《核酸类药物》PPT课件

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生物合成核酸类药物课件

酸、甘氨酸、苏氨酸、苯丙氨酸及赖氨酸等8种
氨基酸也有促进作用。
除组氨酸外的其他8种氨基酸可以用高浓度的苯
丙氨酸一种来代替。
氨基酸可通过促进菌体生长使肌苷产量增加。
第十六页，共34页幻灯片
发酵条件，如pH值、温度、通气搅拌等都是影响肌苷积累的重要因素。
肌苷积累的最适pH值为6.0~6.2；最适温度对枯草杆菌为30℃，对短小芽孢杆菌
（4）选育肌苷酸高产变异菌株，直接发酵生产。
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一般采用方法（2）和方法（4）生产肌酸。
国外采用枯草芽孢杆菌、产氨短杆菌的营养缺陷
型、抗代谢类似物、Mn2+不敏感抗生物素菌株，以糖类等为基质的发酵法得到稳步发展，效益显著。
工艺路线如下：
试管斜面培养→摇瓶种子培养→二级种子罐培养→三级种子罐培养→发酵→板框压滤→脱色→ 活性炭吸附→浓缩结晶→精制
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4．肌苷酸的用途
肌苷酸可参与机体能量代谢以及蛋白质合成，活化丙酮酸氧化酶，能使细胞在缺氧状态下继续进行代谢。
肌苷酸的主要医用价值为白细胞或血小扳减少症、各种急慢性肝炎、肺原性心脏病、中心性视网膜炎、视神经萎缩症、放射线照射病、毛地黄中毒症以及血吸虫病等的治疗。
由于腺嘌呤是肌苷酸的前体，而腺苷酸又是控制 IMP生物合成的主要因子，所以加入腺嘌呤的多少，不仅影响菌体的生长，更影响肌苷积累。
腺嘌呤对肌苷积累最适浓度比菌体生长所需要的最适浓度小一些，称为亚适量。
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氨基酸促进肌苷积累、节约腺嘌呤用量。其中组氨酸是必需的，异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨
肌苷主要应用于心脏疾病、肝脏病、白细胞减少症、放射性照射病、贫血病、血吸虫病、视网膜炎、神经萎缩、毛地黄中毒等症。

核酸与核苷类药物PPT课件

生产菌株：（1）酶6、7缺失（为腺嘌呤缺陷型）积累IMP---肌苷（肝炎辅助药）；（2）酶4缺失（为鸟嘌呤缺陷型）积累XMP---黄苷；（3）酶5缺失积累鸟苷。
• 发酵法生产肌苷
（1）肌苷生产工艺（2）发酵工艺条件： ▪ 碳源为葡萄糖 ▪ 保证充足的氮源 ▪ 磷酸盐的影响 ▪ Mg+、Ca+有促进作用 ▪ 生长因子腺嘌呤或酵母粉要亚适量 ▪ 最适发酵温度为30--34℃，pH6.0—6.2 ▪ 需大风量,高溶氧和低CO2
发酵法生产核苷酸
1、发酵法生产肌苷酸（IMP）肌苷酸钠是一种高效增鲜剂，在谷氨酸钠（味精）中加
2%，鲜度可增加3倍。因此，在味精中添加肌苷酸钠（或鸟苷酸钠）后成为第二代特鲜味精。
产氨短杆菌嘌呤核苷酸生物合成途径、代谢调控和肌苷酸发酵机制:
积累IMP的主要前提：
（1）阻断SAMP合成酶: 即选育缺该酶的菌株（嘌呤缺陷型），发酵前期提供适量
碱水解法生产2＇，3＇-混合核苷酸
RNA结构中的磷酸二酯键对于碱性条件不稳定，很容易生成2′，3 ＇ -环状磷酸酯，此环状磷酸酯对碱更不稳定，很易加水分解生成2＇，3＇-混合核苷酸。取RNA配成3％～3.5% 的水溶液，加氢氧化钠达0.3mol／L浓度，升温至38℃，保温16～20小时，用6mol／L盐酸中和至pH7.0，从RNA水解成2′，3＇-核苷酸的降解率达95％以上，将2′，3＇-混合核苷酸制成每片含50～100mg的片剂，经临床使用，对非特异性血小板减少症、对白血球减少症、癌肿的化疗和放疗后的升白血球均有较好疗效。
后一类药物是治疗病毒感染性疾病、肿瘤的重要手段，也是产生干扰素、免疫抑制的临床药物。
正式用于临床的抗病毒核苷类药物有三氮唑核苷、叠氮胸苷、阿糖腺苷等。

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二、核苷及其衍生物依据形成核苷的碱基或核糖的不同分为：腺苷类：有腺苷、肌浸膏、核脉通、腺苷甲硫氨酸
(SAM)、辅酶型维生素B12(Co-B12)、腺苷二醛、巯苷、嘌呤霉素(Puromycin) 尿苷类：有尿苷、氮杂尿苷(Azauridine)、碘苷、氟苷、溴苷胞苷类：有环胞苷(Cyclo-C)、氟环胞苷(AAFC)、氮杂胞苷(Azacyti-dine) 肌苷类：有肌苷、肌苷二醛(IDA)、异丙肌苷(Inosiplex) 脱氧核苷类：有氮杂脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine)、脱氧硫鸟苷、三氟胸苷
1868年瑞士青年生化学家米歇尔(Miescher)，在用胃蛋白酶分解细胞蛋白质的时候，发现酶不能分解细胞核。经过化学分析，细胞核主要是由含磷的物质构成的，它的性质又不同于蛋白质，起名叫核素，20年以后，人们发现这种物质是强酸，改称为核酸。
德国生化学家科赛尔(Kossel)第一个系统地研究了核酸的分子结构，从核酸的水解物中，分离出一些含氮的化合物，命名为腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶，科赛尔因此获得了1910年的诺贝尔医学与生理学奖。
在Tm时，表现出260nm的光吸收值急剧上升的增色效应、比旋度值显著降低和黏度下降等现象。通常DNA的Tm是增色效应达40％～50％时的温度， RNA的Tm为增色效应达30％～40％时的温度。
Tm大小与DNA的碱基组成有关。G-C之间的氢键联系要比A-T之间的氢键联系强得多，故G-C含量高的DNA其Tm值亦高。
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三、核苷酸及其衍生物单核苷酸类：有腺苷酸(AMP)、尿苷酸(UMP)、肌苷
酸(IMP)、环腺苷酸(cAMP)、双丁酰环腺苷酸(DBC)、辅酶A(CoA)等；核苷二磷酸类：有尿二磷葡萄糖(UDPG)、胞二磷胆碱 (CDP-Choline)等；核苷三磷酸类：有腺三磷(ATP)、胞三磷(CTP)、尿三磷(UTP)、鸟三磷(GTP)等；核苷酸类混合物：有5’-核苷酸、2’，3’-核苷酸、脱氧核苷酸、核酪等球批准上市的第一个反义药物，1998 年已被美国FDA批准上市，用于二线治疗AIDS所致的巨细胞病毒(CMV)视网膜炎。

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主要用于病毒性角膜炎、单纯疱疹、慢性病
毒性肝炎的辅助治疗。
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适用于绒毛膜上皮癌、恶性葡萄胎、急性淋巴细胞白血病及急性非淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病的急变期。
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【不良反应】 ①骨髓抑制：较常见； ②肝脏损害：可致胆汁郁积出现黄疸； ③消化系统：恶心、呕吐、食欲减退、腹
泻和口腔炎，但较少发生； ④高尿酸血症：多见于白血病治疗初期，
严重的可发生尿酸性肾病。
核酸药物中另一类为裸DNA基因疫苗与基因药物，它们是将具有预防和治疗疾病的功能基因与真核表达载体重组，将此重组DNA导入人体细胞，使其表达活性的多肽或蛋白质，产生免疫或治疗作用。
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第二节核酸类药物各论
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一、碱基及其衍生物巯嘌呤（6-巯基嘌呤）
【作用与用途】
属于抑制嘌呤合成的细胞周期特异性药物，化学结构与次黄嘌呤相似，能竞争性地抑制次黄嘌呤的转变过程，在抗肿瘤方面拥有较大市场。
（一）碱基及其衍生物
多数是经过人工化学修饰的碱基衍生物，主要有巯嘌呤、氟尿嘧啶等。
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（二）核苷及其衍生物
1.腺苷类:阿糖腺苷等。 2.尿苷类:碘苷等。 3.胞苷类:阿糖胞苷等。 4.肌苷类:肌苷等。 5.脱氧核苷类:氮杂脱氧胞苷等。
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（三）核苷酸及其衍生物
1.单核苷酸类:有腺苷酸(AMP)、尿苷酸(UMP)、肌苷酸 (IMP)、环腺苷酸(cAMP)、双腺苷酸、辅酶A等。
第十一章核酸类药物-1第一节核 Nhomakorabea类药物概述
核酸由核苷酸组成；核苷酸由碱基、戊糖和磷酸三部分
组成；戊糖与碱基组成的单元叫核苷。

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肌苷类：有肌苷、肌苷二醛(IDA)、异丙肌苷(Inosiplex) 脱氧核苷类：有氮杂脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine)、
脱氧硫鸟苷、三氟胸苷
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三、核苷酸及其衍生物单核苷酸类：有腺苷酸(AMP)、尿苷酸(UMP)、肌苷
酸(IMP)、环腺苷酸(cAMP)、双丁酰环腺苷酸(DBC)、辅酶A(CoA)等；核苷二磷酸类：有尿二磷葡萄糖(UDPG)、胞二磷胆碱 (CDP-Choline)等；核苷三磷酸类：有腺三磷(ATP)、胞三磷(CTP)、尿三磷(UTP)、鸟三磷(GTP)等；核苷酸类混合物：有5’-核苷酸、2’，3’-核苷酸、脱氧核苷酸、核酪等。
质会使机体代谢失调，发生病态，提供这类物质，有助于改善机体的物质代谢和能量平衡，加速受损组织的修复. 临床上已广泛应用于放射病、血小板减少症、白细胞减少症、慢性肝炎、心血管疾病等。属于这一类的核酸药物有ATP、辅酶A、脱氧核苷酸、CTP、UTP、腺苷、混合核苷酸、辅酶I等。
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第二类为天然碱基、核苷、核苷酸结构类似物或聚合物，这一类核酸类药物是当今人类治疗病毒、肿瘤、艾滋病等的重要手段，也是产生干扰素、免疫抑制的临床药物。
已经在临床上应用的抗病毒核苷酸类药物有以下一些品种：氮杂鸟嘌呤、巯嘌呤、6一氯嘌呤、氟胞嘧啶、氟尿嘧啶、呋喃氟尿嘧啶、氟苷、阿糖胞苷、环胞苷、肌苷二醛、异丙基苷、脱氧巯鸟苷、环腺苷酸、聚肌胞等。
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反义核酸技术（简称反义技术）
利用这一技术研制的药物称为反义药物，根据核酸杂交原理，反义药物能与特定基因杂交，在基因水平干扰致病蛋白的产生过程，及干扰遗传信息从核酸向蛋白质的传递。
第五章核酸类药物
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1868年瑞士青年生化学家米歇尔(Miescher)，在用胃蛋白酶分解细胞蛋白质的时候，发现酶不能分解细胞核。经过化学分析，细胞核主要是由含磷的物质构成的，它的性质又不同于蛋白质，起名叫核素，20年以后，人们发现这种物质是强酸，改称为核酸。

《核酸与核苷类药物》PPT课件

• 核酸类物质药物一般可分为两大类： • 一类具天然结构的核酸类物质， • 另一类是自然结构碱基、核苷、核苷酸的结构类似物或聚合物。
前者是生物体合成原料或蛋白质、脂肪、糖生物合成与降解以及能量代谢的辅酶，这一类药物有助于改善机体的物质代谢和能量平衡，加速受损组织的修复，促使缺氧组织恢复正常生理机能，临床上已广泛使用于放射病、血小板减少症、白细胞减少症、急慢性肝炎、心血管疾病、肌肉萎缩等病症的治疗，包括肌苷、辅酶A、GTP、 CTP、UTP、ATP、腺苷、辅酶I、辅酶Ⅱ等，多数是生物体自身能够合成的物质，具有一定临床功能，毒副作用小，基本都可经微生物发酵或从生物资源中提取。
稀碱法：是用氢氧化钠溶液（1%），使细胞壁变性，使核酸从细胞内释放出来。需用酸中和PH7。然后除去菌体，将pH调至RNA的等电点（pH2.5），使 RNA沉淀出来。上法的缺点是制得的RNA Mr较低,(磷酸单脂酶、磷酸二脂酶降解 RNA，90 ℃保持3－4h破坏酶)。
浓盐法：是用高浓度盐溶液（6%－8%）处理，同时加热，以改变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
RNA提取实例：
[提取]
[中和] HCl
[酸化、沉淀]HCl
酵母
提取液
上清液
RNA
NaOH、水
pH 7、离心
pH
2.5、离心
二、DNA的提取与制备
工业用DNA的提取
取新鲜冷冻鱼精20kg，用绞肉机粉碎2次成浆状，加入等体积水，搅拌均匀，倾入反应锅内，缓慢搅拌，升温至100℃，保温15分钟，迅速冷却至20～25℃，离心除去鱼精蛋白等沉淀物，获得35L含热变性DNA的溶液，经精确测定DNA含量后直接可用于酶法降解生产脱氧核苷酸。如要制成固体状DNA，在热变性DNA溶液中逐渐加入等体积95％乙醇，离心可获得纤维状DNA，沉淀用乙醇、丙酮洗涤，减压低温干燥得DNA粗品，产品含热变性DNA50％～60％。

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例二: 鸟苷2mmol／L悬浮于5ml磷酸三甲酯中，温度控制0℃，添加氯化氧磷6mmol／L，水2mmo/L，反应6h，5＇-GMP摩尔产率达90%。
三、核苷的制备本节叙述核苷的化学法和发酵法生产。（－）RNA化学水解法制备核苷 1. 核苷生产工艺流程 RNA经甲酰胺化学水解制备核苷
（－）RNA化学水解法制备核苷 1. 核苷生产工艺流程（图14·8）
（二）发酵法生产核苷
发酵法生产核苷是近代发酵工程领域中的杰出成果，产率高，周期短，控制容易，产量大。用发酵法生产各种核苷的菌株有着许多共同特点:
①它们都使用磷酸单酯酶活力很强的枯草芽孢杆菌或短小芽抱杆菌为诱变出发菌株；
②它们都是通过使用物理或化学诱变方法选育出在遗传性状上具有特定标记的诱变菌；
4．菌体自溶法生产核苷酸
磷酸二酯酶在合适的条件下降解细胞内的RNA 可产生5′-核苷酸。在国内用谷氨酸产生菌体自溶法生产5‘-核苷酸。
（1）菌体自溶法生产核苷酸工艺流程:
5. 碱水解法生产2＇，3＇-混合核苷酸
RNA结构中的磷酸二酯键对于碱性条件不稳定，很容易生成2′，3-环状磷酸酯，此环状磷酸酯对碱更不稳定，很易加水分解生成2＇，3＇-混合核苷酸。取RNA配成3％～3.5%的水溶液，加氢氧化钠达 0.3mol／L浓度，升温至38℃，保温16～20小时，用 6mol／L盐酸中和至pH7.0，从RNA水解成2′，3＇核苷酸的降解率达95％以上，将2′，3＇-混合核苷酸制成每片含50～100mg的片剂，经临床使用，对非特异性血小板减少症、对白血球减少症、癌肿的化疗和放疗后的升白血球均有较好疗效。
（二）生产工艺 1．以5＇－CMP为原料的合成法（1）工艺路线:
2.工艺过程：

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核酸、核苷酸类药物是指具有药用价值的核酸、核苷酸、核苷和碱基以及它们的类似物或衍生物。按照化学结构和组成可分成四类： ①核酸碱基及其衍生物，如硫鸟嘌呤、氟尿嘧啶、阿昔洛韦等； ②核苷及其衍生物，如肌苷、利巴韦林、阿糖胞苷； ③核苷酸及其衍生物，如三磷酸腺苷二钠、胞磷胆碱钠、环磷腺苷； ④多核苷酸，如寡聚核苷酸、核糖核酸Ⅰ、核糖核酸Ⅱ、抗肿瘤免疫核糖核酸等。
《中国药典》从２００５年版开始改用阳离子交换色谱法对利巴韦林进行含量测定，结果有明显改善。
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利巴韦林的含量测定。色谱条件与系统适用性试验用磺化交联的苯乙烯－
二乙烯基共聚物的氢型阳离子交换树脂为填充剂；以水（用稀硫酸调节ｐＨ值至２.５±０.１）为流动相；检测波长为２０７ｎｍ。理论板数按利巴韦林峰计算不低于２０００。离子交换色谱常使用水缓冲溶液作流动相，有时也通过加入适量有机溶剂如甲醇或乙醇来提高分离度或改善样品的溶解度。
（２）二苯胺反应脱氧核糖核酸、脱氧核苷酸或脱氧核苷与酸共热水解产
生的脱氧核糖在乙醛存在下与二苯胺反应，生成蓝色化合物，在５９５ｎｍ波长处有最大吸收。
核糖核酸、核糖核苷酸无此反应。
蓝色 595nm
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２磷酸盐的鉴别核酸、核苷酸类药物在酸性条件下加热水解产生的磷酸与过量
的钼酸铵［（ＮＨ４）３ＭｏＯ４］反应，生成磷钼酸铵放冷析出黄色沉淀。此反应为磷酸盐的一般鉴别试验。
收波长的吸光度来测定含量，也可用带紫外检测器的ＨＰＬＣ法定量。
核酸类原料药的杂质较少时，可用非水碱量法或紫外分光光度法定量；杂质较多时则需采用具有分离、分析能力的高效液相色谱法。
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（一）非水碱量法１原理
核苷或碱基衍生物、类似物等药物的碱性较弱，在水溶液中用酸滴定时没有明显的突跃，难以获得满意的测定结果。而在冰醋酸溶剂中，弱碱性基团的相对碱强度得到显著增加，可被高氯酸滴定液定量滴定，根据消耗的高氯酸滴定液体积即可计算该类药物的含量。

核酸类药物分析课件

核酸类药物分析
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（二）紫外分光光度法
嘌呤碱基和嘧啶碱基的紫外吸收特征除了可用于鉴别外，还可用于该类药物的含量测定。
《中国药典》（２０１５年版）收载的巯嘌呤、氟尿嘧啶和别嘌醇的原料药均采用紫外分光光度法中的吸收系数法进行含量测定。
（三）高效液相色谱法
大多数核酸类药物可用常规的反相高效液相色谱法进行分离测定，但部分结构中存在极性基团的核酸类药物采用常规方法分离时，效果较差，需改用一些特殊的高效液相色谱法，如离子对色谱法或离子交换色谱法。
多核苷酸、核苷酸、核苷类药物中均含有戊糖；多核苷酸和核苷酸结构中都含有磷酸。因此它们有一些共同的分析方法，如用紫外分光光度法进行鉴别或含量测定。
核酸类药物分析
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一、鉴别
（一）化学鉴别
１戊糖的鉴别
（１）地衣酚反应
核糖核酸、核糖核苷酸或核糖核苷与酸共热时，水
解形成的戊糖基脱水变为糠醛，再与绿３色，67５0nm二
离子对色谱法是在流动相中加入适量的反离子，使其与呈解离状态的待测组分形成离子对，增加其在非极性固定相上的分配，从而改善其色谱保留与分离行为。
核苷酸为酸性物质，故其离子对试剂常用季铵盐阳离子试剂，如四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵。离子对色谱的影响因素较多，包括反离子的性质和浓度、流动相的组成、ｐＨ值和离子强度等，需仔细选择。
核酸类药物分析
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（３）巯嘌呤分子上的巯基（—ＳＨ）与氨试液反应，生成铵盐，溶解度增大，溶液变澄清，再与硝酸银试液反应，生成溶解度较小的巯嘌呤银白色絮状沉淀，在热硝酸中不溶。
（４）本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。
核酸类药物分析
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（二）检查
１. ６－羟基嘌呤

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浓盐法：是用高浓度盐溶液（6%~8%）处理，同时加热，以改变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。
要避免分子降解，可采用苯酚法制备RNA。用苯酚处理生物材料使蛋白质变性，然后离心，上层水溶液内含有全部RNA，可用乙醇沉淀出来。
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脱氧核糖核蛋白溶于浓盐溶液1mol/L,不溶于 0.14mol/L,而核糖核蛋白溶于0.14mol/L盐溶液。
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（二）发酵法生产核苷酸 1．发酵法生产肌苷酸（IMP） 2、发酵生产黄苷酸（XMP）及酶法转化成鸟苷酸
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（三）半合成法制备核苷酸
由于发酵法生产核苷的产率很高，核苷悬浮于磷酸三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷却条件下加入氯化氧磷，进行磷酸化，从核苷生成5′-核苷酸收率可达90%。
（4）RNA的提取实例：啤酒酵母是提取RNA的很好的资源。取 100g 压榨啤酒酵母（含水份 70%），加入230ml含NaOH 3g的水，20℃以下缓慢搅拌30分钟。用6mol／L HCl调至pH7，搅拌15 分钟，离心得清液255m1。冷至10℃以下，6mol ／L HCl调pH2.5，置冷过夜，离心得RNA l.8g （纯度80％）。
磷酸二酯酶在合适的条件下降解细胞内的RNA 可产生5′-核苷酸。在国内用谷氨酸产生菌体自溶法生产5‘-核苷酸。
（1）菌体自溶法生产核苷酸工艺流程：
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5．碱水解法生产2＇，3＇-混合核苷酸
RNA结构中的磷酸二酯键对于碱性条件不稳定，很容易生成2′，3-环状磷酸酯，此环状磷酸酯对碱更不稳定，很易加水分解生成2＇，3＇-混合核苷酸。取 RNA 配成 3 ％～ 3.5% 的水溶液，加氢氧化钠达 0.3mol／L浓度，升温至38℃，保温16～20小时，用 6mol／L盐酸中和至pH7.0，从RNA水解成2′，3＇核苷酸的降解率达95％以上，将2′，3＇-混合核苷酸制成每片含50～100mg的片剂，经临床使用，对非特异性血小板减少症、对白血球减少症、癌肿的化疗和放疗后的升白血球均有较好疗效。
通常在细菌中 RNA 占 5 ％～ 25 ％，在酵母中占 2.7 ％～15％，在霉菌中占0.7%～28％。
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在菌体内RNA含量的变化受培养基组成影响，其中关键是铵离子浓度和磷酸盐浓度。培养酵母菌体收率高，易于提取RNA。
很显然在许多酵母中，早期细胞中的RNA含量高，其确切数值取决于碳、氮比例和培养基组成等。
干燥得具有生物活性的DNA（活性DNA制备需在0～
3℃操作）。
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二、用酶解法、发酵法和半合成法制备核苷酸（一）酶解法及碱水解法制备核苷酸 1、酶解法制备脱氧核苷酸
桔青霉产生5`-磷酸二脂酶红酵母产生3`-磷酸二脂酶
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2、酶解法制备戊糖核苷酸
我国从60年代开始使用核酸酶P1降解核糖核酸生产单核苷酸，日本年产呈味核苷酸（肌苷酸和鸟苷酸） 3000吨，其中60%是使用酶解法生产的。
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2、具有生物活性DNA的制备
动物内脏（肝、脾、胸腺）加4倍重量生理盐水经
组织捣碎机捣碎1分钟，匀浆于2500r／pm离心30分钟，
沉淀用同样体积的生理盐水洗涤3次，每次洗后离心，
将沉淀悬浮于20倍重量的冷生理盐水中，再捣碎3分
钟，加入2倍量5％的（用45%乙醇作溶剂）十二烷基
磺酸钠，并搅拌2～3小时，在0℃2500r／pm离心，在
例一：肌苷2mmol／L悬浮于5ml磷酸三乙酯中，温度控制0℃，添加氯化氧磷6mmol／L，水2mmol／L，反应2h，5＇-IMP摩尔产率达91％。
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（二）DNA的提取与制备
1．工业用DNA的提取
取新鲜冷冻鱼精20kg，用绞肉机粉碎2次成浆状，加入等体积水，搅拌均匀，倾入反应锅内，缓慢搅拌，升温至100℃，保温15分钟，迅速冷却至20～25℃，离心除去鱼精蛋白等沉淀物，获得35L含热变性DNA 的溶液，经精确测定DNA含量后直接可用于酶法降解生产脱氧核苷酸。如要制成固体状 DNA ，在热变性 DNA溶液中逐渐加入等体积95％乙醇，离心可获得纤维状DNA，沉淀用乙醇、丙酮洗涤，减压低温干燥得 DNA粗品，产品含热变性DNA50％～60％。
第十二章核酸类药物
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第一节核酸类物质的分离提取及其发酵生产
一、RNA与DNA的提取与制备
（一）RNA的提取与制备
1、工业用RNA的提取
（1）RNA及其工业来源从微生物中提取RNA是工业上最实际和有效的方法。一些最常见的菌体含有丰富的核酸资源，如酵母、白地霉、多种抗菌素的菌丝体——青霉素，制霉菌素等菌体。
上层液中加入等体积的冷95％乙醇，离心即可得到纤
维状DNA，再用冷乙醇和丙酮洗涤，减压低温干燥得
粗品DNA。粗品DNA溶于适量蒸馏水，加入5％十二
烷基磺酸钠达1／10体积，搅拌1小时，经5000r／pm
离心1小时，清液中加入NaCl达1mol／L，再缓慢加
入冷95%乙醇，DNA析出，经乙醇、丙酮洗涤，真空
（2）高RNA含量酵母菌株的筛选可以从自然界筛选到RNA含量高的酵母菌株，也可用诱变育种的方法提高酵母菌的RNA含量。
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稀碱法：是用氢氧化钠溶液（1%），使细胞壁变性，使核酸从细胞内释放出来。需用酸中和pH7。然后除去菌体，将pH调至RNA的等电点（pH2.5），使 RNA 沉淀出来。上法的缺点是制得的 RNA Mr 较低,(磷酸单脂酶、磷酸二脂酶降解RNA，90 ℃保持 3~4h破坏酶)。
酶解法生产5‘—单核苷酸工艺流程
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3、双酶法生产肌苷酸和鸟苷酸（I＋G）
呈味核苷酸的主要品种是肌苷酸钠和鸟苷酸钠，商品名简称为（I＋G），用核酸酶Pl降解RNA可获得 GMP和AMP，其中AMP经脱氨生成IMP。双酶法生产（I十G）工艺。
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4．菌体自溶法生产核苷酸