151104大米中直链淀粉和支链淀粉的检测分光光度法

FNCPLSDM00009 稻米中直链淀粉含量的测定分光光度法F-NCP-LS-DM-00009稻米－直链淀粉含量测定－分光光度法1 适用范围目前测定直链淀粉含量的方法有国标法和简化法（农业部部标）两种,一般法适用于水稻、玉米、高梁、谷子籽粒直链淀粉含量的测定,简化法适用于稻米的测定。

2 原理直链淀粉与碘作用生成蓝色的淀粉—碘复合物,在适当的波长范围内其颜色的深浅与直链淀粉含量呈线性关系;测定该复合物水溶液的吸光度值,根据标准曲线,可求得待测样品的直链淀粉含量.3 试剂3.1 1mol/L乙酸溶液：量取57.8ml冰乙酸（GB 676－78分析纯）用蒸馏水定容至1000ml；3.2 柠檬酸溶液：5.6g柠檬酸（HG 3－1108－1981）用600ml蒸馏水溶解，加入5.0ml冰醋酸，定容至1000ml。

3.3 1mol/L氢氧化钠（GB 629－81 分析纯）溶液3.4 碘液：2.000±0.005g碘（GB 675－77 分析纯）和20.000±0.001g碘化钾 （GB 1272－1977 分析纯）用蒸馏水溶解并稀释至1000ml。

3.5 乙醇：95%乙醇（GB 679－1980 分析纯）和无水乙醇（GB 678－1978 分析纯）； 3.6 甲醇（GB 683）：85%（V/V）；3.7 1mg/ml直链淀粉标准溶液：称取0.1000g（干基）马铃薯直链淀粉纯品，放入100ml 容量瓶中，加入1ml无水乙醇湿润样品，再加入9ml 1mol/L NaoH溶液，于沸水浴中分散10min，冷却后用水定容；3.8 1mg/ml支链淀粉标准溶液：称取0.1000g支链淀粉纯品，置于100ml容量瓶中，加入1ml无水乙醇湿润样品，再加入9ml 1mol/L NaoH溶液，于沸水浴中分散10min，冷却后用水定容；3.9 直链淀粉参比样：具高、中、低直链淀粉含量的参比样品各一个（其直链淀粉含量预先经NY/T 558－1987或ISO 6647－1987方法准确测定；4 仪器设备4.1 具有孔径0.25mm（60目）网筛的实验室用粉碎机；4.2 分光光度计或全自动直链淀粉分析仪；4.3 分析天平：感量0.0001g；4.4 水浴锅；4.5 玻璃容器：50ml具塞试管、100ml容量瓶、50ml容量瓶、10ml、5ml、2ml、1ml移液管。

MMFSCNG0181 稻米 直链淀粉 分光光度法MM_FS_CNG_0181稻米直链淀粉含量的测定1.适用范围本方法适用于稻米直链淀粉含量的测定。

4.原理概要将大米粉碎至细粉以破坏淀粉的晶形结构，使其易于完全分散及糊化，并对粉碎试样脱脂，脱脂后的试样在氢氧化钠溶液中分散，向一定量的试样分散液中加入碘试剂，在620nm处测定所形成的复合物的吸光度。

考虑到支链淀粉对试样中碘-直链淀粉复合物的影响，利用直链淀粉与支链淀粉的混合物制备校正曲线，从校正曲线上读取试样中直链淀粉含量。

3.主要试剂甲醇[85％(V/V)]、乙醇[95％(V/V)]。

氢氧化钠：1mol/L和0.09mol/L。

乙酸：1mol/L溶液。

碘试剂：称取2.000±0.005g碘化钾 ，加适量的水以形成饱和溶液，加入0.200±0.001g碘，碘溶解后将定量移至100mL容量瓶中定溶。

每天用前现配，避光保存。

马铃薯直链淀粉标准溶液(1mg/mL)：称取100±0.5mg脱脂及平衡后的直链淀粉于100mL烧杯中，加入1.0mL无水乙醇湿润样品，再加入9.0mL1mol/L氢氧化钠溶液于85℃水浴中分散10min，移入100mL容量瓶，用70mL水分数次洗涤烧杯，洗涤液一并移入容量瓶中定溶，剧烈摇匀。

1mL此标准分散液含1mg直链淀粉。

马铃薯直链淀粉标准品的制备见附录A。

支链淀粉标准溶液(1mg/mL)：称取100±0.5mg经除去蛋白质、脱脂及平衡后蜡质大米支链淀粉于100mL烧杯中，加入1.0mL无水乙醇湿润样品，再加入9.0mL 1mol/L 氢氧化钠溶液，于85℃水浴中分散，移入100mL容量瓶中，用70mL水分数次洗涤烧杯，洗涤液一并移入容量瓶中定溶，剧烈摇匀。

1mL此标准溶液含1mg支链淀粉。

蜡质大米支链淀粉标准品的制备见附录B。

4.仪器实验室用磨粉机：可将大米粉碎并通过80目筛。

筛（80目）、实验室用砻谷机、实验室用碾米机。

大米直链淀粉含量的链定2010-11-08链布2010-12-20日链施中链人民共和链生部国家链准化管理委链国会中链人民共和家链准国国GB/T15682——2008B 57492006—代替GB 5749-85大米直链淀粉含量的链定GB/T15683-20081范链本链准链定了非熟化大米直链淀粉含量的链定方法----基准方法。

本链准适用于直链淀粉含量高于5链量分的大米。

数本链准在延伸链用范链得到链后也可以用于米、玉米、小米和其他谷物的链定。

确糙2链范性引用文章下列文件中的款通链本链准的引用而成链本链准的款。

凡是注日期的引用文件条条其后所有的修改链不包括勘链的容或修链版均不适用于本链准然而鼓根据本随内励链准成链链的各方究是否可使用链些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件其最达研新版本适用于本链准。

GB/T 21305谷物及谷物制品水分的链定常链法GB/T 21305-2007 ISO 712 1998IDTISO 7301 大米链格ISO8466-1水链分析方法定链和链以及性能特征链第一部分 链性定链估估——函的链链链价数ISO15914链物链料原料链解法链淀粉含量链定3链链和定链ISO7301 中立的以及下列链链和定链使用本链准。

确与3、1直链淀粉amylose淀粉中的多聚糖成分其葡萄糖链元主要以直链链链链接的大分子。

状构3、2支链淀粉amylopectin淀粉中的多聚糖成分其葡萄糖链元主要以支链链链接的大分子。

构4原理大米粉碎至链粉以破淀粉的胚乳链使其易于完全分散及糊化链粉碎链链将坏构并脱脂脂后的链链分散在链化链溶液中向一定量的链链分散液中加入链链然后使用脱氧碘分光光度链于720nm 链链定链色链合物的吸光度。

考链到支链淀粉链链链中碘-直链淀粉链合物的影利用链链薯直链淀粉和支链淀粉响的混合链链制作校正曲链校正曲链中链出链品的直链淀粉含量。

从注 链方法链链上取于直链淀粉决-的链和力在碘720nm 链定的目的是使支链淀粉的干链作用少到最小。

大米中直链淀粉含量浅析作者：孟庆顺来源：《硅谷》2015年第02期摘要本文通过对影响大米中直链淀粉含量测定的因素分析，提出了标准方法应注意的几个技术问题。

关键词大米；直链淀粉含量；测定；国标法；简化法中图分类号：TS231 文献标识码：A 文章编号：1671-7597（2015）02-0210-01淀粉是大米中重要的化学成分，是含量最高的碳水化合物，在稻谷籽粒中的含量在70%左右，糙米中达到80%以上，而在碾白的大米中可达到90%以上。

天然淀粉都是具有结晶的颗粒形式。

稻谷中直、支链淀粉含量比例是稻谷的重要品种品质特性。

直链淀粉是淀粉中的多聚糖成分，其葡萄糖单元主要以直链关结构连接成的大分子，而支链淀粉中的葡萄糖单元主要以支链结构连接成的大分子。

直链淀粉含量是优质大米的重要的指标之一。

因而直链淀粉含量的测定就显得尤为重要。

目前测定直链淀粉含量的方法有国标法（GB/T15683-2008《大米直链淀粉含量的测定》）和简化法（NY/T55-1987（GB7648-1987）《水稻、玉米、谷子籽粒直链淀粉测定法》）（农业行业标准）两种，它们均适用于稻米直链淀粉含量的测定。

GB/T15683-2008中，将大米粉碎至细粉破坏淀粉的胚乳结构，脱脂，用氢氧化钠溶液分散试样，加入碘试剂，用分光光度计于720 nm处测量样液吸光度。

并利用标准溶液绘制标准曲线，于标准曲线上计算含量。

NY/T55-1987中，脱脂后的样品中支链淀粉与碘生成棕红色，直链淀粉与碘生成深蓝色，样液用分光光度计在620 nm读取吸光度。

并利用标准溶液绘制标准曲线，于标准曲线上计算含量。

标准样品和样品在同等条件下都要进行脱脂。

1 影响大米直链淀粉含量的主要因素分析1）主观因素即人为因素。

主要是操作不当带来的偏差，如样品不具备代表性、未按标准粉碎过筛，混样不均；分散时间不一致；显色定容、分光光度计等仪器操作不当。

2）客观因素一是大米本身的品种、等级对直链淀粉含量有直接的影响，国家标准GB1354-2009中《大米》标准中优质大米中规定直链淀粉含量：籼米和粳米为14.0%-24.0%，籼糯米和粳糯米为≤2.0，而非优质大米不检测直链淀粉含量。

不同品牌的大米中淀粉的含量测定研究广东石油化工学院化学与生命科学学院生物技术摘要淀粉跟稀硫酸在加热的条件下能够完全水解成葡萄糖、麦芽糖等还原糖。

还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸及其他产物，3，5-二硝基水杨酸则被还原成棕红色的3-氨基-5硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线。

由于淀粉完全水解成还原糖的量是成正比的，所以，也与棕红色物质的深浅成正比关系。

关键词水解还原糖吸光度1 前言最近网上有人提出疑问：“我们吃的大米淀粉含量究竟有多少？哪种大米的淀粉含量最高？”很多人都不太能准确地回答。

对于我们南方人来说，大米是我们的主要食物、能量来源，基于网上有人提出“大米淀粉含量究竟有多少”的疑问，我们决定对某超市出售的某几种大米的淀粉含量进行实验研究。

通过实验测出不同品种大米的淀粉含量，比较不同品种大米的淀粉含量的高低。

2 实验目的1、掌握测定稀酸水解淀粉的原理和方法，利用酸水解法测定淀粉的原理，测定不同品牌的大米中淀粉的含量。

3 实验原理淀粉是植物体最主要的贮藏多糖，也是人和动物的重要食物来源和发酵工业的基本原料。

主要存在于大米、种子和块茎中。

淀粉经过稀硫酸水解后生成葡萄糖、麦芽糖等小分子物质而被机体利用。

酸水解淀粉产生葡萄糖、麦芽糖等还原糖能使3，5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的的3-氨基-5-硝基水杨酸，后者在540nm处有最大吸收峰。

可用比色法进行测定。

反应中还原糖被氧化成相应的糖酸。

反应如下：淀粉的含量与产生的还原糖的量成正比。

用标准的淀粉溶液制作标准曲线，用比色法测定稀硫酸作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位质量样品在过量酸作用下完全水解生成的还原糖的量从而测定淀粉的含量。

4 实验设备80℃水浴锅高速组织捣碎机分光光度计20 mL具塞比色管×13容量瓶（100 mL×7、1000 mL×2）量筒（20 mL、50 mL）试管架移液管（2mL×6、1mL×6）电子天平胶头滴管烧杯玻璃棒5 实验材料及试剂5.1 样品来源本研究使用的样品包括5种不同品牌的大米。

大米直链淀粉与支链淀粉分离工艺研究
大米中的淀粉分为直链淀粉和支链淀粉两种，直链淀粉含有较高的透明度和黏度，可用于制作高质量的食品和工业产品；而支链淀粉含有较高的溶解性和胶凝性，适用于制作高温糊化食品和工业胶粘剂。

因此，分离直链淀粉和支链淀粉是大米淀粉加工过程中的重要环节。

目前，常用的大米淀粉分离工艺包括湿法分离法、干法分离法和酶解分离法。

湿法分离法是将大米经过蒸煮、冷却、打浆、过滤等步骤，分离出不同粒径的淀粉颗粒，再通过筛选、沉淀、纯化等步骤分离直链淀粉和支链淀粉。

干法分离法是将大米研磨成粉末后，通过粉体颗粒的大小不同和密度的差异进行分离，再通过筛选、烘干、纯化等步骤进行分离。

酶解分离法则是利用酶对淀粉进行水解，将水解出的直链淀粉与未被水解的支链淀粉分离出来。

综合比较，湿法分离法是目前应用最广泛的工艺，其分离效率高、生产能力大和分离出来的淀粉质量较高。

但该方法存在成本高、操作难度大的问题。

酶解分离法虽然能够获得高品质的直链淀粉，但其操作成本过高，未得到广泛应用。

干法分离法虽然成本较低，但由于分离效果较差，目前尚未得到广泛应用。

因此，目前大米淀粉分离工艺仍需要进一步研究，以寻求更加经济、高效的分离方法。

剖析分光光度法测定大米中直链淀粉含量尹凤芝【摘要】To crumble to dust of the rice, To smash the specimen to skim, adding NaOH solutions to the skim the sample, then add the Iodine reagents, spectrophotometry determination of the absorbance at 720 nmo Make use of amylose and amglooectin to do calibration curve, from calibration curve it can be know amylose content of the sample o%将大米粉碎后，再对粉碎试样脱脂，脱脂后的试样加入氢氧化钠溶液，然后再加入碘试剂，用分光光度法在720nto处测定吸光度。

利用马铃薯直链淀粉和支链淀粉的混合标样制作校正曲线，从校正曲线中可知样品中直链淀粉含量。

【期刊名称】《生命科学仪器》【年(卷),期】2012(010)001【总页数】4页(P10-13)【关键词】直链淀粉;支链淀粉;碘试剂;分光光度法;校正曲线【作者】尹凤芝【作者单位】农业部乳品质量监督检验测试中心哈尔滨,黑龙江哈尔滨150078【正文语种】中文【中图分类】TS212.7直链淀粉含量是评价大米品质的一个重要指标，与蒸煮品质、食味品质的好坏有着密切关系。

大米直链淀粉含量适当的口感较好。

大米直链淀粉含量还与米饭的粘性、光泽等食味鉴定值、淀粉糊化特性值关系密切.含量越高米饭越硬、口感越差。

其含量受开花后5～l0天的气温影响较大。

有研究表明，此期气温较低，成熟后籽粒直链淀粉含量较高，反之，气温较高，直链淀粉含量较低 .但不随稻谷收获后贮藏时间长短的变化而变化，也不随品种籽粒大小或粒形的变化而变化，稻谷在收获后可尽早测定.也可稍后较空闲时测定。

大米中直链淀粉和支链淀粉的检测分光光度法企业标准（拟定稿）倪天瑞2015年11月04日1.适用范围大米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定，不适用于熟制大米的检测；2.规范性引用文件NY/T 2639-2014 稻米直链淀粉的测定分光光度法GB/T 15683-2008 大米直链淀粉含量的测定3.原理大米中淀粉与碘形成显色复合物，在波长620 nm处测定显色物的吸光度值，其吸光度与直链淀粉含量成正比；大米中淀粉分为直链淀粉和支链淀粉，直链淀粉含量之外数值即为支链淀粉含量。

4.试剂使用试剂为分析纯试剂，水为三级水4.1 氢氧化钠溶液（1 mol/L）：称取4 g 氢氧化钠，溶于100 mL水中；4.2 乙酸溶液（1 mol/L）：量取5.78 mL冰乙酸，用水定容至100 mL；4.3 碘液：0.2 g碘、2 g碘化钾，用水定容至100 mL；4.4 乙醇溶液（95%）4.5 空白校正液：氢氧化钠溶液（0.09 mol/L），量取4.5 mL 1 mol/L 氢氧化钠溶液，定容至50 mL；4.6 直链淀粉标准品，购于上海将来试剂公司；4.7 支链淀粉标准品，购于上海将来试剂公司；5.仪器分光光度计分析天平，感量±0.0001 g水浴锅烧杯研钵筛子（80目）6.分析步骤6.1 样品处理：将样品混匀，称取约10 g，粉碎后，过80目筛子；6.2 前处理：准确称取样品50±0.2 mg，置于50 mL容量瓶中，加入0.5 mL 95%乙醇溶液，冲洗容器壁上的粉末，再加入4.5 mL氢氧化钠溶液，摇匀，沸水浴10 min，取出，冷却至室温，定容至50 mL。

该溶液即为待测液。

6.3 标准溶液：6.3.1 直链淀粉标准溶液（1 mg/mL）称取50±0.2 mg直链淀粉标准品，置于50 mL容量瓶中，加入0.5 mL 95%乙醇溶液，冲洗容器壁上的粉末，再加入4.5 mL氢氧化钠溶液，摇匀，沸水浴10 min，取出，冷却至室温，定容至50 mL。

支链淀粉的测定波长和吸收波长
支链淀粉的测定波长和吸收波长是化学分析中的重要概念。

支链淀粉
是一种淀粉分子中分枝部分的化合物，其结构决定了其在紫外-可见光谱仪中的吸收特性。

支链淀粉的测定波长与吸收波长与所使用的化合物有关。

通常，支链
淀粉在紫外-可见光谱仪中可以使用280-400 nm之间的波长进行测定。

但是，测定波长取决于所使用的溶液中存在的其他化合物，因此实验
中需要进行验证和校准。

例如，在食品中测定淀粉含量时，可以在480 nm附近使用可见光吸
收光度法进行测定。

在这种情况下，其他化合物对测定结果的影响相
对较小，并且可以使用标准曲线进行校准。

在使用紫外线测定淀粉含
量时，需要将其他化合物完全从样品中去除，以确保测定结果的准确性。

总之，支链淀粉的测定波长和吸收波长取决于所使用的化合物和溶液
的性质。

在进行测定前，需要对化合物和溶液进行充分的验证和校准，以确保测定结果的准确性和可靠性。

直链淀粉和支链淀粉的测定（双波长法）作者：佚名文章来源：生物化学实验技术点击数：417 更新时间：2006-5-13 11:22:32一、目的淀粉一般都是直链淀粉和支链淀粉的混合物。

直链淀粉和支链淀粉含量和比例因植物种类而不同，决定着谷物种子的出饭率和食味品质，并影响着谷物的贮藏加工。

通过本实验学习掌握双波长测定谷物中直链淀粉和支链淀粉的含量。

二、原理根据双波长比色原理，如果溶液中某溶质在两个波长下均有吸收，则两个波长的吸收差值与溶质浓度成正比。

直链淀粉与碘作用产生纯蓝色，支链淀粉与碘作用生成紫红色。

如果用两种淀粉的标准溶液分别与碘反应，然后在同一个坐标系里进行扫描（400 - 960 mm) 或做吸收曲线，可以得到图所示结果。

图作图法选择淀粉的测定波长图中 1 为直链淀粉的吸收曲线， 2 为支链淀粉的吸收曲线。

对含有直链淀粉和支链淀粉的未知样品，与碘显色后，只要在选定的波长入 1 ，λ 2 , λ 3 ，λ 4 ，处作 4 次比色，利用直链淀粉和支链淀粉标准曲线即可分别求出样品中两类淀粉的含量。

三、仪器、试剂和材料1 .仪器（1) 电子分析天平(2 ）索氏脂肪抽提器1 套（ 3 ）分光光度计1 台（ 4 ）pH 计（ 5 ）容量瓶100m1 X 2 ，50m1 X 16(6 ）吸管0.5m1 X 1, 2m1 X 1, 5m1 X 12 .试剂（1) 乙醚或石油醚（沸程30 一60 ℃）(2 ）无水乙醇（ 3 ）0.5 ml ／L KOH 溶液（ 4 ）0.1 mol ／L HCl 溶液(5) 碘试剂：称取碘化钾2.0g, 溶于少量蒸馏水，再加碘0.2g, 待溶解后用蒸馏水稀释定容至l00ml.(6) 直链淀粉标准液：称取直链淀粉纯品0.1000g, 放在100m1 容量瓶中，加入0.5mol/ L KOH 10m1, 在热水中待溶解后，取出加蒸馏水定容至100m1, 即为1mg/ml 直链淀粉标准溶液。

我国的大米，无认是在生产上还是在消费上，都是世界上第一的大国，我国有着几千年的大米历史和文化，有60%以上的人口大米为主食。

大米淀粉是由葡萄糖组成的多糖高分子化合物，其中含有以分支结构为主的支键淀粉和以线性结构为主的直链淀粉。

大量研究表明，两类淀粉的含量、分子量、空间结构及其相互关系是影响大米品质优劣的重要因素。

它直接影响着大米在蒸煮过程中水分的吸收和体积扩张，以及米饭的粘稠与松散性。

碘蓝值实验是表示淀粉结合碘能力的一个指标，碘蓝值高，说明与碘结合力强。

支链淀粉分支多，不与碘结合，碘染呈紫色，与热水作用膨胀成糊状。

直链淀粉分支少，易于碘结合成深蓝色，能溶于水而不成糊状，所以说直链淀粉含量直接影响着米饭的韧性口感。

直链淀粉含量高，米细比较细长，韧性口感较低，弹性低，产于南方的籼稻就是高直链淀粉含量的品种。

反之，直链淀粉含量低，支链淀粉含量高，煮熟后的粘性也比较高，米饭韧性口感高，弹性高，产于北方的粳稻就是低直链淀粉含量的品种，口感较好。

中国北方水稻栽培专家许哲鹤先生是这样区别普通大米与优质大米的：一是药物和污染残留，只要检测为阳性就不能确定为优质米。

二是蛋白质含量。

以7%为限，小于7%即是优质米，口味就好，并且越低越好；大于7%口味就差，越高越差。

三是直链淀粉含量，以20%为限，越小，米饭的柔韧度、弹性越好，越高则越差。

根据国内外前沿农业科学研究分析，水稻的蛋白质积累和淀粉的积累排列方式，除了人为的施肥因素外，与其灌浆期的温度有着直接关系。

在这个时期，只有满足平均气温在23至25度、昼夜温差大于10度的条件，蛋白质和直链淀粉的含量才能保证最低。

如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！。

151104大米中直链淀粉和支链淀粉的检测分光光度法大米中直链淀粉和支链淀粉的检测分光光度法企业标准（拟定稿）倪天瑞2015年11月04日1.适用范围大米中直链淀粉和支链淀粉含量的测定，不适用于熟制大米的检测；2.规范性引用文件NY/T 2639-2014 稻米直链淀粉的测定分光光度法GB/T 15683-2008 大米直链淀粉含量的测定3.原理大米中淀粉与碘形成显色复合物，在波长620 nm处测定显色物的吸光度值，其吸光度与直链淀粉含量成正比；大米中淀粉分为直链淀粉和支链淀粉，直链淀粉含量之外数值即为支链淀粉含量。

4.试剂使用试剂为分析纯试剂，水为三级水4.1 氢氧化钠溶液（1 mol/L）：称取4 g 氢氧化钠，溶于100 mL 水中；4.2 乙酸溶液（1 mol/L）：量取5.78 mL冰乙酸，用水定容至100 mL；4.3 碘液：0.2 g碘、2 g碘化钾，用水定容至100 mL；4.4 乙醇溶液（95%）4.5 空白校正液：氢氧化钠溶液（0.09 mol/L），量取4.5 mL 1 mol/L 氢氧化钠溶液，定容至50 mL；4.6 直链淀粉标准品，购于上海将来试剂公司；4.7 支链淀粉标准品，购于上海将来试剂公司；5.仪器分光光度计分析天平，感量±0.0001 g水浴锅烧杯研钵筛子（80目）6.分析步骤6.1 样品处理：将样品混匀，称取约10 g，粉碎后，过80目筛子；6.2 前处理：准确称取样品50±0.2 mg，置于50 mL容量瓶中，加入0.5 mL 95%乙醇溶液，冲洗容器壁上的粉末，再加入4.5 mL氢氧化钠溶液，摇匀，沸水浴10 min，取出，冷却至室温，定容至50 mL。

该溶液即为待测液。

6.3 标准溶液：6.3.1 直链淀粉标准溶液（1 mg/mL）称取50±0.2 mg直链淀粉标准品，置于50 mL容量瓶中，加入0.5 mL 95%乙醇溶液，冲洗容器壁上的粉末，再加入4.5 mL氢氧化钠溶液，摇匀，沸水浴10 min，取出，冷却至室温，定容至50 mL。