DNA回收试剂盒原理

DNA凝胶回收试剂盒产品说明书

北京四正柏生物科技有限公司网站: 客服热线:400-7060-959技术支持:DNA 凝胶回收试剂盒产品编号规格MDN3066-5050次MDN3066-100100次保存条件及效期：常温运输和保存，保质期一年。

产品描述：本试剂盒用于从琼脂糖凝胶中或DNA 反应体系中(如PCR 反应)回收DNA 片段。

试剂盒采用可以高效、专一结合DNA 的硅胶膜和独特的溶胶体系，或DNA 反应体系中回收的单链、双链及环状DNA ，回收效率可达50-90%(跟片段大小相关)。

得到的DNA 可直接用于连接、转化、酶切、测序、杂交等分子生物学实验。

产品组分：使用方法：1.凝胶回收：切取含DNA 片段的琼脂糖凝胶(100mg 左右，尽可能多地把多余的胶切除，否则会影响回收效率)，放入一干净的1.5ml 塑料离心管(自备)中，用移液枪头捣碎，按重量比为1：3到1：5的比例加入通用溶胶液(100mg 琼脂糖凝胶需要加入300μl-500μl 通用溶胶液)。

PCR 产物回收：直接在PCR 反应管中加3-5倍体积的通用溶胶液，混匀，然后跳过第2步、直接从第3步做起。

如果PCR 反应中使用了石蜡，需要预先去除。

2.50℃保温使胶完全溶化(一般需要5分钟)，其间可以振荡数次以促进琼脂糖凝胶的溶化。

如果片段长度在300bp 成份50次包装100次包装通用溶胶液25ml 50ml 吸附柱活化液25ml 50ml 通用洗柱液50ml 100ml 离心吸附柱50套100套DNA 洗脱液10ml 10ml 说明书1份1份以下，建议不要加热，以免DNA变性，影响回收率。

3.在等待期间，活化离心吸附柱。

在离心吸附柱中加入0.5mL吸附柱活化液，套上收集管后室温放置2分钟，然后12,000rpm离心2分钟，倒弃穿透液，再将吸附柱套上收集管后待用。

活化后的离心吸附柱必须在当天使用。

4.在上柱前，在溶化的胶中加入相当于胶块体积1/2的异丙醇（对100mg胶块，加50uL），快速振荡10秒混匀。

AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒说明书

AxyPrep DNA凝胶回收试剂盒本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中提取多至8 μg DNA（70bp-10Kb），回收率为60-85%。

琼脂糖凝胶在温和的缓冲液(DE-A溶液)中溶解，其中的保护剂能防止线状DNA在高温下降解，然后在DE-B溶液的作用下使DNA选择性结合到膜上。

纯化的DNA纯度高，并保持片断完整性和高生物活性，可直接用于连接、体外转录、PCR扩增、测序、微注射等分子生物学实验。

一、试剂盒组成、贮存、稳定性说明书，耗材：DNA制备管、2 ml离心管、1.5 ml离心管。

Buffer DE-A：凝胶熔化剂，含DNA保护剂，防止DNA在高温下降解。

室温密闭贮存。

Buffer DE-B：结合液（促使大于70 bp的DNA片段选择性结合到DNA制备膜上）。

室温密闭贮存。

若出现沉淀，应于70°C温育溶解并冷却至室温后再使用。

Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。

Buffer W2 concentrate：去盐液，使用前，根据瓶上数量加入乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。

可用100%无水乙醇或95%乙醇。

Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室温密闭贮存。

二、注意事项1. 在步骤1中，将凝胶切成细小的碎块可大大缩短凝胶熔化时间（线型DNA长时间暴露在高温条件下易于水解），从而提高回收率。

勿将含DNA的凝胶长时间地暴露在紫外灯下，减少紫外线对DNA 造成的损伤。

2. 在步骤2中凝胶必须完全熔化，否则将严重影响DNA回收率。

3. 将Eluent或水加热至65°C，有利于提高洗脱效率。

4. DNA分子呈酸性，建议在2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5洗脱液中保存。

三、实验准备1. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。

2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。

3. 准备75°C水浴。

四、操作步骤1. 在紫外灯下切下含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面液体并切碎。

胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理

胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理首先，将含有目标DNA片段的琼脂糖凝胶切割出来。

这可以通过电泳将DNA片段从DNA混合物中分离出来，然后在紫外灯下观察到DNA片段的迁移带。

然后，将切割的琼脂糖凝胶用试剂盒提供的缓冲液进行均质化处理。

均质化后的琼脂糖凝胶中含有目标DNA片段。

接下来，使用离心机将均质化后的琼脂糖凝胶离心。

离心的目的是将琼脂糖凝胶上的DNA片段分离出来。

DNA片段会沉积到离心管底部的沉淀中。

上清液中则只含有琼脂糖凝胶、缓冲液和其他杂质。

然后，将离心管中的上清液去除。

去除上清液的目的是除去琼脂糖凝胶的残余和其他杂质，以便纯化DNA片段。

最后，向离心管中加入酶切缓冲液和蛋白酶。

酶切缓冲液包含酶切DNA片段所需的盐和缓冲成分，以及一些防止核酸降解的物质。

蛋白酶则会降解琼脂糖和与其结合的蛋白质。

在将酶切缓冲液和蛋白酶加入后，离心管需要在适当的温度下进行酶切反应。

酶切反应的目的是分解凝胶中的琼脂糖和与其结合的蛋白质，从而释放出目标DNA片段。

在酶切反应完成后，离心管需要再次进行离心，以将琼脂糖和其他残留物沉淀到离心管底部。

上清液中则含有纯化后的DNA片段。

最后，将离心管中的上清液转移至干燥消化DNA纯化膜（试剂盒中提供），并根据试剂盒的说明进行后续的DNA回收操作。

根据不同试剂盒的要求，DNA可以通过洗涤、低温离心或其他方法进行最终的回收。

总的来说，胶回收DNA试剂盒的原理是通过离心法和蛋白酶酶解法将凝胶上的目标DNA片段回收，以获得纯化后的DNA样品。

这一方法简单有效，可以应用于分子生物学和生物医学研究中的DNA分析和操作。

PCR产物的克隆(DNA的胶回收和连接)技术方案及实验原理

PCR产物的克隆(DNA的胶回收和连接)技术方案及实验原理【实验原理】1.DNA片段回收方法：DNA片段在适当浓度的琼脂糖凝胶中，通上一定电压进行电泳，不同大小的DNA分子由于迁移率的不同而分离开。

切下带有所需DNA 片段的凝胶，用冻融法、玻璃奶回收法或商品化胶回收试剂盒将目的片段回收纯化。

2.利用Taq酶能够在PCR产物的3’末端加上一个非模板依赖的A，而T载体是一种带有3’T突出端的载体，在连接酶作用下，可以把PCR产物插入到质粒载体的多克隆位点，可用于PCR产物的克隆和测序。

商品化的T载体有很多。

本实验采用TaKaRa公司的pMDTM18-T Simple Vector。

这个载体以pUC19载体为基础，消除了pUC18载体上的多克隆酶切位点，经EcoRⅤ酶切后在两侧的3＇端添上“T”制备而成（见附录1）。

由于本载体上消除了多克隆酶切位点，克隆后的PCR产物将无法使用载体上的限制酶切下，需要在PCR扩增引物上导入合适的酶切位点。

【试剂与器材】（一）试剂1.pMDTM18-T Simple Vector Kit（Takara公司）。

2.TAE电泳缓冲液3.琼脂糖（Agarose）4.6×电泳加样缓冲液：0.25％溴粉蓝，40％(w/v) 蔗糖水溶液，贮存于4℃。

2 / 95.溴化乙锭(EB)溶液母液：配制成10mg/mL，用铝箔或黑纸包裹容器，储于室温即可。

6.70%乙醇7.胶回收试剂盒（Omega公司）（二）器材水平式电泳装置,电泳仪,台式高速离心机, 恒温水浴锅, 微量移液枪, 微波炉或电炉,紫外透射仪, 凝胶成像系统或其它照相设备。

【操作方法】（一）胶回收试剂盒回收PCR产物（以Omega公司Gel Extraction Kit为例）1.当目的片段DNA完全分离时，转移凝胶至紫外灯上尽可能快地切下目的片段。

2.凝胶块转移至1.5ml离心管(离心管已经称重了)中，称重得出凝胶块的重量。

从琼脂糖凝胶中回收DNA

五、实验结果与讨论
1. 实验结果 2. 讨论
附I： TaKaRa Agrose Gel DNA Purification Kit Ver2.0回收DNA 的操作步骤
1. 使用TAE或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。 2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶。应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减少凝胶体积，提高DNA回收率。注: 切胶时不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防DNA损失。
五、注意事项
切胶时不要将DNA长时间暴露于紫外灯下，以防DNA损失。胶块一定要充分融化,否则会严重影响 DNA的回收率。混合振荡操作不要过于剧烈。灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60゜C 使用时有利于提高洗脱效率。 DNA需长期保存时，建议使用Elution Buffer。纯化的DNA用于序列分析时，最好使用灭菌的双蒸水进行DNA的洗脱。
四、百泰克DNA回收试剂盒回收DNA的操作步骤
1. UV下切下DNA条带，尽量切除不含 DNA的凝胶； 2. 将切下的胶块放入1.5ml EP 管中，称重； 3. 加2倍体积的溶胶/结合液DB(如凝胶重 0.1g，加200μl DB溶胶液)； 4. 56℃水浴4-6 min 至胶完全溶解，每2 min涡旋震荡一次帮助加速溶解；（每100mg最初的凝胶重量加150ul的异丙醇，震荡混匀）
3. 切碎胶块，可加快步骤6的胶块融化时间，提高DNA回收率。
4. 称量胶块重量，计算胶块体积。以1mg=1µ L进行计算。
5. 向胶块（1%）中加入3个凝胶体积量的胶块融化液DR-1 Buffer。 6. 混合均匀后75゜C加热融化胶块。并间断振荡混合，使胶块充分融化（约6-10分钟）。

PH0208 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒实验操作步骤原理

片段未回收或回收率低
凝胶体系 pH 太高
太高，DNA 不能与吸附柱有效结合，用少量 NaAc pH2.5 将溶液颜色调至黄色吸附柱上的 DNA 在低盐和高 PH 条件下被有
洗脱缓冲液 pH 不合适
效洗脱。其最大洗脱率 PH 在 7.0-8.5 之间。如用灭菌水洗脱，保证 PH 在其范围内洗脱体积不能低于 30ul，并保证洗脱液加到吸附柱中间位置紫外线对 DNA 的破坏会导致连接后的转化

使用参考
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 1. 将单一的目的 DNA 条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量。 2. 向胶块中加入 3 倍体积溶胶液 PN （如果凝胶重为 100mg，其体积可视为 100 ul，则加入 300 ul 溶胶液），55℃水浴放置 10 分钟，其间不断温和地上下翻转离心管，以确保胶块充分溶解。
琼脂糖凝胶常见问题分析
常见问题
可能原因漂洗液 PW 中未加入无水乙醇或加入的比例不正确
建议首次使用请严格按照标签说明加入无水乙醇；用完后盖紧瓶盖，以防乙醇挥发按照凝胶重量与溶液 PN 的体积比为 1:3 加
凝胶没有完全溶解
入溶胶液，并在融化过程中间歇混匀使凝胶完全融化如果凝胶体系变为粉红色，说明溶胶体系 pH

试剂组分
Componets 溶胶液 PN 3M NaAc pH5.2 漂洗液 PW 洗脱缓冲液 EB 吸附柱 CA1 收 mL 100 个 100 个 1份 200T 200 mL 500μl 2×25 mL 15 mL 2×100 个 2×100 个 1份
注意： a) 吸附柱 CA1 的有效容积为 700μl，如溶胶体系体积大于 700μl，分次上柱，保证全部溶液都加到吸附柱中。 b) <100bp 和>10kb 的片段请在室温放置 10 分钟，这将会提高回收效率。 5. 向吸附柱中加入 700μl 漂洗液 PW（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），13,000 rpm 离心 60 秒，倒掉废液，将吸附柱重新放入收集管中。 6. 向吸附柱中加入 500μl 漂洗液 PW，13,000 rpm 离心 30-60 秒，倒掉废液。 7. 将离心吸附柱 CA1 放回收集管中，13,000 rpm 离心 2 分钟，尽量除去漂洗液。注意：此步必不可少！如果漂洗液有残留会影响回收效率和 DNA 质量，进而影响下游实验；离心后将吸附柱盖子打开，室温放置 2 分钟，这样将有助于彻底挥发残余乙醇。 8. 将吸附柱放到一个干净离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液 EB （一般不要少于 30μl），室温放置 2 分钟。 13,000 rpm 离心 1 分钟收集 DNA 溶液。注意： a) 可将洗脱缓冲液 EB 预热到 70℃后再加到吸附膜上，这样可以提高洗脱效率。 b) CA1 柱的洗脱体积不应少于 30 μl，体积过小将会降低回收效率。 c) 洗脱液的 pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗脱效率 9. DNA 产物-20℃保存。

快速凝胶回收实验报告

一、实验目的本实验旨在通过快速凝胶回收方法，从琼脂糖凝胶中回收目的DNA片段，为后续的PCR扩增、酶切、连接等分子生物学实验提供高质量的模板DNA。

二、实验原理凝胶回收是分子生物学实验中常用的技术之一，主要用于从琼脂糖凝胶中回收目的DNA片段。

本实验采用的方法是利用琼脂糖凝胶中的DNA片段在低盐、高pH值条件下，可被特定的吸附剂（如硅胶膜、磁珠等）特异性吸附的特性，通过简单的操作步骤，将目的DNA片段从凝胶中分离、纯化。

三、实验材料1. 琼脂糖凝胶2. 目的DNA片段3. DNA回收试剂盒（含吸附剂、缓冲液等）4. 1.5 mL离心管5. 离心机6. 电泳仪7. 凝胶成像系统四、实验方法1. 准备琼脂糖凝胶电泳，将目的DNA片段与载体DNA混合，加入琼脂糖凝胶中，进行电泳分离。

2. 将电泳后的凝胶在紫外灯下观察，确定目的DNA片段的位置。

3. 使用DNA回收试剂盒中的吸头，将目的DNA片段从凝胶中剪下。

4. 将剪下的凝胶片段放入1.5 mL离心管中，加入适量的缓冲液，用吸头充分混匀。

5. 将混匀后的离心管置于离心机中，以12,000 rpm离心5分钟，使DNA片段吸附在吸附剂上。

6. 弃去上清液，用缓冲液洗涤吸附剂，重复洗涤步骤2次。

7. 将洗涤后的离心管置于离心机中，以12,000 rpm离心3分钟，使DNA片段充分沉淀。

8. 弃去上清液，加入适量的TE缓冲液，用吸头充分混匀，使DNA片段溶解。

9. 使用凝胶成像系统观察DNA片段的回收情况。

五、实验结果与分析1. 电泳结果显示，目的DNA片段成功从琼脂糖凝胶中回收。

2. 凝胶成像系统显示，回收的DNA片段大小与预期相符。

3. 回收的DNA片段纯度较高，可用于后续的PCR扩增、酶切、连接等分子生物学实验。

六、实验讨论1. 本实验采用快速凝胶回收方法，操作简便，节省时间，适用于大量样品的回收。

2. 实验过程中，应注意以下几点：a. 凝胶回收时，应确保目的DNA片段在凝胶中的位置准确。

胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理

胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理胶回收DNA试剂盒是一种常用的分子生物学实验工具，用于从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA的方法。

其原理主要基于琼脂糖凝胶电泳的分离特性和DNA与硅胶膜亲和吸附的原理。

下面将详细介绍胶回收DNA试剂盒的原理和方法。

1.原理：1.1琼脂糖凝胶电泳分离：首先，将DNA样品与琼脂糖混合并加热使其溶解后，将混合物加入琼脂糖凝胶槽中，随后进行电泳。

由于琼脂糖具有分子筛的特性，DNA分子根据大小被分离在凝胶中的不同位置。

1.2硅胶膜吸附：电泳结束后，将琼脂糖凝胶取出，然后将硅胶膜放置在凝胶表面，使其与DNA分子接触。

由于硅胶膜具有强烈的亲和吸附性，它能够有效地吸附DNA分子。

1.3洗脱纯化：在硅胶膜上吸附的DNA分子可以通过洗脱的方式从硅胶膜上释放出来。

一般情况下，通过使用适当的缓冲液可以将DNA洗脱出来，得到纯化的DNA样品。

2.方法：2.1样品制备：将待分离和纯化的DNA样品进行适当的制备处理，如酶切产生的片段、PCR扩增产生的产物等。

根据需要，可以使用酶切缓冲液、PCR停止液等添加剂来优化样品的制备。

2.2琼脂糖电泳：将样品加入琼脂糖凝胶槽中，通过电泳操作进行DNA分离。

根据需要，使用适当的电泳缓冲液和电泳条件来获得所需的分离效果。

2.3硅胶膜吸附：电泳结束后，取出琼脂糖凝胶，将硅胶膜放置在凝胶表面，使其与DNA分子接触。

根据实验要求，可以根据需要对硅胶膜进行预处理，如加热、孵育等。

2.4洗脱纯化：通过使用适当的洗脱缓冲液，将硅胶膜上吸附的DNA 洗脱出来。

通常，洗脱缓冲液中包含盐和其他成分，以提高DNA的纯度和回收率。

2.5最终保存：将洗脱的DNA样品进行适当的保存和处理。

根据实验需求，可以进行浓缩、冻干或直接用于后续实验。

总结：胶回收DNA试剂盒通过利用琼脂糖凝胶电泳分离DNA，并利用硅胶膜的亲和吸附性，实现了从琼脂糖凝胶中回收纯化DNA的目的。

这种方法简便易行，能够在短时间内获得高质量的DNA样品，广泛应用于分子生物学研究和实验室应用中。

胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理

胶回收DNA试剂盒的原理和方法\一原理1、硅胶膜捕获核酸的原理是什么？利用核酸在裂解液下与硅胶膜特异结合，在洗脱液条件下被洗脱的原理。

2、我们一般都用硅胶膜来浓缩DNA片断，尤其是PCR产物，那硅胶膜能对RNA吸附吗？效率有多少？可以，在酸性条件下可以结合，国外公司试剂盒所用大多是此原理。

效率中等。

3、硅胶膜对双链DNA有吸附作用，那对单链DNA有吸附作用吗？对DNA/RNA杂合链能吸附吗？吸附效率分别有多少？对单链DNA有吸附作用。

DNA/RNA杂合链能吸附，但在裂解条件下DNA/RNA可能会解离，可以尝试一下。

另外可以尝试用Desaltfast200快速脱盐试剂盒，对DNA/RNA影响较小，纯化速度快。

二一般试剂盒的用法1 试剂盒的产品包括溶液I(融胶液)溶液II(洗涤液) (第一次使用前按照说明加入无水乙醇)溶液III(洗脱液)DNA纯化柱废液收集管2 使用方法（按照说明，不同公司产品操作方法有差异这里以其中一种为例）a 切胶回收后，称重，将胶切碎或在离心管内用1ml枪头捣碎。

b 加入等体积的溶液I（如胶为100mg，则加100微升溶液I），vortex或颠倒混匀。

c 50-60℃水浴加热约10分钟至胶全融，期间，需vortex或颠倒混匀3-4次，以加速凝胶融解。

果胶碎片较小，3-5分钟即可全融，凝胶碎片较大则需较长时间，胶全融后至少再在50-60℃水浴加热2分钟。

50-60℃间任一温度都适合于本试剂盒。

如果DNA片断大于5kb，宜颠倒混匀。

V ortex容易导致大片断DNA断裂。

d 加入到DNA纯化柱内，室温放置1分钟。

如果体积较大，DNA纯化柱内容纳不下，可以把部分样品加入到纯化柱内，经离心处理后，再加入剩余的样品继续处理。

e 最高速(16000g，约12000-14000rmp左右)离心1分钟，倒弃收集管内的液体。

注意：这一步一定要达到16000g，较低离心速度会导致回收效率下降。

f 在DNA纯化柱内加入700微升溶液II，室温放置1分钟。

PCR产物回收、酶切鉴定

PCR产物回收、酶切鉴定1.1实验目的1.掌握PCR产物回收和酶切鉴定的基本原理2.熟悉PCR产物回收和酶切鉴定的具体操作过程3.鉴定β-珠蛋白基因（β-Gbobin gene）多态性1.2实验原理1.2.1 PCR产物回收实验原理PCR产物一般都含有过量的引物、Taq DNA酶及dNTP，这些成分的存在将直接影响到后续的酶切、双脱氧PCR测序反应等过程，因此有必要除去。

目前核酸纯化的方法有很多，回收试剂盒的出现使DNA的纯化过程变得更加简便、快捷。

试剂盒PCR回收原理：试剂盒中回收管内所带的硅基质膜，具有在高盐、低pH值情况下吸附DNA，低盐、高pH值情况下释放DNA 的性质。

1.2.2 酶切实验原理限制性内切酶：生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。

β-珠蛋白基因PCR产物中含有AvaⅡ酶切位点，会被AvaⅡ酶切割。

1.3方法步骤1.3.1 PCR产物纯化操作步驟1. 将PCR 反应产物移至干净的1.5ml离心管。

2. 加入3 倍体积的Binding Solution 至反应产物溶液( 50 μl 的PCR 溶液，加入150 μl 的Binding Solution并振荡混合均匀）3. 将Spin column 放入Collection tube 中，将反应溶液放入spin column 中，以12,000 ×g离心1 分钟，丢弃collection tube 中的液体。

4. 加入700 μl 的Wash Solution，于12,000×g离心1 分钟。

丢弃废液, 重复此步驟一次。

5. 丢弃废液，12,000 ×g离心去除残余的酒精。

6. 将spin column 转移至新的1.5ml离心管(microcentrifuge tube) 并加入30μl 的Elution Solution 或H2O (pH7.0~8.5) 至column，静置2分钟。

pcr产物回收原理

pcr产物回收原理PCR产物回收原理。

PCR（聚合酶链式反应）是一种用于扩增DNA片段的技术，它是分子生物学领域中非常重要的工具。

在PCR过程中，产生了大量的PCR产物，而回收这些产物对于后续的实验和分析非常重要。

本文将介绍PCR产物回收的原理及方法。

PCR产物回收的原理主要包括DNA片段的寡聚物纯化和DNA片段的凝胶回收两个方面。

首先，DNA片段的寡聚物纯化是指通过将PCR产物与寡聚物结合，然后利用寡聚物的亲和性将DNA片段纯化出来。

这种方法可以有效地去除PCR反应体系中的盐离子、引物和聚合酶等杂质，从而得到纯净的DNA片段。

其次，DNA片段的凝胶回收是指将PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳分离出来，然后通过切割凝胶并使用凝胶回收试剂盒将DNA片段从凝胶中提取出来。

这种方法可以根据DNA片段的大小选择性地回收目标片段，从而得到所需的DNA片段。

在实际操作中，可以根据实验需求选择合适的回收方法。

下面将介绍两种常用的PCR产物回收方法。

首先是寡聚物纯化法。

这种方法通常使用商业化的DNA寡聚物纯化试剂盒，通过将PCR产物与寡聚物结合，然后通过洗涤步骤将DNA片段从其他杂质中分离出来。

这种方法操作简单，纯化效果好，适用于小规模的PCR产物回收。

其次是凝胶回收法。

这种方法通常需要进行琼脂糖凝胶电泳，将PCR产物按照大小分离出来，然后通过切割凝胶并使用凝胶回收试剂盒将DNA片段从凝胶中提取出来。

这种方法适用于需要回收多个目标片段或者需要大量PCR产物的情况。

总的来说，PCR产物回收是PCR技术中非常重要的一步，它直接影响到后续实验的结果和分析。

选择合适的回收方法并严格按照操作步骤进行操作，可以有效地得到纯净的DNA片段，为后续的实验和分析奠定基础。

在实际操作中，需要注意操作规范，避免污染和损失，保证回收的PCR产物质量和数量。

同时，根据实验需求选择合适的回收方法，并结合实际情况进行操作，可以提高PCR产物回收的效率和质量。

凝胶DNA回收试剂盒使用说明

DNA凝胶回收试剂盒50TCat#：GV-GX-50本试剂盒可从各种浓度琼脂糖凝胶中回收DNA片段，不含盐、蛋白质、RNA等杂质。

500bp以上片段，回收率80%以上，200bp～500bp回收率70%以上，100bp～200bp回收率60%。

可回收单链、双链DNA 片段以及环状质粒DNA。

本试剂盒采用一种独特的平衡液处理吸附膜，该试剂能够激活硅基质膜，改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，专一吸附DNA的作用，同时还可消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。

1试剂盒组成、储存、稳定性成分规格注意事项Buffer GA60mlBuffer BL12mlWash buffer13ml使用前加入52ml无水乙醇Elution4ml离心柱50个单个最大吸附量20μg1.5ml离心管50个说明书1份Buffer GA：溶胶液。

室温密闭贮存。

若出现沉淀，应于65℃温浴溶解并冷却至室温后再使用。

Buffer BL：平衡液，平衡液的加入能够激活硅基质膜，改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，专一吸附DNA的作用，同时还可消除高温/潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。

Wash buffer：去盐液。

使用前，第一次使用前根据瓶上指定的体积加入无水乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。

Elution：10mM Tris-HCl，pH8.0。

室温密闭贮存。

二、注意事项1：将洗脱液或双蒸水加热至65℃，有利于提高洗脱效率2：DNA呈酸性，建议在10mM Tris-HCl，pH8.0洗脱液中保存3：用平衡液处理过的柱子最好当天使用，放置时间过长会影响效果4：在步骤1中，将凝胶切成细小的碎块可大大缩短溶胶时间（线型DNA长时间暴露在高温条件下易水解），从而提高回收率。

勿将含有DNA的凝胶长时间暴露在紫外灯下，减少紫外线对DNA造成的损伤。

三、实验前试剂准备Wash buffer第一次使用前加入52ml无水乙醇。

实验五目的DNA片段的回收

分子生物学实验
Experiments of molecular biology
实验五目的D．学习从琼脂糖凝胶中回收DNA的技术； 2．掌握从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的方法；
【实验器材】
电泳仪，水平电泳槽，微量移液器（10uL, 100 uL 1000uL），EP管，凝胶成像系统，水浴锅等。
DNA片段的胶回收常用的方法：
1、电泳洗脱法 2、低熔点琼脂糖凝胶电泳挖块法 3、冻融回收法 4、玻璃奶回收法 5、琼脂糖酶回收法 6、吸附柱回收法
待回收的PCR产物首先用1%的琼脂糖凝胶电泳纯化，然后在紫外灯下小心切下目标条带，放入一干净的EP管中。
一、冻融法
1. 紫外灯下切下含待回收的DNA胶条，称量其重量后将其置于1.5ml离心管中； 2. -80℃放置10min; 3. 4℃离心12000rpm×5min，上层液转移到一新的离心管中;
4. 加入1/4体积H2O于含胶的离心管中，捣碎，加入等体积酚/氯仿抽提一次，
振荡混匀； 5. -80℃，放置10min；
6. 4℃离心12000rpm×5min，合并上清液；
7. 加入1/10体积3M NaAc(pH 5.2)充分混合，再加入2.5倍体积预冷的无水乙醇混匀，在 -80℃静置10min； 8. 4℃离心12000rpm×10min，弃上清，再加入75%乙醇洗涤沉淀1次，4 ℃离心12000rpm×5min，弃上清，倒扣在滤纸上室温晾干。 9.加入20ul的TE溶解沉淀，取5μ l进行电泳鉴定回收效果。
二、纯化试剂盒法
1. 2. 3. 4. 切胶回收后，称重，将胶切碎或在离心管内捣碎。加入等体积(1g/1ml)的溶液I（溶胶液）, 颠倒混匀。 60℃水浴约10min至胶全融，期间混匀3-4次，以加速凝胶融解。将融后溶液冷却至室温后加入到DNA纯化柱内，室温放置1分钟。(如果体积较大，可以把样品分批加到纯化柱内，离心后，再加入剩余的样品。 5. 最高速(约12000rmp)离心1分钟，弃收集管内的液体。 6. 在DNA纯化柱内加入700μ l溶液II（75%乙醇），室温放置1分钟。 7. 最高速离心1分钟，洗去杂质。弃收集管内的液体。 8. 再次加入700 μ l溶液II，最高速离心1分钟，再洗一次。倒弃收集管内的液体。 9. 最高速再离心2分钟，除去纯化柱内残留液体并让残留的乙醇充分挥发。 10. 将DNA纯化柱置于新的1.5ml离心管上，加入30 μ l溶液III（TE或无菌水）至管内柱面上，放置1min。溶液III需要直接加至管内柱面中央，使液体被纯化柱吸收。也可以用重蒸水或MiliQ级纯水替代溶液III，但是水的 pH应不小于6.5。 11. 最高速离心1min，离心管中所得液体即为高纯度DNA溶液。

胶回收DNA试剂盒的原理和方法一原理

胶回收DNA试剂盒的原理和方法\一原理1、硅胶膜捕获核酸的原理是什么？利用核酸在裂解液下与硅胶膜特异结合，在洗脱液条件下被洗脱的原理。

2、我们一般都用硅胶膜来浓缩DNA片断，尤其是PCR产物，那硅胶膜能对RNA吸附吗？效率有多少？可以，在酸性条件下可以结合，国外公司试剂盒所用大多是此原理。

效率中等。

3、硅胶膜对双链DNA有吸附作用，那对单链DNA有吸附作用吗？对DNA/RNA杂合链能吸附吗？吸附效率分别有多少？对单链DNA有吸附作用。

DNA/RNA杂合链能吸附，但在裂解条件下DNA/RNA可能会解离，可以尝试一下。

另外可以尝试用Desaltfast200快速脱盐试剂盒，对DNA/RNA影响较小，纯化速度快。

二一般试剂盒的用法1 试剂盒的产品包括溶液I(融胶液)溶液II(洗涤液) (第一次使用前按照说明加入无水乙醇)溶液III(洗脱液)DNA纯化柱废液收集管2 使用方法（按照说明，不同公司产品操作方法有差异这里以其中一种为例）a 切胶回收后，称重，将胶切碎或在离心管内用1ml枪头捣碎。

b 加入等体积的溶液I（如胶为100mg，则加100微升溶液I），vortex或颠倒混匀。

c 50-60℃水浴加热约10分钟至胶全融，期间，需vortex或颠倒混匀3-4次，以加速凝胶融解。

果胶碎片较小，3-5分钟即可全融，凝胶碎片较大则需较长时间，胶全融后至少再在50-60℃水浴加热2分钟。

50-60℃间任一温度都适合于本试剂盒。

如果DNA片断大于5kb，宜颠倒混匀。

V ortex容易导致大片断DNA断裂。

d 加入到DNA纯化柱内，室温放置1分钟。

如果体积较大，DNA纯化柱内容纳不下，可以把部分样品加入到纯化柱内，经离心处理后，再加入剩余的样品继续处理。

e 最高速(16000g，约12000-14000rmp左右)离心1分钟，倒弃收集管内的液体。

注意：这一步一定要达到16000g，较低离心速度会导致回收效率下降。

f 在DNA纯化柱内加入700微升溶液II，室温放置1分钟。

第二部分dna产物纯化和凝胶回收

第二部分 DNA产物纯化和凝胶回收分子生物学实验中经常用到基因克隆及载体构建，而PCR和酶切是基因克隆最常用到的技术，在PCR反应中有模板、引物、酶及其他盐类等物质参与，酶切实验中也往往涉及内切酶、其他蛋白及盐类等，这些杂质对后续的实验一般具有较大的影响，因此，必须对目的DNA产物进行纯化。

纯化的方式有直接纯化与切胶纯化，具体运用哪种纯化方法要视具体情况而定。

DNA产物纯化试剂盒：适用于酶切或PCR产物中只有一条DNA片段或所有的片段都需要回收，这种试剂盒属于直接纯化，不需要凝胶电泳，直接对反应产物进行纯化回收。

琼脂糖凝胶回收试剂盒：最常用、适用于绝大多数的DNA纯化实验，可从多条DNA 片段中纯化其中一条或几条。

这种试剂盒属于切胶纯化，需要凝胶电泳，如测序或构建载体，就要对目的条带采取该方法处理。

通用型DNA纯化回收试剂盒：既可以对凝胶溶解纯化，又可以直接对溶液纯化。

本公司生产的DNA纯化回收试剂盒采用可与核酸特异吸附的硅胶膜，通过在低pH和高盐缓冲液中结合DNA，在高pH值和低盐缓冲液或水中洗脱DNA的原理，达到纯化DNA 产物的目的，同时去除各种蛋白质、无机盐和有机物杂质等。

DNA片段回收与纯化技术简介质粒、噬菌体等经酶切、电泳，PCR产物或PCR产物经电泳后，常常需要对其中一些DNA片段进行回收和纯化，以用于克隆、测序或探针标记等实验。

经典DNA回收和纯化常用方法有压碎法、低融点琼脂糖法、冻融法等，由于这些方法操作复杂，回收率偏低等缺点，很少有人再用。

凝胶溶解系统的改进，硅胶吸附膜的利用，使DNA片段回收纯化变得更为容易，目前市场上销售的纯化回收试剂盒大都采用离心柱与硅胶膜结合的模式，以这种方法纯化回收，操作简便，用时短，回收效率高。

DNA片段纯化与回收试剂盒的工作原理在获得DNA片段后，采用吸附材料与之结合，通过漂洗液的清洗去除杂质，用水或洗脱液回收。

目前大多数生物公司都采用硅胶膜作为吸附介质，可以特异地吸附DNA片段，有效去除体系中的蛋白、盐类和有机物质。

DNA凝胶回收试剂盒

产品简介：碧云天2005年底最新推出的DNA凝胶回收试剂盒(DNA Gel Extraction Kit)，是世界上最先进的DNA凝胶回收试剂盒之一。

本产品采用了融胶液，可以使琼脂糖凝胶完全融化。

同时采用了一种新型的离子交换柱，在特定条件下，使DNA能在离心过柱的瞬间，结合到DNA纯化柱上，在一定条件下又能将DNA充分洗脱，从而实现DNA的快速纯化。

无需酚氯仿抽提，无需酒精沉淀，通常12个样品只需不足20分钟即可完成。

DNA纯化柱的容量约为15微克。

适用于PCR反应后去除引物，酶，矿物油，甘油，盐等杂质；也同样适用于酶切，连接，磷酸化，补平或切平，随机引物等反应后的DNA纯化。

所得的DNA可直接用于酶切，连接，转化细菌，测序，PCR，杂交等后续操作。

本试剂盒适用于纯化100bp-10kb DNA。

长至30个碱基的引物均可被完全去除。

DNA回收效率通常为60-90%。

接近100bp或10kb的DNA片断回收效率要略低一些，大于10kb的DNA回收效率迅速下降。

另外如果样品中DNA含量特别低也会导致回收效率下降。

每个试剂盒足够用于50个平均重量不超过400微克的凝胶样品。

包装清单：保存条件：室温保存，一年有效。

注意事项：第一次使用前在溶液II (洗涤液)中加入39ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。

溶液I对人体有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护。

本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。

所有离心也均在室温进行。

废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：1. 切胶回收后，称重，将胶切碎或在离心管内用1ml枪头捣碎。

2. 加入等体积的溶液I（如胶为100mg，则加100微升溶液I），vortex或颠倒混匀。

3. 50-60℃水浴加热约10分钟至胶全融，期间，需vortex或颠倒混匀3-4次，以加速凝胶融解。

若果胶碎片较小，3-5分钟即可全融；凝胶碎片较大则需较长时间，胶全融后至少再在50-60℃水浴加热2分钟。

pcr产物回收原理

pcr产物回收原理PCR产物回收原理。

PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种常用的分子生物学技术，它可以在体外扩增DNA片段，是分子生物学领域中不可或缺的技术手段之一。

在PCR实验中，产物回收是非常重要的一步，它可以影响到后续实验的成功与否。

本文将介绍PCR产物回收的原理和方法。

首先，我们需要了解PCR反应产物的性质。

在PCR反应中，DNA 聚合酶通过反复的扩增，使得目标DNA片段得到大量复制。

这些产物通常是双链DNA，其中包括了我们需要的目标序列。

但是，PCR反应中还会产生一些非特异性产物，比如引物二聚体和引物延伸产物等。

因此，在进行产物回收时，需要将目标DNA片段从这些非特异性产物中分离出来。

产物回收的原理主要是利用DNA的亲和性分离。

在实验中，我们通常会使用凝胶电泳将PCR反应产物分离开来。

凝胶电泳是一种常用的DNA分离技术，通过电场作用使得DNA片段在凝胶中移动，从而实现分离。

在凝胶电泳后，我们可以通过紫外光照射或染色方法将目标DNA片段可视化，然后将其切割出来。

另外，产物回收的方法还包括了使用商业化的PCR纯化试剂盒。

这些试剂盒通常包括了DNA结合柱和缓冲液等，可以通过离心等步骤将目标DNA片段从反应混合物中纯化出来。

这种方法操作简单，且可以高效地将目标DNA片段回收下来。

除了上述方法，还有一些其他的产物回收方法，比如磁珠分离法、溶液抽提法等。

这些方法都是根据DNA的性质和特点来设计的，可以根据实验需要选择合适的方法进行产物回收。

在进行PCR产物回收时，需要注意一些问题。

首先，要严格控制实验条件，避免外源DNA的污染。

其次，在产物回收过程中要避免DNA的降解，可以使用RNase等酶来去除RNA的污染。

最后，要对回收的DNA片段进行定量和质量检测，确保其适用于后续实验。

总之，PCR产物回收是PCR实验中至关重要的一步，它直接影响到后续实验的成功与否。

通过合理选择回收方法，并严格控制实验条件，可以高效地将目标DNA片段从PCR反应产物中回收出来，为后续实验提供可靠的DNA样品。