一性 •服从Michaelis-Menten动力学规律 • Km＝42×10－6 M （C5为底物）

某大学生物工程学院《生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（95分，每题5分）1. 核苷酸的碱基和戊糖相连的糖苷键是CN型。

（）答案：正确解析：2. 从理论上说，可用Edman降解法测定任何非封闭多肽的全部氨基酸顺序。

（）答案：正确解析：3. 一种生物所有体细胞的DNA，其碱基组成均是相同的，这个碱基组成可作为该类生物种的特征。

（）解析：4. 磷脂具有亲水与疏水两重性质，其强的亲水性是由于具有一个磷酸基团。

（）答案：正确解析：5. 维生素B1缺乏必然带来TPP含量减少，导致机体脂代谢障碍，临床上称为脚气病。

（）答案：错误解析：6. 三维结构的破坏和生物活性的丧失是蛋白质变性和核酸变性的最重要的标志。

（）答案：错误解析：DNA的生物活性并不因为变性而丧失。

7. 维生素E是一种抗氧化剂，对线粒体膜上的磷脂有抗自由基的作用。

（）解析：8. 二硫键能稳定蛋白质的三级结构，但它又属于一级结构的内容。

（）答案：正确解析：9. 胰岛素分子中含有A7SSB7，A20SSB19和A6SSA11三个二硫键，这些属于二级结构的内容。

（）[暨南大学2018研]答案：错误解析：二硫键在一级结构中指的是数量和位置，在三级结构中指的是二硫键本身。

10. 大多数蛋白质的主要带电基团是由它N端的氨基和C端的羧基组成。

（）答案：错误解析：蛋白质分子所带的电荷主要来自带电荷的侧链基团。

11. 纯酶一定可以结晶。

（）答案：错误12. 酶反应速率一般用单位时间内底物的减少量来表示。

（）答案：错误解析：13. 不同来源DNA单链，在一定条件下能进行分子杂交是由于它们有共同的碱基组成。

（）答案：错误解析：14. 天然核苷酸中的碱基与戊糖的连接既有CN键，也有CC键。

（）答案：正确解析：15. PKA、PKC和PKG都是催化蛋白质分子上的SerThr发生磷酸化修饰。

脱氧核糖核酸酶活力检测方法编制说明（征求意见稿）一、任务来源本国家标准的制定任务列入国家标准化管理委员会《二О一五年国家标准制修订项目》，项目编号“-T-424”。

本项任务由中国标准化研究院提出并归口，定于2016年完成。

本标准起草工作组由中国标准化研究院、浙江工商大学、河北农业大学等单位共同组成。

二、标准制定的背景及意义核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键，在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶，其本质是蛋白质。

不同来源的核酸酶，其专一性、作用方式都有所不同。

有些核酸酶只能作用于核糖核酸（RNA），称为核糖核酸酶（RNase），有些核酸酶只能作用于脱氧核糖核酸（DNA），称为脱氧核糖核酸酶（DNase），核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶统称为核酸酶（Nuclease）。

脱氧核糖核酸酶是将单链或双链DNA同等程度地随机分解，生成具有5'-P 末端寡核苷酸的脱氧核糖核酸内切酶。

脱氧核糖核酸酶具有重要的功能，目前主要用途包括制备不含DNA的RNA样品；RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染；体外T7, T3, SP6等RNA Polymerases催化的RNA 转录后去除DNA模板；DNase I Foot printing研究DNA-蛋白质相互作用；缺口平移（Nick translation）；产生DNA随机片段文库；细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照等。

脱氧核糖核酸酶I一般被认为是脱氧核糖核酸酶的典型代表，分子量约32 kDa。

由于脱氧核糖核酸酶具有重要的生理学作用，引起了国内外广泛的关注。

目前已经商业化生产和销售，但是作为脱氧核糖核酸酶的重要质量指标之一的酶的活力，根据文献调研显示相应的测定方法目前仍然没有形成统一的检测和分析标准，各生产和销售厂商对其活力的质量控制各自定义，同一种酶选用不同的活力测定方法结果显示大小差异显著。

这实际上已经成为脱氧核糖核酸酶产品可持续发展的瓶颈问题，给消费者造成了极大的不便。

细胞凋亡检测方法细胞凋亡检测方法是利用特定的实验手段和技术来识别细胞凋亡的发生与否，观察细胞凋亡的程度。

细胞凋亡检测是生物过程中重要的一块，其能够反映细胞死亡的类型，从而可以帮助研究者确定细胞是否已经进入凋亡状态。

现在，细胞凋亡检测的常用方法有多样，包括水解酶活力分析、流式细胞术、免疫组化、细胞图像分析等。

1. 水解酶活力分析：水解酶活力分析法是目前使用最多的细胞凋亡检测方法，原理是以细胞内的水解酶活性（如肌酸激酶、核糖核酸酶）来反映细胞凋亡程度。

细胞凋亡检测方法将细胞悬液添加到活性检测液体，然后经过细胞溶解和脱水稀释后，细胞内的水解酶（如肌酸激酶或核糖核酸酶）就会被释放出来，测定其活力值。

通过比较正常细胞和凋亡细胞的活力值，可以判定细胞凋亡的程度。

2. 流式细胞术：流式细胞术是一种常用的检测细胞凋亡的方法，主要以细胞的DNA含量与形态特点作为检测凋亡的标志物。

通常，凋亡细胞的DNA含量要明显低于正常细胞，且凋亡细胞的形态特征也会发生明显的变化，比如大小、形状、酸性等。

3. 免疫组化：免疫组化是一种利用免疫细胞学技术检测细胞凋亡的方法，它主要是针对细胞凋亡伴随而出现的特定抗原，如多种酶、APO2.7及特有蛋白等。

通过洗涤细胞，并用带有特定抗原的抗体制作出免疫印迹，就可以观察到细胞凋亡的现象。

4. 细胞图像分析：这是一种以细胞形态及细胞图像分析来检测细胞凋亡的方法，主要是利用荧光显微镜或电子显微镜观察细胞，以及对被观察细胞的形态特点进行分析，根据细胞形态变化观察凋亡程度。

通过观察正常细胞与凋亡细胞的形态比较，便可以判断细胞是否进入凋亡状态。

上述是现时比较常用的细胞凋亡检测方法，它们都有一定的特点，可以根据不同的实验需求选择合适的检测方法。

然而，对于不同的细胞类型，其凋亡方式也可能会有所不同，可能需要使用不同的检测方法来进行识别细胞凋亡的发生与否。

因此，根据具体的实验，研究者可以选择合适的检测方法，配合研究凋亡发生机制，为研究凋亡提供科学依据。

关于原料药中酶残留限度药典检测方法在药物生产过程中，原料药的质量直接影响到药物的稳定性和疗效。

而酶残留限度则是影响原料药质量的重要因素之一。

为了保证原料药的质量，药典检测方法是必不可少的。

本文将会按类介绍一些关于原料药中酶残留限度的药典检测方法。

一、酰胺酶测定法酰胺酶是一类针对酰胺键进行水解的酶，常用在药物合成反应中。

酰胺酶测定法是通过对原料药中残留的酰胺酶进行检测来判断原料药的质量。

该方法的原理是将待检测的药物与酰胺酶反应，测定反应前后的酶活力差值。

酶活力差值与待检测药物中酶的残留量成正比。

二、脱氧核糖核酸酶测定法脱氧核糖核酸酶是一类酶，它主要作用是水解脱氧核糖核酸（DNA）。

在药物生产过程中，脱氧核糖核酸酶的残留会影响到药物的稳定性和疗效。

因此，脱氧核糖核酸酶测定法是判断原料药中酶残留的一种方法。

该方法的原理是将待检测的样品与脱氧核糖核酸进行反应，测定反应前后脱氧核糖核酸的降解程度。

脱氧核糖核酸降解程度与药物中脱氧核糖核酸酶的残留量成正比。

三、葡萄糖氧化酶测定法葡萄糖氧化酶是一种将葡萄糖氧化成葡萄糖酸的酶。

在药物生产过程中，葡萄糖氧化酶通常用于检测生物反应器中的葡萄糖含量。

葡萄糖氧化酶测定法是通过将待检测的药物与葡萄糖氧化酶进行反应，测定反应前后的葡萄糖含量，从而判断药物中葡萄糖氧化酶残留量的方法。

以上三种检测方法均是通过将待检测的样品与酶进行反应，测定反应前后相关物质的含量差值，从而判断原料药中酶残留量的。

这些药典检测方法不仅可以保证原料药的质量，同时也为药物疗效的稳定性提供了保障。

总之，原料药中酶残留限度药典检测方法是确保药物质量的重要手段之一。

对于药物生产企业来说，只有通过高质量的原料药和严格的药典检测方法，才能在保证药物疗效的同时，提升企业的核心竞争力。

西安大学生物工程学院2020级《生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（40分，每题5分）1. 初速度底物浓度关系不遵守米氏方程是别构酶的基本特征之一。

（）。

答案：正确解析：2. 酶分子除活性中心部位和必需基团外，其他部位对酶的催化作用是不必需的。

（）答案：错误解析：3. 其嘧啶碱基含量较高的DNA的Tm值高于嘌呤碱基含量较高的DNA。

（）答案：错误解析：根据碱基配对原则，A＋G＝C＋T，DNA的双链中，嘧啶碱基含量与嘌呤含量相等。

一种DNA分子的Tm值大小与其所含碱基中的G＋C比例相关，G＋C比例越高，Tm值越高。

4. 两性离子氨基酸在溶液中，其正负离子的解离度与溶液pH无关。

（）答案：错误解析：两性离子氨基酸在溶液中，其正负离子的解离度与溶液pH有关。

在酸性条件下，氨基酸中的氨基可以加上一个氢离子而带正电；在碱性条件下，羧基可以解离出一个氢离子而带负电。

5. 胶原蛋白质由三条左手螺旋形成的右手超螺旋，其螺旋周期为68nm。

（）答案：正确解析：6. 血红蛋白和肌红蛋白具有相同的生物学功能，因此它们具有相同的空间结构。

（）答案：错误解析：血红蛋白多肽近似球形，是一个四聚体蛋白质，由4个多肽亚基组成，每一亚基缔合有一个血红素辅基。

肌红蛋白只有一、二、三级结构，无四级结构。

7. 霍乱毒素能与肠道上皮细胞膜中的鞘糖脂结合。

（）[南开大学2016研]答案：正确解析：鞘糖脂中的神经节苷脂在神经突触的传导中起重要作用，除此之外糖蛋白也作为细菌毒素的受体，如霍乱毒素的受体。

8. 固定化酶的一个缺点是很难作用于水不溶性底物。

（）答案：错误解析：2、名词解释（20分，每题5分）1. 碘值（iodine number）答案：碘值（iodine number）又称碘价，是100g脂质样品所吸收的碘的克数，通常天然橡胶用它来表示油脂中脂酸的不饱和程度。

某大学生物工程学院《生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（75分，每题5分）1. 糖的变旋现象是由于糖在溶液中起了化学作用。

（）答案：错误解析：糖的变旋现象不是由于糖在溶液中起了化学作用，而是由于其分子结构在溶液中起了变化，从α型变成β型或相反地从β型变成α型。

2. 在强酸或强碱条件下，蛋白质的构型会发生改变而失去生物活性。

（）答案：错误解析：在强酸或强碱条件下，蛋白质会变性，如果不涉及共价键的断裂，构型就不会发生改变，因为构型改变需要断裂共价键。

3. 一般来说酶是具有催化作用的蛋白质，相应的蛋白质都是酶。

（）答案：错误解析：酶是由活细胞产生的、对其底物具有高度特异性和高度催化效能的蛋白质或RNA。

一般来说，酶是具有催化作用的蛋白质，但是相应的蛋白质不一定都是酶，要根据不同情况下蛋白质的作用进行区分。

4. DNA核蛋白及RNA核蛋白可用0.14molL NaCl溶液抽提出来。

（）答案：错误解析：DNA核蛋白及RNA核蛋白一般用1molL NaCl抽提。

5. Pro不能参与α螺旋，它使α螺旋转弯。

（）答案：正确解析：6. 除翻译外，DNA的复制、转录、反转录都按碱基互补原则进行。

（）答案：正确解析：7. 蛋白激酶使蛋白质磷酸化的部位都是丝氨酸残基。

（）答案：错误解析：底物蛋白质被磷酸化的氨基酸残基有两类：①Thr、Ser、Tyr、Asp、Glu……“PO”键连接；②Lys、Ar9、His……“PN”键连接。

主要是磷酸化Ser、Thr，个别为Tyr。

被磷酸化的氨基酸残基可以是一个、两个或多个。

8. 理论上己糖有8对对映体。

（）答案：正确解析：9. 脂肪的皂化价高表示含低相对分子质量的脂肪酸少。

（）[山东大学2017研]答案：错误解析：皂化值（价）是指皂化1g脂肪所需的KOH的毫克数。

重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的复性及活性鉴定刘大和;张允;郭雄军;郭平川;Sorajo Umar;李锦秀;陈劲春【摘要】建立尿素梯度凝胶过滤复性重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ的方法.将诱导表达的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ包涵体通过初步纯化后变性,然后在尿素梯度凝胶过滤色谱柱Sephadex G-75中复性,洗脱流速0.4 mL/min,复性完毕后透析除去小分子复性剂,使用琼脂糖电泳法检验其有活性后,再用单向酶扩散法测定其酶活力为655.8 U/mg,复性得率为83.7％.最后通过LC-ESI-MS/MS从氨基酸序列组成上证明复性产物是重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ.结果表明,建立的方法能成功用于复性变性的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ包涵体蛋白,获得了可用于结构和功能研究的具有生物学活性的重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2012(000)009【总页数】5页(P155-159)【关键词】重组人脱氧核糖核酸酶Ⅰ;尿素梯度;凝胶过滤;包涵体;复性;酶活【作者】刘大和;张允;郭雄军;郭平川;Sorajo Umar;李锦秀;陈劲春【作者单位】北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029;北京化工大学生命科学与技术学院,北京100029【正文语种】中文随着基因工程技术的发展，大肠杆菌被广泛用于高水平表达有重要价值的外源性蛋白质，但是使用大肠杆菌高水平表达的产物大多数是没有活性的包涵体［1］，这就需要一个有效的手段把非活性状态的包涵体蛋白转化为有活性的天然状态。

因疏水作用而引起的蛋白聚集是包涵体正确复性率极低的根本原因。

传统的稀释复性和透析复性能通过控制蛋白质的起始浓度（10-50 μg/mL）防止聚集，获得相对较高的复性产率，但是这两种方法耗时长，操作繁琐，不适合工业化大规模复性［2］。

1. 淀粉分子中含有两种糖苷键，它们是 α － 1 ， 4 糖苷键 和 α －1，6 糖苷键 。

糖原 的分子结构与支链 淀粉相似，存在于动物体中，被称为动物淀粉。

淀粉糊化的本质 是 淀粉粒中有序及无序（晶质与非晶质）态的淀粉分子之间 的氢键断开，分散在水中成为胶体溶液 蔗糖由 葡萄糖 和 果糖通过 糖苷键 键连接而成。

糖类是指多羟基醛 或 酮 及其衍 生物。

必需脂肪酸是指： 亚油酸 、 α －亚麻酸 和 花生四烯酸 。

油脂的熔点随分子量的增大 而 增大 ， 随不饱和度的增大而 降低 。

酸价是中和 1 克油脂中的游离脂肪酸所需 KOH 的 毫克数 。

碘价是指 用 100 克油脂进行碘加成反应 ， 所 吸 收 碘 的 克 数称 为碘 价 。

卵 磷 脂 是 由磷 脂酸 和 胆 碱 通过 酯 键连接而成。

油脂自动氧化的速度随不饱和程度的增 加而 增大 。

核糖核酸的构件分子是 核糖核苷酸 ， 脱氧核糖核酸的构件分子是 脱氧核糖核苷酸 。

RNA 主要有三种类型，它们是 tRNA 、 mRNA 和 rRNA 。

20 种氨基酸中， 半胱氨酸 在稳 定许多蛋白质结构中起重要作用， 它可参与形成链内或链间的共 价键。

研究蛋白质构象的方法很多，但主要是应用 X-光衍射 。

在 ph6.0 时对 Gly（甘氨酸） ，Ala（丙氨酸） ，Glu （谷氨酸） ，Lys（赖氨酸） ，Arg（精氨酸） ，和 Ser（丝氨酸）的 混合物进行纸电泳，向阳极移动最快的是 谷氨酸 ；向阴极 移动最快的是 赖氨酸和 精氨酸 ； 移动很慢接近原 点的是甘 氨酸 ， 丙氨酸 和 丝氨酸 。

20 种氨 基酸中 苯丙氨酸 具有非极性侧链且是合成 Tyr 的前体。

组 成 蛋 白 质 的 20 种 氨 基 酸 中 苏氨酸和 丝氨酸 分子量比较小，而且含有羟基，在折叠的多肽中能形成氢键。

组 成蛋白质的 20 种氨基酸中除 苏 外，都是不对称分子， 且都为 L 构型。

人胰 腺核 糖核 酸酶的基 因克 隆 、 白表达 与活性测 定 蛋
吕勇刚 史 明 王 廷 李南林 允 军 凌 ， ， ， ， ， 瑞 王 岭 ，
Ｃ ｎｔ ｃｉｎｏ ｒｋ ｒｏｉ ｅ ｐｅ ｓ ｎ ｐａ ｍｉ ｗｉ ｕ ｎ ｐ ｎ ｒａｉ ｒ ｏ ｕ ｌ ｓ ｅ ｅ ｏ ｓ ｕ ｔ ｆ ｏ ａ ｙ ｔ ｘ ｒｓ ｉ ｌｓ ｄ ｔ ｈ ｍａ ａ ｃｅ ｔ ｉ ｎ ｃｅ ｅ ｇ ｎ ｒ ｏ ｐ ｃ ｏ ｈ ｃ ｂ ａ ａ ｄ ｐｏｅｎ ｅ ｐｅ ｉｎ ａ ｄ ｉｅ ｔ ｃ ｔ ｎ ｎ ｒｔｉ ｘ ｒｓ ｏ ｎ ｄ ｎｉ ａｉ ｉ ｆ ｏ
７ ２．
【 参考文献】
［ ］ 穆 肿瘤知 ［ ． １ 稹 Ｍ］武汉： Ｅ 涮 科技出版社， ９： ２ １０ ｌ Ｂ１ — ５ ． ９ ３ ［ ］ 司徒 镇强 ， ２ 吴军正． 细胞培养 ［ ． 安： Ｍ］ 西 世界图书出版公司 ，
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Ｃ ３ Ｋ细胞及其抗肿瘤研究的进展［ ］。 Ｊ 国外医学肿 ［ ］ 袁跃传 ． Ｄ Ａ ６
３ ５． ｌ
本研究初步表 明 Ｐ Ａ—Ｃ ３ Ｋ细胞作为过继免疫效 应 Ｈ ＤＡ 细胞更优于 Ｌ Ｋ细胞 ， 更适合 Ｉ Ａ 是 临床推 广应用 的抗肿瘤 过 继免疫效应细胞 ， 为临床应用提供了初步的实验依据 。
［ ］ 谢裕安 ， ５ 梁安民 ， 罗小玲 ， Ｃ ３ Ｋ细胞的体外诱导及免疫生 等． Ｄ Ａ 物学特征的实验研究 ［ ］ 四川肿 瘤防治 ，０ ０，３（ ：０— Ｊ． ２０ １ ２）７
７１ ０３ Ｃｈ ｎ ０ ２， ｉ ａ．
【 ｂｔ ｃ Ｏ ｊｃｖ：ｏ ｏｓｕｔｈ ｒ ａ ｏｃｅ ｒ ｓｎｐ ｓ ｉ ｏ ｈｍｎｐｎ ｅｔ ｂ ｕｌ ｓ ｈＲ Ａ ｓ ａｔ ｒ 】 ｂｅ ｉ Ｔ ｎ ｒ ｅｐ ｋｒ ｔ ｘ ｅ ｉ ｌ ｍｄ ｆ ｕ ａ ａｃ ａｃ ｉ ｎｃ ａ ｔ ｅ ｃ ｔ ｃ ｔ ｏ ｙ ｉ ｐ ｓｏ ａ ｒ ｉ ｒ ｏ ｅ ｅ（ｐ —

实验三酵母核糖核酸的提取及测定实验三酵母核糖核酸的提取及测定⽣物111 杨明轩1102040128⼀、研究背景及⽬的⽣物⼤分⼦通常指的是动物、植物和微⽣物进⾏新陈代谢是所产⽣的蛋⽩质、核酸等有机化合物。

它们不仅是⽣物科学⼯作者研究的重要对象，⽽且与化学、医学和⾷品等⼯业部门有着密切的关系。

核酸作为⽣命体常见⽽重要的⼤分⼦物质，它通过酶解或化学法⽔解可得到4个核苷酸，再经脱磷酸可得4种相应的核苷。

核酸构成遗传物质、传递遗传信息、构成核糖体和酶等⼤分⼦、合成多糖，与正常的⽣命活动密不可分。

医学家、诺贝尔奖得主富兰克研究认为，⼈体的⽼化是因其体内的核酸变质减少所致，可见核酸在⽣物正常发育中的重要性。

由于核酸在⽣命体中的物质构成、功能⽅⾯的作⽤，近100年来核糖核酸（RNA）被⼴泛应⽤与⾷品⼯业、医药⼯业和农业⽣产上。

在⾷品⼯业⽅⾯，RNA是开发新型⾷品调味品、保健品必不可少的原料；在医药⼯业上，RNA是⽣产治疗冠⼼病、肿瘤、⼼肌梗塞等疾病药物的原料；在农业上，RNA及其衍⽣物⼴泛⽤作农作物的⽣长促进物质。

⽽在这些领域，所需要的是并不是结构完整的RNA，⽽是其单体核苷酸。

因此，我们需要获得能够在⾷品医药卫⽣领域应⽤的核苷酸。

⽽核酸制品⽆⾮是利⽤其核苷酸或衍⽣物，因⽽⼯业上⽣产核酸的⽬的在于获得纯品核苷酸，以作为⽣产各种药物或测序分析等的原料。

在⼯业⽣产中，还常常考虑到利润和成本的问题。

因⽽实验室⾥提取核酸和将其放到⼯业⼤⽣产中是不同的。

⼯业⽣产对核酸制品的完整性要求不⾼，⽽注重其产率和成本。

考虑核苷酸分⼦的复杂结构，直接化学合成是⼗分困难的。

所以⽬前⼈们主要采取从⽣物体系中分离纯化RNA，将其⽔解并通过其他分离⼿段获得⼩分⼦核苷酸的⽅法。

本实验在于模拟⼯业⽣产的流程，探究提取酵母核糖核酸的⼯艺，掌握提取和测定酵母核糖核酸的⽅法，明确从⽣物体中提取RNA的思路和具体操作⽅法，了解产业开发的思路，体会⼯业化⽣产与实验室科研之间的不同。

核糖核酸酶（RNase）的活性测定（1）溶液的配制：①0.1 mol/L pH 5.0的乙酸缓冲溶液：称取5.78 g CH3COONa, 加入1.7 mL CH3COOH, 用蒸馏水稀释至500 mL。

② 0.05 % RNase酵母溶液：称0.05 g RNase酵母，用0.1 mol/L pH 5.0的乙酸缓冲溶液溶解并稀释至100 mL。

测活方法：（2）用移液管移取已配制好的0.05 %的核糖核酸酵母溶液2.5 ml于比色皿中，加入一定量的样品RNase A溶液，迅速摇匀，以蒸馏水为参比，在300 nm波长下每隔30秒测一次吸光值，共读3分钟，得到一组对应于时间t(min)的At值。

当样品管反应3小时后再测定300 nm处的吸光值A f, A f为最终的光吸收，分别求得一组对应于t的log(A t-A f), 以log(A t-A f)对时间t作图应得到线性关系，画出直线。

求出直线斜率的数值S，将S带入标准曲线，求得活性回收率。

将S带入下列公式中，可求出酶的活力。

单位/ mg = S × (-2.3) ×4 / (样品管中含酶的数量)胰凝乳蛋白酶（α-Chy）活性测定用胡梅尔(Hummel)法测定α-胰凝乳蛋白酶[2]：(1) 原理：α-胰凝乳蛋白酶优先催化水解结合有氨基酸（如酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸的L-异构体）的肽键。

我们可以通过在256 nm处测定吸光度增大值的办法来测定反应的速度。

苯甲酰-L-酪氨酸乙酯的水解反应引起吸光度的增大。

(2) 定义：一个凝乳蛋白酶单位相当于在pH值为7.8，温度为25 ℃时，每分钟水解1 μmol苯甲酰-L-酪氨酸乙酯(BTEE)所需的酶量。

(3) 试剂配置方法：Tris缓冲液(pH: 7.8)取0.969 g三（羟甲基）氨基甲烷和1.47 mg二水氯化钙溶于80 mL蒸馏水中，用1 N的盐酸将pH值调至7.8，并定容至100 mL。

某大学生物工程学院《生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（75分，每题5分）1. 疏水作用是使蛋白质空间结构稳定的一种非常重要的次级键。

（）答案：正确解析：2. 功能蛋白质分子中，只要有氨基酸残基发生改变都会引起生物功能的丧失。

（）[武汉科技大学2018研]答案：错误解析：一个典型蛋白质的功能决定于它的三维结构，而蛋白质所采取的三维结构又决定于它的氨基酸序列。

若由于氨基酸残基发生的改变影响了该蛋白质的三维结构，则会引起其生物功能的丧失，但若未影响其三维结构，则不一定会引起生物功能的丧失。

3. 具有对底物分子切割功能的都是蛋白质。

（）答案：错误解析：已经发现一些RNA具有催化能力，可以催化自我拼接等反应4. 肾上腺素既可以使用cAMP作为“第二信使”，也可以使用DG和IP3作为“第二信使”。

（）答案：正确解析：肾上腺素具有不同的受体，通过β受体作用时的第二信使为cAMP，而通过α受体作用时的第二信使则为DG、IP3和Ca2＋。

5. 其嘧啶碱基含量较高的DNA的Tm值高于嘌呤碱基含量较高的DNA。

（）答案：错误解析：根据碱基配对原则，A＋G＝C＋T，DNA的双链中，嘧啶碱基含量与嘌呤含量相等。

一种DNA分子的Tm值大小与其所含碱基中的G＋C比例相关，G＋C比例越高，Tm值越高。

6. 用定位点突变方法得到缺失某一个氨基酸残基的突变体，这个突变的酶蛋白不再具有催化活性，因此可以认为该缺失残基一定是酶结合底物的必需基团。

（）答案：错误解析：该缺失残基可能与形成酶蛋白的空间构象有关。

7. 细菌质粒DNA是双链环状DNA。

（）答案：正确解析：8. 辅酶或辅基决定酶的反应性质，酶蛋白决定酶的专一性。

（）答案：正确解析：9. b折叠是主肽链相当伸展的结构，因此它仅存在于某些纤维状蛋白质中。

江苏农业科学
２ ０ １ ３年第 ４ １卷第 ９期
龚宏伟．小麦雄性不育系花粉 发育过 程中核糖核 酸酶活性 的变化 ［ Ｊ ］ ． 江 苏农业科学 ， ２ ０ １ ３ ， ４ １ （ ９ ） ： ６ ３ — ６ ５
小麦雄性不育系花粉发育过程 中 核 糖 核 酸 酶 活 性 的变 化
龚宏 伟
２ ６ ０ ａ ｍ处 比色， 重复 ３ 次 。一 个 核 糖 核 酸 酶单 位 （ ｕ ｎ ｉ ｔ ｅ ） 相 当 于 在３ ７ ｏ Ｃ、 ２ ６ ０ ａ ｍ 的条件下使 吸光度增 大 １ ． ０时 所 需 的 酶 量， 酶活力 以 １ ｇ干样 所 含 的 Ｒ Ｎ ａ ｓ ｅ 酶 量 来 表示 ， 即Ｕ ／ ｇ Ｄ Ｗ。 ２ 结 果 与 分 析 ２ ． １ 不 同气 候 箱 温度 处 理 下 不 育 系育 性 敏 感 时期 花 药 核 糖 核 酸 酶含 量 变化 由图 １ 可 以看 出 ， 在低 温 （ 白天 １ ６￣ Ｃ ／ 夜间 １ ４℃） 处 理
１ ． ３ Leabharlann 验 方 法 Ｒ Ｎ Ａ及 可溶性蛋 白质 的变化。核糖核酸酶对 Ｒ Ｎ Ａ的降解直 接阻碍了植物体蛋 白质 的合 成 ， 而 细胞 中的蛋 白质 既能催化
许多新 陈代谢活动 ， 又是各种酶 、 细胞器 、 膜系统的组成成分 。 因此 ， 蛋 白质含量下降直接导致代 谢紊乱 。舒 孝顺等研 究表 明， 水稻温敏不育系的核糖 核酸酶 活性 升高 ， 引起 Ｒ Ｎ Ａ含量 下降， 阻碍 了蛋 白质 合成 ， 使 不育系新陈代谢紊乱 ， 从 而导致 不育 系花药败育 Ｊ 。杨建军 等也认为 ， 核糖核 酸酶活性 的增
核糖核酸酶 （ ｒ ｉ ｂ ｏ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ａ ｓ ｅ ， Ｒ Ｎ ａ ｓ ｅ ） 在植物体 内分布广 泛 ， 具有特殊的生物学功能 ， 除能裂解 Ｒ Ｎ Ａ外 ， 还与植物的衰老 、 抗逆 、 自交不亲和、 植物雄性不育有密切关 系 。 。尤其近年 来， 核糖核酸酶与植物雄性不育花 药败育 的关系受 到人们 的 广泛关 注 。植 物组 织 器 官 中 Ｒ Ｎ ａ ｓ ｅ活 性 的强 弱 直 接 影 响

噬 的 异 物 ＲＮＡ 。 ＡＫＲ 与 ＲＩ １：１结 合 ．
正 常 人组 与 胃损 疡 、 巢 囊 肿 心 者 柏 比 ， 卵
・ｌ５ ・ ４
肿 瘤 １ ９ 年 ５月 （ １ 第 ３期 ） ９４ 第 ４卷
ｃ ｅ ｓ ． Ｂｉ ｃ ｍ ｏ ｈｙ ｅ ． １ ６１ ５ ３７ ｌａ ｅ ｏ ｈｉ Ｂｉ ｐ ｓ Ａ １ ｒ ９ ｌ：
别。 ８例 胃癌 术 后 患 者 ， ｆ 其 ＡＫＲ 及 ＡＣ 活 Ｒ
２ 方 法
性 均 比治 疗 前 明显 降低 （ ｏ ０ １ ， 仍 高 Ｐ＞ ． ０ ）但
肿瘤 １９ ４年 ５月 （ ｌ ９ 第 ４卷 第 ３期 ）
・１ ５３ ・
表 １ 正常 人与 癌症 患者血 清 中 ＲＮａ ｅ 性比 较 ｓ活
ＲＩ 合 的 ＡＫＲ 被 称 为 游 离 的 ＡＫＲ， ｆｅ 结 （ｒｅ ＡＫＲ，ｆ ＡＫＲ） 。ＲＩ的 活性 及 ＲＮａ ｅ的 活 性 ｓ
酶 活 性 以 ｕ ｍｌ 清 表 示 。 ／ 血
（ ） 细 胞 内 ＲＩ活性 测 定 ２红 参 考 王 氏
法 略 加 修 改 。纯 化 的 酵母 Ｒ ＮＡ 作基 质 ， 缓 冲 体 系 ｐ 为 ７ ６的 Ｔｒ — Ｈ ， ｉ ＨＣ１缓 冲 浓 Ｒ ｓ Ｉ 单 位 以 抑 制 标 准 酶 Ｉｇ的 ５ 活 力 为 １单 ｎ ｏ 位， ＲＩ活力 以 ｐ ｍｇ蛋 白 质 表 示 。 ／
为 酸 性 ＲＮａ ｅ Ａｃ Ｎａ ｅ ｓ （ ｉ Ｒ ｓ ，ＡＣ 及 碱 性 ｄ Ｒ）
（ ） 清 Ｒ ｓ 性 襁ｆ １血 Ｎａｅ活 定
参 考 王 氏方
法 略 加 修 改 。以 纯 化 的 酵 母 ＲＮＡ 为基 质 ， ＡＫＲ 测 定 的 ｐ 为 ７ ６ Ｈ ． 。ＡＣ 测 定 的 ｐ 为 Ｒ Ｈ

酶的提取 ---- 酶的分离纯化
酶的提取
一般是在一定条件下，用适当的溶剂处理含
酶原料，使酶充分溶解到溶剂中的过程。
依提取液分类： （T，pH值，离子强度等 ）
盐溶液 取
酶的分离纯化
是采用各种生化分离技术，如离心分离、过滤与 膜分离、萃取分离、沉淀分离、层析分离、电泳分离 以及浓缩、结晶、干燥等，使酶与各种杂质分离，达 到所需的纯度，以满足使用的要求。
酶的生产是指通过人工操作获得所需酶的 技术过程。
酶的生产方法可以分为3种：
提取分离法（最早采用、沿用至今）
生物合成法（20 世纪50 年代以来）
化学合成法（实验室阶段）
（1）提取分离法
定义：
是采取各种提取、分离、纯化技术从动物、 植物的组织、器官、细胞或微生物细胞中将酶提 取出来，再进行分离纯化的技术。
模拟酶
是在分子水平上模拟酶的活性中心的结构特
征和催化作用机制、设计并合成的仿酶体系。
小分子仿酶体系
环状糊精模型、冠醚模型、卟啉模型、环芳烃模
型等大环化合物模型。
大分子仿酶体系
分子印迹模型和胶束酶模型
第七节 酶工程的发展概况
酶工程（enzyme engineering）是在1971年第一
届国际酶工程会议上才得到命名的一项新技术。 酶工程主要研究酶的生产、纯化、固定化技术、 酶分子结构的修饰和改造以及在工农业、医药卫 生和理论研究等方面的应用。 根据研究和解决问题的手段不同将酶工程分为化 学酶工程和生物酶工程。
（三）酶的转换数和催化周期
酶的转换数KP，指每个酶分子每分钟催化底物转化为产物的摩 尔数，又称摩尔催化活性（mol catalytic activity）。即每摩尔 酶每分钟催化底物转化为产物的摩尔数，是没催化效率的一 个指标。 KP通常用每摩尔酶的酶活力单位数表示，单位min-1。

某大学生物工程学院《普通生物化学》课程试卷（含答案）__________学年第___学期考试类型：（闭卷）考试考试时间：90 分钟年级专业_____________学号_____________ 姓名_____________1、判断题（140分，每题5分）1. 人体内氨的来源主要是氨基酸及胺分解产生的氨，肠道吸收的氨和肾小管上皮细胞分泌的氨。

（）答案：正确解析：氨基酸脱氨基作用产生的氨是体内氨的主要来源，肠道吸收的氨有两个来源，一个是肠内氨基酸在肠道细菌作用下产生的氨，另一个是经肠道细菌尿素酶水解产生的氨。

肾小管上皮细胞分泌的氨主要来自谷氨酰胺的水解。

2. DNA复制时，先导链是连续合成的，而后随链的合成是不连续的。

（）[华中农业大学2007研]答案：正确解析：3. 正常情况下，一种酶制剂的得率越高，比活力越低。

（）答案：错误解析：得率与酶活性回收率有关，而比活力和酶的纯度有关，两者不一定成正比。

4. 经常进行户外活动的人，体内不会缺乏维生素A。

（）答案：错误解析：5. 酶活力的测定实际上就是酶的定量测定。

从B2（核黄素）、烟酸和烟酰胺以作用于葡萄糖（Km＝6×106mol·L1）或果糖（Km＝2×103·mol·L1），则己糖激酶对果糖的亲和力更高。

（）[华东师范大学2007研]答案：错误解析：Km值越低，酶对底物的亲和力越高。

6. 别嘌呤醇作为尿酸的类似物抑制黄嘌呤氧化酶而用于治疗痛风。

（）答案：错误解析：痛风是因为体内尿酸产生过多而造成的。

使用别嘌呤醇来治疗痛风症，其原理是由于其结构与次黄嘌呤相似，并抑制黄嘌呤氧化酶的活性。

7. L抗坏血酸有活性，D抗坏血酸没有活性。

（）答案：正确解析：维生素C又称抗坏血酸，有L及D型两种异构体。

其中只有L型有生理功效，它的还原型和氧化型都有生物活性。

8. 大多数真核生物的mRNA和它的DNA模板是等长的。