水中贾第虫包囊的检测和杀灭及清除方法

饮用水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫的危害及防治摘要：贾弟鞭毛虫和隐孢子虫这两虫对饮用水安全造成了严重的威胁，饮用直饮水时尤其如此。

本文简要论述了贾弟鞭毛虫和隐孢子虫所造成的危害以及防治方法。

除了在饮用水水源上进行控制，最重要的是处理过后的出厂水要符合水质要求，防止饮用水的二次污染也是非常重要的。

关键词：饮用水安全贾弟鞭毛虫隐孢子虫防治1 引言饮用水的水质已经受到越来越多的关注。

据美国水协研究基金的专题研究报告，1991年流行病调查结果，在所有年龄组，每人每年生肠道病0.66次，其中2－12岁为0.84次，而肠道病35％是由于饮水引起的。

美国疾病预防及控制中心（CDC）估计美国饮用水引起微生物疾病而死亡的人数每年为900～1000人。

这个数字可能是低估的，因有些患病者原因很难确认。

根据推算及统计，微生物风险已大于化合物。

美国自来水协会对美国1976～1994年间由于水媒性流行病情况所作的调查统计显示，除部分不明原因者外，事故次数的84.1%和致病人数的99.2%是由于微生物引起的，而微生物的主要风险在寄生虫。

隐孢子虫、贾第鞭毛虫是水源中普遍存在的微生物。

据1991年3月到1993年4月调查，美国262个原水水样中有118个水样有贾第鞭毛虫，有135水样有隐孢子虫。

同时调查了260个出厂水样，发现12个水样有贾第鞭毛虫，35个水样有隐孢子虫【1】。

隐孢子虫是寄生于哺乳动物、鸟类及鱼类的胃肠道及呼吸道内的原生动物，为椭圆形，4～6微米，能在不利环境下生存，在有利环境下生存几个月。

隐孢子虫的感染是由于摄入了其感染阶段――卵囊而引起的。

受感染的人一天可排出109个卵囊，小牛和小羊每天可排出1010个以上的卵囊并超过14天。

由于人的抵抗力不同，人体感染1～100个卵囊可能发生隐孢子虫病。

我国隐孢子虫病感染率在正常人群中为1％－3.3％，有关部门对广东省地表水中隐孢子虫卵囊检出率为18.8％-37.5％，深圳水源中也发现过。

传染病防治：贾第虫病
贾第虫病是由蓝氏贾第鞭毛虫感染引起的疾病。

同阿米巴一样，贾第虫也有包囊和滋养体两种形态，也是通过粪-口途径传播。

由于其包囊能够抵抗氯化消毒及臭氧消毒，能在冷地表水中存活数周至数月，因而成为水源性腹泻爆发最常见的病原体之一。

在卫生条件差的地方，贾第虫还能通过人-人粪口途径，在托儿所、家庭成员、菜场、办公室和小型聚会中传播。

患者的粪便可能是水样、油腻样或者恶臭便,但一般没有血便或者黏液便。

贾第虫病病程一般超过7-10天，超过14天的则为慢性或者持续性腹泻。

这些病人容易发生营养不良。

对于贾第虫病来说，首选的治疗药物为甲硝哇、替硝哇和叶基丙酮。

次选药物为阿的平，吠喃哇酮和阿苯达哇。

甲硝嗖和叶基丙酮都是分次给药的药物，甲硝嗖疗程7天，有效率达80-95%,高于安慰剂及大多数老药；叶基丙酮可用于儿童，0.5bid疗程3天，有效率在儿童中达70%-85虬与甲硝嗖相似，耐受性较好。

替硝嗖是单次给药的药物，在该类药物中治愈率最高。

阿的平和吠喃嗖酮虽然治愈率不低，但是有严重的副反应。

对于患有贾第虫病的孕妇来说，许多药物需要避免使用，且若非必要，最好在分娩后或者在怀孕3月之后治疗。

对于严重者，可用肠道不吸收的巴龙霉素
0.5tid治疗5-10天，有效率可达60%-70%。

在怀孕后期6个
月，甲硝哇可能可以安全给药。

贾第虫检查+标准一、样品采集1.1 采集前准备在采集样品前，需要准备好采集工具和防护用品，如剪刀、采集瓶、手套、口罩等。

同时，需要了解样品采集的基本要求和注意事项。

1.2 采集方法根据需要采集的样品类型和采集场所的不同，采取不同的采集方法。

例如，对于食品和水样，可以采用随机抽样或系统抽样的方法进行采集；对于环境样品，可以采用网格或分区抽样的方法进行采集。

1.3 样品处理采集的样品需要进行适当的处理，以避免样品中贾第虫的死亡或丢失。

例如，对于食品和水样，需要保持样品原有的状态，避免过度震荡或过滤；对于环境样品，需要进行适当的分离和浓缩，以获得足够的贾第虫数量进行检测。

二、贾第虫培养2.1 培养基选择贾第虫的培养需要选择适合的培养基。

常用的培养基包括人造培养基和天然培养基。

其中，人造培养基适用于实验室条件下的培养，天然培养基则适用于自然环境中的培养。

2.2 培养条件贾第虫的培养需要适宜的条件，包括温度、湿度、光照和气体环境等。

不同的培养基和培养条件对贾第虫的生长和繁殖有不同的影响，需要根据实际情况进行调整。

2.3 培养过程将处理后的样品接种到培养基中，根据不同的培养条件进行培养。

在培养过程中，需要观察和记录贾第虫的生长情况，及时调整培养条件或添加营养成分，以保证贾第虫的正常生长和繁殖。

三、贾第虫检测方法3.1 显微镜观察法将培养后的样品用显微镜进行观察，通过观察贾第虫的形态特征和运动方式等来判断是否存在贾第虫。

显微镜观察法需要经验丰富的专业人员进行判断，以免出现误判或漏检的情况。

3.2 免疫学检测法免疫学检测法是一种基于抗原-抗体反应的检测方法，通过将特异性抗体与样品中的贾第虫抗原结合，形成抗原-抗体复合物，再通过信号放大和检测试剂等方法进行检测。

免疫学检测法具有灵敏度高、特异性好等优点，但需要使用抗体试剂和仪器设备等成本较高的材料。

3.3 分子生物学检测法分子生物学检测法是一种基于DNA杂交和PCR等技术的检测方法，通过检测贾第虫的特异性DNA片段来判断是否存在贾第虫。

摘　要：贾第虫病是蓝氏贾第鞭毛虫病的通称，属于寄生肠道的原虫性疾患。

人畜均可感染，畜禽感染后主要表现为腹泻、腹痛及腹胀，病情严重的可导致胆囊炎、胆管炎及肝脏损害等。

本病主要通过带有虫卵的粪便污染环境和水源，人畜经接触传染，野生动物体内是其保虫宿主。

本病应从治理水源污染入手，配合用药进行防控。

关键词：贾第虫；畜禽；感染；流行；防控1　病原和流行现有贾第虫的种类值得商榷，常用的种名还比较混乱。

目前寄生于人的种类叫做蓝氏贾第虫或十二指肠贾第虫或肠贾第虫。

有些贾第虫有自己专门的宿主，如老鼠的鼠贾第虫，两栖动物的敏捷贾第虫和鸟类的鹦鹉贾第虫。

目前根据分子生物学特征将贾第虫按集聚体来划分。

从宿主体内分离出的贾第虫经过分子生物学鉴定发现：A和B群主要感染人，C和D群主要感染犬，E群主要感染有蹄类动物（牛、绵羊、山羊、猪、马等），F群主要感染猫，G群主要感染老鼠。

A群有时也会感染猫或犬。

此外，全世界大约7%的人群肠道内存在贾第虫，但对它的流行病学却知道的很少，尤其是其他哺乳动物有可能作为人的感染源。

有迹象表明，动物有时可以排出A和B群，因而可以成为人的感染源。

然而，人通常还是通过其他人感染的，不过大多数人更倾向于相信病原是来自动物的。

贾第虫滋养体一般附着于小肠黏膜上皮细胞，形如泪滴，一端细长形成吸盘，双核，每个核内含有一个大的内体（核仁呈福尔根阳性），整个滋养体在显微镜下从底部向上看就像一个带有双眼的网球拍一样。

其他亚细胞结构包括两根细长的轴丝，4对鞭毛和一对中体。

除贾第虫寄生在小肠之外，其他所有的肠道鞭毛虫都寄生在盲肠和结肠。

贾第虫滋养体通过吸盘附着于黏膜细胞，通常随粪便排出前就已经形成感染性的包囊。

在带虫宿主的粪便中通常发现的虫体是含有两个潜在滋养体的成熟包囊。

尽管滋养体可因腹泻随粪便排出，但它们不能引起感染，并且很快就会死亡。

如果滋养体落入淡水中，由于它们无法进行渗透调节很快就会溶解。

犬在感染贾第虫后5d就开始腹泻。

水体中寄生虫的检测与治理水是生命之源，然而，水中寄生虫的存在对人类健康和生态环境构成潜在威胁。

因此，对水体中寄生虫进行有效的检测和治理显得至关重要。

本文将讨论水体中寄生虫的检测方法和治理措施，以保障水质安全和人民健康。

一、水体中寄生虫的检测方法1. 理化指标法理化指标法是通过检测水体的理化性质来推测是否有寄生虫的存在。

其中，浑浊度、色度、氨氮、pH值等参数被广泛应用于寄生虫的初步筛查。

这些指标可以快速提供水体是否受到寄生虫的污染。

2. 沉降法沉降法是通过对水样进行静置，在一段时间后观察水下沉淀物中是否有寄生虫的存在。

这种方法对于较大型的寄生虫，如蠕虫等，具有较好的检测效果。

通过沉降法，可以快速了解水体中寄生虫的种类和分布情况。

3. 微生物学检测法微生物学检测法是一种常用的水体寄生虫检测方法。

通过采集水样进行培养和观察，可以发现微生物级别的寄生虫，如原虫和硅藻等。

这种方法通常需要专业实验室进行操作和分析。

二、水体中寄生虫的治理措施1. 水源保护水源保护是预防水体寄生虫污染的关键措施之一。

加强水源地周边环境的保护，禁止污水直排等行为，可有效减少寄生虫进入水体的机会。

此外，定期检查和维护水源地的水质状况，确保水体的清洁和安全。

2. 预处理技术预处理技术包括净化和消毒等步骤，可有效降低水体中寄生虫的数量和活性。

常用的预处理技术包括过滤、沉淀、氯化等。

过滤可以去除水中的大型寄生虫囊泡，沉淀则可以使寄生虫和悬浮物沉降至底部，而氯化可杀死或抑制寄生虫的生长。

3. 技术改进对于水处理工艺，持续进行技术改进也是有效治理水体中寄生虫的方法之一。

采用先进的膜分离技术、紫外线消毒技术等可以提高水质处理效果并有效杀灭寄生虫。

此外，引入先进的水质监测系统，实时监测和预警寄生虫的污染情况，可以及时采取相应措施避免水质被寄生虫污染。

三、结语水体中寄生虫的检测与治理是保障水质安全和人民健康的重要环节。

通过理化指标法、沉降法和微生物学检测法等方法，可以准确检测水体中寄生虫的存在。

两虫方法确认材料生活饮用水中贾第鞭毛虫和隐孢子虫的测定免疫磁分离荧光抗体法测定方法验证报告（GB/T 5750.12-2006）1.目的通过能力确认，确认实验室检出限、回收率，方法重复性方面是否都达到标准要求，实验室是否具备开展用免疫磁分离荧光抗体检测定生活饮用水及水源水的贾第鞭毛虫和隐孢子虫的检测能力。

2.适用范围本标准规定了用免疫磁分离荧光抗体法测定生活饮用水及水源水中的贾第鞭毛虫和隐孢子虫（以下简称为“两虫”）的含量。

本标准适用于生活饮用水及水源水中的“两虫”的测定。

3.职责3.1 检测人员负责按操作规程操作，确保测量过程正常进行，消除各种可能影响试验结果的意外因素。

3.2复核人员负责检查原始记录。

3.3技术负责人负责审核检测结果。

4.测试方法4.1 术语和定义贾第鞭毛虫（Giardia）：一种可能在水中或其他介质中发现的原虫类寄生虫。

有两个种，宿主是：G.intestinalis（人类）和G.muris （鼠类）。

隐孢子虫（cryptosporidium）：一种可能在水中或其他介质中发现的原虫类寄生虫，有6个种哺乳类动物，包括人类；鸟类；鼠类；爬行类和鱼类。

4.2．试剂4.2.1 Easy seed G/C质控标样（贾第鞭毛虫孢囊100±1.6，隐孢子虫卵囊100±1.2）；4.2.2 挪威Dynal贾第鞭毛虫/隐孢子虫免疫磁分离试剂盒；4.2.3 美国Waterborne贾第鞭毛虫/隐孢子虫染色试剂盒；4.2.4 PBS缓冲溶液：NaCl，8g；KCl，0.2g；Na2HPO4，1.15g；KH2PO4，0.24g；纯水，1000mL，用氢氧化钠或盐酸调pH至7.2±0.1，在4℃可存储1个星期。

4.2.5 PBST淘洗缓冲液：NaCl，8g；，KCl，0.2g；Na2HPO4，1.15g；KH2PO4，0.2g；TWeen-20，0.1mL；纯水1000mL，将磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、氯化钾、氯化钠加入到900mL超纯水，搅拌20min 至完全溶解，加入0.1mLTween-20并继续搅拌10min，然后用超纯水稀释至1000mL；4.2.6 0.1mol/LHCl；4.2.7 1mol/LNaOH；4.2.8 去离子水4.3器材Dynal MPC-1 磁极、Dynal MPC-S 磁极、Dynal MX1 混合器、FM xpressV2.0快速淘洗装置系统、蠕动泵、IKA涡旋震荡混混合器、空气压缩机、四川蜀科离心机、Dynal L10 试管、BK-FL正置荧光显微镜、移液枪。

隐孢子虫、贾第鞭毛虫（两虫）检测系统招标参数1.应用范围：根据《生活饮用水标准》GB5749-2006及《生活饮用水标准检测方法》GB/T5750.12-2006，用于生活饮用水及水源水的快速多样品隐孢子虫、贾第鞭毛虫的检测。

2. 检测方法依据及系统要求：依据《生活饮用水标准检测方法》GB/T5750.12-2006 两虫检测方法，关键设备为进口。

用于对各类样品中隐孢子虫和贾第虫的分析。

包括捕获富集，净化和显微镜检测装置等。

以上仪器及其配套件（包括备件、特殊工具等）的货物包括供应、安装、调试、售后服务等相关服务。

投标商的投标型号应为厂家最新且在国内销售量较多的型号。

3.符合标准：▲国标《生活饮用水卫生标准》GB5749-2006及《生活饮用水标准检测方法》GB/T5750.12-2006▲美国US-EPA1622/1623方法▲英国UKDWI方法4.技术指标：*4.1综合回收率(过滤/淘洗、磁珠分离、染色)：稳定≥35%*4.2过滤速度：最高速度≥4.0升/分钟*4.3滤芯结构:多孔网状泡沫滤芯（回收率稳定于≥85%）滤芯包括60层多孔网状泡沫层，每层厚10mm, 外径55mm, 内径18mm，可从600mm压缩到30mm。

水样处理量：自来水10～1000升；原水10～50升。

4.4可处理水样浊度：≥50 NTU*4.5淘洗液消耗体积：≤100 mL/检测*4.6滤器取样：滤器可重复使用，每个样品只丢弃滤芯部分。

过滤器耐受压≥8巴。

4.7淘洗设备：两虫专用淘洗设备,单次淘洗时间≤15分钟。

4.8过滤/淘洗回收率：≥85%4.9相对标准偏差：≤8—14%4.10快速便利性：滤器滤芯携带、采样、冷藏、远程送检方便可靠，可直接与自来水龙头连接过滤。

4.11蠕动泵：可变流速范围：≥0.74~12L/分钟。

4.12离心机：用于隐孢子虫与贾第鞭毛虫淘洗样品的收集浓缩，无刷电机，悬式水平转头≥50mlx8，最大转速≥4000rpm 最大离心力：≥2300g ，无刹车系统或缓慢刹车4.13免疫磁分离设备：依据国标GB/T5750.12-2006 两虫检测方法。

640 引言水中致病微生物的种类多种多样，除了细菌、病毒外，致病性原虫的污染也越来越引起了人们的关注。

蓝氏贾第鞭毛虫(giardia)和隐孢子虫( cryptosporidium) 是两种常见的水生原虫，许多人、家畜及野生动物都因各种方式而感染“两虫”，引起以腹泻为主的原虫寄生虫病。

1993年，在美国威斯康星州密尔沃基市爆发了隐孢子虫病，造成100多人死亡[1]，据资料统计[2]，在美国每年仅新发隐孢子虫病例就占到74.8万例，这是一个非常庞大的数字；世界卫生组织估计全球新发贾第虫病占到50万例每年[3]，全球贾第虫感染率为1%-20%左右[4]。

我国首例人体隐孢子虫病例于1987年在南京市发现，随后在安徽省、福建省、内蒙古自治区、山东省等至少19个省（自治区）均发现了病例，近年来隐孢子虫感染率也有上升趋势[5]。

虽然我国早已于2006年，把“两虫”作为非常规检测指标列入《生活饮用水卫生标准》延安市区、县五家自来水厂的出厂水、末梢水各1份，每份采样体积为100 L。

采样前先处理好装水样的塑料水桶，确保干净、无“两虫”污染，采完后将水样立即运回实验室。

1.2 仪器与试剂离心机、蠕动泵、流量计、荧光显微镜，含隐孢子虫卵囊（1*102个）的质控标样（ESCG100）、含贾第虫包囊（1 *102 个）的质控标样（ESCG100）均购自BTF公司，醋酸纤维膜（CA膜，BS-M-CA4722）购自Biosharp公司，磁性分选试剂盒（730.12）购自Dynal公司，免疫荧光染色试剂盒（EST-CG80-D）购自BTF公司。

磷酸盐缓冲液(PBS)等购自国药集团化学试剂有限公司。

1.3 方法参照曹胜魁[3]等人的实验方法对采集回来的水样标本首先进行过滤、“两虫”免疫磁性分离、66两虫分离液。

1.3.3 免疫荧光染色根据两虫单克隆荧光抗体染色试剂盒描述的方法，将试管内两虫分离液加至载玻片加样井中后用甲醛固定。

然后向加样井中加入荧光标记的单克隆抗体，室温条件下孵育 50 min 后用PBS 缓冲液洗涤加样井 2 次，并用 4，6-二氨基-2-苯基吲哚液衬染两虫细胞核1 min 。

专利名称：水中贾第虫孢囊和隐孢子虫卵囊的检测方法专利类型：发明专利
发明人：白晓慧,万紫微,曾莉
申请号：CN200610030137.7
申请日：20060817
公开号：CN1908621A
公开日：
20070207
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及的是一种检测技术领域的水中贾第虫孢囊和隐孢子虫卵囊的检测方法，通过采用微孔滤膜过滤，经乙酸乙酯和福尔马林为10∶1梯度分离，铁苏木和改良抗酸联合染色法检测水环境中隐孢子虫和贾第氏虫，通过膜滤前筛网水样预处理减轻后续镜检背景复杂性，通过铁苏木和改良抗酸染色法分别实现对贾第虫和隐孢子虫的染色。

本发明可减轻贾第虫和隐孢子虫传统检测方法中背景较多杂质的干扰，提高形态结构特征的镜检确认准确度。

申请人：上海交通大学
地址：200240 上海市闵行区东川路800号
国籍：CN
代理机构：上海交达专利事务所
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浅谈水环境中隐孢子虫和贾第鞭毛虫的检测方法【摘要】水环境中微生物贾第鞭毛虫和隐孢子虫是两种严重危害水质安全的致病性原生寄生虫，主要通过水和食物等传播疾病，人和动物感染“两虫”所患疾病分别称为贾第鞭毛虫病和隐孢子虫病。

当前，人们逐渐认识到其对人类的危害不容忽视。

因此研究适合我国广大供水企业采用可靠的“两虫”检测方法极其重要，对保障我国城市供水水质安全具有重要的意义。

现就“两虫”在水环境中的检测方法予以综述。

【关键词】隐孢子虫；贾第鞭毛虫；检测一、隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测的改进方法传统方法在使用过程中逐渐暴露出检出率低、重现率差、过程复杂、成本昂贵等缺陷，笔者通过工作实践开始在各个步骤予以改进，摸索出各种优化方案。

（一）样品前处理优化对传统方法中的样品处理过程进行改进，方案如下：采样一膜过滤一刮擦一隔夜浸泡一漩涡振荡一2次摇床洗脱一离心浓缩一洗涤沉淀一再次离心浓缩一IMS（2次酸解离）一IFA镜检读数。

该方法改进之处如下：1.直接在洗脱基础上，增加了滤膜刮擦后隔夜浸泡和洗脱前剧烈振荡，提高回收率，且使回收率更稳定；2.更换洗脱液，投加高岭土浊液，提高水样浊度至4NTU；3.离心浓缩后洗涤沉淀2次酸解离。

通过以上改进步骤，缩短了反应混合时间，减少了两虫与磁珠结合体解离，最大限度保留两虫在终检物中的存在水平，使检测结果尽可能接近实际。

（二）方法联用传统方法重现率差，关键限制步骤在漂浮处理，沉淀分离法重现率高于蔗糖漂浮分离法。

通过沉降法与免疫磁分离法联用，改进浓缩步骤，提高了重现率。

沉降法与免疫磁分离法联用重现率可达38.9%～58.5%，高于蔗糖漂浮法（重现率为1.3%～5.4%）。

且卵囊（包囊）预先染色允许精确估计峰浓度等于或低于背景水平的重现率，重现率在一定范围的生物固体中稳定，不受贮存保留时间的影响。

（三）改进检测设备及检测步骤目前，已知的1622和1623方法检测系统主要有：a.Cartridge方法、b.Envirochek浓缩法、c.Filta-Max系统。