动物细胞培养与单克隆抗体制备 公开课

杂交细胞具有 两个或多个细胞的遗传物 质 突破_________________，使 有性杂交局限 远缘杂交 __________成为可能。获得杂
单克隆抗体制备 交细胞，用于_______
二、单克隆抗体制备的过程
问题导引：1.抗体从何而来？ 2.传统抗体制备的方法是什么？弊端有哪些？ 3.能否通过单独体外培养浆细胞的方式大量 获得相应抗体?
2013年3月20日
骨髓瘤细胞
杂交细胞
5.淘汰后的细胞所 产抗体是单一的吗？ 若不是，下一步如 何操作？
6.如何获得大量 的单克隆抗体？
单克隆抗体
B淋巴细胞
细胞融合
骨髓瘤细胞
杂交细胞
5.淘汰后的细胞所 5.不是，下一步应 产抗体是单一的吗？ 进行杂交细胞的克 若不是，下一步如 隆化培养与“专一 抗体检测” 何操作？
1.注射特定抗 1.如何获得特 （浆细胞） 定的浆细胞？ 原 （选择培养基）筛选
2.浆细胞与浆细胞、骨髓瘤 2.融合过程中会出现几种类 细胞与骨髓瘤细胞、浆细胞 型的细胞？若只考虑两两融 与骨髓瘤细胞 合呢？ 筛选（专一抗体检测阳性）克隆
3.该过程得到的细胞 哪种是我们所需要 的？其特点是？ 4.如何淘汰掉我 们不需要的细胞？
【本节知识梳理】
要求：
1.以“单克隆抗体制备”为主线，自 己进行本节知识梳理。 2.完成当堂检测
2013年3月20日
单克隆抗体的制备（小结）
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
体外培养 小鼠腹腔内增殖
克隆化 诱导 选择 产生所需 融合 多种杂 培养 杂交瘤 培养
交细胞
细胞
抗体 检测
抗体的杂 交瘤细胞
单克隆抗体
应用
体外培养 体内培养
6.体内、体外培养杂 6.如何获得大量 交瘤细胞并从小鼠腹 的单克隆抗体？ 水或细胞培养液中提 取单克隆抗体
2013年3月20日
单克隆抗体
把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正 确顺序连接起来。顺序是？
2013年3月20日
【归纳提升】
回顾“单克隆抗体制备流程” 自主归纳 1、两种细胞： 浆细胞 骨髓瘤细胞
1.原理 2.方法 3.意义
动物细胞培养技术 1、该过程中用到了两种技术 动物细胞融合技术 2、单克隆抗体的制备过程的三个 “ 一 ”： 灭活病毒诱导融合
2013年3月20日
一种诱导细胞融合的新方法，产生了一种新细胞，得到了一种优势抗体。
杂交瘤细胞
优势：特异性强、 灵敏度高， 可大量制备
【巩固训练】
1.A 2.A
3.B
4.A
2013年3月20日
作业：
《导学练》P39 课堂演练 T17为选做！！
2013年3月20日
【寄语】
2013年3月20日
1970年， 有两位科 学家做了 一个人— 鼠细胞融 合的实验
人为诱导融合
2013年3月20日
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
主讲人： 付 强 2013年3月20日
【学习目标】
1.能够列表比较动物细胞融合与植物体细 胞杂交的异同。 2. 能叙述单克隆抗体制备过程； 明确各步骤目的； 能举例说出其应用及意义。
2013年3月20日
一.动细胞融合
核心知识点： 1.原理 2.方法 3.意义
4.用途（特别）
2013年3月20日
【归纳提升】
项目 原理 融合前处理 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性 植物细胞全能性 纤维素酶 用_____________、 果胶酶 __________去除细胞壁
后诱导原生质体融合
2、两次筛选（目的）：
1、杂交瘤细胞
2、分泌专一抗体的杂交瘤细胞
3、两种培养（培养特定杂交瘤细胞的方法）：体内，体外培养
4、两种提取（提取抗体的途径）：小鼠腹水 细胞培养液 5、两项技术： 动物细胞培养 动物细胞融合 特异性强，灵敏度高，可大量制备 6、三个优点：
2013年3月20日
三. 单克隆抗体的应用
4.用什么方法能让浆细胞在体外培养时既能 产生抗体又能无限增殖?
2013年3月20日
5.“单” “克隆” 各指什么含义？
二. 单克隆抗体制备的过程
【小组活动】 小组合作--尝试设计“单克隆抗体的制备”流程 目的：自查预习情况 要求：1.根据预习情况，梳理思路，利用手中材料尝 试对“单抗”制备流程进行设计； 2.组内交流设计思路；
预习案点评
融合方法：物理法：离心、振动、电激 化学法：PEG
植物细胞融合成功的标志：杂种细胞再生细胞壁 植物体细胞杂交技术成功的标志：杂种细胞培育成新的植物体 体液免疫中特异性识别抗原的细胞是：T细胞 B细胞 记忆B细胞
吞噬 细胞
T细胞
记忆B细胞 浆细胞
2013年3月20日
预习案点评
组别
1 2 3 4 5 6 7 8 9 2013年3月20日 10
3.小组代表黑板展示设计流程，并作简要说明。
2013年3月20日
把以下代表单克隆抗体制备过程步骤的图解的字母按正 确顺序连接起来。顺序是？
2013年3月20日
B淋巴细胞 1.如何获得特 （浆细胞） 定的浆细胞？
2.融合过程中会出现几种类 型的细胞？若只考虑两两融 合呢？
3.该过程得到的细胞 哪种是我们所需要 的？其特点是？ 4.如何淘汰掉我 们不需要的细胞？
动物细胞融合 细胞膜的流动性
胰蛋白酶 用____________使细胞分散后 诱导细胞融合
除应用植物体细胞杂交手段外， 还有 灭活病毒
诱导融合的方 法
离心，振动，电 激，PEG
杂种植株（或 杂种植株含有两种 杂交细胞）特 生物的遗传物质 点 意义和用途 克服 远缘杂交不亲 和的障碍，获得杂 2013年3月20日 植株 种_________
2013年3月20日
体内培养
既能产 生抗体 6.体内、体外培养杂 6.如何获得大量 又能无 交瘤细胞并从小鼠腹 的单克隆抗体？ 限增殖 水或细胞培养液中提
取单克隆抗体
体外培养
单克隆抗体
单克隆抗体制备过程
2013年3月20日
B淋巴细胞 （浆细胞）
细胞融合
骨髓瘤细胞
杂交细胞
（选择培养基）筛选
筛选（专一抗体检测阳性）克隆
组长
整齐 度
认真 疑难 度 分析
提出问 题
温故知新:
植物细胞A
去掉细胞壁
植物体细胞杂交过程
植物细胞B
去掉细胞壁
原生质体A
原生质体B
原生质体融合
杂合的原生质体
再生出细胞壁
杂种细胞
细胞分裂
愈伤组织
分化发育
2013年3月20日
杂种植株
2013年3月20日
实例1：
自然融合
2013年3月20日
实例2：
（要求）阅读教材P54相关内容，自主总结：
①诊断试剂（识别作用，如同位素
标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、 心血管畸形等）
优点： 准确、高效、简易、快速
②用于治疗疾病和运载药物（主要用于
癌症治疗，如单克隆抗体（瞄准装置）+ 药物（弹头）= “生物导弹”）
优点： 位置准确、疗效高、副作用小
2013年3月20日