细胞因子检测
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细胞因子检测与临床意义
细胞因子检测与临床意义细胞因子种类包括：白细胞介素、干扰素、趋化因子、肿瘤坏死因子、转化生长因子β 家族、集落刺激因子或生长因子。
细胞因子检测临床应用：1.脓毒症目的：评估全身炎症反应综合征的状态检测因子：TNF-a、IIL-1、IL-6、IL-12、IL-8、MIF、sCD74、HMGB1等IL-6临界值为52.6 pg/mL时可诊断败血症，当其超过348.92 pg/mL时可诊断败血症休克，且28天病死率明显增高。
TNF-α随着脓毒症疾病进展而升高，TNF-α的高表达提示患者预后不良。
IL-8是强烈的中性粒细胞趋化因子，在早期预测脓毒症有重要价值，其诊断敏感度和阴性预测值均比PCT高。
IL-8还可以预示脓毒症患者存在多器官功能障碍可能，可作为脓毒症患者的死亡风险指标。
IL-10是机体关键的抗炎性细胞因子，IL-10升高与脓毒症不良预后相关，持续高表达的IL-10反映脓毒症处于免疫抑制状态。
HMGB1可促进促炎性细胞因子的释放，诱导中性粒细胞、DC等细胞活化。
HMGB1水平与脓毒症休克患者预后密切相关，HMGB1水平越高，患者的预后越差，HMGB1可作为脓毒症病情变化的重要监测指标。
巨噬细胞移动抑制因子(MIF)是一种具有多效炎症介质功能的细胞因子，包括抑制巨噬细胞迁移、化学趋化作用及促进白细胞在炎症部位募集。
脓毒症及脓毒症休克患者血清中MIF浓度显著升高，并与疾病严重程度相关。
2.感染炎症因子IL-6、TNF-α和抗炎因子IL-10等可用于急性感染的早期诊断、评价病情严重程度及判断预后。
IL-6的升高早于CRP和PCT，其持续时间长，2h达到高峰。
IL-6＞1000ug/L，提示预后不良。
IFN-γ：病毒感染患者主要升高的细胞因子，IFN-γ显著升高、伴随IL-6、IL-1β、IL-8、IL-10和TNF-α等因子升高，多提示为病毒感染。
IL-6和IL-10＞正常值的10倍以上，考虑革兰阴性菌感染。
细胞因子7项检测的说明
细胞因子7项检测的说明1. 什么是细胞因子检测？好啦，今天咱们来聊聊一个听起来挺高大上的话题——细胞因子检测。
别担心，不用背什么复杂的术语，咱们就像在茶馆聊天一样，轻松愉快。
细胞因子，简单来说就是咱们身体里的一些小信使，它们帮助调节免疫系统，像个小精灵一样，在体内穿梭，传递信息。
细胞因子检测就像是给这些小精灵做个体检，看看它们的状态如何，能不能把咱们的免疫系统调得更加给力。
1.1 检测的意义说到检测的意义，简直就是一部大片啊！想象一下，你在打游戏，突然屏幕上出现了一个小提示：“你的角色状态不佳，快去补给！”这就是细胞因子检测的作用。
通过检测，我们可以了解到身体的免疫反应是否正常，是否存在潜在的疾病，甚至可以提前预判一些问题，像个神预言家一样，给咱们的健康把把关。
1.2 细胞因子的种类细胞因子可多了，七项检测听上去就像一场音乐会，里面有主唱、吉他手、鼓手等等。
它们分别是：肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素（IL1、IL2、IL6、IL10），还有干扰素（IFN）。
每一项都有自己的特点，像不同乐器演奏出的旋律，合在一起才能奏响健康的交响曲。
2. 检测的过程说到检测，很多人会担心，啊呀，要抽血吗？对的，没错，细胞因子检测确实是需要抽血的，听起来有点紧张，但实际上，抽血就像是捡个小便宜，可能有点疼，但为了健康，值得啊。
首先，你得去医院或者诊所，前台的小姑娘会给你登记，像是在填一份VIP通行证，接着就是护士小姐姐出场，温柔地告诉你，稍微捏一下拳头，深呼吸，不用太紧张哦。
然后就抽一管血，咕咚一下，搞定！2.1 检测结果解读等着结果的时候，就像等快递，心里七上八下的。
结果出来后，你可能会看到一些数据，别慌，这些数字就像考试卷上的分数，医生会根据你的情况来给你解读。
比如说，如果某项细胞因子的水平偏高，那可能说明你的身体在和某种疾病作斗争，或者免疫系统在“开会”呢。
如果一切正常，那就恭喜你，继续保持健康的生活方式，咱们要做个“健康达人”！2.2 注意事项不过，做检测也有一些小窍门，首先，最好提前预约，不然一到医院就像去赶集，热闹得很。
10种常用细胞因子检测方法盘点
10种常用细胞因子检测方法盘点细胞因子是一类在细胞间相互作用中发挥重要作用的蛋白质，对免疫调节、炎症反应、细胞增殖和分化等过程起着关键的调控作用。
因此，检测细胞因子的水平对于研究疾病发病机制、诊断和治疗具有重要意义。
以下是常用的10种细胞因子检测方法盘点：1. 酶联免疫吸附法（ELISA），ELISA是一种常用的细胞因子检测方法，通过将待检测的细胞因子与特异性抗体结合，然后用酶标记的二抗结合，最后通过底物染色来检测细胞因子的含量。
2. 免疫荧光法（IF），IF方法利用激光共聚焦显微镜观察标记的抗体与细胞因子结合的情况，适用于定量和定位分析。
3. 流式细胞术（FCM），FCM结合荧光标记的抗体，可以对多种细胞因子进行快速、高通量的检测和分析。
4. 生物传感器技术，生物传感器技术结合了生物学和传感器学的优势，可以实现对细胞因子的高灵敏度、高选择性检测。
5. 蛋白质芯片技术，蛋白质芯片技术可以同时检测多种细胞因子的含量，具有高通量、高灵敏度的特点。
6. 质谱法，质谱法可以通过检测细胞因子的质荷比来定量和鉴定细胞因子。
7. 生物学功能法，生物学功能法通过观察细胞因子对细胞生物学功能的影响来间接检测细胞因子的活性。
8. 核酸杂交技术，核酸杂交技术可以通过检测细胞因子的mRNA水平来间接反映细胞因子的表达水平。
9. 免疫印迹法（Western blot），Western blot可以用于检测细胞因子的蛋白质水平，结合特异性抗体可以实现对细胞因子的定量分析。
10. 细胞因子生物学活性检测，通过细胞因子对细胞增殖、分化、凋亡等生物学活性的影响来检测细胞因子的活性水平。
以上是常用的10种细胞因子检测方法，它们各自具有特定的优势和局限性，在实际应用中可以根据需要选择合适的方法进行检测分析。
细胞因子检测
细胞因子检测
细胞因子检测是一种重要的生物医学检测方法，用于分析生物体内不同细胞产
生的特定蛋白质分子。
细胞因子是一类能调节细胞功能的蛋白质，广泛参与调节免疫反应、细胞增殖和凋亡等生物过程。
通过检测细胞因子的水平，可以帮助医生诊断疾病、评估疗效，以及指导个体化治疗方案的制定。
在细胞因子检测中，常用的方法包括酶联免疫吸附法（ELISA）、流式细胞术、蛋白质芯片技术等。
ELISA是一种常见的定量检测方法，通过将待检测样本加入带
有特异性抗体的酶标记物后，再加入底物使酶发色，通过颜色的变化来反映细胞因子的含量。
流式细胞术主要通过将单个细胞悬浮液通过激光进行检测，可以同时检测多种细胞因子，并分析不同细胞亚群之间的作用关系。
蛋白质芯片技术是一种高通量的检测方法，可同时检测多种细胞因子及其相互作用。
细胞因子检测在临床应用中有着广泛的价值。
例如，在肿瘤治疗中，细胞因子
检测可以评估肿瘤微环境中细胞因子的分泌水平，及时调整治疗方案。
在自身免疫性疾病中，细胞因子检测可以帮助医生了解患者免疫炎症状态，指导用药选择。
在感染性疾病中，细胞因子检测可以帮助快速诊断病原体感染，加快治疗进程。
总的来说，细胞因子检测作为一种重要的生物医学检测方法，为疾病的诊断、
治疗和监测提供了重要的信息。
随着技术的不断进步，相信细胞因子检测将在未来发挥更为重要的作用，为个体化医疗和疾病预防提供更多可能性。
细胞因子九项检测科普
细胞因子九项检测科普什么是细胞因子细胞因子是一类介导细胞间相互作用的蛋白质，它们可以作为信号分子在细胞和细胞之间进行通讯。
细胞因子在机体的免疫反应、炎症反应以及许多其他生理过程中发挥重要的调节作用。
不同类型的细胞产生不同种类的细胞因子，比如肿瘤坏死因子、白细胞介素等。
为什么需要进行细胞因子九项检测细胞因子九项检测是通过检测某些关键细胞因子的水平，来评估机体的免疫状态和炎症程度的一种检测方法。
这些细胞因子的水平变化与很多疾病的发生和发展密切相关，包括慢性炎症性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等。
进行细胞因子九项检测可以帮助临床医生更好地了解疾病的病理过程、判断疾病的严重程度以及制定更合理的治疗方案。
此外，对于某些疾病的预后判断和效果评价也具有一定的参考价值。
细胞因子九项检测包括哪些指标细胞因子九项检测通常包括以下几个重要的指标：1.白细胞介素-2（IL-2）：它是一种重要的T细胞生长因子，对免疫系统的调节具有重要作用。
2.白细胞介素-4（IL-4）：它是一种重要的T细胞细胞因子，能够促进B细胞的增殖和抗体产生。
3.白细胞介素-6（IL-6）：它是一种重要的炎症介质，能够促进炎症反应的发生和发展。
4.白细胞介素-8（IL-8）：它是一种重要的趋化因子，在炎症反应中发挥重要作用。
5.白细胞介素-10（IL-10）：它是一种重要的免疫抑制因子，能够抑制炎症反应和免疫系统的活性。
6.肿瘤坏死因子-α（TNF-α）：它是一种重要的炎症介质，参与许多炎症性疾病的发生和发展。
7.干扰素-γ（IFN-γ）：它是一种重要的免疫调节因子，能够促进宿主免疫系统的抗病毒和抗肿瘤反应。
8.变态反应因子（IgE）：它是一种抗体，参与机体的过敏反应。
9.血清白细胞介素-17（sIL-17）：它是一种炎症介质，与自身免疫性疾病的发生和发展密切相关。
细胞因子九项检测的应用领域细胞因子九项检测在许多疾病的诊断和治疗中具有重要的应用价值。
以下是一些常见领域：1. 免疫性疾病细胞因子九项检测可以帮助医生评估免疫性疾病的炎症程度和免疫状态，例如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
细胞因子的ELISA方法检测
实验报告1.取已包被抗体并完成封闭的酶标条2条，分别装于酶标架上。
在每条酶标条的1~6孔分别加入稀释液100微升。
2.向第6、7孔加入分别加入2000pg/ml PGFβ1标准品100微升。
3.用加样枪吹吸混匀第6孔的液体，注意避免气泡形成。
混匀后其浓度约为1000pg/ml。
4.再吸出100微升加入第5孔，吹吸混匀。
其浓度变为500pg/ml。
以此类推，一直加到第2孔。
吸去多余的100微升。
5.向第8、9孔各加入100微升样品1。
10、11孔加入100微升样品2.6.封口膜覆盖酶标板，防止水分挥发。
7.将酶标板置于37℃温箱孵育120min。
8.取出孵育后的酶标板，揭开封口膜，甩去孔中液体，注意甩动方向，避免液体流入相邻酶标孔，造成交叉污染。
9.加入洗涤液，注意不要溢出至相邻孔，造成交叉污染。
静置3min后甩去孔中液体，重复以上洗涤过程4次。
在吸水纸上拍干孔中液体。
10.每个孔各加入酶标记抗体100微升。
封口膜覆盖酶标板，将酶标板置于37℃温箱孵育60min。
11. 取出孵育后的酶标板，揭开封口膜，甩去孔中液体。
再加入洗涤液，静置3min后，甩去孔中液体，重复以上洗涤过程4次。
在吸水纸上拍干孔中液体。
12. 每个孔各加入底物A 100微升，再加入底物B各100微升。
晃动酶标板混匀。
将酶标板放入37℃温箱孵育15min显色。
13. 取出孵育后的酶标板，见酶标板孔中液体呈蓝色。
14. 每个孔各加入终止液100微升，可见液体变成淡黄色。
15.用酶标仪在450nm处测OD值。
结果如下：16. 分析结果：将2组标准品的OD值和标本1、标本2的4个副本的OD值合并得到平均值。
根据各自的OD值，在半对数坐标上标出62.5、125、250、500、1000、2000这6个不同稀释度标准品所处的位置，将6个点连线集会成标准曲线。
根据2个标本的OD值标出其在OD值普通坐标上的位置，虚线连接其在标准曲线上的位置，再用虚线连接确定其在浓度坐标上的位置。
细胞因子检测是检查什么的？
细胞因子检测是检查什么的？免疫系统是人体抵御疾病入侵的重要防线，而细胞因子作为免疫系统中的重要调节分子，对于维持免疫平衡和正常功能起着关键作用。
细胞因子检测是一种现代医学手段，通过测量体内特定细胞因子的水平，帮助医生评估患者的免疫状态、诊断疾病并制定个体化治疗方案。
一.让我们一起来了解什么是细胞因子细胞因子是一种生物素类蛋白质，是由细胞分泌的，具有广泛的生物活性分子。
它们在机体的免疫系统中扮演着重要的角色，调节和控制免疫细胞的生长、分化、功能和生存。
细胞因子可分为许多类型，包括肿瘤坏死因子、干扰素、白细胞介素、趋化因子等。
它们可以促进细胞增殖、分化、迁移、存活，促进炎症反应、抗病毒防御、组织修复等生物过程。
在各种疾病中，例如恶性肿瘤、自身免疫病、感染等，细胞因子的异常水平可能导致免疫功能失调和疾病进展。
因此，细胞因子被广泛地应用于检测和治疗疾病，如肝炎、艾滋病、乳腺癌、骨髓移植和器官移植等。
对于细胞因子的深入研究和应用，将有助于更好地理解和治疗各种疾病。
二.你知道医院检实验室测细胞因子的方法有哪些吗？细胞因子检测是通过测量体内特定细胞因子的水平来评估免疫状态的方法。
1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：将检测细胞因子蛋白特异性的抗体固定在微孔板上，与待检样品中的细胞因子结合后再加上二抗或底物，通过波长的变化来测定细胞因子的含量。
2. 流式细胞术（FACS）：用流式细胞术检测特定免疫细胞表面的特异性标志物，并测定其在单个细胞水平上细胞因子含量的方法。
3.蛋白质芯片技术：将细胞因子蛋白分子固定在芯片上，通过荧光标记或质谱技术检测特定抗体与蛋白结合的信号强度，从而定量测量细胞因子的浓度。
4. RT-PCR技术：通过反转录先把RNA转变为cDNA，再通过PCR扩增细胞因子的mRNA数量，从而间接定量细胞因子的含量。
三.为什么医生会开具细胞因子相关检查，有何作用呢？医生会开具细胞因子相关检查是为了了解患者体内某些细胞因子的水平是否异常，以帮助诊断和治疗一些疾病。
细胞因子检测方法
细胞因子检测方法细胞因子是一类存在于细胞内的小分子蛋白质，它们在细胞间扮演着重要的信号传递和调节作用。
细胞因子的产生和释放常常与某些疾病的发生和发展密切相关。
因此，对细胞因子的检测成为了许多疾病的诊断和治疗的重要手段之一。
本文将介绍几种常用的细胞因子检测方法。
一、酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种常用的细胞因子检测方法。
该方法通过专门的ELISA 试剂盒，利用特异性的抗体对目标细胞因子进行检测。
ELISA方法具有操作简单、灵敏度高、特异性强等优点，可以用于检测多种细胞因子，如白细胞介素、肿瘤坏死因子等。
二、流式细胞术流式细胞术（Flow Cytometry）是一种通过检测细胞表面或细胞内标记物来分析和鉴定细胞的方法。
在细胞因子检测中，可以通过标记抗体来检测细胞表面的特定细胞因子。
流式细胞术具有高通量、高灵敏度、多参数等优点，可以同时检测多种细胞因子的表达水平，并对细胞因子的分布、数量等进行分析。
三、PCR方法聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一种常用的分子生物学技术，可以通过扩增目标DNA片段来检测细胞因子的基因表达水平。
PCR方法可以通过设计特异性引物，扩增细胞因子基因的特定区域，并通过凝胶电泳等方法来检测扩增产物的存在与否。
PCR方法具有高灵敏度、高特异性等优点，可以用于定量和定性分析细胞因子的表达水平。
四、蛋白质芯片技术蛋白质芯片技术（Protein Microarray）是一种高通量的蛋白质检测技术，可以同时检测多种细胞因子。
蛋白质芯片技术通过将不同的细胞因子蛋白固定在芯片上，然后与标记有荧光物质的样品中的细胞因子进行特异性结合，最后通过荧光扫描仪来检测荧光信号的强度，从而获得细胞因子的表达水平。
蛋白质芯片技术具有高通量、高灵敏度等优点，可以用于筛选和鉴定细胞因子。
细胞因子九项检测科普
细胞因子九项检测科普细胞因子九项检测是一种常规的免疫检测方法，可以评估人体细胞因子水平。
细胞因子是一类信号蛋白，能够刺激或抑制体内免疫反应，起着极其重要的作用。
而细胞因子水平的高低与很多疾病的发生和发展密切相关，包括肿瘤、炎症性疾病和自身免疫病等。
细胞因子九项包含的检测指标分别是干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、白介素6（IL-6）、白介素8（IL-8）、白介素10（IL-10）、白介素12（IL-12）、干扰素α（IFN-α）和白介素4（IL-4）。
其中，前六项是评估炎症水平的重要指标，后三项则是评估免疫功能的关键指标。
这项检测通常采用外周血检测或分泌物检测方式进行。
外周血检测需要采集一定量的血液样本，经过离心等处理方法分离出白细胞，然后通过酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术检测不同细胞因子的浓度。
而分泌物检测则需采集相应分泌物的样本，如唾液、泪液、脑脊液、尿液等，利用同样的检测方法进行分析。
临床上，细胞因子九项检测广泛应用于炎症性疾病、自身免疫疾病和肿瘤等的辅助诊断、预后评估及治疗监测。
例如，对于患有类风湿性关节炎的患者，检测IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α的浓度可以帮助评估疾病活动度和治疗效果；对于肝硬化或乙型肝炎患者，测定IFN-γ和IL-10的水平可以判断病情的稳定或恶化；对于乳腺癌等恶性肿瘤患者，检测IL-12和IFN-α的含量可以评估治疗反应。
需要提醒的是，细胞因子九项检测并不是万能的，其结果必须与临床表现、检验和其他检查结果综合考虑。
同时，在进行检测前需要咨询医生，了解相关的注意事项和检测费用等信息。
综上，细胞因子九项检测是一项非常重要的免疫检测方法，可以对很多疾病的诊断、治疗和预后评估提供有益的帮助。
但同时，我们也需要认识到检测结果是辅助诊断、预测和治疗的重要参考，不能替代临床医生的判断和治疗方案。
细胞因子12项检测解读
细胞因子12项检测解读1什么是细胞因子12项检测细胞因子12项检测（Cell Factor12Items Testing）是一项对人体机体发育和生长过程中活动的细胞因子水平进行检测研究的技术。
主要检测人体血液细胞因子如干扰素（Interferon）、白介素（Interleukin）等十二种水平。
这项检测能够帮助医生了解患者机体抗病能力是否损伤，从而为临床改善判断和治疗提供科学依据。
2细胞因子12项检测的意义细胞因子12项检测具有重要的临床与健康意义。
首先，它有助于诊断慢性疾病。
细胞因子的活化变化可能会导致一系列与之有关的慢性疾病，如胃炎、抑郁症、类风湿性关节炎、免疫性肝炎等。
细胞因子12项检测可以帮助医生准确判断患者情况，从而为临床实施准确治疗p提供参考依据。
此外，细胞因子12项检测还与健康相关。
随着年龄的增长，人体的免疫力会逐渐下降。
如果患者的血液细胞因子含量过低，则可能导致身体免疫力减弱，使人容易患上疾病。
细胞因子12项检测能够有效检测人体细胞因子水平，帮助患者了解自身的健康状况，从而采取有效的预防措施来保护自身健康。
3细胞因子12项检测方法细胞因子12项检测通常采用定量测定加以检测，主要通过收集患者血液进行检测，包括。
用ELISA技术检测白介素（IL）、血小板介素（PF）、脂质素B（LBP）和细胞因子（Cytokines）等。
此外，也可以对细胞因子的水平通过PCR定量检测，以获得更加精确的结果。
4细胞因子12项检测解读细胞因子12项检测的结果一般是归类性的——正常或异常。
正常表明机体抗病能力正常，能够作为准确诊断慢性疾病的重要基础数据；而异常则表明患者机体抗病能力受损，有可能罹患慢性疾病。
一般来讲，检测结果的解读根据患者的具体情况而定，只有在与医生沟通的基础上，才能判断诊断结果的准确性。
总之，细胞因子12项检测既有助于临床诊断，又有助于保护患者健康，成为医生判断、指导治疗的重要依据。
但不论最终结果如何，患者都应该在耐心等待结果之后，及时向医生进行有关的评估和治疗。
细胞因子检测方法
细胞因子检测方法
细胞因子是一种介导细胞间相互作用的小分子信号物质，具有在机体免疫、炎性反应、生物钟同步、细胞分化、生殖发育等方面的重要功能。
因此，细胞因子的检测对于了解疾病发生、发展机制以及药物治疗的疗效等方面具有重要意义。
以下是几种常见的细胞因子检测方法：
1. 酶联免疫吸附试验(ELISA)：该方法利用特异性抗体与细胞因子结合，通过酶标记测定其浓度。
具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点，是目前最常用的检测方法。
2. 流式细胞术：该方法利用荧光标记的特异性单克隆抗体对细胞因子进行检测，可以同时检测多种细胞因子，但操作较复杂，需要较高的技术水平。
3. 放射免疫分析(RIA)：该方法利用放射性同位素标记的抗体与细胞因子结合并通过放射检测器测定放射性计数率来检测其浓度，具有高灵敏度和高特异性，但需要操作较为繁琐，使用范围较窄。
4. 生物传感器检测法：该方法利用细胞因子与生物传感器相互作用后产生电化学信号来进行检测，具有快速、灵敏度高、实时检测等优点，但需要设计和构建生物传感器。
5. 质谱法检测：该方法利用质谱仪检测分子的质量和分子类别，可以对多种细
胞因子同时进行检测，但需要较为昂贵的设备和较高的技术水平。
总之，选择适宜的细胞因子检测方法需要考虑实验室设备、技术水平、检测样本和需要检测的细胞因子等多个因素。
细胞因子检测
细胞因子检测细胞因子就是由免疫细胞与某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌得一类生物活性物质分泌得蛋白质,在体内广泛参与免疫调节及炎症反应、组织修复、刺激造血系统、刺激细胞得增殖与凋亡等重要生理活动,•在抵抗外来病原及维持机体内环境平衡中均起重要作用、某些刺激因子也可导致一些细胞因子超量表达,或表达减少,从而参与疾病得发病及病理过程。
1、免疫学检测法其基本原理就是将细胞因子作为抗原进行定量检测。
•如免疫斑点法、ELISA法、ＲIＡ法与免疫印迹法等均已用于细胞因子得检测。
2。
、生物学测定法其原理就是根据细胞因子对特定得依赖性细胞株(即靶细胞)•得促增殖作用,以增殖细胞中得DNA得合成或酶活性为指标,间接推算出细胞因子得活性单位,如对IＬ-1、ＩL-2等细胞因子活性得检测。
亦可根据某些细胞因子对特定靶细胞得杀伤效应或对病毒得抑制作用进行测定,如对肿瘤坏死因子及干扰素得生物活性测定。
3、分子生物学测定法目前采用得技术有各种印迹法、斑点杂交、原位杂交与ＰCＲ等。
通过检测细胞内细胞因子得基因组成或mRNA量,推算出细胞因子得合成量、一、IL-1得检测(生物活性测定)产生IL—1得细胞种类很多,其中最主要得为单核－巨噬细胞、ＩL—1可分为IL —１α(•也称酸性IL—１,pI=5。
0)与IL－1β(中性ＩL－1,pI=7。
0)、两者得分子量与生物活性相似,•只能用抗体检测方法才能区别,常用得生物学测定法对两者都适用。
ＩＬ-1•得生物学活性广泛,其检测方法亦较多,包括有小鼠胸腺细胞增殖法、D10Ｇ4、1细胞增殖法及L929细胞增殖法等。
ＩL-1反应细胞增殖可以通过活性染料染色,显微镜直接计数,3H-TdＲ或125I—ＵdR得ＤＮA掺入量或以活性细胞代谢率为指标来表示。
本试验介绍Ｌ929细胞增殖MTT比色法、(一)IＬ-1得诱生体外试验可用ＬPS等有丝分裂原诱导单核-巨噬细胞产生IL-1,或用P3８8D1(鼠),TＨP-1(人)细胞株制备ＩL－1、本试验以小鼠巨噬细胞制备IL—１。
细胞因子检测方法
细胞因子检测方法细胞因子是一类负责细胞之间相互通讯的蛋白质分子，在生物体中起着重要的调节和调控作用。
细胞因子检测是研究细胞因子功能及其相关疾病机制的重要手段。
本文将介绍常见的细胞因子检测方法，包括免疫学方法、PCR方法以及生物芯片技术。
免疫学方法是常用的细胞因子检测方法之一。
这种方法基于细胞因子与抗原抗体的特异性结合来进行检测。
常见的免疫学方法包括酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫荧光法和免疫组化染色法等。
ELISA是最常用的细胞因子检测方法之一。
该方法利用酶标记的抗体与待测的细胞因子特异性结合，通过酶的催化作用使底物发生显色反应，从而进行定量测定。
ELISA方法具有高灵敏度、高特异性和较大的线性测定范围，广泛应用于临床实验室检测细胞因子水平。
免疫荧光法是通过荧光标记的抗体与待测的细胞因子结合，并通过荧光显微镜观察标记信号来进行检测。
该方法具有高灵敏度和高特异性，可以用于检测细胞因子的定位和分布，广泛应用于生物医学研究中。
免疫组化染色法是一种利用酶标记或荧光标记的抗体与待测的细胞因子结合，并利用酶的催化作用进行染色反应的方法。
通过染色的程度可以判断细胞因子的表达水平及分布情况。
这种方法常用于组织学研究和病理学鉴定中。
PCR方法是一种通过扩增特定DNA序列来进行细胞因子检测的方法。
该方法适用于细胞因子的基因表达研究。
常见的PCR技术包括逆转录PCR、实时荧光定量PCR和单细胞PCR等。
逆转录PCR是一种将RNA转录为cDNA并进行扩增的方法。
该方法通过反转录酶将RNA转录为cDNA，再利用DNA聚合酶扩增所得的cDNA，最终通过凝胶电泳或其它方法来检测细胞因子的基因表达水平。
实时荧光定量PCR是一种可以实时监测DNA扩增过程的PCR方法。
该方法基于荧光信号的累积产生来实时监测扩增产品的数量，从而测量初始模板的绝对量或相对量。
单细胞PCR是一种可以在单个细胞水平检测细胞因子基因表达的PCR方法。
该方法通过将单个细胞在微小反应体系中进行逆转录、扩增和检测，从而实现对细胞因子在单个细胞中的表达水平研究。
细胞因子检测报告
细胞因子检测报告细胞因子是一类介导和调节免疫反应的信号蛋白，它们在细胞间传递信息，调控机体的免疫功能。
细胞因子检测可以帮助我们了解机体的免疫状态，判断免疫疾病的发生和发展。
本文将介绍细胞因子检测的步骤和意义。
步骤一：样本采集细胞因子检测首先需要采集样本，常见的样本包括血液、唾液、尿液等。
这些样本中含有丰富的细胞因子，可以反映机体的免疫状态。
在采集样本前，需要注意保持采样区域的清洁，避免污染和感染。
采集血液样本时，可以选择静脉采血或者指尖采血，根据实际情况选择适合的方式。
步骤二：样本处理采集到的样本需要进行处理，以获取纯净的细胞因子。
处理步骤包括离心、稀释、沉淀等。
通过这些步骤，可以将细胞因子从其他成分中分离出来，提高检测的准确性和敏感性。
步骤三：细胞因子检测方法细胞因子的检测方法有很多种，常见的包括酶联免疫吸附法（ELISA）、流式细胞术（FACS）、荧光标记技术等。
这些方法基于不同的原理，可以定量或者定性地检测细胞因子的水平。
选择合适的检测方法需要根据实际需求和设备条件进行。
步骤四：结果分析得到细胞因子的检测结果后，需要进行结果分析。
根据参考范围或者临床标准，判断细胞因子的水平是否正常。
如果细胞因子水平异常，可能提示机体存在免疫疾病或者炎症反应。
结果分析需要结合具体的临床表现和其他检测指标综合判断。
意义和应用细胞因子检测在临床医学中具有重要的意义和应用。
它可以帮助医生了解患者的免疫状态，辅助诊断和治疗。
通过细胞因子检测，可以早期发现免疫疾病的风险，及时干预和治疗。
此外，细胞因子检测还可以评估治疗效果，监测疾病的进展。
细胞因子检测在免疫学研究中也起着重要的作用。
它可以帮助科研人员了解免疫反应的机制和调控网络，探究免疫相关疾病的发生和发展机制。
通过细胞因子检测，可以发现新的治疗靶点，开发新的免疫治疗方法。
总结细胞因子检测是一种重要的检测方法，可以帮助我们了解免疫状态和疾病的发生机制。
通过样本采集、处理、检测和结果分析，可以获取细胞因子的水平信息，为临床诊断和治疗提供依据。
检测细胞因子的方法
检测细胞因子的方法
检测细胞因子的方法有多种，以下是常用的几种方法：
1. 酶联免疫吸附测定法（ELISA）：ELISA方法根据酶标记抗体与目标细胞因子的特异性结合来检测细胞因子的浓度。
这种方法广泛应用于研究和临床实验室中。
2. 流式细胞术（Flow cytometry）：流式细胞术可以通过标记抗体与细胞因子结合来分析和计数特定细胞子群。
这种方法可以定量分析细胞因子的分布和表达水平。
3. 实时荧光定量PCR法（Real-time PCR）：通过实时荧光定量PCR方法可以检测目标细胞因子mRNA的表达水平。
这种方法可以快速、准确地分析细胞因子的转录水平。
4. 细胞因子芯片（Cytokine array）：细胞因子芯片是一种高通量方法，可以在同一实验中同时检测多个细胞因子。
这种方法可以用来研究细胞因子的分泌模式和相互作用。
5. 免疫组织化学染色法（Immunohistochemistry）：免疫组织化学染色法可以在组织切片中检测细胞因子的表达情况。
这种方法可以定位细胞因子在组织中的分布和定量分析其表达水平。
检测细胞因子的方法
检测细胞因子的方法
检测细胞因子的方法有很多种。
下面是一些常用的方法：
1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：ELISA是一种常用的检测细胞因子的方法。
它通过将特异性抗体固定在试验板上，然后将待测样品加入到板上，利用特异抗体与待测细胞因子结合，再加入特异性检测抗体和辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗，最后添加底物，测定光密度来确定细胞因子的浓度。
2. 流式细胞仪：流式细胞仪可以用来检测细胞因子在单个细胞水平上的表达情况。
它通过标记特定的细胞因子抗体或标记分子，在细胞水槽中运行待测细胞悬液，然后通过激光束照射细胞，测量细胞因子的荧光强度来确定其表达水平。
3. 实时荧光定量PCR（qPCR）：qPCR可以用来测定细胞因子的mRNA水平。
它通过与待测细胞因子的mRNA序列特异性杂交，然后使用荧光探针或染料来检测PCR扩增产物的累积量，进而确定细胞因子的mRNA水平。
4. 蛋白质芯片：蛋白质芯片是一种高通量检测细胞因子的方法。
通过将已知细胞因子的抗体固定在芯片上的不同点位上，然后将待测细胞因子加入到芯片上进行反应，最后使用荧光标记的二抗来检测反应产物，从而确定细胞因子的浓度。
5. 化学发光：化学发光法可以用于检测细胞因子的浓度。
它通过在反应体系中加入底物，在酶催化下发生发光反应，发光强度与细胞因子的浓度成正比。
需要根据实验要求和资源条件选择合适的方法进行细胞因子的检测。
细胞因子检测标准
细胞因子检测标准
细胞因子检测的标准通常涉及以下几个方面：
1.样本采集和处理：采集血液、组织或其他体液样本时，应使用无菌技术并遵循标准操作程序。
样
本应妥善保存和运输，以避免污染和细胞因子的降解。
2.检测方法：细胞因子检测通常使用免疫测定法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、流式细胞术、免
疫荧光法等。
这些方法的选择应基于实验目的、样本类型和分析的细胞因子类型。
3.仪器和试剂：使用高质量的仪器和试剂对于确保准确的检测结果至关重要。
应定期维护和校准仪
器，并使用经过验证的试剂。
4.质量控制：实施严格的质量控制措施，包括使用内部对照、重复样本检测和外部质量评估计划，
以监测检测过程的准确性和可靠性。
5.数据解释：细胞因子浓度的解释应基于适当的参考范围或对照样本。
结果应与其他临床和实验室
数据相结合，以提供有关患者状况的全面信息。
6.报告和记录：检测结果应准确、清晰地记录在适当的文档中，并应在需要时向患者或医生报告。
记录应包括样本信息、检测方法、结果和质量控制数据。
请注意，细胞因子检测的具体标准可能因实验室、地区和国家的不同而有所差异。
因此，在进行细胞因子检测时，应遵循所在地区或国家的相关法规和标准，并参考相关指南和建议。
细胞因子检测的重要性及应用前景
细胞因子检测的重要性及应用前景细胞因子检测是一种重要的实验技术，用于评估细胞内外信息传递的程度，并提供了许多关于细胞功能和疾病机制的重要信息。
细胞因子是一类由细胞产生，并在体内发挥调节细胞生长、发育、分化、死亡等功能的分子信号。
细胞因子的异常调节与多种疾病的发生和发展密切相关。
因此，细胞因子检测可以为临床诊断和治疗提供有力的支持。
细胞因子检测的重要性在于它能够提供关于机体免疫功能状态的信息。
细胞因子在免疫调节中起着至关重要的作用，包括维持和调控免疫平衡、抵抗感染和控制炎症反应等。
通过定量检测细胞因子的水平，可以评估机体的免疫功能状态，为预防、诊断和治疗疾病提供重要的指导。
例如，在免疫缺陷病人中，特定细胞因子的检测可以帮助确定免疫系统的功能缺陷或炎症病理过程，从而引导治疗方案的选择和监测治疗效果。
另外，细胞因子检测还能够揭示疾病的发生机制。
许多疾病的发展都与细胞因子的异常调节有关。
通过检测特定细胞因子的水平，可以了解疾病的发病机制和进展过程，为疾病的早期诊断和治疗提供重要参考。
例如，在某些自身免疫性疾病中，特定细胞因子的过度产生导致免疫系统攻击正常组织，了解细胞因子的水平变化可以帮助确定病情严重程度和制定个体化的治疗方案。
细胞因子检测的应用前景非常广阔。
随着生物技术和分子生物学的发展，检测细胞因子的方法也得到了不断改进。
传统的细胞因子检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和流式细胞术。
近年来，基于免疫荧光、质谱、蛋白芯片和单细胞技术的新方法不断涌现，大大提高了细胞因子检测的灵敏度和准确性。
在临床方面，细胞因子检测可以用于疾病的早期诊断、疾病的分期和预后评估，以及治疗方案的选择和效果监测。
例如，在肿瘤研究中，通过检测肿瘤相关细胞因子的水平，可以帮助确定肿瘤的类型、分期和治疗反应，从而指导个体化的肿瘤治疗。
此外，细胞因子检测还可以应用于感染性疾病的诊断和监测、免疫缺陷病的早期筛查和治疗效果的评估，以及自身免疫性疾病的诊断和治疗。
细胞因子临床意义及检测技术
IFN-α，驱动细胞免疫的关键角色
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病毒感染的诊断指标，病毒感染诱导IFN-α的产生，与周围细胞膜上受体蛋白，诱导细胞cAMP形成，后 者激活细胞内抗病毒机制，产生抗病毒蛋白。
I 型干扰素是免疫系统中的主要抗病毒 防御与调节因子。它一方面直接激活免 疫细胞，另一方面可间接抑制病毒的复 制过程。它还可以活化自然杀伤细胞和 巨噬细胞，从而达到促进树突状细胞的 活化，并同时诱发周围的CD4+亚型T淋 巴细胞、T辅助细胞在区别效应细胞上 产生大量的Ⅰ型干扰素，达到保护CD8+ 细胞，防止诱导抗体细胞死亡的功能。
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细胞因子分类
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❖ 白细胞介素（IL）
主要包括IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-12p70，通过影响细胞与细胞间的相互作用，参与炎症反应和 蛋白质合成，调节人体的免疫状态。目前已经命名38种（IL-1~IL-38）
❖ 干扰素（IFN）
IFN-γ，驱动细胞免疫的关键角色
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IFN-γ从类型上说，是一种促炎因子，由Th1细胞分泌。
但IFN-γ是“有限”促炎、提供“保护”的双重作用因子。
在众多自免、肿瘤疾病中，高浓度IFN-γ的患者，其生存期往 往更长，预后更好。但过高浓度的IFN-γ可能会诱使组织损伤、 坏死和炎症，并可能导致疾病。
• 在特发性肺纤维化疾病中，肺泡巨噬细胞表达IL-8 也会显著增加。
• 上海新冠诊疗指南也特别指出患者IL-6、IL-8异常升 高。
总之，在血常规中性粒细胞异常的患者、大部分呼吸道 疾病中，都可以跟踪IL-8，以应对可能的严重疾病。
IL-10，强大的炎症抑制因子
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细胞因子检测细胞因子是由免疫细胞和某些非免疫细胞经刺激而合成、分泌的一类生物活性物质分泌的蛋白质,在体内广泛参与免疫调节及炎症反应、组织修复、刺激造血系统、刺激细胞的增殖与凋亡等重要生理活动,•在抵抗外来病原及维持机体内环境平衡中均起重要作用。
某些刺激因子也可导致一些细胞因子超量表达,或表达减少,从而参与疾病的发病及病理过程。
1、免疫学检测法其基本原理是将细胞因子作为抗原进行定量检测。
•如免疫斑点法、ELISA法、RIA法和免疫印迹法等均已用于细胞因子的检测。
2.、生物学测定法其原理是根据细胞因子对特定的依赖性细胞株(即靶细胞)•的促增殖作用,以增殖细胞中的DNA的合成或酶活性为指标,间接推算出细胞因子的活性单位,如对IL-1、IL-2等细胞因子活性的检测。
亦可根据某些细胞因子对特定靶细胞的杀伤效应或对病毒的抑制作用进行测定,如对肿瘤坏死因子及干扰素的生物活性测定。
3、分子生物学测定法目前采用的技术有各种印迹法、斑点杂交、原位杂交和PCR等。
通过检测细胞内细胞因子的基因组成或mRNA量,推算出细胞因子的合成量。
一、IL-1的检测(生物活性测定)产生IL-1的细胞种类很多,其中最主要的为单核-巨噬细胞。
IL-1可分为IL-1α(•也称酸性IL-1,pI=5.0)和IL-1β(中性IL-1,pI=7.0)。
两者的分子量和生物活性相似,•只能用抗体检测方法才能区别,常用的生物学测定法对两者都适用。
IL-1•的生物学活性广泛,其检测方法亦较多,包括有小鼠胸腺细胞增殖法、D10G 4.1细胞增殖法及L929细胞增殖法等。
IL-1反应细胞增殖可以通过活性染料染色,显微镜直接计数,3H-TdR或125I-UdR的DNA掺入量或以活性细胞代谢率为指标来表示。
本试验介绍L929细胞增殖MTT比色法。
（一）IL-1的诱生体外试验可用LPS等有丝分裂原诱导单核-巨噬细胞产生IL-1,或用P388D1(鼠),THP-1(人)细胞株制备IL-1。
本试验以小鼠巨噬细胞制备IL-1。
1、取6～10周龄BALB/c或C57BL/6小鼠,雌雄均可,拉颈处死后用酒精消毒。
2、用带9号针头的5ml注射器腹腔注入5ml冷的含5％小牛血清的Hanks液(5•％•NBS-HBSS),轻揉腹部吸出腹腔液体(内含腹腔细胞),反复抽吸几次。
3、1500r/min离心8min,洗细胞2次。
4、将腹腔细胞用含10％小牛血清的RPMI-1640液(10％NBS-RPMI-1640)配成2×106/ml,加到24孔平底培养板,1ml/孔,置5％CO2,37℃温箱孵育2h。
5、每孔用5％NBS-HBSS洗3次,弃去未粘附细胞,贴壁细胞为巨噬细胞单层。
6、将LPS(10μg/ml)加入巨噬细胞单层,每孔1ml,培养4h；加入10％NBS-1640 •1ml继续培养至48h,收集上清液,置-20℃冰箱保存,待测IL-1活性及含量。
（二）L929细胞增殖MTT比色法MTT比色分析法的原理是利用四甲基偶氮唑盐[3-(4.5-dimethylthiazol-2-y1)-•2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT)在活细胞线粒体的琥珀酸脱氢酶作用下,被还原成兰黑色的MTT-甲,形成MTT-甲的量与细胞增殖程度呈正相关。
•故通过测定细胞形成MTT-甲量,可间接定量分析细胞的增殖情况,具体步骤如下:1、将生长成单层的L929细胞用0.25％胰酶消化2～3min。
除去消化液后,用10% FCS的RPMI-1640将L929细胞配成1×105/ml,加入96孔细胞培养板中,每孔100μl。
2、取100μl不同稀释度的IL-1标准品和待测品,分别加入各孔中,每孔设3个复孔•,置37℃,5% CO2温箱孵育56h。
3、用PBS溶解MTT为5mg/ml,用0.22μm膜滤器除菌及杂质。
4、上述培养体系取出后,每孔加入10μl MTT(5mg/ml),37℃继续培养4h。
5、从每孔吸出100μl上清弃去,加酸化异丙醇或加DMSO 100μl/孔,•充分混匀以溶解底物。
酸性条件使培养液中酚红指示剂变为黄色,以利于对MTT-甲转化物的测定。
6、将微量测定板置室温数分钟,保证转变的底物结晶被溶解。
7、用酶标光度计以检测波长为570nm,参考波长为630nm分别测量OD值。
测定应在酸化异丙醇加入后1h内完成。
OD570nm－OD 630nm,再减去培养液对照的OD值。
8、用IL-1标准品各稀释度IL-1含量(X)和各稀释度对应的OD值(Y)作直线回归,按上述概率单位分析法计算待测样品IL-2的活性单位(u/ml)。
（三）注意事项1、IL-1诱生剂的浓度,培养条件和细胞浓度对结果均有明显影响,•应进行预试验以确定最佳实验条件。
2、培养器皿和研磨条件：24孔培养板培养细胞活率较高,但生长稍慢。
玻璃瓶培养有时会因玻璃质量和清洗不净引起细胞死亡,故应注意采取相应措施。
•大量培养时用大容量瓶比较方便,可减少操作中的污染。
研磨组织可用玻璃匀浆器、不锈钢网。
二、TNF的检测(免疫学测定法,双抗体ELISA夹心法)（一）原理选用两种针对rHuTNF-α分子不同表位的单克隆抗体,一种单克隆抗体作为包被抗体,另一种单克隆抗体作为酶标抗体,如果待测样品中含有TNF-α,则形成抗体-TNF-α-酶标抗体复合物,通过酶催化底物显色,亦可根据标准品OD 值绘制标准曲线,•从标准曲线上查出待检标本中TNF-α的含量。
（二）材料和试剂1、包被抗体: 使用时用包被缓冲液作适当稀释。
2、酶标抗体: 使用时用稀释液作适当稀释。
3、标准品: rHuTNF-α(10ng/ml),使用时用稀释液作倍比稀释。
4、阴性对照液(未免疫鼠Ig)。
5、ABTS底物:2,2'-Azino-bis-(3-ehtylbenzthiozoline 6-sulfonic acid)•,•2,2'-连氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯呆-6磺酸)。
6、96孔ELISA板。
7、0.15mol/L,pH7.4 PBS:配其它液体用。
8、包被缓冲液: 0.05mol/L,pH9.6 Na2CO3-NaHCO3缓冲液。
9、洗涤液: 0.05％Tween 20-PBS。
10、稀释液:4％PEG-洗涤液(用于稀释标准品和酶标抗体)。
11、底物缓冲液:0.1mol/L,pH5.0柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液。
12、3％H2O2。
13、血清、枸缘酸盐或EDTA抗酸血浆、其它体液及细胞培养上清均可检测,•后者应作适当稀释。
14、ELISA读数仪等。
（三）操作步骤1、包被将稀释好的包被抗体加入ELISA板,100μl/孔,4％放置24h或48h。
2、加待检标本洗涤液冲洗ELISA板3次,加待测样品、阴性对照及倍比稀释的标准品,100μl/孔,37％,1h.标准品稀释方法:取标准品150μl(10ng/ml)倍比稀释7个浓度:5ng/ml、2.5ng/ml、1.25ng/ml、625pg/ml、312pg/ml、156pg/ml和78pg/ml。
3、加酶标抗体:洗板3次,加入稀释好的酶标抗体,100μl/孔,37℃,1h。
4、显色:洗板3次,加入配好的ABTS显色液,100μl/孔,室温或37℃显色15～30min。
5、ELISA读数仪测410nm处OD值,绘制标准曲线。
6、从标准曲线查得待测样品中的TNF-α含量。
四、注意事项1、血清或血浆中残存凝块或红细胞须经离心去除,勿用溶血或脂肪过多的血清。
2、标本在2～8℃可储存3天,超过3天应放入-20℃或-70℃,避免反复冻融.3、分别用加样器头吸取各份标本,避免相互交叉。
4、叠氮钠(NaN3)对辣根过氧化物酶(HRP)有灭活作用,在本实验系统中应避免使用。
5、底物显色液必须临用时配制,双氧水应放置在2～8℃,保存6个月以内。
附: 试剂配制1. 0.15mol/L,pH7.4 PBSKH2PO4 0.2gNa2HPO4·12H2O 2.9gNaCl 8.0gKCl 0.2g双蒸水加至100ml 2. 包被缓冲液Na2CO3 1.59g NaHCO3 2.93g双蒸水加至1000ml 3. 洗涤液PBS 1000ml Tween 20 0.5ml 4. 稀释液洗涤液100ml鸡蛋清0.6mlPEG (聚乙二醇,MW6000) 2.0g NaCl 2.9g5. 底物缓冲液Na2HPO4·12H2O 1.79g拧檬酸1.29g双蒸水加至100ml6. ABS显色液ABTS 5mg底物缓冲液10ml3％H2O2 20μl三、IL-2的检测(基因的检测)细胞因子基因的检测包括对其DNA的检测和mRNA表达的检测,常用的方法有Southern印迹,斑点印迹,PCR,原位杂交及原位PCR等,Northern印迹及RT-PCR。
本文介绍IL-2mRNA的测定(斑点杂交法)。
将RNA变性后直接点样于硝酸纤维膜上,可用手工操作点样,•也可用斑点式点样器点样,再与特异性探针进行杂交。
•本法可用于基因组中特定基因及其表达产物的定性及半定量分析。
由于其操作比Northern印迹简单、迅速,所需样品量少,且可在同一张膜上同时进行多个样品的检测,故很适合于临床应用。
亦可用于DNA的检测。
但其缺点是不能鉴定所测基因的分子量。
（一）主要试剂1. RNA提取试剂:TRIZOL试剂(Gibcol,No.15596-026),DEPC水(Fluka,No.980210)2. 质粒提取试剂盒:(Promega:Wizard Minipreps DNA,No.117)3. DNA片段提取试剂盒:(La Jolla)4. 地高辛标记和检测试剂盒:(Boerhinger Mannheim,No.1093657)5. IL-2 DNA探针6. 其他试剂（1) STE溶液0.1mol/L NaCl10mmol/L Tris.Cl(pH8.0)1mmol/L EDTA(pH8.0)（2) 溶液Ⅰ50mmol/L 葡萄糖25mmol/L Tris.Cl(pH 8.0)10mmol/L EDTA(pH 8.0)可配100ml,高压灭菌15min,贮存于4℃（3) 溶液Ⅱ0.2mol/L NaOH(临用前用10mol/L贮存液稀释) 1%SDS (配20%贮存液)盖紧瓶盖,颠倒离心瓶数次,以充分混匀内容物.于室温放置5～10min（4) 溶液Ⅲ5mol/L 乙酸钾60ml冰乙酸11.5ml水28.5ml所配成的溶液对钾是3mol/L ,对乙酸根是5mol/L（5) 含相应抗生素的LB培养基（6) 氯霉素(0.25g/2ml)--->终浓度170μg/ml（7) 溶菌酶(10mg/ml,溶于10mmol/L Tris.Cl pH8.0) 1ml （8) 无水乙醇(部分-20℃预冷).异丙醇.75%乙醇(部分4℃预冷)（9) TE缓冲液(pH8.0)（10)5mol/L LiCl 1.5ml（11)RNA酶,RPMI-1640,胎牛血清(FCS),ConA(刀豆蛋白A)等（12)500μl 含13%(W/V)聚乙二醇(PEG 800)的1.6mol/L NaCl（13）3mol/L NaAc、饱和酚、氯仿:异戊醇(24:1)（二）主要仪器CO2培养箱:美国Forma Scientific产品;无菌操作台:苏州净化设备公司产品;图象处理分析仪:同济医大太阳公司产品;低温高速离心机:上海离心机械研究所.（三）IL-2质粒DNA探针的大量制备1、含IL-2质粒DNA探针的提取取含IL-2质粒DNA的单个菌落置两个25ml LB培养基(含100μg/ml Amp)↓37℃220r/min 振摇过夜(约16h)取10ml菌液加200ml LB培养液(含100μg/ml Amp)↓37℃150r/min 振摇4h加氯霉素(终浓度170μg/ml)↓37℃220r/min 振摇3h菌液倒入300ml离心管中离心↓4℃5000r/min×10min离心弃上清除去残液(吸水纸无菌)每管加40ml STE溶液(冰预冷)悬浮细菌后,用移液管转入到50ml离心管中↓4℃5000r×15min离心弃上清,加5ml溶液Ⅰ(冰预冷)悬浮细菌,加1ml新配制(pH8.0)的溶菌酶(10mg/ml)↓轻摇,室温静置5min加10ml溶液Ⅱ,盖上盖子,将离心管小心颠倒数次混匀液体,不要用旋涡振荡器↓冰浴10min,且勿摇动加7.5ml溶液Ⅲ(冰预冷),轻振荡离心管数次使之混合↓冰浴20～30min,使沉淀完全,4℃12000r/min×20min离心取上清到另一50ml离心管中,加0.6体积异丙醇,混匀,室温静置15min↓室温5000r/min×15min离心弃上清用75%乙醇洗涤沉淀一次(不将沉淀悬浮),倒出乙醇,倒置吸水纸上,使乙醇挥发用1.5mlTE(pH8.0)将沉淀溶解,加等体积冰预冷的5M LiCl,混匀后置冰浴10min↓4℃12000r/min×10min离心取上清至新EP管, 加等体积的异丙醇(约3ml),充分混匀,室温静置15min↓室温12000rmin×10min离心(回收沉淀的核酸)小心去上清,将管倒置以使最后残留的液滴流尽,用75%乙醇洗涤沉淀,流尽乙醇,•用吸纸吸去附于管壁的液滴,将管倒置在纸巾上数分钟,以使最后残余的痕量乙醇蒸发用500μl TE(pH8.0)溶解DNA沉淀,移至新EP管中,加入RNA酶(终浓度100μg/ml)↓37℃水浴30min加等体积(500μl)含13%(W/V)PEG(800)的1.6mol/L NaCl,充分混合↓4℃12000r/min×5min离心吸去上清,用400μl TE(pH8.0)溶解质粒DNA沉淀加等体积饱和酚(400μl)混合↓12000r/min×10min离心吸上层水相移至另一EP管,加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)剧烈混匀呈乳白状↓12000r/min×10min离心吸上层水相移至另一EP管,加等体积氯仿:异戊醇(24:1)混匀↓12000r/min×10min离心吸上层水相移至新EP管(硅化),加入0.1体积的3mol/L NaAc(pH5.2)和2体积的-20℃预冷的无水乙醇,混匀(可见沉淀出现),置-20℃2h或0℃20min↓4℃12000r/min×15min离心弃上清,加75%乙醇(4℃预冷)200μl,稍加振荡,离心洗涤2次↓4℃12000r/min×5min离心去上清敞开管口,将管置于实验桌上直到最后可见的痕量乙醇蒸发殆尽溶沉淀于11μl TE溶液中↓↓取1μl电泳其余进行酶切2.、经0.7％琼脂凝胶电泳,确定有质粒DNA后,用XhoI进行酶切。