HIF-1α、VEGF在银屑病皮损中的表达及意义

ＢｏｎｅＪｏｉｎｔＳｕｒｇＡ砜１９９５。７７００）：１５５１－１５５６．【５】ＧｉｌｌＪＢ，ＫｕｐｅｒＭ。ｅｔａ１．Ｃｏｍｐａｒｉｎｇｐａｉｎｒｅｄｕｃｔｉｏｎｆｏｌｌｏｗｉｎｇｋｙｐｈｏｐｌａｓｔｙａｎｄｖｅｒｔｅｂｒｏｐｌａｓｔｙｆｏｒｏｓｔｅｏｐｏｒｏｔｉｃｖｅｒｔｅｂｒａｌｃｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎｆｒａｃｔｕｒｅｓ【Ｊ】ＪＳｕｒｇＯｒｔｈｏｐＡｄｖ，２００７．１６（２）：６２－－６６．【６】ＳａｄｏｗｓｋｉＣ，ＬｕｂｂｅｋｅＡ，ｅｔａ１．Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆ＂ｖｅｒ№ｏｂｌｉｑｕｅａｎｄｔｇａｎｇｖｅｍｉｎｔｅｒｔｒｏｅｈａｎｔｅｒｉｃｆｒａｃｔｕｒｅｓｗｉｔｈｏｆ∞ｉｎｔｒａｍｅｄｕｌｌａｒｙｎａｉｌ９５ｓｃｒｅｗ－ｐｌａｔｏ［Ｊ］．ＪＢｏｎｅＪｏｉｎｔＳｕｒｇ，２００２，８４：３７２．［７］ＳｉｍｍｅｒｎｍｅｈｅｒＢＫ，ＬｊｕｎｇｑｖｉｓｔＪ。ＢａｉｌＨ．ＨｏｃｋｅｒｔｚＴ．ＡＯ—ＰＦＮＡｓｔｕｄｙｇｒｏｕｐ．Ｔｎｅｐｒｏｘｉｍａｌｆｅｍｏｒａｌｎａｉｌａｎｔｉｒｏｔａｔｉｏｎ（ＰＦＮＡ）ｉｎｄａｉｌｙｐｒａｃｔｉｃｅ：ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅｃｌｉｎｉｃａｌｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｉｎｊｕｒｙ．２００８．Ａｕｇ，３９（８）：９３２—９９９．『８］ＳｔｒａｎｓｓＥ，ＦｒａｎｋＪ，ＬｅｅＪ．ＨｅｌｉｃａｌｂｌａｄｅｓｌｉｄｉｎｇｈｉｐｇｅｒｅＷｆｏｒｔｒｅａ帅ｔ

ｏｆｕｎｓｔａｂｌｅｉｎｔｅｒｔｒｏｃｈａｎｔｅｒｉｃｈｉｐｆｔａｃｔ㈣Ａｂｉｏｍｅｃｈａｎｉｅａｌｅｖａｌｕａｔｉｏｎ［ｆ１．Ｉｎｊｕｒｙ．２００６Ｏｃｔ，３７（１０）：９８４－９９９．编辑／贺丽

ＨＩＦ－１仅、ＶＥＧＦ在银屑病皮损中的表达及意义

杨海龙－，栗玉珍２，孙瑞１，刘晶玉１（１．大庆市人民医院皮肤科，黑龙江大庆１６３３１６；２．哈尔滨医科大学附属二院皮肤科，黑龙江哈尔滨１５００８６）摘要：目的探讨低氧诱导因子一１（ｈｙｐｏｘｉａ－ｍｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ一１，ＨＩＦ－１）血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在银屑病发病机制中的作用。方法采用免疫组化法检测寻常型银屑病患者皮损处ＨＩＦ－１、ＶＥＧＦ表达情况。并与正常皮肤进行比较分析。结果寻常型银屑痛患者皮损处ＨＩＦ－１、ＶＥＧＦ的表达明显高于正常对照组（Ｐ＜Ｏ．０５），ＨＩＦ－Ｉ与ＶＥＧＦ在银屑痛患者皮损中的表达差异有显著正相关性（Ｐ＜０．０５）。结论ＨＩＦ－１与ＶＥＧＦ在银屑病发病机制中的作可能起重要作用，并且具有协同促进性。关键词：银屑病：低氧诱导因子－１：血管内皮生长因子ＴｈｅＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＩＦ—ｌａａｎｄＶＥＧＦａｎｄｉｔｓＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｉｎＰｓｏｒｉａｓｉｓＶｕｌｇａｒｉｓＹＡＮＧＨａｉ－ｌｏｎ９１，ＬＩＹｕ－ｚｈｅｎ２，ＳＵＮＲｕｉｌ，ＬＩＵＪｉｎｇ－ｙｕｌ（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，ｎｅＤａｑｉｎｇＰｅｏｐｌｅ７ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｄａｑｉｎｇ１６３３１６，Ｃｈｉｎａ；２．ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＮｏ．２Ｈｏｓｐｉｔａｌ，ｈａ＇ｅｒｂｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｈａ＇ｅｒｂｉｎ１５００８６，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｏｌｅｏｆＶＥＧＦａｎｄｂＦＧＦｉｎｔｈｅＰａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｐｓｏｒｉａｓｉｓｖｕｌｇａｒｉｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎｄＨＩＦ－Ｉ、ＶＥＧＦＷａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｗｉｔｈｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔａｃｈｅｍｉｓｔｒｙｉｎｓａｍｐｌｅｓｏｆｐｓｏｒｉａｓｉｓｖｕｌｇａｒｉｓｔｉｓｓｕｅａｎｄｔｈｏｓｅｏｆｓｋｉｎｔｉｓｓｕｅｆｒｏｍｈｅａｌｔｈｙｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ．ＲｅｓｕｌｔｓＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨ１Ｆ一１、ＶＥＧＦｉｎｐｓｏｒｉａｓｉｓｖｕｌｇａｒｉｓｔｉｓｓｕｅＷａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｓｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｉｎｔｈｅｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜Ｏ．０５）．ＴｈｅｒｅｗａｓＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＩＦ—ｌａａｎｄｔｈａｔｏｆＶＥＧＦ（Ｐ＜０．０５）．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＨＩＦ－１ａｎｄＶＥＧＦｐｏｓｓｉｂｌｙｐｌａｙｔｈｅｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅＰａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｐｓｏｒｉａｓｉｓａｎｄｆａｃｉｌｉｔａｔｉｎｇｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ；ｈｙｐｏｘｉａ－ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ—ｌ；Ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ银屑病皮损处最先发生的病理改变是血管的分布和形成的异常ｔａ］。作为一种与血管生成相关的疾病，对银屑病的血管生成机制的研究现已成热点，特别是一些血管生成相关因子日益受到重视。在促进血管生成的各种调节因子中血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅ—ｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）是主要的刺激因子，ＶＥＧＦ的上调是银屑病病理生理学早期和鼋要的一步，而影响ＶＥＧＦ的各种因子也因此成为目前银屑病研究的热点。低氧诱导因子一ｌ（ｈｙｐｏｘｉａ—ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃ—ｔｏｒ－Ｉ，ＨＩＦ—１）是细胞在缺氧条件下产生的具有转录活性的核蛋白，它可促使ＶＥＧＦ的转录激活，从而诱导银屑病的血管生成。其很可能参与了银屑病的发病过程。目前ＨＩＦ—ｌａ在皮肤中的研究仍处于起步阶段。本实验以寻常型进行期银屑病患者及正常人皮肤为研究对象，采用免疫组化方法，观察其皮损处ＨＩＦ—ｌｅｔ、ＶＥＧＦ的表达情况．并对二者在银屑病皮损处的相关性进行比较分析．探讨ＨＩＦ—ｌｅｔ、ＶＥＧＦ在银屑病皮损处的微血管异常中发挥作用的情况。１资料与方法１．１一般资料寻常型进行期银屑病患者２８例，来自我院皮肤科门诊及住院患者，其中男１５例。女１３例；年龄范围１５－６５岁，平均４２．１岁；病程６个月～２０年，平均４．２年；皮损面积６％一４０％。并且符合以下标准：①两周内未使用糖皮质激素、维Ａ酸类药物局部治疗者；②八周内未系统使用糖皮质激素、免疫抑制剂者；⑨无其他系统性疾病及免疫功能缺陷者。活检取材ｏ．６ｃｍｘｌ．０ｃｍ大小皮损，躯干１５例，上肢５例．下肢８例。１５例对照组正常人皮肤来自我院整形美容科门诊手术室，其中游离植皮修复术６例（取腹部４例，下肢２例）。下睑松弛整形术４收稿Ｆ｛期：２０１０－１ｌ埘嗡桫例。面部除皱术５例，入选者均排除全身系统性疾病。所有标本经同定、包埋后，３１ｘｍ切片，取一张做苏木素一伊红染色，备普通病理用。１．２主要试剂抗ＶＥＧＦ（兔抗人单克隆抗体，工作液），抗ＨＩＦ—ｌｅｔ（鼠抗人单克隆抗体，工作液），免疫组化通用型两步法检测试剂盒ＰＶ６０００，以上三种试剂购自北京中杉生物技术有限公司。１．３实验方法免疫组化两步法（ＰｉｃＴｕｒｅＴＭ）：ＶＥＧＦ、ＨＩＦ—ｌｅｔ一抗用Ｏ．０１Ｍ枸橼酸盐缓冲液（ｐＨ６．０）进行高压热修复。３％Ｈ：０２去离子水避光室温孵育２０ｍｉｎ，灭活内源性过氧化物酶，滴加一抗，３７℃恒温箱湿盒内孵育６０ｍｉｎ，滴加通用型ｌｓＧ抗体（Ｆａｂ段）一ＨＲＰ多聚体，室温或３７。Ｃ孵育３０ｒａｉｎ，ＤＡＢ（０．０２％３．３’二氨基联苯）显色。苏木精复染，脱水，透明，封片后摄片。ＰＢＳ缓冲液代替一抗作阴性对照。１．４结果判定ＶＥＧＦ和ＨＩＦ—ｌｅｔ：细胞有棕黄色颗粒视为染色阳性。采用半定量计分法判定回。按着色程度评分，无着色＝ｏ，浅黄色＝ｌ，棕黄色＝２，棕褐色＝３。按阳性细胞所占比例评分，＜２０％＝ｏ，２０％一５０％＝１，５０％－８０％＝２，＞８０％＝３。按以上２项指标的积分和分为４级，（一）为０—１分，（＋）为２分，（＋＋）为３—４分．（＋＋＋）为５－６分。１．５统计学处理数据采用ＳＰＳＳｌ５．０／ＰＣ软件进行统计分析，ＶＥＧＦ和ＨＩＦ－ｌｅｔ结果采用等级资料比较的秩和榆验，ＶＥＧＦ和Ｈ１Ｆ—ｌｅｔ间表达相关性分析采用Ｓｐｅａｒｍａｎ等级相关。以Ｐ＜０．０５为有统计学意义。２结果２．１ＶＥＧＦ的表达ＶＥＧＦ在银屑病患者皮损中主要表达于角质形成细胞胞浆，为细胞内颗粒状棕黄色染色，ＶＥＧＦ表达几乎遍布表皮全层，但以棘层染色最强，基底层细胞染色明显减弱或不染色，真皮浅

层浸润的部分炎症细胞胞浆内亦可见到阳性表达。血管内皮细胞可

万方数据见少量表达（图１）。在正常人皮肤中ＶＥＧＦ亦有表达，但表达弱．表皮层以基底层及棘层细胞为主（图２），结果显示，ＶＥＧＦ在银屑病中的表达高于正常对照组，差异有统计学意义（ｕ＝２８，Ｐ＜Ｏ．Ｏｌｏ（见表１）

图１银屑病皮损处ｖｅｇｆ的表达图２正常皮肤中ｖｅｇｆ的表达（ＤＡＢｘ２００）（ＤＡＢｘ２００）表１ＶＥＧＦ在银屑病皮损组和正常人对照组中的表达

２．２ＨＩＦ—ｌｅｔ的表达ＨＩＦ—ｌａ在银屑病患者皮损中主要表达于细胞浆。定位于表皮基底层和棘层下部，为棕黄色或黄色，真皮少量表达于真皮浅层的血管，位于血管壁和血管周围，为黄色或淡黄色。毛囊、成纤维细胞和淋巴细胞亦有不规则表达（图３）。正常人皮肤中ＨＩＦ—ｌｅｔ几乎均为阴性表达，个别呈淡黄色弱表达于表皮的基底层（图４），ＨＩＦ－ｌｅｔ在银鸸病中的表达高于正常对照组，差异有统计学意义（ｕ＝１０３，Ｐ＜Ｏ．０１）。（见表２）

圈３银屑病皮损处ＨＩＦ—ｌａ圈４正常皮肤中ＨＩＦ－Ｉ（ｘ的表达（ＤＡＢｘ２００）的表达（ＤＡＢｘ２００）表２ＨＩＦ一１ａ在银屑病皮损组和正常人对照组中的表达

２．３相关性分析ＶＥＧＦ和ＨＩＦ—ｌｅｔ在银屑病患者皮损中的表达差异有显著相关性ｆｒ＝－Ｏ．４，Ｐ＜Ｏ．０５）。（见表３）表３银屑病皮损中ＶＥＧＦ与ＨＩＦ一１ａ的相关性分析３讨论ＶＥＧＦ是一种作用最强，且唯一能特异性作用于内皮细胞的有丝分裂原，它不仅可以促进真皮血管内皮细胞分裂增生，还可以增加血管通透性。并对炎症细胞、内皮细胞有化学趋化作用。笔者的实验表明，银屑病皮损处ＶＥＧＦ表达明显增加，这与Ｄｅｔｆｎａ一嘴；报道相一致。在正常人皮肤中也有一定量的ＶＥＧＦ表达，主要分布于表皮基底层和毛囊外毛根鞘部位，此处的ＶＥＧＦ可能以旁分泌作用调节皮肤血管的自身平衡１３Ｊｏ最近有报道１４将编码ＶＥＧＦ的基因转入小鼠皮肤可致银屑病样改变，包括特征性血管变化、表皮变化和炎性细胞浸润，这进一步表明ＶＥＧＦ可能在银屑病发病过程中起到重要作用。体外培养表明正常皮肤中主要是角质形成细胞分泌ＶＥＧＦ，而银屑病的角质形成细胞和成纤维细胞均分泌大量的ＶＥＧＦ。有关于ＶＥＧＦ在银屑病中表达的报道表明，由角质形成细胞分泌的ＶＥＧＦ对于银屑病皮损部血管异常起着决定作用，加重银屑病皮损处的炎症反应，促进银屑病的病理过程，且进行期皮损的真皮乳头层微血管内皮细胞上可见有ＶＥＧＦ受体一ＫＤＲ和ＦＩ１＇一ｌ的表达．而正常皮肤则无甄６１。大量针对血管形成因子及其受体的靶向治疗研究已诸见报道，如针对ＶＥＧＦ及其受体ｎｔ，ｎｋ、血管生成紊（Ａｎｇｉｏｐｏｉｅｄｎｓ）及其受体Ｔｉｅ、表皮生长因子（ＥＧＦ）及其受体（ＥＧＦＲ）ｕＩ等，并在不同程度上取得了抑制血管形成的效果，但是，由于血管的形成是由一系列而非单一血管生长因子来调控，因此，探索能够阻断多种血管生长因子的靶点显然比以单一血管生长因子为靶点更有实际治疗意义。低氧诱导因子一ｌ（ｈｙｐｏｘｉａ—ｉｎｄｕｃｉｂｌｅｆａｃｔｏｒ—ｌ，ＨＩＦ—１）是１９９２年由ｓｅｍｅｍａ等在Ｈｅｐ３Ｂ细胞株中发现的一种ＤＮＡ结合蛋白，可调控许多基因的表达。随着对ＨＩＦ—ｌａ研究的进展，发现其与缺血缺氧状态下机体的各种应答机制有密切的关系，可以使细胞适应低氧环境。ＨＩＦ—ｌｅｔ对ＶＥＧＦ的调控机制基本阐明田，ＨＩＦ－ｌｅｔ通过与ＶＥＧＦ５’端增强子相互作用来实现对ＶＥＧＦ的转录调节。在ＶＥＧＦ５’端增强子内存在ＨＩＦ—ｌｅｔ结合位点低氧反应元件（ｈｙｐｏｘｉａｒｅｓｐｏｎｓｅｅｌｅｍｅｎｔ，ＨＲＥｏ缺氧时积聚并且与ＤＮＡ结合活性增加，与ＶＥＧＦ基因的ＨＲＥ结合后，促使ＶＥＧＦ的转录活性和表达增强。有研究表明，诱导ＨＩＦ—ｌｅｔ突变则不能与ＶＥＧＦ增强子内的ＨＲＥ结合，使增强子的作用不能发挥。此时ＶＥＧＦｍＲＮＡ水平显著降低，即使在低氧条件下，ＶＥＧＦｍＲＮＡ也未被诱导表达；诱导ＶＥＧＦ上的ＨＲＥ缺失。同样使ＨＩＦ—ｌｅｔ不能与其结合而发挥转录作用［９１。“ｕ等㈣于新近发现，ＨＩＦ－１ａ在调节ＶＥＧＦ的转录活性和ＶＥＧＦｍＲＮＡ稳定性两个方面来影响ＶＥＧＦ的表达。ＨＩＦ—ｌｅｔ的过度表达则会提高ＶＥＧＦｍＲＮＡ的水平。在银屑病中细胞增殖增加了氧的消耗，表皮肥厚导致了．氧供应的障碍。ＨＩＦ—ｌｅｔ可很好反应机体缺氧情况．它可促使ＶＥＧＦ的转录激活，从而诱导银屑病的血管生成。其很可能参与了银屑病的发病过程。我们的实验亦显示在银屑病皮损处ＶＥＧＦ的表达与ＨＩＦ—ｌｅｔ的表达呈正相关。这表明银屑病角质形成细胞的过度增殖导致了局部的缺氧而激活了ＨＩＦ－１ｅｔ，表皮角质形成细胞在受到缺氧刺激后能通过自分泌或旁分泌的形式释放细胞因子，促进ＶＥＧＦ表达，而ＶＥＧＦ则通过内皮细胞上的特异性受体结合。使细胞内发生一系列改变，促使血管通透性增加及血管内皮细胞增殖、迁移，最终导致新生血管形成。检测ＨＩＦ—ｌｅｔ、ＶＥＧＦ的联合表达，对进一步了解银屑病血管生成情况以及寻找抗血管生成治疗新靶点有一定价值。许多用于肿瘤方面可抑制ＨＩＦ—ｌｅｔ活化的药物也有望试用于银屑病。随着研究的深入，血管生成机理在银屑病发病机制中的作用将逐步得到阐明，并对抗血管生成药物在银屑病的临床研究应用上具有重要的指导意