第一章 细菌检验基本技术
一、形态学检查
意义：1.为后续的进一步检验提供参考依据
2.迅速了解标本中有无细菌及菌量的大致情况
3.对少数具有典型形态特征的细菌可以做出初步诊断，为临床选用抗菌
药物治疗起重要的提示作用。
分为：染色标本和不染色标本的检查
1、不染色标本的检查：用于观察细菌的动力及运动情况。常用方法有压滴法和悬滴法。
2、染色标本检查：检查的内容：对标本合格与否进行评价；了解标本有无细菌及大致菌量；根据细菌形态、染色性质等对病原菌初步识别分类，决定进一步的生化反应鉴定血清学鉴定、并为临床选择用药提供帮助。
常用染色方法有：革兰染色（常用）、抗酸染色（结核病、麻风病）、荧光染色（结核、麻风、白喉、痢疾）、负染色（墨汁负染色法用于新型隐球菌检查）、特殊染色（鞭毛染色、荚膜染色、异染颗粒（白喉））。
二、培养与分离技术（关键）
目的：鉴定细菌的种类和保存菌种，为进一步确定细菌的致病性、药物敏感性提供依据。
牛肉膏无糖，可作为肠道细菌鉴别培养基的基础成分。
流感嗜血杆菌需要X因子和V因子。
理想的凝固物质具有的特性：本身不被细菌利用；在微生物生长温度范围内保持固体状态，凝固点的温度对微生物无害；不因消毒灭菌而破坏，透明度好，黏着力强。（琼脂最合适）
半固体培养基琼脂含量 0.3%~0.5%；固体培养基1.5%~2.0%。
培养基质量检验：1、无菌试验：将灭菌后的培养基置35℃温箱培养过夜，判定是否灭菌合格。2、效果检验：按不同的培养要求，接种相应菌种（符合要求的标准菌种），观察细菌的生长、菌落形态、色素、溶血及生化反应等特征，判断培养基是否符合要求。
制备好的培养基存放于冷暗处或4℃冰箱，一般不超过七天，如果用塑料袋密封。保存期可延长，但至多两周。
专性需氧：结核分枝杆菌、霍乱弧菌
微需氧菌（5%氧气、10%二氧化碳、85%氮气）：空肠弯曲菌，幽门螺杆菌
谈谈微生物检验操作技能及注意事项
微生物检验过程之中除了要保障检测环境的无菌以及工作器具的清洁之外，对于检测人员的技能操纵也有相当的要求。为了全面保障实验室内检验操作的准确可信，应当从下面几个方面注意操作事项。
1.
培养基的使用
微生物的培养基础在于培养基的配置，每次根据不同的微生物培养要重新确定培养基的配置配方与流程。配置前要确定其生产日期与最佳使用时段，在开瓶前检验密封性，确保未变质、吸潮、发霉的情况下进行配置使用。
培养基配置时需要保障称量准确，一定要将配置和灭菌放在同时进行，没有及时进行灭菌措施的培养基绝不能长时间放置，尤其不能隔夜，否则一律以污染物处理。
灭菌操作以恒温恒压为主要条件，维持一定的灭菌时间。灭菌完成之后要放置冰箱进行保存，但最好当天使用。保存时间不应当超过三天时间，对于难以确定保存时间的培养基，一律以污染物处理。
在培养基的使用之中，需要根据班次安排使用量。水浴加热培养基为液态，先化开的培养基能够取出放在锅盖上缓慢冷却，但是所有的培养基都不能长期处于高温加热状态下。（没懂起什么意思）
微生物在检测时培养基温度通常要控制在45℃，过烫的情况下会导致菌群死亡，过冷会导致培养基凝聚，无法观察。
检测做样要集中进行，培养基每次打开都有可能提升杂菌污染几率，出现实验误差。
培养基除菌群外均要流出空白位置，方便对照观察。 1.
检测环境的维持
检测环境的维持分为检测室大环境的维持和超净工作台小环境的维持。检测室大环境之中，每当微生物样本检测之前需要关闭窗户、空调与风扇，然后用酒精等杀毒药物对空间内进行消毒喷雾，避免检测室内的空气运动对超净工作台内部环境产生影响。如果在检测室内有紫外灯，需要定期打开紫外灯进行杀毒操作。（酒精擦拭消毒仪器设备，含氯消毒制剂擦拭消毒操作台面）
在小环境超净工作台之中，需要对初效过滤器进行定期清洁与及时更换，在检测前将工作台进行全面清洁，使用医用酒精进行擦拭消毒。超净工作台需要提前至少半个小时打开紫外光灯，对超净台内所有的环境进行杀毒操作。一旦需要人员进入，一定要先关灯，避免紫外灯对人眼视网膜灼伤，再打开风机，调整进风量。检测完成之后，要再次进行清洁与消毒。紫外光等需要及时进行更换。
微生物检验技师相关知识复习试题及答案(5)
1.胶体金标记技术的优点为
A、较放免方法更敏感
B、标记物非常稳定
C、较酶联免疫方法更敏感
D、特别适合于定量分析
E、以上都不是
正确答案：B
2.有关快速斑点免疫金渗滤法（Dot-immunogold filtration assay）的描述哪些是正确的
A、又称滴金免疫法
B、基本原理仍是间接法或夹心法
C、在操作完成后即可直接观察结果
D、夹心法测抗原的机理为：固定于膜上的多克隆抗体+标本中待测抗原+金标记的特异性单克隆抗体显色
E、以上都正确
正确答案：E
3.胶体金取代传统三大标记物，用于肉眼水平的免疫检测中的优点为
A、不需γ—计数器、荧火显微镜、酶标检测仪等贵重仪器，更适于现场应用
B、没有诸如放射性同位素、邻苯二胺等有害物质参与
C、实验结果可以长期保存
D、时间大大缩短，提高了检测速度
E、以上都是
正确答案：E
4.胶体金标记技术的应用领域包括
A、用做电镜或光镜水平的标记物，取代传统的荧火素、酶等
B、结合流式细胞仪计数分析细胞表面抗原
C、凝集试验
D、免疫印迹技术
E、以上都是
正确答案：E
5.有关生物芯片的描述哪项是错误的：
A、常用的生物芯片分为三大类：即基因芯片、蛋白质芯片和芯片实验室
B、生物芯片的主要特点是高通量、微型化和自动化
C、生物芯片是近年来在生命科学领域中迅速发展起来的一项高新技术
D、生物芯片技术属于一种大规模集成电路技术
E、基因芯片可分为主动式芯片和被动式芯片
正确答案：D
31.抗酸染色的结果判定
A、菌体着兰色为抗酸菌
B、菌体着红色为抗酸菌
C、菌体着绿色为抗酸菌
D、菌体着黄色为抗酸
E、菌体无色为抗酸菌
答案：B
32.颗粒型细菌抗原（死或活菌）在哪种反应中采用
A、沉淀反应
B、琼脂扩散
C、中和试验
D、凝集试验
E、对流电泳
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“微生物学检验技术”基本技能操作系列微课的设计思路
作者：黄荔丰
来源：《新课程研究·中旬》2017年第09期
【摘 要】“微课”作为一种创新型的教学模式，是以教学视频为核心载体，基于一个学科知识点或结合某个教学要素和环节精心设计和开发的优质学习资源。微课的制作是一项复杂、细致、系统的工作，在微课的开发过程中，首先要进行统筹设计、科学规划，按照合理、规范的流程制作，才能让各项工作有条不紊地进行。现结合我校“微生物学检验技术”基本技能操作系统微课的开发实践，浅析“微生物学检验技术”基本技能操作系列微课的设计思路。
【关键词】微课；微生物学检验技术；设计思路
【基金项目】本文系福建省教育厅2016年中青年教师教育科研项目（编号：JAS161081）的研究成果。
中图分类号：G712 文献标识码：A 文章编号：1671-0568（2017）26-0062-02
由于微课具有“短”“小”“精”“悍”的特点，一堂微课的时间一般在8～10分钟，那么如何在有限的时间内尽量聚焦我们的教学内容，使之条理清楚，言简意赅，成为学生喜欢、富有教学成效的优秀的微课作品呢？以下是我的设计思路。
一、客观分析，精心选题
一节微课能否设计好、教学效果如何，知识点的选择和分析处理是非常重要的。首先，教师要根据实际的教学进度、教学内容，对学生的接受能力做出客观的评估，并梳理教学过程中的知识点、技能点，选取核心内容作为一节微课的教学焦点。比如“微生物学检验技术”基本技能操作系列微课属于实验演示类微课，我们可选择并制作成微课的教学内容有：显微镜油镜的使用与保养、细菌涂片的制作、革兰染色、抗酸染色、细菌的四区划线法、药敏试验K-B法等，做到一节微课一个主题。
二、确定每节微课的教学目标
确定每节微课的教学目标一来让设计者明确每节微课的聚集点不偏离教学目标，二来可以让学习者迅速找准学习方向，我计划把“微生物学检验技术”基本技能操作系列微课设计成一体化教学的模式：以技能点的介绍为主，并融合与之匹配的知识点为辅的组合形式，比如以“革兰染色”这节微课为例，我们确定的教学目标是让学生掌握革兰染色的原理、操作步骤、适用龙源期刊网
