猕猴骨髓基质细胞的培养及鉴定
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小鼠骨髓基质细胞使用说明页数:3
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地塞米松对骨髓基质细胞生物学特性的影响页数:3
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干细胞鉴定
Von Kossa染色
确定细胞外基质矿化的方 法，只有成骨细胞在体外 培养时能形成矿化的细胞 外基质，一般培养至 6~8 周即可出现。原理是将矿 化基质中的磷酸盐(钙)、 碳酸盐(钙)转变为磷酸银、 碳酸银，然后用日光、紫 外线或强还原剂使其还原 为黑色的金属银。
I型胶原检测
成骨细胞可合成I型胶原， 是成熟成骨细胞的标识物 之一，免疫荧光法检测其 表达在骨细胞核周围。
体外分化
ES
EB
贴壁诱导
约5~7天后出现自主性搏动
Nestin (ectoderm )
Tubulin (ectoderm )
Troponin (mesoderm )
AFP (endoderm)
定向分化
脂肪细胞
神经元细胞
肝细胞
神经干细胞
• 广泛存在于成年或胚胎哺乳动物大脑内 • 可分化为神经元、星形胶质细胞、少突 胶质细胞。
人ES：相对松散、 扁平状集落,集 落内细胞界限隐 约可见
特异性表达
抗原
人ES 鼠ES
Oct-4
+ +
Nanog
+ +
SSEA-1
— +
SSEA-3
+ —
SSEA-4
+ —
抗原 SSEA1 SSEA3 SSEA4
人 ES/EC — +
人EG + +
猕猴 ES — —
鼠 ES/EC/ EG + —
马ES + —
鉴定方法
• 形态学：梭型、纤维样贴壁细胞 • 表面抗原：MSCs属混杂细胞群，其表面抗原也具有非专一性, 它表达了 间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志。主要包括: ①黏附分子, 如 CD166、CD54、CD102、CD44、CD106 等。②生长因子和细胞因子受体, 如 白介素21 受体( IL-1R )、IL-3R、IL-4R、IL-6R、IL-7R、C干扰素受体 ( IFN-CR)、肿瘤坏死因子(TNF) -A等。③整合素家族成员, 包括CD49a、 CD49b、CD49c、CD29、CD104 等。④其他如CD90、CD105 等。不表达造血 细胞的表面标志, 如CD34、CD45、CD14、CD3、CD4、CD8 等, 也不表达与 人白细胞抗原(HLA ) 识别有关的共刺激分子及主要组织相容性复合物类 分子如HLA-DR 抗原等。 • 多向分化能力：如可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱细胞、 平滑肌细胞、骨髓基质细胞、成纤维细胞及多种血管内皮细胞，甚至神经 系统的神经元和神经胶质细胞
2022届浙江省杭州市高三一模生物试题(含答案解析)
2022届浙江省杭州市高三一模生物试题学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________一、单选题1．为了保护大熊猫，我国在其栖息地建立了相应的自然保护区、人工繁殖基地。
下列关于该保护措施的叙述，正确的是（）A．属于就地保护B．增加物种多样性C．属于迁地保护D．增加生态系统多样性2．自噬是细胞利用内质网膜包裹细胞内待降解的结构或物质形成自噬体，并在溶酶体的参与下降解的过程，如图所示。
下列叙述正确的是（）A．游离核糖体是参与细胞自噬有关酶的合成场所B．线粒体中葡萄糖的糖酵解为细胞的自噬供能C．溶酶体参与细胞自噬的过程伴随有生物膜的更新D．高尔基体直接与多种生物膜连接提高物质交换效率3．秀丽隐杆线虫细胞的凋亡过程中有ced﹣3和ced﹣4基因的表达。
下列叙述正确的是（）A．线虫细胞的凋亡是受基因调控的死亡过程B．线虫细胞的凋亡是由于遗传物质发生改变引起的C．线虫细胞中ced﹣3和ced﹣4基因的表达会使细胞脱分化D．线虫细胞中ced﹣3和ced﹣4基因的表达会引发细胞破裂4．下列关于油脂、糖类和蛋白质鉴定的叙述，错误的是（）A．油脂鉴定前花生种子浸泡处理有利于切成薄片便于观察B．油脂鉴定过程中滴加50%酒精的目的是洗去多余的染液C．在梨汁中滴加适量本尼迪特试剂加热后显红黄色则证明含葡萄糖D．蛋白质溶液中先后加入适量双缩脲试剂A、B摇匀后即可显紫色5．下列关于种群特征的叙述，正确的是（）A．增长率大的种群，增长速率不一定大B．由于薇甘菊入侵导致松树种群密度下降属于内源性因素C．标记重捕法适合调查公园内灌木类植被上毛虫虫卵的密度D．若通过调控环境条件，使某动物的性成熟推迟，则出生率会更高6．自然界中碳循环的简图如图所示。
下列叙述正确的是（）A．甲为消费者B．乙为分解者，丙为生产者C．在丙→乙→甲所示的渠道中，碳元素以有机物的形式流动D．生物群落中的碳都是通过①②③过程进入无机环境中的7．感染肺炎链球菌的重症肺炎患者常常会出现呼吸困难、酸中毒、血浆蛋白减少及高热等症状。
大鼠骨髓巨噬细胞的分离_纯化_培养以及鉴定_李静
文章编号:0253-3626(2003)04-0436-04大鼠骨髓巨噬细胞的分离,纯化,培养以及鉴定李静,王亚平(重庆医科大学基础医学院组胚教研室,重庆400016)=摘要>目的:为深入研究骨髓巨噬细胞的生物学功能,探索一种简便的骨髓巨噬细胞的分离,纯化和培养的方法。
方法:分离获取大鼠骨髓细胞,在60%DM EM培养液,20%马血清,20%(v/v)L929培养上清的诱导条件下进行体外贴壁培养,6~7天时获得纯度较高的贴壁细胞。
采用倒置显微镜下观察生活状态、Wr ight c s染色光镜观察、电子显微镜观察检测贴壁细胞形态学;酸性磷酸酶及非特异性酯酶染色测定细胞内酶的表达;吞噬鸡红细胞及墨汁颗粒实验检测其吞噬功能;免疫细胞化学染色观察细胞表面标志等生物学技术鉴定培养的贴壁细胞性质。
结果:获得高纯度的巨噬细胞,且具有良好的吞噬功能,并且具备巨噬细胞的形态特征,特有的水解酶类及特有的表面标志-CD68。
结论:本法是一种简易实用的体外分离、纯化、培养骨髓巨噬细胞的方法。
=关键词>骨髓巨噬细胞;分离;纯化;鉴定=中国图书分类法分类号>R32.43=文献标识码>A=收稿日期>2002-09-24Methodology of separation,purification,cultivation an didentification of rat bone marrow macrophageLI Jing,et al(Dep artment o f Histolo gy and Embry ology,College of Basic Medical Sciences,Chongqing Medical University) =Abstract>Obj ective:T o study t he biolo gical functions of bone marrow macrophage(BM M5)and to establish the methodolog y of separation,purification,cultivation and identification of BM M5.M ethods:Using the techniques of anchorage-dependent culture of separated r at bone marrow cell(rBM C)in DM EM culture media(contain20%horse serum,20%(v/v)L929conditioned media)in v itro,a lo t o f purified anchor cells were obtained,and t hese cells were identified wit h specifically biological mar ker of macrophage, such as1,morpholog ical obser vation:invert phase contrast microscopy,light and electron microscopy;2,enzyme cytochemistr y:acid phosphatase(A CP),A-acet ic acid naphthol esterase(A-AN E);3,phagocytic exper iment:phag ocy tosis of chicken er ythrocy tes and prepared Chinese ink;4,immunocytochemistry:surface specific antig en of macrophage(CD68stain).Results:T he cells w er e purified having functional satisfactory macrophage acco rding to morphological observation,enzyme cytochemistr y,phag ocyt ic ex periment and immunocytochemistry.Conclusion:T his is a simple and easy method for separation,purification,cultivation and identificat ion of rat marro w macrophage.=Key w ords>Bone marr ow macro phag e;Separation;Purification;I dentification巨噬细胞是机体的重要防御细胞。
小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化及鉴定
小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养、纯化及鉴定赵继学;王广义;张海玉;伏鑫【摘要】目的探讨分离、培养、纯化和鉴定小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)方法,观察MSCs体外生长特征.方法取小鼠胫骨和股骨,取出骨髓细胞,用1.073 g/ml的Percoll分离液梯度离心,培养皿培养、换液除去非贴壁细胞,获得MSCs,通过传代对MSCs进行纯化和扩增培养.进行形态学观察,测定生长曲线,用流式细胞仪检测P3代MSCs细胞周期及表面抗原.结果新分离的MSCs呈小圆形,形态规整.培养传代后,细胞大小均匀,形态较一致,多为梭形.P1、P2、P3代MSCs生长曲线均呈S型.P3代MSCs 75.27%的细胞处于G0-G1期.P3代MSCs CD44表达阳性,表达率为88.71%,CD34表达阴性.结论利用密度梯度离心法联合贴壁培养法分离纯化骨髓MSCs,在含15%FBS的DMEM-LG培养基中培养MSCs,可获得稳定生长的昆明小鼠MSCs.培养的MSCs细胞系性状稳定,表型稳定均一,适于做进一步研究.%Objective To explore a new method for the isolation, cultivaton, purification and identification of MSCs and observe the biological features of mice MSCs in vitro. Methods Bone marrow was extracted from the tibia and thighbone of mice. The marrow liquid were isolated with 1. 073 g/ml ocrcoll. MSCs were obtained by removing the non-adherent cells. Then the MSCs were purified and expanded through passage in time. The growth curve was drawn and the morphology was observed. Cell cycle and the antigen expression of P3 MSCs were measured with FACS. Results The MSCs exhibited a small round shape after fresh separation. After cultivated and passaged,the MSCs were homogcnenously fusiform shaped. The growth curves of P1 ,P2 and P3MSCs were "S" shape. The cells of G0-G1 stage account for 75. 27%. The expression of CD 44 was positive, while the expression of CD34 was negative. Conclusion The method of density gradient centrifugation combined with adherent culture could isolate MSCs from bone marrow simplcly. DMEM-LG medium supplemented with 15% fetal bovine scrum is suitable for the culture of MSCs. The cultured MSCs lineage is stable and can be used for further research.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2012(016)001【总页数】3页(P11-13)【关键词】骨髓间充质干细胞;细胞培养;鉴定;小鼠【作者】赵继学;王广义;张海玉;伏鑫【作者单位】吉林大学第一医院儿外科,吉林长春130021;吉林大学第一医院普外科,吉林长春130021;吉林大学第一医院儿外科,吉林长春130021;中日联谊医院【正文语种】中文【中图分类】Q78骨髓间充质干细胞（MSCs）是骨髓中存在的除造血干细胞（HSCs）外的另一类干细胞。
GFP的简介和应用
GFP的简介和应用【摘要】源于多管水母属等海洋无脊椎动物的绿色荧光蛋白（GFP），是一种极具应用潜力的标记物，有着极其广泛的应用前景。
本文就GFP的理化性质、荧光特性、改进以及它在科学研究中发挥的作用进行了综述。
【关键词】绿色荧光蛋白（GFP）、标记物、荧光特性、进展、改进、应用、干细胞移植【正文】一、GFP的简介1. GFP的理化性质，荧光特性及其改进1.1 GFP的理化性质从水母体内分离到的GFP基因，长达2.6kD，由3个外显子组成，分别编码69、98和71个氨基酸。
GFP本身是一种酸性，球状，可溶性天然荧光蛋白。
Aequoria GFP分子量约27×103，一级结构为一个由238 个氨基酸残基组成的单链多肽；而Renilla GFP是分子量为54kD的同型二聚体。
两种GFP有不同的激发光谱，Aequoria GFP在395 nm具有最高光吸收峰，肩峰为473 nm；Renilla GFP在498 nm具有强烈的光吸收，肩峰为470 nm。
两种GFP含有相同的生色团，发射光谱基本相同（λmax= 508~ 509 nm）。
GFP性质极其稳定，易耐受高温处理，甲醛固定和石蜡包埋不影响其荧光性质。
其变性需在90℃或pH<4.0或pH>12.0的条件下用6mol/L盐酸胍处理，一旦恢复中性环境，或去除变性剂，虽然变性的蛋白质并不能完全复性，但是复性蛋白质同天然蛋白质对温度、pH变化的耐受性、抗胰蛋白酶消解的能力是相同的。
更重要的是，它们在很大的pH范围内的吸收、发射光谱也是相同的。
Renilla GFP的稳定性就更为显著。
它在上述一系列的变性条件下都很稳定，不易变性。
根据Sheen等的研究，GFP在受体内表达时，其稳定性并不亚于CAT 蛋白，因而可以得到持续时间较长的荧光。
1.2 GFP的荧光原理GFP的性质和发射光谱的稳定性是同其生色团结构的稳定性密不可分的。
GFP表达后折叠，在氧存在的条件下，使66位氨基酸残基的α、β键间脱氢。
生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程
生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程本规程适用于人用生物制品生产/检定用动物细胞基质，包括具有细胞库体系的细胞及原代细胞。
细胞基质系指可用于生物制品生产/检定的全部动物或人源的连续传代细胞系、二倍体细胞株及原代细胞。
生产非重组制品所用的细胞基质，系指来源于未经修饰的用于制备其主细胞库的细胞系/株和原代细胞。
生产重组制品的细胞基质，系指含所需序列的、从单个前体细胞克隆的转染细胞。
生产的细胞基质，系指通过亲本骨髓瘤细胞系与另一亲本细胞融合的杂交瘤细胞系。
一、对生产用细胞库细胞基质总的要求用于生物制品生产的细胞系/株均须通过全面检定，须具有如下相应资料，并经国务院药品监视治理部门批准。
〔一〕细胞系/株历史资料的要求1.细胞系/株来源资料应具有细胞系/株来源的相关资料，如细胞系/株制备机构的名称，细胞系/ 株来源的种属、年龄、性别和安康状况的资料。
这些资料最好从细胞来源试验室获得，也可引用正式发表文献。
人源细胞系/株须具有细胞系/株的组织或器官来源、种族及地域来源、年龄、性别及生理状况的相关资料。
动物来源的细胞系/株须具有动物种属、种系、饲养条件、组织或器官来源、地域来源、年龄、性别、病原体检测结果及供体的一般生理状况的相关资料。
如承受已建株的细胞系/株，应从具有肯定资质的细胞保藏中心猎取细胞，且应供给当细胞在保藏中心的具体传代过程，包括培育过程中所使用的原材料的相关信息，具有细胞来源的证明资料。
2.细胞系/株培育历史的资料应具有细胞分别方法、细胞体外培育过程及建立细胞系/株过程的相关资料，包括所使用的物理、化学或生物学手段，是否有外源添加序列，以及细胞生长特征、生长液成分、选择细胞所进展的任何遗传操作或选择方法等。
同时还应具有细胞鉴别、检定、内源及外源因子检查结果的相关资料。
应供给细胞培育液的具体成分，如使用人或动物源成分，如血清、胰蛋白酶、水解蛋白或其他生物学活性的物质，应具有这些成分的来源、制备方法及质量把握、检测结果和质量保证的相关资料。
试验室猴的猴T淋巴细胞白血病疾病的诊疗防治
试验室猴的猴T淋巴细胞白血病疾病的诊疗防治猴T淋巴细胞白血病（SimianTlymphotropicvirusdisease）是由猴T淋巴细胞白血病病毒（SimianTlymphotropicvirus，STLV）引起，是猴群的一种重要传染病，猴T淋巴细胞白血病病毒可引起猴的T细胞白血病或T-淋巴瘤，从而导致免疫器官病变或免疫机能紊乱，严重影响动物试验的研究，同时，该病毒在SPF 猴群中也必须排除。
病原猴T淋巴细胞白血病病毒（SimianTLymphotropicVirus，STLV）在病毒学分类中属于反转录病毒科、正反转录病毒亚科、丁（δ）型反转录病毒属。
根据血清学特征和基因组类型可将猴T淋巴细胞白血病病毒分为3个型，即STLV-1、STLV-2和STLV-3型，STLV-1型在核酸序列上与人类T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）有90%～95%的同源性。
形态学上，所有灵长类T细胞白血病病毒形态都相同，在电镜下呈球形颗粒，直径约100nm，由单股RNA、核蛋白及围绕在外面的二十面体蛋白衣壳组成。
猴T淋巴细胞白血病病毒抵抗力不强，常用的脂溶剂和有机溶剂，如洗涤剂、氯仿、苯酚、75%酒精灯，都可以使病毒的包膜受到破坏，从而使病毒灭活。
病毒对热源敏感，漂白水、X射线、紫外线和高压灭菌等方式对猴T淋巴细胞白血病病毒都有灭活功能。
在低温下猴T淋巴细胞白血病病毒稳定，培养液中的病毒加入20%的胎牛血清置于-70℃冰箱内可长久保存其感染性。
猴T淋巴细胞白血病病毒的类型是单股RNA病毒，根据血清学特征和基因组类型可将猴T淋巴细胞白血病病毒分为3个型，即STLV-1、STLV-2和STLV-3型。
猴T淋巴细胞白血病病毒基因组约9kb，具有反转录病毒结构和保守开放阅读框，分别编码结构蛋白gag、pro、env和调节蛋白tax、rex。
Gag可编码形成多型蛋白前体，随后蛋白前体可裂解为p15、p24、p19蛋白，与之对应而形成病毒的核衣壳、衣壳和基质蛋白质成分。
骨髓间充质干细胞体内归巢特性的研究_施小凤
264
江苏医药杂志 2004 年 4 月第 30 卷第 4 期 Jiangsu M ed J , A pril 2004, V ol 30, N o. 4
骨髓间充质干细胞体内归巢特性 张勇 张晓慧
骨髓基质细胞包括单 核内皮 细胞及 纤维母 细胞等 多种 细胞成份组成, 并组成造血微环境, 产生造血干/ 祖细 胞自我 更新、增殖及分化所必需的细胞因子, 维持正常的造血功 能。 业已证实, 骨髓基质有 起源于 间充质 的干细 胞, 该 类细 胞除 可组成造血微环境外, 尚具有多向分化能力。本研究 观察了 骨髓来源的间充质干细 胞( M SC) 体外生 长特性 及归巢 骨髓 的能力。
异基因外周血干细胞移植后纯红细胞再生障碍性 贫血的治疗
干细胞移植
吴汉新 李建勇 任志宏 钱思轩
患者男, 23 岁。因不 明原 因头 昏、乏力、牙 龈出 血 2 周 于 2002 年 8 月 2 日入院。既往有乙肝病毒小三阳史, 5 年前 在外院行先天性心房间隔缺损修补术治疗。入院后查: 重度 贫血貌, 巩膜无黄染, 口腔 黏膜血泡 , 牙 龈出 血, 四 肢皮 肤较 密集出血点, 淋巴结无 肿大, 心肺无 异常, 肝 脾肋下 未扪 及。 血 WBC0 8 109 / L , 中性粒细胞 绝对值( AN C) 0 1 109 / L , Hb33g / L, BPC8 109/ L , 网织 红细 胞 ( Ret) 计 数 0 05% ; 抗 核抗体( AN A) (- ) , Ham s 试验 (- ) ; 乙肝 病 毒小 三阳, HBVDNA(- ) , 丙肝抗 体(- ) ; 骨 髓细 胞学 涂片 及病 理学 活检 均为 再生障碍 性贫 血( A A) 。临床 诊断重 型 A A( SAA) 。8 月 17 日行 HLA 匹配患 者胞 姐外 周血 干细 胞( P BSC) 移植。A BO 血型受者 O 型, 供者 B 型。预 处理方案为 环磷酰胺 50 mg kg-1 d-1 连用 4 d。输注供者单核细胞( M NC) 2 9 108/ kg 和 CD34+ 细胞 3 3 106 / kg。用 环 孢素 A ( CsA ) 、短程 甲 氨蝶 呤、霉酚酸 酯( M M F ) 预防 移植 物抗 宿主 病( GVH D) 。 移植 后 2 个月内无发热、GVHD 等, 但 Hb 在 40~ 50 g / L , Ret 为 0, WBC 及 BPC 正 常。+ 11 d AN C> 0 5 109/ L, + 21 d BPC> 20 109 / L 。+ 40 d 检查患 者血型 由 O 转 为 B 型, 抗 B 凝集素测不出, + 58 d 染 色体 核型复 查仍 完全为 供者 型。 + 14 d 起 4 次骨髓 检查均示粒 系、巨 核系增生活 跃, 红 系缺 如。诊断为 移植后纯红细胞 AA ( PRCA ) 。于 + 65 d 予 大剂 量丙种 球 蛋白 ( 500 mg kg-1 d-1 ) 连 用 5 d, + 73 d Ret 为 5 0% , Hb72 g/ L , + 78 d Hb126 g/ L。+ 80 d 患者因 恐 CsA 对肝功能有损, 自行停 服 CsA 和 M M F, + 96 d 因 发生 爆发 性乙型病毒性肝炎, 患者家属拒绝行血浆置换等治疗 并自动 出院, 出院时血常规正常。
江苏医药杂志 2004 年 4 月第 30 卷第 4 期 Jiangsu M ed J , A pril 2004, V ol 30, N o. 4
骨髓间充质干细胞体内归巢特性 张勇 张晓慧
骨髓基质细胞包括单 核内皮 细胞及 纤维母 细胞等 多种 细胞成份组成, 并组成造血微环境, 产生造血干/ 祖细 胞自我 更新、增殖及分化所必需的细胞因子, 维持正常的造血功 能。 业已证实, 骨髓基质有 起源于 间充质 的干细 胞, 该 类细 胞除 可组成造血微环境外, 尚具有多向分化能力。本研究 观察了 骨髓来源的间充质干细 胞( M SC) 体外生 长特性 及归巢 骨髓 的能力。
异基因外周血干细胞移植后纯红细胞再生障碍性 贫血的治疗
干细胞移植
吴汉新 李建勇 任志宏 钱思轩
患者男, 23 岁。因不 明原 因头 昏、乏力、牙 龈出 血 2 周 于 2002 年 8 月 2 日入院。既往有乙肝病毒小三阳史, 5 年前 在外院行先天性心房间隔缺损修补术治疗。入院后查: 重度 贫血貌, 巩膜无黄染, 口腔 黏膜血泡 , 牙 龈出 血, 四 肢皮 肤较 密集出血点, 淋巴结无 肿大, 心肺无 异常, 肝 脾肋下 未扪 及。 血 WBC0 8 109 / L , 中性粒细胞 绝对值( AN C) 0 1 109 / L , Hb33g / L, BPC8 109/ L , 网织 红细 胞 ( Ret) 计 数 0 05% ; 抗 核抗体( AN A) (- ) , Ham s 试验 (- ) ; 乙肝 病 毒小 三阳, HBVDNA(- ) , 丙肝抗 体(- ) ; 骨 髓细 胞学 涂片 及病 理学 活检 均为 再生障碍 性贫 血( A A) 。临床 诊断重 型 A A( SAA) 。8 月 17 日行 HLA 匹配患 者胞 姐外 周血 干细 胞( P BSC) 移植。A BO 血型受者 O 型, 供者 B 型。预 处理方案为 环磷酰胺 50 mg kg-1 d-1 连用 4 d。输注供者单核细胞( M NC) 2 9 108/ kg 和 CD34+ 细胞 3 3 106 / kg。用 环 孢素 A ( CsA ) 、短程 甲 氨蝶 呤、霉酚酸 酯( M M F ) 预防 移植 物抗 宿主 病( GVH D) 。 移植 后 2 个月内无发热、GVHD 等, 但 Hb 在 40~ 50 g / L , Ret 为 0, WBC 及 BPC 正 常。+ 11 d AN C> 0 5 109/ L, + 21 d BPC> 20 109 / L 。+ 40 d 检查患 者血型 由 O 转 为 B 型, 抗 B 凝集素测不出, + 58 d 染 色体 核型复 查仍 完全为 供者 型。 + 14 d 起 4 次骨髓 检查均示粒 系、巨 核系增生活 跃, 红 系缺 如。诊断为 移植后纯红细胞 AA ( PRCA ) 。于 + 65 d 予 大剂 量丙种 球 蛋白 ( 500 mg kg-1 d-1 ) 连 用 5 d, + 73 d Ret 为 5 0% , Hb72 g/ L , + 78 d Hb126 g/ L。+ 80 d 患者因 恐 CsA 对肝功能有损, 自行停 服 CsA 和 M M F, + 96 d 因 发生 爆发 性乙型病毒性肝炎, 患者家属拒绝行血浆置换等治疗 并自动 出院, 出院时血常规正常。
大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定
大鼠骨髓间充质干细胞的培养与鉴定干细胞研究一直是生物医学领域的前沿热点，其中骨髓间充质干细胞（BMSCs）因其具有多向分化潜能和低免疫原性而备受。
在众多研究中，大鼠BMSCs的体外培养和鉴定方法为其在科研和临床领域的应用提供了基础。
本文将就大鼠BMSCs的培养、鉴定方法进行详细介绍，并结合实验数据进行阐述。
BMSCs是一种成体干细胞，具有自我更新和多向分化潜能，可以分化为多种细胞类型，如成骨细胞、脂肪细胞、肌肉细胞等。
因其来源广泛，免疫原性低，大鼠BMSCs已成为再生医学、免疫调节等领域的重要研究对象。
近年来，随着生物技术的不断发展，BMSCs的培养和鉴定方法也得到了不断优化和改进。
BMSCs的培养需要无菌环境，常用的培养基为DMEM、F12等，添加适量的生长因子和抗生素以维持细胞的生长和存活。
细胞的鉴定主要包括形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实。
其中，表面标志物如CDCD90等可用来区分BMSCs和其他细胞，多向分化潜能的证实包括成骨、成脂和成肌等方向的诱导分化。
本实验采用大鼠BMSCs的常规体外培养方法。
具体步骤如下：采集大鼠骨髓：在无菌环境下，用注射器抽取大鼠股骨和胫骨骨髓，加入肝素抗凝。
细胞分离：将采集的骨髓用密度梯度离心法分离出单个核细胞。
细胞培养：将单个核细胞接种于培养瓶中，用含10%血清、1%抗生素和1%谷氨酰胺的培养基培养。
细胞鉴定：经过约7-10天的培养，细胞达到80%-90%融合时，进行细胞鉴定。
通过形态学观察、表面标志物检测和多向分化潜能的证实，对BMSCs进行鉴定。
通过观察细胞的形态和生长情况，发现培养的BMSCs呈典型的长梭形，且细胞间连接紧密（图1）。
经表面标志物检测，BMSCs表达CD29和CD90等间充质干细胞表面标志物（图2）。
在多向分化潜能的证实中，我们发现BMSCs经成骨、成脂和成肌诱导后，可分别形成矿化结节、脂肪滴和肌纤维（图3）。
这些结果说明所培养的细胞为BMSCs。
恒河猴骨髓间充质干细胞的培养与鉴定
恒河猴骨髓间充质干细胞的培养与鉴定董婧婧;胡竹林;李妍;孙晓梅【摘要】背景:关于恒河猴骨髓间充质干细胞的研究结果很有限,来自幼年恒河猴骨髓间充质干细胞的分化潜力仍然未知.目的:探讨体外分离培养的恒河猴骨髓间充质干细胞生物学特性,对其生长曲线和表型进行初步鉴定.方法:采用密度梯度离心法和全骨髓贴壁培养法提取培养幼年恒河猴骨髓间充质干细胞,利用MTS法绘制第2,7代骨髓间充质干细胞生长曲线,利用流式细胞仪分析法检测第3代骨髓间充质干细胞凋亡及第4代骨髓间充质干细胞表面标志物CD29、CD34、CD45、CD90、CD147表达,检测第3代骨髓间充质干细胞的成骨及成脂分化能力.结果与结论:①第2,7代骨髓间充质干细胞在培养第一二天为潜伏期,第3-7天为对数生长期,第8天后细胞增殖逐渐减慢,进入平台期,第7代细胞增殖能力弱于第2代;②骨髓间充质干细胞表面标志物CD90、CD29、CD147呈阳性表达,CD34、CD45呈阴性表达;③流式细胞仪细胞凋亡检测结果显示,73.83％为活细胞,21.76％为死亡细胞,4.27％为凋亡细胞;④骨髓间充质干细胞可诱导分化为成骨细胞与成脂细胞;⑤结果表明,分离培养的恒河猴骨髓间充质干细胞生长活跃,有较强的增殖及多向分化能力.%BACKGROUND:Studies on rhesus monkey bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) are limited,and the differentiation potential of juvenile rhesus monkey BMSCs remains unknown.OBJECTIVE:To investigate the biological characteristics of rhesus monkey BMSCs isolated and cultured in vitro,and to identify the growth curve and phenotype ofBMSCs.METHODS:BMSCs from juvenile rhesus monkeys were isolated and cultured by density gradient centrifugation and the whole bone marrow adherence methods.BMSCs at passages 2 and 7 were taken to draw cellgrowth curves by MTS method.Flow cytometry was used to detect apoptosis of passage 3 BMSCs and to detect expression of cell surface markers,CD29,CD34,CD45,CD90,CD147,in passage 4 BMSCs.Osteogenic and adipogenic abilities of passage 3 BMSCs were also detected.RESULTS AND CONCLUSION:The BMSCs at passages 2 and 7 were incubated at first 2 days,logarithmically grew at 3-7 days,and then proliferated slowly at 8 days.The BMSCs at passage 2 showed stronger proliferation than those at passage 7.At passage 3,BMSCs were negative for CD34 and CD45,but positive for CD90,CD29 and CD147.Results from the fiow cytometry showed that there were 73.83％ living cells,21.76％ dead cells,and 4.27％apoptotic cells.BMSCs could differentiate into osteoblasts and adipocytes under osteogenic and adipogenic induction,respectively.Toconclude,BMSCs from the rhesus monkey have strong proliferation and multilineage differentiation abilities in vitro.【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2017(021)029【总页数】6页(P4623-4628)【关键词】干细胞;间充质干细胞;恒河猴;原代培养;形态学;分化;鉴定【作者】董婧婧;胡竹林;李妍;孙晓梅【作者单位】昆明医科大学第四附属医院,云南省第二人民医院眼科,云南省昆明市650021;昆明医科大学第四附属医院,云南省第二人民医院眼科,云南省昆明市650021;昆明医科大学第四附属医院,云南省第二人民医院眼科,云南省昆明市650021;中国医学科学院昆明医学生物研究所灵长类研究中心,云南省昆明市650018【正文语种】中文【中图分类】R394.20 引言 lntroduction间充质干细胞是分布在间质骨髓的多能祖细胞，在特定培养条件下有极强的增殖分化潜能，并打破了传统的胚层分化限制，可向3个胚层的细胞分化：内胚层的肝细胞，中胚层细胞的成骨细胞、脂肪细胞和肌细胞，外胚层的神经细胞等[1-4]。