食品中4种黄曲霉毒素的检测方法及研究进展
近年来，随着我国经济的不断进步，科学技术水平也在不断的提高。对于多次出现的黄曲霉毒素污染事件，各国家对食品的安全问题更加重视，黄曲霉毒素成为食品安全中着重关注的对象，对进出口食品的标准也进行限量。各国对食品中黄曲霉毒素的检测方法包括常规检测和快速检测，综合比较与评价，同时也对检测方法进行进一步的深入研究。
针对食品中黄曲霉毒素的前处理
对食品中黄曲毒霉素的前处理首先要使用加压流体萃取技术，也被称为速溶剂萃取技术，是指在压强和温度相对较高的情况下，在一定时间内用少量溶剂对样品里的目标物质进行提取的技术，这一技术操作起来比较简单，溶剂的损耗比较低、提取的效率比较高，但是专业的仪器比较贵，对食品中黄曲霉素的检测还没有被使用。超临界流体的萃取技术，难度比较大、成本高回收率低、提取的纯度比较低，不适用于黄曲毒霉素提取方法。固相萃取技术主要是对样品进行分离和净化，检测的灵敏度比较高，可以分离黄曲毒霉素，操作也比较简单，用于食品中黄曲毒霉素的处理方法。免疫亲和层析技术，操作简单、净化好，但种类少，没有被使用。分子印迹技术实用性强，但成本高，在国内的实验中没有被使用。 黄曲霉毒素的常规检测方法
薄层色谱的方法。黄曲霉毒素检测技术的方法中，薄层色谱的方法是最先检测的方法之一。主要是对检测的样品进行提取，然后进行净化，最后进行富集，要在薄层版上进行分离，最后需要在紫外线的照射下进行检验识别。黄曲霉毒素在紫外线的照射下会出现紫色荧光和绿色荧光，根据显示的荧光强度进行定量。这种黄曲霉毒素的薄层色谱的检测方法是我国标准推荐的方法之一。薄层色谱法的试剂简单，成本比较低，操作起来也比较容易掌握，可以对样品中黄曲毒霉素进行分析，对于量大的样品筛查，薄层色谱法非常的适用。但是此检测方法的操作步骤比较麻烦，灵敏度的反应比较差，实验的人员要对大量的有毒试剂进行接触，因此，薄层色谱法将被逐渐停止运用。
谷物中黄曲霉毒素检测方法的研究进展
作者：韩伟，向红莉
来源：《现代食品》 2018年第21期
摘 要：谷物及其制品是人类生命活动的能量来源，谷物在湿热的环境中易感染黄曲霉毒素等真菌毒素。黄曲霉毒素毒性大，致癌，会对人体产生严重的危害，因此，对谷物中黄曲霉毒素含量的检测有重大意义。
关键词：谷物；黄曲霉毒素；检测方法；研究进展
近年来，关于人和动物遭受黄曲霉毒素毒害的研究报道越来越多，大部分报道称谷物遭受黄曲霉毒素的污染，被人与动物体食用后，会引起人体肝脏代谢紊乱；且黄曲霉毒素在生物体内极难被代谢掉。因此，谷物中黄曲霉毒素含量的检测十分重要。目前，应用于谷物中黄曲霉毒素含量检测的方法很多，随着现代科技的发展，人们开始注重方法的灵动性，开始联合化学、仪器分析法和生物鉴定法三大类主要检测方法，建立了多种方法交叉联用检测技术，本文介绍几种研究比较频繁的谷物中黄曲霉毒素含量联合检测方法。
1 HPLC- 柱后衍生法
张惠贤等[1] 提出一种新型黄曲霉毒素检测方法，该法用乙腈提取样品，采用专用固相萃取柱净化提取物，然后利用光化学增加样品荧光强度，并用HPLC检测黄曲霉毒素含量。该方法在前处理方面进行了优化，选用乙腈作为提取溶剂而不是甲醇，成功除去水溶性杂质；采用配比合理的双有机溶剂进行固相萃取，提高净化富集效果；采用合适的色谱柱，优化了分离效果；增装光衍生反应器，引入羟基，解决了黄曲霉毒素遇水荧光猝灭的问题。经改进后，该方法综合了化学分析法与仪器分析法优缺点，充分利用黄曲霉毒素的理化性质，提高了检测灵敏度，操作简便，检测结果准确度高。
王志强等[2] 也用此方法同时测定食品中几种黄曲霉毒素，不同的是柱后衍生采用的是溶液衍生，而不是光化学衍生。该法运用0.05% 碘溶液柱后衍生，检测成本相比要低得多，检测条件要求也较低，灵敏度却很高。
李珺沬等[3] 在也用该方法对粮食作物中黄曲霉毒素的含量进行了检测，而他们采用了新型吸附萃取技术，制备了石墨烯搅拌棒，并优化了相关萃取条件，之后用0.5 g·L-1 碘溶液作为柱后衍生溶液，能精准地检测出谷物样品中极痕量的黄曲霉毒素。
牛奶中黄曲霉毒素M，检测方法研究进展
作者：暂无
来源：《食品安全导刊》 2012年第3期
□ 黄良策 程建波 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/安徽农业大学
郑 楠 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
韩荣伟 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/青岛农业大学
许晓敏 甄云鹏 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/农业部奶及奶制品质量监督检验测试中心/农业部奶制品风险评估实验室
黄曲霉毒素M1（Afl a to xi n M1，A FM1）是黄曲霉毒素中一种二氢呋喃杂萘邻酮衍生物，主要是由于奶牛食用了被黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1）污染的饲料后，AFB1在奶牛体内代谢产生的羟基化代谢物，转化反应式如图1。AFM1毒性强、对人体危害大，1993年WHO将AFM1归为对人类II类致癌物，其毒性是氰化钾的10倍，砒霜的68倍，主要危害的部位在肝脏。
图1 AFB1转化成AFM1的反应式A F M1很难降解，其熔点（裂解温度）为299℃对光、热和酸都比较稳定。牛奶加工常用的三种热处理方法—巴氏杀菌法（LTLT，63℃保持30min）、高温快速巴氏杀菌（HTST，72℃保持15s）和超高温灭菌（U HT，135℃保持1～2s）均不能破坏其毒性。因此，生鲜乳中存在的AFM1会导致乳制品中也含有AFM1。许多国家、国际组织依据本国国情制定了牛奶中AFM1的限量标准，并就AFM1的检测方法开展了许多研究工作。本文对不同国家、国际组织对牛奶中AFM1限量值进行了比对分析，并重点对其检测方法进行了综述，以期对我国奶业生产者和政府监管部门起到一定借鉴作用，切实保证我国牛奶中的AFM1安全。
牛奶中AFM1的限量
AFM1限量的确定是法律法规制定和风险控制的关键内容。牛奶中AFM1限量取决于科学、社会和经济方面的诸多因素，主要包括危害分析、暴露分析结果、抽样方案和方法、分析方法、贸易协调、国内食品供应6因素。这些因素都能制约AFM1限量值的确定，其中危害分析和暴露分析是风险评估内容，是风险评估中最重要的部分；抽样方案、方法和分析方法是确定限量值的实验手段，是获得真实数据的保证；贸易协调和国内食品供应是社会经济因素。这些因素相互影响、制约，综合地决定牛奶中AFM1限量值。
◇科技论坛◇ 科技置向导 ２０１３年３６期 花生油中黄曲霉毒素检测方法及去除技术研究 秦子禾’赵芙钗 姜璐’孙宇轩’王一凡 张以航。张鹏 （１．山东省青岛第二中学 山东青岛２６６０６１； ２．青岛捷安信检验服务有限公司 山东青岛２６６０７１；３．山东省青岛实验初级中学山东青岛２６６００３） 【摘要】文中通过对提取方式和衍生化方式的比较，最终选定用免疫亲和柱净化处理提取液，柱后在线电化学衍生化来进行花生油中黄 曲霉毒素的检测。研究还发现紫外线可以分解黄曲霉毒素，且效果显著。 【关键词】黄曲霉毒素；提取；衍生；紫外线 ０．前言 黄曲霉毒素（ＡⅡａｔｏｘｉ．）主薯是由黄曲霉（Ａｄｌａｖｕｓ）和寄生曲霉（Ａ． ｐａｌ＇ａｓｉｔｉｃｕｓ）产生的具有生物活性的次生代谢产物，多见于发霉的粮食 粮制品及其他霉腐的有机物上【 。是一种有强烈生物毒性的化合物。 黄曲霉毒素的检测方法包括：薄层色谱法（ＴＬＣ）、高效液相色谱 法（ＨＰＬＣ）、微柱筛选法、酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）、多功能柱净化一柱 后衍生化一高效液相色谱法、免疫亲和柱净化一荧光光度计法、免疫亲 和柱净化一柱后衍生化一高效液相色谱法等。各种检测方法的前处理方 法不尽相同．检测方式各异，检出限等指标也有所差异【 。 本文主要是对花生油中的黄曲霉毒素的检测方法进行优化．并探 讨紫外照射对花生油中黄曲霉毒素的去除效果。 １．研究内容 １．１检测方法 综合国内外黄曲霉毒素的检测方法，改进样品的净化处理方式和 条件．优化衍生方式。找到最优条件，提出完善的花生油中黄曲霉毒素 的检测方法。 １．２黄曲霉毒素的去除 黄曲霉毒素的去除方法主要包括物理、化学和生物方法。物理方 法主要是吸附法和辐照法；化学方法主要是采用化学试剂对产品进行 反应处理：生物方法主要是采用酶解的方式进行处理目。 本实验选取用紫外线照射的方法。探究紫外线照射时间与黄曲霉 毒素的去除效果的关系 １．３实验目标 确认花生油中黄曲霉毒素的检测方法，找到紫外线照射时间与黄 曲霉毒素去除效果的关系。 ２．实验方法 ２．１ 检测方法的研究。 ２．１．１前处理方式 ｆＩ）免疫亲和柱提取。取２５ｇ花生油样品于２５０ｍＬ锥形瓶中，加 人５ｇ氯化钠和１２５ｍＬ提取液（甲醇：水＝６：４），均质２ｍｉｎ，之后用滤纸 进行过滤．取２０ｍＬ滤液加入２０ｍＬ高纯水混合均匀，用玻璃滤纸过 滤．取１０ｍＬ滤液过免疫亲和柱，之后用ｌＯｍＬ高纯水对柱子进行洗 涤．洗涤两次．之后用ＩｍＬ甲醇进行洗脱，收集洗脱液待用 。 （２）简单提取。取１２５ｇ花生油样品于５００ｍＬ锥形瓶中，加入３ｇ氯 化钠和２５０ｍＬ提取液（甲醇：水＝８：２），均质３０ｓ后加入１．５ｍＬＣａ＝ｅｚ Ｉ．继续均质ｌｍｉｎ后加入１．５ｍＬ Ｃａｒｒｅｚ ＩＩ，继续均质２ｍｉｎ，之后用滤纸 进行过滤．收集滤液待用Ｍ。 ２．１．２衍生方式。 （１）柱前衍生。取２ｍＬ收集好的样品，在６ 氮气吹干，加入２ｏｏ Ｌ 正己烷和１０ｏ“ＩＬ三氟乙酸，密闭混匀３０ｓ，之后在４Ｏ。ｃ的烘箱中衍生 １５ｍｉｎ：室温氮气吹干衍生液，用２００￣Ｌ水：乙腈＝８５：５的溶液溶解，混 匀．之后１０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｒａｉｎ．取上清液进ＨＰＬＣ进行检澳 （２）柱后在线衍生。在ＨＰＬＣ的色谱柱和检测器之间加入电化学 衍生装置Ｋｏｂｒａ Ｃｅｌ１．以溴离子为衍生化试剂，加入到流动相中 。 ２．２黄曲霉毒素的去除效果用紫外灯对含有黄曲霉毒素的花生油 样品进行照射．分别测定照射２ｈ、４ｈ和１０ｈ后的花生油样品中的黄曲 霉毒素的含量 ３．实验结果与讨论 作者简介：赵荚钗（１９８７一），女，河北石家庄人，硕士研究生。 ３．１实验方法的比较 ３．１．１前处理方式 通过两种前处理方式的回收率的比较得出，免疫亲和柱的特异性 吸附和净化方式明显优于简单的提取方式．因此．选择用免疫亲和柱 对提取液进行净化处理。 ３．１．２衍生化方式 柱前衍生化操作复杂．衍生时间较长．相比较而言。在线电化学衍 生操作简便，具有易于安装、维修、维护等优点，且衍生效果理想，因 此．该实验选择用在线电化学衍生方法进行衍生化处理。 ３．１＿３小结 根据净化处理和衍生化方式的实验结果的比较．最终选定采用免 疫亲和柱对样品的提取液进行净化处理．之后再采用在线电化学衍生 的方法进行ＨＰＬＣ检测。 ３．２黄曲霉毒素去除效果的实验结果 紫外照射后的花生油中的黄曲霉毒素的检测结果汇总．见表１ 表１紫外照射后的结果汇总 Ｔａｂｌｅ １：Ａｆｔｅｒ ＵＶ ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ。ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｍｍａｒｙ 单位：ｐｇ／ｋｇ Ｕｎｉｔ：Ｕｇ／ｋｇ 下降率 样品类型 Ｃ－２ Ｇ１ Ｂ２ Ｂ１ Ｔｏｔａｌ Ｂ１ Ｔｂｔａｌ ｓ－ｏｏ２（未照射前） ＮＤ ０．９２ ７．３５ ６１＿３３ ６９．６１ ／ ， Ｓ－００２（ 照射２ｈ） ＮＤ ＮＤ １－３Ｏ ８．７８ １Ｏ．０８ ８５．６８％ ８５．５２％ Ｓ－Ｏ０２（照射４ｈ ＮＤ ＮＤ Ｏ．５２ １．７４ ２．２６ ９７．１６％ ９６．７５％ ｓ＿０Ｏ２（照射１０ｈ） ＮＤ ＮＤ ０－２９ Ｏ．３２ Ｏ．６１ ９９．４９％ ９９．１２％ 注：ＮＤ：未检出。 由表１可以得出 随着照射时间的增加，各种类型的黄曲霉毒素 的含量都在降低，其中．Ｂ１在经过２ｈ、４ｈ和１０ｈ照射后的含量下降 ８５．６８％、・９７．１６％和９９．４９％，总量分别下降８５．５２％、９６．７５％和９９．１２％。 证明经过紫外线照射，黄曲霉毒素被分解，含量明显降低，去除黄曲霉 毒素的效果显著。 ４。总结 通过实验方法的比较．选择免疫亲和柱对提取液进行净化．在线 电化学衍生进行衍生化反应，来检测花生油样品中的黄曲霉毒素。 对紫外线照射后的花生油进行检测，发现，紫外线可以分解黄曲 霉毒素．有助于减少黄曲霉毒素的含量，且随着照射时间的增加．黄曲 霉毒素的分解率也在逐步增加，效果显著。囊 ， 【参考文献】 １ １姜宗亮等．花生中黄曲霉毒素的污染和控制．中国标准出版社．２０１２． 『２］李秀缺，张薇等．花生中黄曲霉毒素的防控及去除方法．食品工程，２０１０． 『３］中国国家标准ＧＢ／ＴＩ８９７９—２００３．食品中黄曲霉毒素的测定．免疫亲和层析净 化高效液相色谱法和荧光光度法． 『４］中国国家标准ＧＢ／Ｔ５００９．２３—２００６．食品中黄曲霉毒素Ｂ１、Ｂ２、Ｇｌ、Ｇ２的测定． ｆ５］张鹏，张艺兵等．免疫亲和柱净化、在线电化学衍生化高效液相色谱法检测花 生中的黄曲霉毒素．色谱．２０００．
