血清蛋白琼脂糖凝胶电泳

血清蛋白电泳一．项目名称血清蛋白电泳（HYDRAGEL PROTEIN）二．检验方法名称琼脂糖凝胶区带电泳三．方法学原理蛋白电泳是临床实验室中一种常用的蛋白质剖析技术。

它可以对血清或其他体液中的异常蛋白质进行筛选。

它是以区带电泳为基础在一种合适的支持介质—琼脂糖上进行的电泳。

血清蛋白质在给定的PH条件下主要根据其所带电荷数将其分离成五种片段：白蛋白,α1球蛋白,α2球蛋白,β球蛋白,γ球蛋白，每一区带含有一种或多种血清蛋白质。

四．方法学溯源自1930年由Tiselius发现了移界电泳（moving boundary eectrophoresis），而后，这种技术的各种局限性已逐渐被区带电泳（zone elecrrophoresis）所克服，区带电泳的条件和支持介质的选择是电泳成败的关键。

血清蛋白区带电泳是在临床实验室中常用的技术之一，可定性和/或半定量各条正常或异常蛋白区带。

五．仪器（一）型号：SEBIA HYDRASYS (PN1210)（二）分析和计算参数：1．处理量：约162个样本/小时2．所需样本量：10ul3．检验时间：约半小时4．重复性：有良好的批内和批间重复性5．电泳参数：电压0－300V（可选至3000V）电流0－500mA功率0－100W六．试剂及配套品（一）试剂1．HYDRAGEL 7 PROTEIN(E)试剂盒HYDRAGEL 15 PROTEIN(E)试剂盒HYDRAGEL 30 PROTEIN(E)试剂盒（1）商标：SEBIA（2）包装规格：70测试/150测试/300测试（3）货号：PN4100/ PN4120/ PN41402．脱色液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×100ml（3）货号：PN4540(4) 成分：柠檬酸3．洗涤液（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 10×80ml（3）货号：PN4541（4）成分：叠氮钠4．稀释剂（1）商标：SEBIA（2）包装规格：Pack for 1×5ml（3）货号：PN4587（二）配套品质控血清（1）商标：SEBIA(2) 包装规格：Pack for 5×1ml（3）货号：PN4783七．操作步骤㈠开机，启动电泳仪。

琼脂糖凝胶电泳的原理
首先，我们来看电泳的原理。

电泳是利用电场对带电粒子进行迁移的现象进行分离的一种技术。

在琼脂糖凝胶电泳中，我们通常使用直流电场来进行电泳实验。

当我们在凝胶上施加电场时，带电的蛋白质会在电场的作用下向阳极或阴极迁移，其迁移速度与其电荷量和大小有关。

这样，不同大小和电荷量的蛋白质就可以在电场的作用下被分离开来。

其次，凝胶的特性对琼脂糖凝胶电泳也起着至关重要的作用。

琼脂糖凝胶是一种具有孔隙结构的凝胶，其孔隙大小可以根据实验需求进行调整。

在进行琼脂糖凝胶电泳时，我们通常会根据待分离的蛋白质的大小和特性选择合适的凝胶浓度和孔隙大小，以便获得最佳的分离效果。

在电泳过程中，蛋白质会在凝胶中逐渐迁移，最终形成不同的带状条带，从而实现蛋白质的分离和检测。

最后，蛋白质分离是琼脂糖凝胶电泳的核心内容。

蛋白质在电场的作用下会根据其大小和电荷量被分离成不同的带状条带。

通过对这些条带的分析，我们可以了解蛋白质的大小、电荷量、等电点等特性，从而对蛋白质进行鉴定和定量分析。

琼脂糖凝胶电泳在生物化学和分子生物学领域中有着广泛的应用，可以用于分离和检测复杂的蛋白质混合物，是一种非常重要的实验技术。

综上所述，琼脂糖凝胶电泳是一种利用电泳、凝胶和蛋白质分离原理的实验技术，通过对蛋白质的分离和检测，可以帮助我们了解蛋白质的特性和功能，对于生物化学和分子生物学研究具有重要意义。

希望通过本文的介绍，读者能对琼脂糖凝胶电泳的原理有一个清晰的认识，并在实验中正确操作和应用这一技术。

血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳原理和操作血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生化分离和分析技术，主要用于血清中脂蛋白的分析。

其原理是利用琼脂糖凝胶电泳的分离特性，将血清中的脂蛋白按照分子大小进行分离，从而获得脂蛋白的电泳图谱。

琼脂糖凝胶是由琼脂糖溶液制备而成的凝胶。

琼脂糖分子之间通过氢键结合，在溶液中形成网状结构，能够阻碍大分子的迁移，使分子在凝胶中按照分子大小逐渐分离。

根据琼脂糖凝胶的浓度和凝胶体积，可以调整分离脂蛋白的范围和分辨率。

血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳的操作步骤如下：1. 样品制备：将要分析的血清样品进行离心，将清除过量脂蛋白颗粒。

取适量样品于离心管中，加入适量凝胶缓冲液，混匀。

2. 制备凝胶：根据所需的凝胶浓度，称取相应质量的琼脂糖溶解于电泳缓冲液中，并加热至溶解。

待溶液温度降至室温后，加入凝胶稳定剂并混匀。

3. 填充凝胶孔：将凝胶溶液倒入电泳池，待凝胶凝固后，用专用的样品载体或者微量移液器将样品填充到凝胶孔中。

注意不要将样品液面超过凝胶表面。

4. 电泳分离：将电泳池连接电源，设定合适的电泳条件，如电压和电流。

在电泳过程中，离子在电场作用下沿着琼脂糖凝胶的移动方向迁移，分离出不同迁移速度的脂蛋白组分。

5. 染色和观察：电泳结束后，取出凝胶，进行染色和观察。

目前常用的染色方法有银染、共伴染色和乳化状胶体金染色等。

在染色后，可以使用分子影像仪或者专用的凝胶分析系统进行图像捕捉和分析。

血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳可以用于分析血清中各种脂蛋白的分布和比例，如低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）等。

通过分析脂蛋白的电泳图谱，可以得到脂蛋白的相对含量和分子大小的分布情况，进一步了解脂质代谢的状态以及与某些疾病的关联。

总之，血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生化分离和分析技术，主要用于血清脂蛋白的分离和分析。

通过其原理和操作步骤的了解，我们可以更好地利用该技术进行实验和数据解读，为脂质相关疾病的研究提供有力的支持。

【名称】血清蛋白电泳【英文名】serum protein electrophoresis【别名】【概述】蛋白质等生物分子在缓冲液中带负电荷或正电荷，在电场中向阳极或阴极运动，称为电泳(electmphomsis)。

由于其等电点不同，分子大小、形状和荷质比的不同，使不同蛋白质分子具有不同的电泳迁移率，在一定的支持介质中可借以分离各种蛋白质。

常用的电泳技术有：醋酸纤维素薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫电泳等。

血清蛋白电泳以醋酸纤维素薄膜应用最为普遍。

【原理】血清中各种蛋白质都有其特有的等电点，各种蛋白质在各自的等电点时呈电中性状态，它的分子所带正电荷与所带负电荷量相等。

将蛋白质置于pH比值等电点较高的缓冲液中，它们将形成带负电荷的质点，在电场中均向正极泳动。

由于血清蛋白质的等电点不同，带电荷的量多少差异，蛋白质分子量大小也不同，所以在同一电场中泳动速度也不同。

蛋白质分子越小带电越多，移动速度越快；分子越大而带电越少，移动速度越慢。

按其泳动速度可以分出以下的主要区带，从正极端起，依次为白蛋白、α球蛋白和α球蛋白，β球蛋白和γ球蛋白5条区带。

【试剂】(1)巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8.6±0.1、μ＝0.06)：以巴比妥2.21g、巴比妥钠12.36g于500ml蒸馏水中，加热溶解，待冷却至室温后加蒸馏水至1000ml。

(2)染色液：①丽春红S染色液：丽春红9.04g、三氯醋酸6g，用蒸馏水溶解，并稀释至100ml。

②氨基黑10B染色液：氨基黑10B 0.1g，溶于无水乙醇20ml中，加冰醋酸5ml甘油0.5ml使溶解。

然后将磺柳酸2.5 g，溶于少量蒸馏水中，加入前液，再以蒸馏水补足至100ml。

(3)漂洗液：①30ml/L醋酸溶液：用于丽春红染色的漂洗。

②甲醇45ml，冰醋酸5ml和蒸馏水50ml混匀。

用于氨基黑10B染色的漂洗。

(4)透明液：柠檬酸(C H Na O·2H O)21g和N-甲基-吡咯烷酮150g，用蒸馏水溶解，并稀释到500ml。

实验六：血清脂蛋白的琼脂糖凝胶电泳血清脂蛋白的琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和鉴定血清脂蛋白的方法。

血清脂蛋白是由蛋白质和脂质组成的颗粒物质，其中包括低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒等。

琼脂糖凝胶电泳可以根据脂蛋白的电泳迁移率和染色性质将脂蛋白分离出不同的带，从而达到分离和鉴定的目的。

实验仪器和试剂：1.琼脂糖凝胶电泳仪2.琼脂糖凝胶板（gel plate）3.20%甘油4.3%琼脂糖5.样品（血清）6.样品缓冲液：Tris-HCl pH 8.97.标准品实验步骤：1.制备琼脂糖凝胶板：取100ml 3%琼脂糖加入十倍浓度的Tris-HCl pH 8.9缓冲液中，搅拌均匀后加入20%甘油，将混合液倒入冷却好的凝胶板中，把已冷却的仪器旋转至仪器倾斜角度20度左右，使混合液均匀地分布在凝胶板的倾斜表面上。

等待凝固即可使用。

2.标记标准品：将标准品加入混合样品缓冲液，在84摄氏度下进行10分钟的煮沸，再进行冷却。

将手套清洗干净并干燥，然后将标准品注入样品单元格中，约10分钟后转动仪器延长电泳时间（通常电泳时间为1个小时左右），直到标准品移动到合适的位置、大小和颜色为止。

标准品的分子量从低分子量到高分子量分别为白色脂蛋白（pre-beta脂蛋白）、β-脂蛋白（LDL）、α-脂蛋白（HDL3）、HDL2和脂蛋白(a)。

3.样品电泳：将样品加入混合样品缓冲液，并煮沸10分钟以去除有机物，然后冷却。

将样品注入样品单元格中，待样品在电泳板上电泳1小时。

电泳结束后，先将凝胶板在120ml的异丙醇/冰醋酸/石油醚混合物中浸泡5-10秒钟，然后在以色列碘溶液中染色。

结果分析：在琼脂糖凝胶板上可以看到不同的带，这些带是由血清脂蛋白的不同组分组成的。

根据标准品的移动位置和样品的移动位置，可以将样品中的脂蛋白分为不同的带。

每个带代表一个不同的脂蛋白类别，通常来说，可以将带分为以下5类：白色脂蛋白（pre-beta脂蛋白）、β-脂蛋白（LDL）、α-脂蛋白（HDL3）、HDL2和脂蛋白(a)。

琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白【目的】1. 掌握琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白的实验原理和操作方法。

2. 熟悉血清脂蛋白改变在临床上的重要意义。

【原理】电泳是指带电颗粒在电场的作用下，向着与其自身所带电荷相反的电极移动的现象。

根据电泳支持物的不同，血清脂蛋白电泳可分为滤纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳四类。

由于各种脂蛋白所含载脂蛋白和脂类的种类及数量不同，分子量大小相差较大，并且在一定 pH 值溶液中所带电荷量不同，电泳移动的速度必然有差别，因此，通过电泳可以将不同种类的血清脂蛋白彼此分离。

血清脂蛋白经苏丹黑 B 预染后，以琼脂糖为载体，在 pH 8.6 巴比妥缓冲液中进行电泳，可将脂蛋白分成不同的区带（图 3-9 ）。

正常人空腹状态下，血清脂蛋白电泳后可出现三条区带，从阳极到阴极依次为α- 脂蛋白带、前β- 脂蛋白带及β- 脂蛋白带。

点样槽处不会出现乳糜微粒，有时前β- 脂蛋白也显示不出来。

区带的宽窄及颜色的深浅粗略地反应了各种脂蛋白的量。

另外，可以将已烘干的凝胶片直接放到吸光度扫描仪上，通过扫描得出各种脂蛋白的百分比含量。

或者，将电泳后凝胶板上各区带切下，比色定量分析出各种脂蛋白的百分比含量。

图 3-9 预染血清脂蛋白电泳图谱【器材】1 ．电泳仪2 ．恒温水浴箱3 ．离心机4 ．微量加样器5 ．烫槽器6 ．载玻片7 ．扫描仪8 ．分光光度计9 ．小号试管10 ．吸管11 ．纱布12 ．烘箱【试剂】1 ．电泳缓冲液（ pH8.6 ，离子强度 0.075 的巴比妥缓冲液）称取巴比妥钠 15.458g ，巴比妥 2.768g ，乙二胺四乙酸（ EDTA ） 0.29g ，加适量蒸馏水溶解后加至 1000ml 。

2 ．凝胶缓冲液（ pH8.6 三羟甲基氨基甲烷缓冲液）称取三羟甲基氨基甲烷 1.212g ， EDTA 0.29g ， NaCl 5.85g ，用适量蒸馏水溶解后加至 1000ml 。

免疫固定电泳操作规程一．项目名称免疫固定电泳(ＨYＤRＡＧＥL IMMUＮＯFIXAＴION)二．检验方法名称琼脂糖凝胶免疫固定电泳三．方法学原理血清蛋白电泳中出现得异常条带主要存在于β—球蛋白与γ—球蛋白区域,通常疑为单克隆蛋白质并且提示丙球蛋白血症。

为鉴别异常条带,可运用免疫固定技术。

免疫固定电泳就是一种简单得技术,电泳后得蛋白质与相应抗体形成复合物与被固定在相应得位置上,通过下列四个步骤:1。

蛋白质在琼脂糖凝胶内进行电泳分离。

2。

电泳后已分离得蛋白质被固定并产生免疫沉淀:应用固定剂与抗血清加于凝胶表面得泳道上,并让固定剂与抗血清在凝胶内渗透扩散、３。

使用吸水纸与清洗将未沉淀得蛋白质去除,已被沉淀得蛋白质贮留在凝胶内。

4、将蛋白质染色,并将这些免疫沉淀区带得位置与蛋白质经电泳后观察到得异常蛋白区带进行比较。

为了精确识别单克隆区带,样品同时在六条泳道上进行测试。

经电泳后,ELP作为参考泳道以显示电泳后得蛋白质。

其余五条泳道用于鉴定单克隆成分。

通过它(们)与抗血清,γ(IｇG)、α(ＩｇA)、μ(IgM)重链与κ、λ轻链(游离与非游离)反应与否进行鉴别、该技术简单、快速、图象清晰,易于解释结果。

四．方法学溯源自1930年由Tｉｓｅlius发现了移界电泳(moviｎg bounｄａry ｅectrophoresis),而后,这种技术得各种局限性已逐渐被区带电泳(zoｎe eｌecrｒophoresiｓ)所克服,区带电泳得条件与支持介质得选择就是电泳成败得关键。

通过免疫化学手段观察其电泳特性及抗原特性就是鉴定某一蛋白成分最好得方法,免疫固定电泳技术就是目前应用最广泛得方法之一。

五．仪器（一）型号:ＳＥBIA HＹＤRASYＳ(PＮ12１0)（二）分析与计算参数:1．处理量:约18个样本/小时2．所需样本量:10ul3．检验时间:约55分钟4．重复性:有良好得批内与批间重复性5．电泳参数:电压0—30０V(可选至３０00V)电流0—500mＡ功率0-１00Ｗ六．试剂及配套品（一）试剂1．HＹDＲＡGEＬ1 IF试剂盒HＹDＲAＧＥL 2IF试剂盒HYDRＡGEL 4IF试剂盒HYＤＲAGＥL 9 ＩＦ试剂盒（1）商标:ＳＥBIA（2）包装规格:10测试/2０测试／40测试/90测试（3）货号:ＰN４301/ＰN４３0２／PN4３04/ＰN４３０９2．脱色液(1) 商标:SＥＢIA(2)包装规格:Ｐａcｋfｏr １０×100ml(3) 货号:PＮ4５40(４) 成分:柠檬酸3、洗涤液（1）商标:ＳEBＩA（2）包装规格:Paｃk foｒ10×80ｍl（3）货号:ＰＮ4541（4）成分:叠氮钠4.稀释剂（1）商标:SEＢIA（2）包装规格:Paｃｋfｏr1×５ml（3）货号:PN458７（二）配套品:ＩＦ试剂抗体(1) 商标:SEBIA(2 ) 包装规格:Pａcｋfor 5×1mｌ(３)PＮ4３15七．操作步骤㈠开机,启动电泳仪。