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第13章 吸光光度法

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第十三章 可见分光光度法和紫外分光光度法

第十三章 可见分光光度法和紫外分光光度法
解 溶液的浓度为：
该药片中所含托巴丁胺的质量为：
9. 某化合物，其相对分子质量Mr＝125，摩尔吸光系数ε＝2.5×105 L?mol－1?cm－1，今欲准确配制该化合物溶液1L，使其在稀释200倍后，于1.00 cm吸收池中测得的吸光度A＝0.600，问应称取该化合物多少克？
4．下列叙述正确的是 （ ）
A．被测物质浓度改变对其吸收光谱形状影响很小
B．吸收光谱与被测物质本性无关
C．在实验条件一定的情况下，吸光度与测定波长成正比
D．在一定波长下，通过测定不同浓度溶液的吸光度而绘制的曲线称为吸收曲线，又称标准曲线
2．（1）以A吸光度为纵坐标，相应波长为横坐标，绘制做图，则得一曲线，这种描述其组分吸光度A与波长λ的关系曲线，称吸收曲线，所以从中找到该溶液的最大的吸收波长，以其作为λ射光波长。
（2）以A为纵坐标，浓度c为横坐标，绘制浓度与吸收度的关系曲线，称为标准曲线，从标准曲线上可以查得试液的浓度。
五、计算题
一、判断题
1 × 2 √ 3 √ 4 × 5 √
二、选择题
1．C 2．C 3．D 4．A 5．B
三、填空题
1．（1）非单色光 （2）化学因素
2．（3）T=100% （4）A=0
3．（5）溶液的量浓度 （6）比色皿厚度 （7）摩尔吸收系数
四、问答题
1．物理意义：当一束单色光平行照射并通过均匀的，非散射的吸光物质的溶液时，溶液的吸光度A与溶液的浓度c和液层厚度b的乘积成比例，它是吸光光度法进行定量分析的理论依据。
解 设 b1=1 cm b2=3 cm A1=0.400 c2=0.5 c1
A1=ε b1 c1，A2=ε b2 c2

仪器分析复习材料

仪器分析复习材料

仪器分析复习材料仪器分析复习材料Ⅰ名词解释:内插法：图p153（⾃绘）透射率：T=I t /I 0吸光度与透射率关系A=-lgT朗伯⽐尔定律： A=ξ*L*C ；ξ=M/10*E (双波长法联⽴⽅程) 紫外分光仪器相对误差： RE=0.434△T/T*lgT 荧光效率=发射荧光量⼦数/吸收激发光量⼦数荧光强度 F=KC (ECL<0.05)不饱和度Ω=1+C+（N-H(和卤族)）/2 核磁峰数=n+1受到不同相邻H 时，J 值相同峰数=(n+n ’+….)+1 J 值不同峰数=（n+1）(n ’+1)… 质谱分辨率 R=M ⼩/△M亚稳离⼦峰 M=M 2（裂解后）/M （裂解前）⽤于验证裂解产物⾊谱分辨率 R=2*(Tr2-Tr1)/(w1+w2) 分配系数 K Tr=To(1+K*V) 分配因⼦ k=Tr’/To理论塔板⾼度 n=16(Tr/w)2=5.54(Tr/w 1/2)2理论塔板数H=L/n⽓相⾊谱重要公式 H=A+B/u+Cu 归⼀化法公式 M i =Af i /∑Af 内标法公式 W=A i f i m s /A s f s m 相对⽐移值 R f =L/L 0Ⅳ课后习题答案第⼋章电位法和永停滴定法1.名词解释指⽰电极：在电化学电池中借以反映待测离⼦活度，发⽣所需电化学反应或激发信号的电极参⽐电极：在恒温恒压条件下，电极电位不随溶液中被测离⼦活度的变化⽽变化，具有基本恒定电位值的电极⽢汞电极：由汞、⽢汞及KCL溶液组成随CL-浓度⽽改变电位的电极. 在CL-浓度不变时多做参⽐2.简述离⼦选择电极类型以及测量⽅法离⼦选择电极类型：晶体膜电极、⾮晶体膜电极、⽓敏电极、酶电极测量⽅法：标准曲线法、标准⽐较法、标准加⼊法3.简述玻璃电极作⽤原理。

以及为什么使⽤前要在蒸馏⽔中浸泡⼀天原理：玻璃膜吸收⽔分形成⽔化凝胶层使凝胶层内Na+位点⼏乎全被H+占据，因SiO3对H+选择性更强导致H+进⼊多⽽Na+出来少产⽣了电位差8.总离⼦强度调节剂主要组成和作⽤，并说明加⼊的⽬的组成：离⼦强度调节剂、缓冲剂、掩蔽剂作⽤：1.提⾼离⼦强度 2.保持液接电位稳定 3.PH缓冲作⽤ 4.掩蔽⼲扰离⼦计算100ml⽔中测Ca2+ E=-0.0619 v 加⼊0.0731MOL/L Ca2+标准液1ML E=-0.0483求原Ca2+浓度解析利⽤标准加⼊法公式解（3.87*10-4）PH=4.00缓冲液⽤电级测E=0.209 当插⼊未知液时 E=0.312 E=0.088 E=-0.017求未知液的PH值利⽤计算ph公式计算（5.75 1.15 0.17）第九章光谱分析概论2.吸收光谱和发射光谱有何异同？同：都是通过物质能级的跃迁，量⼦化的以辐射形式进⾏的能量变化显⽰异：吸收光谱是物质选择性吸收辐射产⽣的谱线发射光谱是物质受刺激后，由激发态回到基态或较低能态时所释放的辐射强度谱线3.什么是分⼦光谱法，什么是原⼦光谱法原⼦光谱：明锐分⽴的现状光谱，每条线状光谱对应⼀定波长，只于原⼦离⼦性质有关，与原⼦、离⼦来源的分⼦⽆关。

食品分析《农药残留的检测》(第13章)

食品分析《农药残留的检测》(第13章)

2、农药加工落后，助剂研究滞后 我国原药与制剂比例较低，目前为1：9但发达国家为1： 10—30。 3、生产规模小，工艺技术落后，产品质量差，我国农药产 量约占全球的25%但销售额不足8%。 4、生物农药还应大力发展。 农药在防治农作物病虫害、控制人类传染病、提高农畜 产品的产量和质量以及确保人体健康等方面，都起着重要的 作用。但是，大量广泛用农药也会造成对食物的污染。 农药残留是指农药施用后，残存在生物体、农副产品和 环境中的微量农药原体、有毒代谢产物、降解物和杂质的总 称。残留的数量叫残留量。
小资料：我国将全面禁用5种高毒农药包括：甲胺磷、久效 磷、甲基对硫磷、对硫磷、磷胺。这5种农药目前年总产量 达10万吨；占我国农药生产总量的20％—25%。 禁用方案分3阶段：第一阶段(2004年1月1日—12月31日)： 撤消5种高毒农药产品生产、销售、使用的有关证书，开始 部分禁用，使用比例下降15％。 第二阶段(2005年1月1日—2006年12月31日)： 禁止5种高毒 农药原药生产企业外的其他企业生产或加工此类产品，并将 其使用范围局限于棉花、小麦、玉米、水稻4种作物。 第三阶段(2007年1月1日)： 中国全面禁止5种高毒农药的使用。
样品的预处理 1.提取 — 用丙酮、己烷、乙醚、石油醚等。 2.净化—用H2SO4磺化处理，除脂肪、蜡质、色素等。 3.浓缩—K-D减压浓缩。 检验标准 GB/T 5009.19 （二）GC-ECD法测定有机氯农药残留 （三）TLC法测定有机氯农药残留
有机磷农药残留及其检测 (一)有机磷农药的特性及种类 1.常见的有机磷农药及其结构 有机磷农药(Organophosphorus Pesticides)是农药中一类含 磷的有机化合物，其种类很多，目前大量生产与使用至少有60 多种，按其毒性可分成高毒、中等毒及低毒三类；按其结构则 可划分为磷酸酯及硫代磷酸酯两大类，其结构通式如下： 根据R，Rl及X等基团 不相同，可构成不同 的有机磷农药。

13 第十三章(分光光度法)

13 第十三章(分光光度法)

有一浓度为1.0 µg · mL - 1 Fe2+的溶液，以邻二氮菲 的溶液， 例 有一浓度为 显色后， 显色后，在比色皿厚度为 2 cm、波长 、波长510nm处测得吸光度为 处测得吸光度为 0.380，计算 透光率 ；(2) 吸光系数 ；(3) 摩尔吸光系数ε 。 透光率T； 吸光系数a； ，计算(1)透光率
动性、粒子性。 动性、粒子性。
E = h ⋅ν = h
c
λ
常数： （Planck常数：h=6.63× 10 -34 J · S ) 常数 ×
上式表明光的波长越短， 上式表明光的波长越短，或者说频率越 大，光的能量越高。 光的能量越高。
具有同一波长的光称为单色光 单色光。 ● 具有同一波长的光称为单色光。 (由具有相同能量的光子组成 由具有相同能量的光子组成) 由具有相同能量的光子组成 ● 不同波长组成的光称为复合光。 不同波长组成的光称为复合光。 复合光 ● 日常生活中肉眼所见到的 白光 ， 如 日 日常生活中肉眼所见到的白光 白光， 等是由红、 光 等是由红 、 橙 、 黄 、 绿 、 青 、 蓝 、 紫等光按 适当的强度比例混合而成的， 是在400~750nm 适当的强度比例混合而成的 ， 是在 范围的一种复合光。 范围的一种复合光。
I0 1 A = lg = lg = − lg T It T
若光全部透过溶液， 若光全部透过溶液，Io= It ， A = 0 若全部被吸收， It = 0 ， A = ∞ 若全部被吸收， 吸光度A是用来衡量溶液中 吸光度 是用来衡量溶液中 吸光物质对单色光 λ 的吸收程度 值越大， ，A值越大，其吸收程度越大； 值越大 其吸收程度越大； 反之亦然。 反之亦然。
UV-Vis主要用于分子的定量分析，但紫外光谱(UV) UV- 主要用于分子的定量分析， 和红外光谱( 为四大波谱之一， 和红外光谱(IR)为四大波谱之一，是鉴定许多化合

仪器分析[第十三章紫外一可见吸收光谱分析法]山东大学期末考试知识点复习

仪器分析[第十三章紫外一可见吸收光谱分析法]山东大学期末考试知识点复习
14．紫外一可见光谱的定量分析 紫外一可见光谱定量分析的基础是光的吸收定律——比尔定律式。进行 定量分析时，首先必须选定被测样品的特征吸收λmax 作为工作波长，主要定量方 法有：
四种跃迁所需能量△E 大小顺序为 n→π*＜π→π*＜n→σ*＜σ→σ*
5．吸收带类型 K 吸收带：在共轭非封闭体系中π→π*跃迁产生的吸收带称为 K 带。其特征 εmax>104 为强带。具有共轭双键结构的分子出现 K 吸收带，如丁二烯(CH2==CH— CH===CH2)有 K 带，λmax=217 nm，εmax=21 000。在芳环上有发色基团取代时，例 如苯乙烯，苯甲醛或者乙酰苯等，也都会出现 K 吸收带。极性溶剂使 K 带发生红 移。
10．计算α，β一不饱和羰基化合物λmax 伍德沃德一菲泽规则 取代基和溶剂对α，β一不饱和羰基化合物(包括不饱和酸酯)π→π*跃迁 λmax 的影响也可由经验公式伍德沃德一菲泽规则来估算(式 13—2)。 有关基准值和校正值见表 13—2，注意该表只适用于乙醇做溶剂时，由于羰 基化合物的π→π*跃迁和 n→π*跃迁吸收带不但受取代基的影响，而且还明显 受到溶剂极性的影响。若使用其他溶剂必须进行校正。
山东大学 期末考试知识点复习
第十三章 紫外一可见吸收光谱分析法
1．紫外一可见光谱法及特点 分子的紫外一可见光谱法是利用物质的分子对紫外一可见光谱区(一般认为 是 200～800 nm)的辐射的吸收来进行的一种仪器分析方法。 分子在紫外一可见区的吸收与其电子结构紧密相关，这种分子吸收光谱产生 于价电子和分 子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，故属于电子光谱。 根据 Franck-Condon 原理，在紫外光谱中电子能级发生跃迁的同时也必定伴 随着振一转能级 的变化，所以分子光谱是带状光谱。紫外吸收曲线一般都是宽 峰，这是由于电子跃迁与振转次能 级的变化相叠加所致。 紫外光谱的研究对象大多是具有共轭双键结构的分子，它广泛用于有机和无 机物质的定性和定量分析。 紫外一可见光谱法具有较高的灵敏度(10-4 一 10-7g·mL-1)和较高准确度，该 法仪器设备简单测定快速。 2．朗伯一比尔定律以及偏离线性的原因 朗伯一比尔定律是比色和光谱定量分析的基础。比尔定律表述为：当一束单 色光通过介质时，光被介质吸收的比例正比于吸收光的分子数目，而与入射光强 度无关。数学表达式为 A＝一 lg(I／I0)=一 lg T=εcl (13—1) 比尔定律成立的前提是：①入射光为单色光；②吸收发生在均匀的介质中； ③在吸收过程中，吸收物质互相不发生作用。 吸光度与浓度呈线性关系，但在实际工作中常发现朗伯一比尔定律偏离线性 的现象，这是由 于溶液的化学因素和仪器因素等引起的。比如样品浓度过高 (>0．010 mol·L-1)、溶液中粒子的散射和入射光的非单色性等。

第十三章 原子吸收光谱法

第十三章 原子吸收光谱法
sc 0.0044 0.0044 cx sc cx A A
(3)特征质量
0.0044 mx 0.0044cxV sm A A
43
2.检出限 在适当置信度下，能检测出的待测元素的
最小浓度或最小量。用给出信号为空白溶
液信号的准偏差的3倍时所对应的待测元素
的浓度或质量来表示 cx 3 -1 单位： μg ml Dc A
吸收光谱
发射出一定频率的辐射。 发射光谱
7
4.元素的特征谱线
（1）各种元素的原子结构和外层电子排布不同
基态→第一激发态:
跃迁吸收能量不同——具有特征性。
（2）各种元素的基态→第一激发态
最易发生，吸收最强，最灵敏线。特征谱线。
（3）利用原子蒸气对特征谱线的吸收可以进行定量
分析
8
二、原子吸收线的轮廓和变宽 1.原子吸收线的轮廓 理论上：没有宽度的线状光谱 实际上：具有一定宽度的谱线（一个频率范围）
31
第三节 实验方法
一、实验条件的选择
1.试样取量及处理
要求：(1)进样量要使吸光度达到最大
(2)防止试样的污染 (3)用来配制对照品溶液的试剂不能含被测元素 (4)处理试样要避免被测元素损失
32
2.分析线 一般选待测元素的共振线作为分析线，测量 高浓度时，也可选次灵敏线 3.狭缝宽度 调节狭缝宽度使吸光度大且平稳 4.空心阴极灯电流 在保证有稳定和足够的辐射光通量的情况下， 尽量选较低的电流
析线相近。使测定结果偏高。
消除方法：另选测定波长。
b空心阴极灯内有单色器不能分离的干扰元
素的辐射。
换用纯度较高的单元素灯减小干扰
38
2）非吸收线干扰 a非原子性吸收 b固体颗粒引起的光的散射 4.化学干扰 指待测元素与其它组分之间的化学作用所引起 的干扰效应,主要影响到待测元素的原子化效 率，是主要干扰源

仪器分析知识题和答案解析

1．是否能用普通电位计或伏特计测量参比电极和pH玻璃电极所组成电池的电动势？简述原因。

答：不能。

因为玻璃电极的内阻(50MΩ～500MΩ)很高，若采用普通电位计或伏特计测量其电位，会引起较大的测量误差。

用普通电位计或伏特计测量玻璃电极所组成电池的电动势时，若检流计的灵敏度为10－9A（测量中有10－9A电流通过），玻璃电极的内阻108Ω，当这微小电流流经电极时，由于电压降所引起的电动势测量误差可达：△E=IV=10－9×108=0.1V，它相当于1.7个pH单位的误差。

因此不能用普通电位计或伏特计测量参比电极和pH玻璃电极所组成电池的电动势。

2．已知=0.10，若试样溶液中F－浓度为1.0×10－2mol/L时，允许测定误差为5%，问溶液允许的最大pH（以浓度代替活度计算）为多少？解：离子电极选择性误差用下式表示和计算：即：3．将一支ClO4-离子选择电极插入50.00ml某高氯酸盐待测溶液，与饱和甘汞电极（为负极）组成电池。

25℃时测得电动势为358.7mV，加入1.00ml NaClO4标准溶液（0.0500mol/L）后，电动势变成346.1mV。

求待测溶液中ClO4-浓度。

解：注意：此题中虽然ClO4-为阴离子，但该离子选择电极为电池的正极，因此S为负值。

4. 用离子选择电极校正曲线法进行定量分析有什么优点？需注意什么问题？使用TISAB有何作用？答：离子选择电极校正曲线法进行定量分析的优点是适用于大批量的样品分析。

定量分析中应注意实验条件的一致，特别是待测液和标准溶液系列的离子强度须保持一致。

使用TISAB的作用为：①保持待测液和标准溶液系列的总离子强度及活度系数恒定；②维持溶液在适宜的pH范围内，满足离子电极的要求；③掩蔽干扰离子。

5. 某pH值的标度每改变一个pH单位，相当于电位的改变为60mV，用响应斜率为53mV/pH的玻璃电极来测定pH为5.00的溶液，分别用pH2.00及pH4.00的标准缓冲溶液来标定，测定结果的绝对误差各为多少？由此，可得出什么结论？解：用pH2.00标准缓冲溶液标定时：ΔE =53×（5.00-2.00）=159（mV）实际测到的pH为: 2.00+2.65=4.65pH绝对误差=4.65-5.00=-0.35pH用pH=4.00的标准缓冲溶液标定时：ΔE =53×（5.00-4.00）=53（mV）第8章电位法和永停滴定法实际测到的pH为：4.00+0.88=4.88，绝对误=4.88-5.00=－0.12结论：①绝对误差的大小与选用标定溶液的pH有关；②应选用与待测试液pH相近的标准缓冲溶液标定，以减小测量误差。

大学化学教材

大学化学教材1、大学化学/普通高等教育“十一五”国家级规划教材2、大学化学教程——高等学校教材3、新大学化学（第二版）4、大学化学——面向21世纪课程教材5、化学功能材料概论——高等学校教材6、新编普通化学/21世纪高等院校教材7、大学基础化学/高等学校教材8、大学化学9、大学化学10、大学普通化学（第六版）11、大学化学教程——21世纪高等院校教材12、大学化学13、化学实验教程——高等学校教材14、大学化学(高等学校教学用书)15、大学化学原理及应用(上下)/高等学校教材16、大学化学教程/高等学校教材17、大学基础化学/新世纪高职高专教材18、新大学化学19、大学化学原理及应用·上下册20、普通化学(英文版)21、近代高分子科学22、绿色化学与环境23、普通化学简明教程24、大学化学（第二版）——高等学校教材1、大学化学/普通高等教育“十一五”国家级规划教材•作者：金继红主编•丛书名：•出版社：化学工业出版社•ISBN：9787502597221•出版时间：2007-1-1•版次：1•印次：1•页数：403•字数：679000•纸张：胶版纸•包装：平装•开本：16开•定价：39 元当当价：30.6 元折扣：78折节省：8.40元钻石vip价：30.60 元••共有顾客评论0条内容提要本书为普通高等教育“十一五”国家级规划教材。

本书在编写过程中注意与中学化学的衔接，力求理论联系实际，概念阐述准确，深入浅出，循序渐进，便于教师教学和学生自学。

本书包括物质的聚集状态、热力学第一定律、热力学第二定律、相平衡、化学平衡、水溶液中的离子平衡(含酸碱滴定、重量分析)、氧化还原和电化学基础(含氧化—还原滴定)、原子结构、分子结构、晶体结构、配位化合物(含配位滴定)、单质和无机化合物、表面与胶体、环境化学及材料化学等内容。

本书可供高等学校非化学化工类专业对化学要求较多的材料、地质、能源、环境、冶金、海洋等专业的基础化学教学使用。

分光光度法---物质的吸收光谱


物质的吸收光谱
将某物质的溶液，用不同波长的单色光作入射 光，测定这一溶液吸光度A。每种波长的单色光都 有其相对应的吸光度。然后以A为纵坐标，波长为 横坐标作图，所得曲线
A
即为该溶液的吸收光谱 。
吸收光谱中与吸收
峰相对应的波长称为最
max=515
480 520 560nm
大吸收波长， max

如CuSO4溶液选 择性地吸收白光中间的 黄色光，故CuSO4溶液 呈蓝色。 [Fe(SCN)6]3-呈 血红色，说明其溶液选 择性地吸收白光中的青 色光。
紫 400 蓝 420 青蓝 450
红 660
橙 600
黄 560
蓝绿 500 绿 530
如果溶液不吸收白色光，则溶液表现为 无色透明；如溶液对所有颜色的光全部吸收， 则溶液呈黑色。
380nm
780nm
当一束光照射到某 物质或某溶液时，该物
质的分子、原子或离子
与光子作用，光子的能 量发生转移，物质中的 这些粒子就会发生能级 跃迁，从较低能量状态 （基态）跃迁到较高能 量状态（激发态）：这 一过程称为物质对光的 吸收。
能 量 E
第三激发态E3
第二激发态E2
第一激发态E1 吸收 发射 光谱 光谱
相对误差小------2%~5%
应用广泛-----医药、卫生、环保、化工等领域。
一、物质对光的选择性吸收
c 光速 υ= 光的频率 光的波长 光是以电磁波形式传播的光子流。电磁波能量大 小与波长和频率有关。 辐射是量子化的，即不连续地、一份一份地发射 或吸收，每一份称一个光子。 光子的能量与辐射频率成正比、与波长成反比：
分析方法的分类
按方法的原理：可分为化学分析和仪器分析。 化学分析：凡主要利用化学原理进行分析的方

第十三章原子吸收分光光度法


2021/2/4
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（一）原子吸收线的轮廓和变宽
一束不同频率强度为I0的平行光通过厚度 为l的原子蒸气，一部分光被吸收，透过光的强 度I服从吸收定律
I = I0 exp(-kl) 式中k是基态原子对频率为的光的吸收系数。
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• 不同元素原子吸收不同频率的光，透过光强度 对吸收光频率作图，如下图：
I I0
0 I与 的关系
由图可知，在频率0处透过光强度最小， 即吸收最大。
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• 若将吸收系数对频率作图，所得曲线为吸收线 轮廓。
• 峰值吸收系数：吸收系数的极大值。 • 半宽度：是中心频率的吸收系数一半处谱线轮
廓上两点之间的频率差。 • 原子吸收线的特点是由吸收线的频率、半宽度
和强度来表征的。
通常要求燃烧器的原子化程度高、火焰稳定、吸 收光程长、噪声小等。燃烧器有单缝和三缝两种。 燃烧器的缝长和缝宽，应根据所用燃料确定。目 前，单缝燃烧器应用最广。
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2.非非火焰火原焰子原化器子常化用器的是石墨炉原子化器。石墨炉原
子化法的过程是将试样注入石墨管中间位置，用大电 流通过石墨管以产生高达2000 ~ 3000℃的高温，使试 样经过干燥、蒸发和原子化。 石墨炉的基本结构包括：石墨管（杯）、炉体（保护 气系统）、电源等三部分组成。 分析过程:干燥、灰化、原子化和净化等四个阶段，即 完成一次分析过程。
分为:火焰原子化器 、非火焰原子化器。
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1. 火焰原子化法
组成：火焰原子化法中，常用的是预混合型原 子化器，它是由雾化器、雾化室和燃烧器三部 分组成。 原理：火焰原子化法是将液体试样经喷雾器形 成雾粒，这些雾粒在雾化室中与气体（燃气与 助燃气）均匀混合，除去大液滴后，再进入燃 烧器形成火焰，试液在火焰中产生原子蒸气。
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8
2. 吸收曲线的作用: ----找出max
1）不同物质的溶液，其吸收光谱不同， max亦不相同。 —max是定性分析的依据。 2）同一物质在一定浓度下，在max处测定， 其A值最大，灵敏度最高。 —定量分析中选择波长的依据。
9
第二节
光吸收的基本定律
一、朗伯-比尔定律（一）透光率和吸光度 一束强度为I0单色 光透过溶液时： I0 = I a + It + I r 入 射 光 吸 透 反 收 射 射 光 光 光
cs
二、多组分的测定方法（自阅）
24
在测定A时，为消除溶剂或其它有色物质对入 射光的吸收、以及光在溶液中的散射和吸收池界 面对光的反射等与被测物吸收无关的因素的影响， 使光强的减弱仅与待测组分浓度有关，必须用参 比溶液（空白溶液）作对照。
常用参比（空白）溶液： 1. 溶剂空白： 显色剂及其它试剂均无色时使用。 如蒸馏水 2.试剂空白： 显色剂有色其它试剂无色时使用。 除试液外，溶剂与其它试剂全加的溶液。 试样有色显色剂无色时使用。 3. 试样空白： 除显色剂外，其它试剂全加的溶液。
13
2） 吸光系数 k的表示方法: 1）摩尔吸光系数 : mol-1 d = dm时， =dm2· 当c = mol· L-1， A= · d· c 2）质量吸光系数 a: g-1 当c =(g · L-1) ，d=dm时，a = dm2· A= a · d · 与a之间的关系: 同一溶液: A= ·d ·c = a ·d ·
可检出质量分数在10-3 % - 1 % （10-5mol· L1~10-6 mol· L-1）的微量组分。
2. 准确度较高。 相对误差为2% ~5%虽然高于滴
定分析(0.2%以内 ) ,但对于微量组分来说其绝对误差 极小，完全符合分析准确度的要求。
3. 设备简单，操作简便、快速、选择性好。 2
二、分类
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A=0.38
=1.1 ×105 dm2· mol-1
已知某化合物的M=251，将此化合物用乙醇作溶 剂配成浓度为0.150mmol· L-1的溶液，在450nm波 长处用2.00cm吸收池测得透光率为39.8%，求该 化合物在上述条件下的摩尔吸光系数 ，质量吸 光系数a各为多少？
解： 已知 c=0.150×10-3 mol· L-1 d=2.00cm T=39.8% A= d c 根据 A = -lgT A -lg0.398 = dc = 1.50 ×10-4 mol· L-1×0.2dm =1.33 ×104 dm2· mol-1 4dm2· -1 1.33 × 10 mol a= = 53.0dm2· g-1 = M 251g · mol-1
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第三节 吸光光度法分析条件的选择 一、吸光光度法的误差 （一）方法误差--溶液偏离Beer定律引起的误差 A—c 线性差，标准曲线出现弯曲。图13-3 原因有： 1. 化学因素： 吸光物质不稳定，发生解离、缔和等使c 变。 单色光不纯。 2. 光学因素： （二）仪器测定误差 由光源不稳、光电管灵敏性差、光电流 测量不准、读数不准等造成。 在不同的吸光度范围内读数，也能产生误差。 26
由图可知： 1. 溶液透光率很大或 很小时产生的浓度相 对误差较大。
2. 中间一段(T=20—65%， A=0.2~0.7)时，产生的 浓度相对误差较小。
3.在T=36.8%(A=0.434)时，产生的浓度相对 误差最小。 结论：1.调节溶液浓度； 2.选择液层厚度适宜的吸收池。 27 使T在20% ~65%之间，即吸光度A在0.2~0.7之间。
2. 单色器：—得到纯度高的单色光。
将光源发射的复合光分解成单色光并可从 中选出任一波长单色光的光学系统。
狭缝、色散元件(棱镜、光栅)，准直镜。 光栅 玻璃 --用于可见光区测定 色散元件 棱镜 石英 --用于紫外光区测定

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20
3. 吸收池 (比色皿)：--盛放溶液。 可见分光光度计： 光学玻璃制做。 紫外分光光度计：光学玻璃---用于可见光区测定
—Lambert-Beer定律
12
注意： 1）朗伯—比尔定律适用于单色光，稀溶液。 2）可见分光光度法只能测定有色溶液。如试 样无色，可加入显色剂。 显色剂：能与被测物反应生成稳定有色物 质的试剂。 2. 吸光系数k 1） k为吸光系数，与溶液性质、入射光波长、 温度、溶剂有关。 k越大，表示溶液对光的 吸收越强，测定的灵敏度越高。
（两种吸收池） 石英---用于紫外光区测定

将光信号转变成电信号 4. 检测器： 光电池、光电管或光电倍增管 5. 读数指示器：放大光电流，显示测定结果。
21
22
第五节 吸光光度法的测定方法 一、单组分的测定方法 （一）标准曲线法 操作步骤：1. 配制系列标准溶液和待测液 2. 绘制吸收曲线—确定max
将被测液和参比溶液分别置于同样质料及厚度 的吸收池中，则Ir 可被忽略或相互抵消:
I0 = Ia + It
10
透光率
Transmittance
It T I0
全部吸收 T = 0.0 %
全部透射
T = 100.0 %
溶液的透光率愈大，表示它对光的吸收愈小； 相反，透光率愈小，表示它对光的吸收愈大。 吸光度
二、物质对光的选择性吸收 （一） 光的互补
单色光 —单一波长的光束组成
复合光 --不同波长的光束组成
互补色光—
当两种不同颜 色的光按一定比例 混合成白光时，这 两种不同颜色的光 叫互补色光。
5
（二） 溶液的颜色 当一束白光通过溶液时，
吸收光 不吸收 透过光 全透过 呈现颜色 无色透明（纯水）
全吸收
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（二）显色反应条件的选择 1. 显色剂用量 适当过量的显色剂使显色反应完全。 作吸光度—c(显色剂)曲线定。 2. 溶液的酸度 酸度不同，生成有色物组成不同。 作吸光度—pH曲线定。 3. 显色时间和温度 实验确定时间、温度。作A-t、A-T曲线定。
（三）测定波长的选择 ---选max为入射光
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例 4：
第四节 分光光度计 概述： 分光光度法是通过测定溶液对某种单 色光的吸光度(吸收程度) 来确定溶液 中被测物质含量的一种方法。 ---Lambert-Beer定律 理论基础：
基本部件及性能
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1. 辐射光源： —获得具有足够强度和稳定的辐射光
可见分光光度计： 钨灯(320~3200nm可见光)。 紫外分光光度计： 氢或氘灯(200~350nm紫外光)。 (两个光源) 钨灯(320~3200nm可见光)。
不透过
黑色（黑墨水）
黄色光
蓝色光
蓝色（CuSO4液）
绿色光
紫色光
紫色（KMnO4液）
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结论： — 物质所呈现颜色为吸收光的互补色。 即透过光的颜色。 （三）物质的吸收曲线（光谱） 1. 吸收光谱的制作：
将不同波长的单色光, 依次通过某一浓度固 定的被测溶液, 测量该溶液对不同波长光的吸 收程度, 即吸光度(absorbance)A ；
以波长为横轴,吸光度A为纵轴作图, 所得曲线→ 吸收光谱(absorption spectrum)或吸收曲线(absorption curve)
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讨论：
1）曲线在525nm处出 现最大峰，即该溶液对 525nm处的光吸收最多； max:具有最大吸收的波长 max=525nm 2）同一有色溶液,在不同 浓度时, 吸收曲线的形状基 本相同，max相同。浓度 愈大， A值愈大，峰愈高。
根据所用 波长不同

可见分光光度法 紫外分光光度法
(380 —780 nm) (10 —380 nm)
红外分光光度法 (780 —3×105nm)
第一节
吸光光度法基本原理
3
光的波粒二象性
一、 光的 基本 性质
光的振
光的干涉
粒子性
E
光电效应
E h
hc

E：光子的能量（J, 焦耳） ：光子的频率（Hz, 赫兹） ：光子的波长（cm） c：光速（2.99791010 cm.s-1） h：Plank常数（6.625610-34 J.s 焦 耳. 秒） 4
29
第六节
吸光光度法的应用
实验七 微量铁的测定（可见分光光度法）
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本章小结
第一节 吸光光度法的基本原理
第二节
第三节
光吸收的基本定律
吸光光度法分析条件的选择
第四节 分光光度计 第五节 吸光光度法的测定方法
作业：课本P354 - 2, 6,
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1.分光光度法中，选择测定波长的依据是（ B ） A. 标准曲线 B. 吸收曲线 C. 滴定曲线 D. 吸收曲线 和标准曲线 2. 某吸光物质(M=180)的 =6×104 dm2 · mol-1, D 。 则其质量吸光系数a为_____ A. 33.3 dm2 · g-1 B. 1.08 ×106L· g-1· cm-1 C. 1.08 ×103 L· mol-1· cm-1 D. 3.33 ×102 dm2 · g-1 3. 对吸收系数的大小没有影响的因素是（D ） A、物质的本性 B、入射光的波长 C、溶剂的种类 D、溶液的浓度 4.在分光光度法中，吸光度A可表示为（ D ） I0 I I t t A、 B、lg C、 D、lg I 0
Absorbance
T=10-A 透光率(T)越大，吸光度(A)就越小
T A 0.0 % ∞ 100.0 % 36.8 % 0.434
I0 A lgT lg It
A越大，溶液对 光的吸收越多。
20.1% 0.697
11
0.0
（二）朗伯-比尔定律 1. 数学表达式： Lambert研究发现： c一定时， A d A = k1d (1) d =液层厚度 k1--比例系数 Beer研究发现： d一定时， A c A = k2c (2) c---溶液浓度 k2--比例系数 合并（1）（2）两式，得 A=k· c· d 当一束单色光通过溶液时，其吸光度与 液层厚度和溶液浓度的乘积成正比。