AAAA院感染管理环境卫生学采样及消毒灭菌效果监测要求根据《消毒技术规范(2002年版)》GB15979-2002、《医院消毒卫生标准》GB15982—1995及《内镜清洗消毒技术操作规范（2004年版）》等规定，特制定AAAA院环境卫生学采样及消毒灭菌效果监测要求。
一、空气消毒效果的监测1.1 采样时间:在消毒处理后或进行医疗活动之前采样。
采样高度：距地面垂直高度80～150cm1.2 采样方法：A:非层流房间(1) 布点方法:室内面积≤30m2，设内、中、外对角线布3点，内、外点布点部位距墙壁1M处；室内面积＞30m2，设 4 角及中央5 点，4 角的布点部位距墙壁1m 处。
(2) 采样方法:将普通营养琼脂平板(直径为9cm)放在室内各采样点处，采样高度为距地面1.5m 采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5min，盖好立即送检。
B：层流房间层流房间根据房间不同净化级别进行布点，操作按照GB50333-2002, 9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露30min后送检培养。
层流房间应在空态或静态条件下采样。
1.3 检测方法: 细菌菌落总数检查：将已采样完毕的培养皿在6h内送进实验室，置于37度温箱内培养48h…。
培养皿培养48h后，计算菌落总数，1.4 计算结果：非层流房间：按照公式计算：细菌总数（cfu/m3）=50000N/（A ×T）式中A为平板面积（cm2）；T为平板暴露时间（min）；N为平均菌落数（cfu）。
层流房间直接以个/30min.90皿为单位计算结果1.5 结果判定非层流房间：Ⅰ类区域：细菌总数≤10cfu/m3(或0.2cfu/平板)，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格；Ⅱ类区域：细菌总数≤200cfu/m3(或4cfu/平板)，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格；Ⅲ类区域：细菌总数≤500cfu/m3(或10cfu/平板)，未检出金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌为消毒合格。
层流房间：按照GB50333-2002要求判定二、物品和环境表面消毒效果的监测2.1 采样时间:在消毒处理后4h内进行采样。
消毒后的采样一定要采用中和剂，不同消毒剂所用中和剂则不同。
2.2 采样面积及采样方法:用5cm×5cm 的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，采样面积≥100cm2，连续采样 4 个，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1 支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各 5 次，并随之转棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检，送检时间不得超过6h。
门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样。
2.3 检测方法(1) 细菌总数检测: 将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80 次，用无菌吸管吸取1.0ml 待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已溶化的45℃～48℃的营养琼脂15ml～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±1℃温箱培养48h，计数菌落数。
采样结果计算方法：平板上菌落数×稀释倍数细菌总数(cfu/cm2)＝────────────────采样面积(cm2)小型物体表面的结果计算，用cfu/件表示。
2.4 结果判定Ⅰ、Ⅱ类区域：细菌总数≤5cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。
Ⅲ类区域细菌：总数≤10cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。
Ⅳ类区域细菌：总数≤15cfu/cm2，并未检出致病菌为消毒合格。
母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿室及儿科病房的物体表面不得检出沙门菌。
三、医护人员手及皮肤黏膜采样及检查方法3.1 采样时间：在消毒后立即采样或在接触患者、进行诊疗活动前采样。
3.2 采样方法(1) 手的采样: 被检者五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液浸湿的棉拭子在双手指曲面从指端到指端往返涂擦2次，一只手涂擦面积约30cm2，涂擦过程中同时转动棉拭子；将棉拭子接触操作者的部分剪去，投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，及时送检。
(2) 皮肤粘膜采样:用5cm×5cm 的标准灭菌规格板，放在被检皮肤处，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子 1 支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5 次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液的试管内，立即送检。
不规则的粘膜皮肤处可用棉拭子直接涂擦采样。
3.3 细菌菌落总数检查将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80 次，用无菌吸管吸取 1.0ml 待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入已溶化的45℃～48℃的营养琼脂15ml～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，置36℃±1℃温箱培养48h，计数菌落数。
3.4 采样结果计算方法：细菌总数(cfu/cm2)＝平板上菌落数×稀释倍数/采样面积(cm2)(2) 致病菌检测:按九的原则执行3.5结果判定：a)卫生手消毒，监测的细菌菌落总数应≤10cfu/ cm2。
b)外科手消毒，监测的细菌菌落总数应≤5cfu/cm2。
四、消毒液的监测4.1 使用中消毒液染菌量测定(1) 检测方法：1）涂抹法:用无菌吸管吸取消毒液1.0ml，加入9.0ml 含有相应中和剂的采样管内混匀，用无菌吸管吸取上述溶液0.2ml，滴于干燥普通琼脂平板，每份样品同时做2个平行样，一平板置20℃培养7d，观察霉菌生长情况，另一个平板置35℃温箱培养72h记数菌落数，同时按八的原则检测致病菌。
消毒液染菌量(cfu/ml)＝每个平板上的菌落数× 502）倾注法：用无菌吸管吸取消毒液1.0ml，加入到9.0ml 含相应中和剂的无菌生理盐水采样管中混匀，分别取0.5ml 放入 2 只灭菌平皿内，加入已熔化的45℃～48℃的营养琼脂15ml～18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，一平板置20℃培养7d，观察霉菌生长情况;另一个平板置36℃±1℃培养72h，计数菌落数，同时按九的原则检测致病菌。
消毒液染菌量(cfu/ml)＝每个平板上的菌落数× 20(2) 结果判断:消毒液染菌量≤100cfu/ml，并未检出致病菌为合格。
(3) 注意事项:采样后1h 内检测。
五、使用中消毒剂与无菌器械保存液6.1 采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液。
6.2 采样量及方法：在无菌条件下，用无菌吸管吸取1ml被检样液，加入9ml稀释液中混均，对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂，需在肉汤中加入0.1%硫代硫酸钠；对于洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入3%（W/V）吐温80和0.3%卵磷脂；对于醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3%甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入3%（W/V）吐温80，以中和被检样液的残效作用。
A6.3 细菌菌落总数检查按A2.5规定执行。
A6.3.1结果分析平板上有菌生长,证明被检样液有残存活菌,若每个平板菌落数在10个以下,仍可用于消毒处理(但不能用于灭菌),若每个平板菌落数超过10个,说明每毫升被检样液含菌量已超过100个,即不宜再用。
六、内镜消毒灭菌效果的监测5.1 采样时间:在消毒灭菌后、使用前进行采样。
5.2 采样方法: 监测采样部位为内镜的内腔面。
用无菌注射器抽取10ml含相应中和剂的缓冲液，从待检内镜活检口注入，用15ml无菌试管从活检出口收集，及时送检，2小时内检测。
5.3菌落计数：将送检液用旋涡器充分震荡，取0.5ml，加入2只直径90mm无菌平皿，每个平皿分别加入已经熔化的45℃-48℃营养琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，于35℃培养48小时后计数。
结果判断：菌落数/镜=2个平皿菌落数平均值×20。
致病菌检测：将送检液用旋涡器充分震荡，取0.2ml分别接种90mm血平皿、中国兰平皿和SS平皿，均匀涂布，35℃培养48小时，观察有无致病菌生长。
5.4 结果判定: 消毒后的内镜合格标准为：细菌总数<20cfu/件，不能检出致病菌；灭菌后内镜合格标准为：无菌检测合格。
七、一次性使用医疗用品产品细菌和真菌污染的检测7.1 细菌或真菌污染总菌数的检测7.2 目的检测一次性使用医疗用品消毒后残存细菌或真菌状况，存放一定时间后是否被细菌或真菌污染及其污染的程。
7.3 适用范围临床用于病人检查、治疗、护理用指套、手套、吸痰管、阴道窥镜、肛镜、印模托盘、治疗巾、皮肤清洁巾、擦手巾、压舌板、臀垫、中单等接触完整粘膜、皮肤的各类一次性使用医疗、护理用品。
7.4试验器材（1）营养琼脂培养基：见附录A。
（2）沙堡琼脂培养基（真菌培养用）：见附录A。
（3）无菌检查用洗脱液：见附录A。
（4）磷酸盐缓冲液（PBS，0.03mol/L，pH7.2）：见附录A。
（5）100级洁净室或100级层流超净工作台（下简称超净台）。
（6）安全操作箱（用于防止真菌孢子污染周围环境）（7）刻度吸管（1.0mol、5.0mol）7.5 抽样要求（1）抽样方法为使样品具有良好的代表性，采用随机抽样方法。
随机选取不同3个批号的产品。
根据检验要求，从每个批号产品中随机抽取同等数量的样品，尽量选自多个大包装。
不得在同一批号内的同一包装内邻近部位集中选取所需全部样品。
（2）抽样数量①对单一品牌、型别（或规格）产品鉴定取样：随机选取不同3个批号的产品。
从每个批号产品中随机抽取3个大包装。
从每个大包装中随机抽取20个最小销售包装产品（每个最小销售包装产品重量应达到10g以上；棉签等每个包装内数量达到5支以上，以满足检验最低需要量。
如果重量低于10g或数量少于5支时，适当增加抽取产品的最小销售包装数量。
）作为该品牌、批号产品抽检样品。
其中1/4样品用于首次检测，1/4样品用于留样，2/4样品用于必要时的复测。
样品最小销售包装应完整无破损（包装破损即可视为不合格产品、禁止出售），检测前不得开启。
②对同一品牌、不同型别（或规格）产品鉴定取样：分别对不同型别（或规格）产品进行随机抽检。
对每个型别（或规格）产品随机选取不同3个批号产品。
从每个批号产品中随机抽取3个大包装。
以下步骤同2.1.9.1.4（2）①。
③对不同一品牌、不同一型别（或规格）产品鉴定取样：分别对不同品牌、型别（或规格）产品进行随机抽检。
对每个品牌的每一个型别（或规格）产品随机选取不同3个批号的产品。
从每个批号产品中随机抽取3个大包装。
以下步骤同2.1.9.1.4（2）①。
7.6 检测样本的制作（1）检测数量①每批样品首次检测时，检测5个样本，分别在所选的5个最小销售包装内抽取。
②必要时进行复测。
