高效液相色谱法标准操作规程

标准操作规程1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。

2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。

3责任：QC人员对本SOP实施负责。

4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。

色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。

超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。

4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。

常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。

正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。

常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。

氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。

离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。

有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。

手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。

色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分离物质的性质来选择合适的色谱柱。

温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。

为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。

残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2〜8之间。

残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。

目的：建立高效液相色谱仪的标准操作程序，以使操作者正确使用。

范围：本文件适用于高效液相色谱仪的标准操作。

职责：质量管理部QC化验员负责本文件的起草、修订及实施。

程序：1接通电源，打开电脑。

按LC-20AT 上“POWER”键及RID-10A上“POWER”键，接通电源。

接通柱温箱的电源，并设置柱温箱温度为40℃。

2 双击电脑桌面上“LC Solution”，点击“1”进入采集窗口。

3 点击“Advanced”进行高级设置。

在“Pump”项中选择“Flow”模式；流速设置为0.5ml/min，泵压0～1.5MPa；在“Detector A”中选择“Analytical”模式，柱温设置为40℃。

设置完成后点击保存图标。

4 点击“Download”下载该方法。

5 将LC-20AT上旋钮“Draw”逆时针旋转180°，按Purge键，仪器自动清洗泵头，约3分钟后听到提示音（轻微长鸣声）后，顺时针旋转“Draw”180°至原位。

6 按LC-20AT上“Pump”键启动泵。

7 点击“R Flow ON/OFF”图标，系统开始运行，约20—30分钟后，点击“Balance RID （Detector A）”平衡系统。

8 基线平稳后，点击“◇”进行样品信息设置，设置完成后点击“确定”。

9 在进样器中吸入样品后插入手动进样口，将进样阀手柄调至“Load”位置，迅速将样品注入液相色谱仪，再将进样阀手柄调至“Inject”位置，开始采集数据。

10 分析完成后，点击红色的“〇”停止分析。

11 分析不同样品时，可重复“8-10”的操作，直至所有的样品均分析完毕。

12 所有的样品均分析完毕后，将流动相换成水继续运行至基线平稳，将色谱柱及系统中残留的物质清洗干净。

13 点击“R Flow ON/OFF”图标，系统停止运行，关闭采集页面。

按LC-20AT上“POWER”键及RID-10A上“POWER”键，关闭电源。

上海伍丰LC-100标准操作规程1．目的规范LC-100型高效液相色谱系统的使用和维护。

2．范围本规程LC-100型高效液相色谱系统的使用和维护。

3．职责质检室仪器分析员负责LC-100型高效液相色谱系统的日常使用和维护。

4．规程4.1 系统组成：本系统由1个LC-100溶剂输送泵，Rheodyne 7725i手动进样阀、LC-100紫外检测器、WS-100工作站和台式电脑等组成。

4.2 准备4.2.1使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。

4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。

4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。

4.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

4.3 开机4.3.1接通电源，依次开启泵、检测器前面板右下角电源开关，待泵和检测器自检结束后（检测器自检需3-5分钟），打开电脑显示器、主机。

4.3.2启动工作站4.3.2.1确认仪器自检通过后，打开计算机电源，双击电脑桌面WS-100图标。

4.3.2.2 进入实时控制及采样画面：4.3.2.3 打开泵的排液阀（逆时针旋180度），排气泡1-2分钟。

再关闭排液阀，待基线平稳（大约需要30分钟左右）数据采集参数设置请单击工具条按钮，进入数据采集参数设置对话框，如图所示：请您输入采集的自动停止时间，各项屏显参数，数据采集的文件名称，采集文件自动保存路径。

文件名称的设置：用户可以自定义文件的命名规则，请鼠标单击名称设置按钮，系统弹出文件命名规则对话框，如图所示：系统会以“前缀+时间”或“前缀+序列号”方式自动命名采样文件。

您还可以在数据采样中更改自动生成的文件名称。

保存路径设置：用户可以自定义文件的保存路径，请鼠标单击保存路径设置按钮，系统弹出保存路径选择对话框，如图所示：开始进样分析：待基线在零点走平后和数据采集参数设置好后即可进样分析。

高效液相色谱仪操作规程高效液相色谱仪（HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生命科学、环境监测等领域。

为了保证色谱仪的正常运行和准确分析结果，需要遵守以下操作规程：1. 准备工作a. 首先，确保色谱仪及其附件的电源已接通，并确认仪器处于正常工作状态。

b. 检查溶剂桶内的溶剂是否充足并无杂质，并确认管路连接正常。

c. 检查流动相液位是否正常，并调整泵的流速和梯度程序参数。

2. 样品制备和准备a. 样品应充分溶解并过滤净化，以避免样品中的杂质对色谱分离产生干扰。

b. 选择合适的进样方式（自动或手动），并根据进样方式调整进样器的参数。

3. 进样器操作a. 将样品注射器插入进样口，并注意不要损坏色谱柱。

b. 设置进样体积和进样速度等参数，并进行一次空白进样以清洗进样器。

4. 色谱柱准备a. 定期检查色谱柱是否损坏，并根据需要更换。

b. 根据实验需要选择合适的色谱柱，并注意记录色谱柱的批号和使用次数。

5. 柱温控制a. 根据分析需要选择合适的柱温，并使用温度控制系统保持恒定。

b. 注意避免温度突变和波动，以保证分析结果的准确性和重复性。

6. 检测器操作a. 根据需要选择合适的检测器，如紫外-可见光检测器（UV-Vis）、荧光检测器、电导检测器等。

b. 设置检测器的参数，如波长、增益和灵敏度，并进行基线校准。

7. 数据采集与处理a. 启动数据采集系统，并设置采集参数，如采样率、数据类型和运行时间等。

b. 对采集到的数据进行处理和分析，如峰识别、定量分析和峰面积计算。

8. 清洗和维护a. 实验结束后，关闭色谱柱和进样器的阀门，并用溶剂清洗色谱柱和进样器，以防止堵塞和降低杂质残留。

b. 清洗完成后，注意关闭色谱仪的电源，并按照要求对色谱柱和进样器进行维护和保养。

总结：高效液相色谱仪的操作规程包括准备工作、样品制备、进样器操作、色谱柱准备、柱温控制、检测器操作、数据采集与处理以及清洗与维护等。

遵守这些规程可以确保色谱仪的正常运行和准确分析结果，提高实验效率。

高效液相色谱法标准操作规程1. 目的建立高效液相色谱法标准操作规程，规范高效液相色谱法检验操作，保证检验操作规范化。

2. 范围适用于高效液相色谱法检验操作。

3. 术语或定义N/A4. 职责质量控制部对本规程的实施负责。

5. 程序5.1依据《中国药典》2020年四部及2019年版《中国药品检验标准操作规范》。

5.2 简述高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

5.3 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期检定并符合有关规定。

5.3.1色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等) 也有使用。

正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。

离子交换色谱系统使用离子交换填充剂; 分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。

填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。

孔径在15nm(lnm=10A)以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。

除另有规定外，分析柱的填充剂粒径一般在3～10μm之间。

粒径更小(约2μm)的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm) 。

使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。

当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。

高效液相操作规程一、目的本操作规程旨在规范高效液相色谱（HPLC）的使用流程，确保实验的准确性和重复性，同时保障操作人员的安全。

二、适用范围本规程适用于所有使用高效液相色谱仪进行分析的实验室人员。

三、操作步骤1. 准备工作a. 确保所有使用的试剂纯度符合要求，且无污染。

b. 检查并清洁色谱柱，保证无残留物影响分析结果。

c. 根据实验要求准备流动相，并调整至适当比例。

2. 仪器开机a. 打开电源，预热仪器至工作温度。

b. 检查并确保所有管道连接正确无漏液现象。

c. 启动色谱软件，进行系统自检。

3. 样品准备a. 根据实验要求，准确称量并溶解样品。

b. 通过适当方式（如过滤或离心）去除样品中的不溶物。

4. 样品注射a. 使用适当的注射器抽取样品。

b. 打开注射口，准确注射样品，然后封闭注射口。

5. 分析运行a. 根据实验方法设置流动相流速、柱温等参数。

b. 启动分析程序，实时监控色谱图谱。

c. 记录并保存分析数据。

6. 结束操作a. 关闭分析程序，停止流动相输送。

b. 清洗系统，包括色谱柱和注射器。

c. 关闭仪器电源，清理工作台面。

四、注意事项1. 在操作过程中应穿戴适当的实验室防护装备。

2. 避免直接接触有毒或腐蚀性的试剂和样品。

3. 定期对仪器进行维护和校准，确保分析结果的准确性。

4. 遇到任何异常情况，应立即停止操作并报告给实验室负责人。

五、安全措施1. 熟悉并遵守实验室安全规程。

2. 操作过程中应使用防护眼镜、实验服和手套。

3. 对于易挥发或有毒溶剂，应在通风良好的环境下操作。

4. 紧急情况下，立即启动紧急冲淋设备，并寻求医疗救助。

六、记录与报告1. 记录所有操作参数和样品分析结果。

2. 对于任何偏离标准操作的情况，应详细记录并报告。

3. 定期对操作记录进行审核，以优化操作流程和提高分析质量。

WATERS高效液相的标准操作规程（SOP）1流动相的处理1.1过滤溶剂溶剂在使用前要用过滤器过滤，有机相和纯水相通常可以不过滤，如果使用固体化学试剂（缓冲盐）配制流动相，过滤特别重要，不能让固体微粒污染泵，阻塞进样器和柱头过滤片。

同时一些缓冲盐溶液过夜后易生菌，使用前要抽滤或者重新配制。

实验室应有水溶性和脂溶性两种过滤膜供选择（反光面朝上），过滤水相时，要先用1-2ml 水润湿过滤膜，有助于快速抽滤。

1.2保持储液瓶的清洁用普通溶剂瓶作流动相储液器应不定期废弃瓶子，最后一次应用HPLC级的水或溶剂清洗，不能在清洗过程中留下污迹。

流动相瓶子要保持清洁。

1.3保证溶剂的质量一定要用HPLC级的溶剂，水也应达到HPLC级，同样也要使用高纯度的缓冲盐。

1.4 故障及解决方法1.4.1 流动相脱气不充分流动相受热，或者流动相不同组分混合时会有气体产生，气泡进入泵内引起压力波动，增加噪音，色谱图上出现毛刺。

可试用下列方法解决问题：a、流动相再脱气；b、采用更有效的脱气方法（如抽滤）或两种方法配合使用；c、改系统内混合为系统外预混合。

1.4.2 流动相供给不畅流动相用完，管道中吸入气体引起泵压力不稳。

应经常观察储液器中流动相的量，加足流动相保证所有的样品分析完毕。

输液管道上装滤头沉至瓶底，储液器盖上留一小孔正好夹住进液管，使其不能上下移动。

过滤器阻塞会引起管道和泵腔进气泡，压力不稳。

压力不稳时，如果已经排除流动相混合不均匀的状况，则观察滤头外部是否长毛（一般水相滤头易长毛），去掉过滤器后如果系统运转正常，说明已找出问题，是过滤器被微粒所阻塞或长霉。

解决方法：a、换上新的过滤器（滤头）。

b、将滤头拆下，先用纯水超声15min，再换50%甲醇水溶液超声，再换纯甲醇超声，如果是水相的滤头，在安装前还需要用纯水超声。

如果上述还不能解决问题，则使用10%稀硝酸水溶液超声滤头，可起到除去菌类微生物的作用。

1.4.3 检测器和流动相管路被污染由于污染，噪音越来越大，检测器被污染。

高效液相色谱仪操作规程
《高效液相色谱仪操作规程》
一、实验目的
本实验旨在通过高效液相色谱仪分析样品，准确测定目标化合物的含量，并学习高效液相色谱仪的操作方法和技巧。

二、实验设备
1. 高效液相色谱仪
2. 注射器
3. 色谱柱
4. 移液管
5. 色谱仪软件
三、操作步骤
1. 打开高效液相色谱仪的电源并进行系统初始化，启动色谱仪软件。

2. 调整流速，进样量等参数，使得实验条件符合要求。

3. 将样品通过移液管注入色谱柱中，注意避免样品泡沫和气泡的产生。

4. 设置色谱条件，如梯度洗脱，流速等，启动色谱分析。

5. 记录实验数据和结果，并进行数据处理和分析。

6. 清洗色谱仪，保持设备清洁。

四、实验注意事项
1. 在操作色谱仪时，要严格按照操作步骤进行，严禁随意更改参数。

2. 在进行样品进样时，要小心操作，避免产生气泡和样品泡沫。

3. 在进行色谱分析时，注意梯度洗脱条件的设置，保证分析结果准确。

4. 在实验结束后，及时清洗色谱仪，保持设备干净。

五、实验结果
根据实验数据和结果，可以得出目标化合物的含量和纯度，并进行结果的解释和分析。

通过《高效液相色谱仪操作规程》的学习，使我们更加熟悉高效液相色谱仪的操作方法和技巧，能够准确进行样品分析，为科研工作的开展提供了重要的技术支持。

⾼效液相⾊谱法操作规程与注意事项⾼效液相⾊谱法操作规程与注意事项1.程序1.1.仪器及性能要求：所⽤的仪器为⾼效液相⾊谱仪，由泵系统，进样系统，⾊谱柱，检测器和⾊谱数据处理系统组成。

1.1.1.泵系统：HPLC泵系统通过⾼压⼒管和设备从溶剂瓶中吸取计量的流动相到柱⼦中。

现⾏的泵系统有⼀元或多元计算机控制的计量泵组成，这些泵可以按照梯度洗脱的要求改变流动相的⽐例或者是按等度洗脱的要求混合流动相。

1.1.2.进样系统：化合物被溶解在流动相或合适的溶剂中，可以通过⼿动进样器或定量环，或⾃动进样器转移到流动相中。

⾃动进样器由可存放进样瓶的卡盘组成，进样瓶的顶部有⼀个可以刺⼊的隔膜，进样针通过这个隔膜将样品转移到⼀个定量环中然后输送到⾊谱系统中。

1.1.3.⾊谱柱：最常⽤的⾊谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相⾊谱系统使⽤⾮极性填充剂，以⼗⼋烷基硅烷键合硅胶最为常⽤，⾟基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅胶和氨基键合硅胶）也有使⽤。

正相⾊谱系统使⽤极性填充剂，常⽤的填充剂有硅胶等。

离⼦交换⾊谱系统使⽤离⼦交换填充剂量；分⼦排阻⾊谱系统凝胶或系统⾼分⼦多孔微球等；对映异构体的分离通常使⽤⼿性柱。

除另有规定外，柱温为室温。

1.1.4.检测器：常⽤的检测器包括紫外分光检测器，⽰差折光检测器，⼆极管阵列检测器。

固定波长检测器在单⼀波长下运⾏，典型的波长是254nm，通过低压⼒的汞灯发射。

可变波长的检测器包含持续的能源，例如氘灯或⾼压⼒氙灯，通过单⾊器或⼲涉过滤器产⽣⼀定波长的单⾊光。

1.2.系统适⽤性试验1.2.1.为了确定最终运⾏系统的有效性，应当进⾏系统适⽤性试验。

整个系统可以⽤以下指标来评价：信噪⽐、理论塔板数，分离度，重复性，拖尾因⼦，其指标及计算⽅法应在相关分析⽅法中予以规定，如果没有专门的规定，按以下⽅法进⾏计算：信噪⽐：⽤于评价⾊谱系统检测微量物质的能⼒，美国药典的计算公式：S/N=2H/h，H为峰顶到基线的距离，h为基线中噪声峰最⼤值与最⼩值的差，该段基线需取≥5倍半峰⾼宽的距离，如果有可能，⽬标峰两侧取相等的距离（如图1）。

实验室高效液相操作规程1. 引言高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种常用的分析技术，广泛应用于化学、生物、制药等领域。

为了保证实验室高效液相操作的安全性、准确性和高效性，特制定本操作规程。

2. 实验室设备和试剂准备2.1 设备准备•高效液相色谱仪：确保色谱仪处于正常工作状态，检查流路是否畅通，适时更换柱子。

•注射器：检查注射器是否正常工作，确保灵活性和密封性。

•保留机：检查保留机功能是否正常，适时进行更换和校准。

•应用软件：检查计算机和操作软件的工作状态，保持及时更新。

2.2 试剂准备•溶剂：根据实验要求准备所需的溶剂，确保溶剂的纯度和稳定性。

•标准品：准备所需的标准品，确保标准品的纯度和准确度。

3. 实验前准备工作3.1 实验室环境条件•温度：保持实验室温度在适宜范围内。

•湿度：保持实验室湿度在适宜范围内。

•通风：保持实验室通风畅通，防止有害气体堆积。

3.2 装载样品•样品准备：按照实验要求，准备好样品，并确保样品的质量和准确性。

•注射器装载：使用干净的注射器装载样品，并确保装载准确和不漏液。

3.3 流动相配制•流动相溶液的配制：根据实验要求准备好流动相溶液，并确保溶液的纯度和稳定性。

•流动相装载：使用干净的流动相装载样品，并确保装载准确和不漏液。

3.4 色谱柱装载•色谱柱选择：根据实验要求选择合适的色谱柱，并确保柱子的使用寿命和稳定性。

•色谱柱装载：根据色谱柱的要求进行装载，并确保装载准确和不漏液。

4. 操作步骤4.1 仪器操作1.打开高效液相色谱仪电源，启动仪器并进行自检。

2.打开注射器，设置注射器体积和进样模式，保持灵活性。

3.打开保留机，设置保留时间和流速，保持准确性和稳定性。

4.打开计算机，启动操作软件，登录实验账号。

5.设置分析方法，包括流动相梯度、检测波长、采集时间等参数。

6.进行空白试验，检查仪器是否正常，调整参数使峰形对称且分离度良好。

高效液相色谱法操作规程目的：建立高效液相色谱法的操作规程，以规范操作过程，确保检验结果准确可靠。

适用范围：原辅料、中药饮片责任人：质量管理部主任、检验员内容：高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等作为流动相，用高压输液泵压入装有固定相的色谱柱中，经进样阀注入供试品，由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器，色谱信号由记录仪、积分仪或数据工作站记录色谱图。

1 适用范围高效液相色谱法适用于挥发性低、热稳定性差、分子量大的高分子化合物以及离子型化合物等的定性、定量分析。

中国药典主要用于药品的含量测定，有关物质检查、杂质限度检查和鉴别等。

2 仪器高效液相色谱法主要由输出液泵系统、进样器系统、分离系统、检测系统及数据处理机（或兼有组分收集系统）等组成。

使用时应按仪器的说明书进行操作。

3 仪器的校正3.1 高效液相色谱仪的柱箱控温精度、基线噪声、基线漂移、灵敏度可检测限，线性范围的检定均按仪器说明书的技术要求进行校验，应符合规定。

3.2 以紫外--可见光检测器为检测器的实验室通用液相色谱仪的检定，所用各种标准物质应使用经国家技术监督部门批准颁发的标准物质。

3.3 泵的耐压试验将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为流动相，流量设为1ml/min，按说明书要求启动仪器，待压力平稳后保持10min，用滤纸检查各管路接头处应无湿迹。

卸下色谱柱，堵住泵出口端（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的90%，保持5min，应无泄漏。

3.4 泵流量设定值误差（Sω）、流量稳定性误差（SR）的试验。

在3.3试验条件下，按下表设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集10-25min，称重，按式(1)、(2)计算Sω和SR。

Sω=（Fm —Fω）/F×100 (1)SR =（Fmax —Fmin）/F×100 (2)式中：Sω——流量设定值误差，%；Fm——（W2-W1）/P.t，流量的实测值，ml/min；W2——容量瓶+流动相的重量，g；W1——容量瓶的质量，g；F——流量设定值，ml/min；Pi——实验温度下流动相的密度，g/cm3；T——收集流动相的时间，min；SR——流动相稳定性误差，%；Fmax——同一组测量中流量最大值，ml/min；Fmin——同一组测量中流量最小值，ml/min。

高效液相色谱（HPLC）操作规程一操作1.准备工作⑴流动相的准备应根据实验选择合适的流动相，所有流动相原则上应选择HPLC级别，水应选择超纯水，并应保持新鲜。

所有流动相在进行实验前应经过相应的脱气处理，脱气时间应根据流动相的量相应增加，但一般超声脱气不应少于20min。

在实验过程中应保证足够的流动相，流动相的量与流速、洗脱时间等有关，应根据具体情况进行准备。

⑵样品的准备对于待测的样品，在进样之前应经过滤膜过滤，根据样品的不同选择不同种类、不同直径的滤膜。

2. 排气打开purge阀，键入stop→prime，直到无气泡停止stop。

B泵同样操作。

关闭purge阀。

3. 开机打开电脑主机和显示器，点击Galaxie，进入工作站。

选择系统，点击Agilent HPLC.点击overview，可观察仪器各部分状态。

打开泵及检测器的电源。

二 分析方法建立1.进入工作站系统界面。

点击数据，文件→新建→方法，出现视窗，点击前进即可。

键入方法名和相应描述→点击ok后出现方法文档。

2.210的设定点击控制→210图标→Elution。

选择流动相A和B的种类。

Compressibility、Pressure Constant以及Refill Time属于内置参数无需设定。

设置A、B流动相的比例，通过改变B的比例设定。

如需梯度洗脱，则根据方法对Equilibrium Time 和Hold Time进行设定。

点击Misscellaneous。

Start Mode选择Inject Trigger on Pump A。

End of Sequence 选择Leave Pump on。

210设定结束。

3.325的设定点击325图标，选择Signal。

其中Detector Bunch Rate建议设置成2（10Hz），Noise Monitor Length建议设定成64，Response Time建议设定0.5。

根据方法设定相应波长。

高效液相色谱仪标准操作规程1目的建立高效液相色谱仪(Waters2695-2996Allianee)标准操作规程，为了使操作者操作高效液相色谱仪(Waters2695-2996Allianee)更规范，保证结果更精确。

2范围适用于高效液相色谱仪(Waters2695-2996Allianee)标准操作规程。

3职责操作者。

4程序4.1开机4.1.1打开Allianee电源开关，仪器进入自检状态。

4.1.2打开检测器，“STATUS”闪烁，4分钟后“LAMP”亮，仪器正常。

4.1.3点击menu/Status进入“STATUS”界面，按direactfunction，选择dryprime后，选择“A/B/C/D”四个泵，点击“Enter”，管道快速充满液体。

4.1.4打开电脑，点击“Empower”登陆，输入帐户“system”，密码“manage”，进入“EmpowerPro”。

4.1.5在配置系统中新建一项目。

4.1.6点击“运行样品”，选择“项目”，3分钟后仪器进入运行界面。

4.2样品检测4.2.1点击“编辑”，编辑仪器方法并保存方法名。

4.2.2点击“新建方法组”，编辑方法组名。

(要求方法组与仪器方法同名)4.2.3标识样品名、进样品/进标准品、样品位置、进样体积、运行时间后，于“file”中保存参数4.2.4点击“准备”，仪器显示“准备进样”后，点击进样。

4.2.5点击鼠标右键，选择“波长”和“正好运行时间”，保存参数4.3数据处理4.3.1点击“浏览项目”，于“进样”栏中双击所选的样品名，进入“通道”栏，双击所选的样品名，进入样品数据主窗口4.3.2选择波长，点击“提取色谱”后，积分或以处理方法向导处理数据，保存处理方法后，于“file”“保存”中保存“全部”。

4.4打印报告4.4.1于所选“浏览项目”结果栏中，选择已处理好的数据（如果没有，点击更新），点击右键，选择预览报告。

4.4.2选择报告方法，确定后，进入报告预览状态。

1.目的：规范高效液相色谱法检验操作，保证检验的质量。

2.范围：适于本公司原辅料、成品的高效液相色谱法操作。

3.责任：质量管理科、中心化验室、检验员。

4.检验依据：《中国药典》2015年版四部高效液相色谱法操作方法。

5.内容：5.1 简述◆高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。

由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。

◆高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。

有的药品需在色谱分离前或后经过衍生化反应方能进行分离或检测。

常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱；离子交换填料，用于离子交换色谱；具一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。

◆高效液相色谱仪基本由泵，进样器，色谱柱，检测器和色谱数据处理系统组成。

检测器最常用的为可变波长紫外可见光检测器，其他检测器有如示差折光检测器和蒸发光散射检测器等。

色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。

梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。

◆高效液相色谱仪的使用要求◆按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705－90）”的规定作定期检定，应符合规定。

●仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。

◆具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。

5.2 操作前的准备◆流动相的制备用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查．应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水，可用超级纯水器制得或用重蒸馏水。

高效液相色谱操作规程第一部分：进样前准备工作1．溶剂LC的溶剂包括：自己的流动相，超纯水，体积比为1：1的流动相与超纯水的混合溶液。

例如，如果你的流动相是甲醇：水＝85：10，那么你需准备的溶剂如下：纯甲醇，超纯水，50％甲醇水混合液。

（以下以甲醇为流动相为例）1．1 过滤使用前，应将纯的甲醇（要求是色谱纯，最好是进口的色谱纯）用0.45µm的滤膜过滤。

50％的甲醇水溶液也用过滤过的甲醇和超纯水配。

注意：此不操作切不能省，尤其是国产色谱纯。

否则，很容易造成色谱柱的堵塞，造成柱压过高，从而使你的测定工作不能进行。

1．2脱气使用前所有的溶剂都要用超声清洗仪脱气15min.原因：液相色谱最重要的一点就是整个流路不能有气泡，否则会造成峰分离不好，响应不理想等后果。

而使用的溶剂或多或少都会融入空气，所以使用前必须脱气。

2．样品样品包括标样和实际样品。

所有样品的最后性状都应是透明的液体。

为避免堵塞，样品同样得用0.45µm的滤膜过滤。

第二部分:仪器使用1.将吸液头放进相应的流动相中.通常标有A的放入纯水中,B泵放进纯有机溶剂中.没有任何标记的吸液头放进50%的有机溶剂水混合液中.2.开仪器.开启顺序为:CTO-20A,SIL-20A,SPD-M20A,LC-20AT.等待几秒钟后,开电脑.3.点击工作站图标,如图: .之后出现界面4.点击出现界面5.点击OK.可听到蜂鸣一声,仪器连接正常,进入工作站.6.设置方法.点击界面中的高级须更改的参数主要有:点击数据采集------输入所需的LC停止时间------点击应用于所有的采集时间点击泵-----选择模式里的低压梯度-----设置泵A总流速,溶剂B浓度.点击柱温箱------设置柱温箱温度.点击自动排气------选择流动相A,流动相B.方法设置完成.另存方法文件到自己建立的文件夹里.保存完成后,点击下载(界面右上角).7.点击自动排气图标.出现排气界面.8.排气完成.点击仪器开关图标,泵开关图标,柱温箱开关图标.9.点击绘图.开始走基线.通常需走30分钟,视基线的好坏更改而定.基线不平,则需更长的分析时间.点击更该分析时间图标,输入所须的时间,点击确定.10.基线平衡之后,就可以进样.将样品放入样品架.如果是单次进样，就点击单次运行。

高效液相色谱法操作规程1．目的：规范高效液相色谱法检验操作。

2．范围：适用于本公司中药材用高效液相法的检验。

3．责任：检验室主任和相关检验员对本操作规程的实施负责。

4．内容：4.1 标准名称高效液相色谱法{中华人民共和国药典（2000年版一部）附录VID}。

4.2 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪。

色谱柱的填充剂和流动相的组分应按各品种项下的规定。

常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶，后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用。

离子交换填充剂，用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂，用于分子排阻色谱等。

除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。

在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法项下对溶剂的要求。

正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变，以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。

一般色谱图约于20分钟内记录完毕。

4.3 系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子。

4.3.1 色谱柱的理论板数（n）在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半峰高宽（Wh/2），按n=5.54（tR/ Wh/2）2 计算色谱柱的理论板数。

如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。

4.3.2 分离度定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。