次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书
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小鼠淋巴细胞hprt基因突变检测的研究进展杨录军;曹佳【摘要】肿瘤的发生、发展与突变事件密切相关.人类在环境中接触的突变剂的检出依赖于致突变试验.以次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶 (hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase, hprt)基因为报告基因的 hprt突变试验是几个重要的致突变试验之一,其优点在于不仅能检测出突变剂的致突变能力大小,还可以对突变体进行突变谱分析,并且能为多种与 hprt基因突变相关的人类疾病提供研究资料.以小鼠啮齿动物为试验模型的淋巴细胞 hprt基因突变试验近年来得到广泛应用,本文对其研究进展作一综述.【期刊名称】《癌变·畸变·突变》【年(卷),期】2006(018)005【总页数】3页(P414-416)【关键词】hprt;突变;突变谱;淋巴细胞【作者】杨录军;曹佳【作者单位】第三军医大学军事毒理学教研室,重庆,400038;第三军医大学军事毒理学教研室,重庆,400038【正文语种】中文【中图分类】Q754次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(hypoxanthineguaninephosphoribosy1transferase,hprt)基因突变试验是几个重要的致突变试验之一。
hprt基因编码次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶,催化次黄嘌呤和鸟嘌呤与磷酸核糖焦磷酸反应,生成相应的核苷-5-单磷酸(NMP)。
这是一条生成NMP的补充途径。
如果存在6-硫代鸟嘌呤(6-TG)、6-巯基嘌呤(6-MP)、8-氮鸟嘌呤(8-AG)等碱基类似物,则以这些物质为底物可生成相应的NMP,参与DNA合成而导致细胞死亡。
如果突变剂使hprt基因失活(hprt-)将导致细胞中的HPRT酶活性大幅度下降从而使(hprt-)细胞能在一定的嘌呤类似物浓度下正常生长而这个浓度足以导致HPRT 酶水平正常的细胞(hprt+)发生死亡。
次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶
次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(简称CPGT)是一种具有多功能和功能多样性的酶。
它主要用于催化糖苷和糖苷酸在次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸结合物之间的转移,在各种生物体内具有重要的生理功能。
CPGT在水平上具有催化活性和调控活性,在垂直上具有重要的抑制作用,可抑制细胞凋亡和增殖,从而发挥作用。
而且它在细胞的糖类代谢中也起着重要作用,可以抑制细胞内糖类的合成和代谢,从而改善细胞水平的含糖量。
CPGT是细胞糖代谢的一种重要调控因子,也是调控糖类水平的关键。
它可以抑制细胞内糖类的合成和代谢,促进细胞的健康代谢,从而达到防治糖尿病的目的。
同时,CPGT在炎症反应和癌症过程中也起着重要作用。
它可以抑制炎症细胞的活动,从而抑制炎症的发展,预防病变的恶化,降低癌症的发生率。
CPGT是一种多功能多样性的酶,在糖类代谢、炎症反应和癌症过程中均发挥重要作用,是中国人民及新时代,重视生物医学领域研究的重要领域。
单克隆抗体制备过程中经过两次筛选单克隆抗体制备过程中;总共有两次筛选;第一次筛选出杂交瘤细胞;第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞;两次筛选的原理和方法是不相同的..第一次筛选的原理与方法:细胞融合后;杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键..普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤H、氨基喋呤A和胸腺嘧啶核苷酸T..其依据是细胞中的DNA合成有两条途径:一条途径是生物合成途径“D途径”;即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸;为DNA分子的合成提供原料..在此合成过程中;叶酸作为重要的辅酶参与这一过程;而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物;可以阻断DNA合成的“D途径”..另一条途径是应急途径或补救途径“S途径”;它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶HGPRT和胸腺嘧啶核苷激酶TK催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸;两种酶缺一不可..因此;在HAT培养液中;未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断;虽“S途径”正常;但因缺乏在体外培养液中增殖的能力;一般10d左右会死亡..对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言;由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型HGPRT细胞;因此自身没有“S途径”;且“D途径”又被氨基喋呤阻断;所以在HAT培养液中也不能增殖而很快死亡..惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞;既具有效应B细胞的“S途径”;又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性;因此能在HAT培养液中选择性存活下来;并不断增殖..第二次筛选的原理和方法:在实际免疫过程中;由于采用连续注射抗原的方法;且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞;因此;从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的;经HAT培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异;所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞..通常采用有限稀释克隆细胞的方法;将杂交瘤细胞多倍稀释;接种在多孔的细胞培养板上;使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞理论上30%的孔中细胞数为0时;才能保证有些孔中是单个细胞;再由这些单细胞克隆生长;最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养..因此;单克隆抗体制备过程中;两次筛选的原理和方法是不相同的..单克隆抗体制备的基本原理与过程原理:B淋巴细胞在抗原的刺激下;能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力..B细胞的这种能力和量是有限的;不可能持续分化增殖下去;因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的..将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞;再进一步克隆化;这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力;又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力;将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体..这种技术即称为单克隆抗体技术..过程:1免疫脾细胞的制备制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠..免疫的方法取决于所用抗原的性质..免疫方法同一般血清的制备;也可采用脾内直接免疫法..2骨髓瘤细胞的培养与筛选在融合前;骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选;防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活..骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养;融合前24h换液一次;使骨髓瘤细胞处于对数生长期..3细胞融合的关键:1技术上的误差常常导致融合的失败..例如;供者淋巴细胞没有查到免疫应答..这必然要失败的..2融合试验最大的失败原因是污染;融合成功的关键是提供一个干净的环境;以及适宜的无菌操作技术..4阳性克隆的筛选应尽早进行..通常在融合后10天作第一次检测;过早容易出现假阳性..检测方法应灵敏、准确、而且简便快速..具体应用的方法应根据抗原的性质;以及所需单克隆抗体的功能进行选择..常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫荧光法等..其中ELISA法最简便;RIA法最准确..阳性克隆的筛选应进行多次;均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增..5克隆化克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体..克隆化应尽早进行并反复筛选..这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的;有丢失染色体的倾向..反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株..克隆化的方法很多;而最常用的是有限稀释法..1显微操作法:在显微镜下取单细胞;然后进行单细胞培养..这种方法操作复杂;效率低;故不常用..2有限稀释法:将对数生长期的杂交瘤细胞用培养液作一定的稀释后;按每孔1个细胞接种在培养皿中;细胞增值后成为单克隆细胞系..第一次克隆化时加一定量的饲养细胞..由于第一次克隆化生长的细胞不能保证单克隆化;所以为获得稳定的单克隆细胞株需经2~3次的再克隆才成..应该注意的是;每次克隆化过程中所有有意义的细胞都应冷冻保存;以便重复检查;避免丢失有意义的细胞..3软琼脂法:将杂交瘤细胞稀释到一定密度;然后与琼脂混悬..在琼脂中的细胞不能自由移动;彼此互不相混;从而达到单细胞培养的目的..但此法不如有限稀释法好..4荧光激光细胞分类法:用抗原包被的荧光乳胶微球标记杂交瘤细胞;然后根据抗原与杂交瘤细胞结合的特异性选出细胞;并进行单细胞培养..6细胞的冻存与复苏7大规模单克隆抗体的制备选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备;因为融合细胞随培养时间延长;发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加..抗体制备有两种方法..一是增量培养法;即将杂交瘤细胞在体外培养;在培养液中分离单克隆抗体..该法需用特殊的仪器设备;一般应用无血清培养基;以利于单克隆抗体的浓缩和纯化..最普遍采用的是小鼠腹腔接种法..选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠;先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射;一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去..通常在接种一周后即有明显的腹水产生;每只小鼠可收集5~10ml的腹水;有时甚至超过40ml..该法制备的腹水抗体含量高;每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平..此外;腹水中的杂蛋白也较少;便于抗体的纯化..摘要在单克隆抗体制备中两次提到筛选问题;对于两次筛选的方法和目的始终是一些人的困惑;那么两次筛选的目的和方法到底是什么..单克隆抗体制备过程中两次提到了筛选;对于两次筛选中的目的和方法许多人也存在疑惑;那么到底是如何筛选的呢现总结如下:第一次筛选: 首先在效应B淋巴细胞和骨髓瘤细胞进行杂交时可能出现的情况应该先弄清楚;一可能的情况有:1 效应B淋巴细胞和效应B淋巴细胞的融合2 效应B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的融合即杂交瘤细胞3 骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞的融合即瘤瘤细胞4 单个骨髓瘤细胞5 单个效应B淋巴细胞二筛选的目的————获得杂交瘤细胞三筛选的方法用选择性培养基来完成;即HAT培养基..含有次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶;其中氨基喋呤可阻断DNA合成的主要途径..主要途径阻断后;依靠应急途径即在HGPRT次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶和TK胸苷激酶作用下;利用胸腺嘧啶和次黄嘌呤合成DNA;缺少其中一种;DNA 合成不能发生..用于杂交的骨髓瘤细胞系均由经有毒药物诱导而成选择产生的代谢缺陷型细胞;细胞内均无TK或HGPRT;所以单个或融合骨髓瘤细胞在HAT培养液中将死亡..B细胞虽然有HGPRT和TK;但在体外通常培养条件下;尤其是在单个细胞环境下难于长期存活和增殖传代..因此只有杂交瘤细胞才能在HAT培养液中生长繁殖..所以通过以上方法可以选择出杂交瘤细胞;但虽然都是杂交瘤细胞;但可能是同一抗原的不同抗原决定基刺激产生的..所以产生抗体是不纯的..如果不进一步提纯;这样得到的是多克隆抗体..所以就有了第二次筛选..第二次筛选:要想获得单克隆抗体;所以必须得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群; 由这样的细胞群产生的抗体才是真正意义的单克隆抗体..一筛选的目的筛选只针对某一种特定的抗原决定簇产生抗体的杂交瘤细胞;即得到由一个细胞分裂而成的一个细胞群并且能产生所需抗体二筛选的方法1、分离单个细胞置入多孔培养板的每个孔中培养2、检测每孔细胞是否产生所注射抗原的抗体即教材插图中提到的选出能产生特定抗体的细胞群所以筛选的条件是两层意思:单个细胞单孔培养保证每个孔中的细胞在产生抗体时是针对同一抗原的同一抗原决定簇产生的的;但每个孔中细胞却不一定都能产生抗体;把那些不产生抗体的细胞淘汰;对能分泌针对抗原某一决定簇抗体的阳性细胞选择下来继续克隆;从而保证大量的生产所需抗体..3、对选择下来的细胞进行克隆方法有两种:一种可以在体外培养;一种可以一直到小鼠腹腔中增殖;即可从中提取所需要的单克隆抗体..。
黄嘌呤核苷嘌呤代谢
黄嘌呤核苷是嘌呤代谢的一个中间产物。
嘌呤代谢是人体内的一种重要代谢过程,主要涉及嘌呤核苷酸的合成和分解。
嘌呤代谢首先由核糖与磷酸合成5-磷酸核糖(5-PR),然后5-PR与三磷酸腺苷作用,生成1-焦磷酸-5-磷酸核糖(PRPP)。
PRPP与谷氨酰胺作用,在磷酸核糖焦磷酸酰胺转移酶的催化下生成1-氨基-5-磷酸核糖(PRA)。
接下来,PRA在一系列酶的催化下生成次黄嘌呤核苷酸(IMP),IMP不是核酸分子的成分,但能进而生成一磷酸腺苷(AMP)和一磷酸鸟嘌苷(GMP)。
IMP分解即产生次黄嘌呤、黄嘌呤及尿酸。
嘌呤代谢的关键是合成嘌呤核苷酸的底物PRPP和(或)谷氨酰胺的增多,这些都会使嘌呤合成加速,分解产物尿酸也增多。
嘌呤代谢还有另一重要步骤,即嘌呤的回收合成途径。
核苷酸分解产生的嘌呤碱可以重新回收利用。
次黄嘌呤、鸟嘌呤和PRPP在次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的作用下,可以分别回收合成IMP、GMP,这样也可以控制尿酸的产生。
另外,海鲜和动物的肉中嘌呤含量较高,嘌呤在人体内氧化最终形成的产物是尿酸。
嘌呤核苷酸分解代谢主要在肝、小肠及肾中进行,代谢过程中有多种酶的参与。
由于酶的先天性异常,代谢可能会发生紊乱,导致尿酸的合成增加或排出减少,进而可能引起高尿酸血症。
如果不及时治疗,高尿酸血症可能会引起痛风性肾炎、尿毒症、肾结石,以及性功能减退、高血压等多种并发症。
以上信息仅供参考,如有需要,建议查阅相关论文或咨询医生。
抗体的制备与使用指南一、抗体的制备。
1. 免疫原的选择。
- 对于制备抗体,首先要确定合适的免疫原。
如果是针对蛋白质抗原,要保证其纯度尽可能高。
例如,从细胞裂解物中纯化目标蛋白,可以采用亲和层析等方法。
对于小分子半抗原(如药物分子等),通常需要将其与大分子载体蛋白(如牛血清白蛋白)偶联,以增强其免疫原性。
- 免疫原的剂量也很关键。
一般来说,初次免疫时,对于小鼠等小动物,蛋白质抗原的剂量可在10 - 100μg之间,具体剂量需要根据抗原的性质和动物的种类进行优化。
2. 动物的选择与免疫。
- 动物选择。
- 常用的动物有小鼠、大鼠、兔子等。
小鼠因为繁殖快、成本低,是实验室制备单克隆抗体时常用的动物。
兔子则常用于制备多克隆抗体,其血清中抗体产量相对较高。
- 免疫程序。
- 对于小鼠,初次免疫可采用皮下注射或腹腔注射的方式。
以皮下注射为例,可在小鼠背部多点注射免疫原。
初次免疫后,间隔2 - 4周进行加强免疫,加强免疫的剂量可以适当减少,一般为初次免疫剂量的1/2 - 1/3。
经过2 - 3次加强免疫后,可检测动物血清中的抗体效价。
3. 单克隆抗体的制备。
- 细胞融合。
- 在小鼠免疫后,取其脾脏细胞(其中含有产生抗体的B淋巴细胞),与骨髓瘤细胞(如SP2/0细胞系)在聚乙二醇(PEG)的作用下进行融合。
融合后的细胞具有两种细胞的特性,既能产生特异性抗体,又能在体外无限增殖。
- 筛选阳性克隆。
- 利用次黄嘌呤 - 鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型的骨髓瘤细胞和HAT (次黄嘌呤 - 氨基蝶呤 - 胸腺嘧啶核苷)选择培养基进行筛选。
在HAT培养基中,未融合的骨髓瘤细胞因为缺乏HGPRT酶而死亡,未融合的脾细胞在体外不能长期存活,只有融合成功的杂交瘤细胞能够生长。
然后通过ELISA等方法筛选出产生特异性抗体的阳性克隆。
- 克隆化培养。
- 对筛选出的阳性克隆进行克隆化培养,常用的方法有限稀释法和软琼脂平板法。
限稀释法是将细胞悬液进行连续稀释,使每个孔中理论上只含有一个细胞,然后培养这些细胞,形成单克隆的细胞集落,从而得到稳定分泌特异性抗体的单克隆细胞系。
怎样有效引发基因沉默?小干扰RNAs(siRNAs)可通过转染进入细胞,作用于序列特异的目标基因,引发基因表达下调或基因沉默。
X-tremeGENEsiRNA Transfection Reagent是一种优化的脂质体多组分试剂,为siRNAs的真核细胞转染提供了方便、可靠和有效的解决方案。
罗氏应用科学部推荐您使用X-tremeGENE siRNA TransfectionReagent进行基因沉默研究,以获得可靠的细胞学和功能学效应数据。
●高效引发基因沉默通过提高转染效率,高效引发基因沉默,研究相应的细胞学和功能学变化●高度灵活应用同一试剂可用于siRNA和质粒共转染的基因沉默实验●获得高附加值应用X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent始终获得稳定、有效的基因沉默siRNAs转染—基因沉默实验中的核心步骤图1:X-tremeGENE siRNA Transfection Reagent和其他转染方法(A-E)的基因沉默效率比较。
使用不同的转染方法将次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)特异结合的siRNA转染到NIH 3T3细胞。
每种转染方法均采用各自对应的说明书流程及通用实验流程分别进行两次转染实验。
转染后的基因沉默效率通过LightCycler® System 定量计算。
表型研究和基因型研究的有力结合图2:应用罗氏xCELLigence System 确定基因表达分析中的理想研究时间点。
在E-Plate 96孔板中,将Eg5 siRNA 或对照siRNA 转染到HeLa 细胞,应用xCELLigence System Real-TimeCell Analyzer 连续记录Cell Index 指数(CI),CI 值与细胞效应相关。
根据连续监测结果,在转染后27小时(图中短划线处)基因沉默的效率达到最高,收获E-Plate 96孔板中的细胞进行RNA 分析。
抑制尿酸生成的基因
抑制尿酸生成的基因有多个,其中包括:
1. XDH(鸟嘌呤核苷酸转氧酶)基因:该基因编码酶XDH,能够将鸟嘌呤核苷酸转化为尿酸。
某些变异型XDH基因可能导致其酶活性下降,从而减少尿酸生成。
2. ADC(腺苷脱氨酶)基因:该基因编码腺苷脱氨酶,能够催化腺苷转化为肌苷。
肌苷是一种天然的尿酸生成抑制剂,通过提高ADC基因表达或活性,可以减少尿酸生成。
3. SLC22A12(尿酸转运蛋白1)基因:该基因编码尿酸转运蛋白1,负责将尿酸从肾小管排泄至尿液中。
某些SCL22A12基因的变异型可能导致尿酸转运障碍,从而减少尿酸生成。
4. HGPRT(次黄嘌呤磷酸核糖转移酶)基因:该基因编码HGPRT酶,可以将次黄嘌呤转化为次黄嘌呤核苷酸。
次黄嘌呤核苷酸被认为是鸟嘌呤核苷酸的前体,通过提高HGPRT基因表达或活性,可以减少鸟嘌呤核苷酸的生成,从而抑制尿酸生成。
这些基因的变异型可能与尿酸代谢异常相关,对尿酸生成的抑制具有重要作用。
然而,尿酸生成是一个复杂的过程,除了基因的调控外,还受到环境因素和生活方式的影响。
因此,对尿酸代谢异常的研究需要综合考虑多种因素。
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本:体液次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书试验原理:BFGF试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知BFGF浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将BFGF和生物素标记的抗体同时温育。
人碱性成纤维细胞生长因子ELISA 检测试剂盒洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中BFGF的浓度呈比例关系。
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书自备材料1.蒸馏水。
2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
3.振荡器及磁力搅拌器等。
安全性1.避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书操作注意事项1.试剂应按标签储存,使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3.不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
4.使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6.洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7.底物A应挥发,避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
避免用手接触,有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
8.加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9.按照中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书样品收集、处理及保存方法1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。
1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、保存------如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。
尽可能的不要使用溶血或高血脂血。
如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。
不要在37℃或更高的温度加热解冻。
应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备标准品:标准品的系列稀释应在实验时准备,不能储存。
稀释前将标准品振荡混匀。
2.洗涤缓冲液(50×)的稀释:蒸馏水50倍稀释。
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书操作步骤1.使用前,将所有试剂充分混匀。
不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。
每个标准品和空白孔建议做复孔。
每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。
立即加入50ul的生物素标记的抗体。
盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。
重复此操作3次。
如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。
重复此操作3次。
如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。
避免光照。
8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9.在450nm波长处测定各孔的OD值。
局限6号标准品以上的结果为非线性的,根据此标准曲线无法得到精确的结果。
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书性能1. 灵敏度:最小的检测浓度小于1号标准品。
稀释度的线性。
样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0.990。
2. 特异性:不与其它细胞因子反应。
3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。
次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶1ELISA试剂盒说明书结果判断与分析1、仪器值:于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的BFGF标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的BFGF含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围:0-800pg/ml4、敏感度: 1.0 pg/mlST1 人基质裂解素规格:48T/96TMAT 人基质裂解蛋白规格:48T/96TTIMP-1 人基质金属蛋白酶组织抑制因子1 规格:48T/96TTIMP-4 人基质金属蛋白酶抑制因子4 规格:48T/96TTIMP-3 人基质金属蛋白酶抑制因子3 规格:48T/96TTIMP-2 人基质金属蛋白酶抑制因子2 规格:48T/96T TIMP-1 人基质金属蛋白酶抑制因子1 规格:48T/96T MMP-9/Gelatinase B 人基质金属蛋白酶9/明胶酶B 规格:48T/96T MMP-8 人基质金属蛋白酶8/中性粒细胞胶原酶规格:48T/96T MMP-7 人基质金属蛋白酶7 规格:48T/96TMMP-5 人基质金属蛋白酶5 规格:48T/96TMMP-4 人基质金属蛋白酶4 规格:48T/96TMMP-3 人基质金属蛋白酶3 规格:48T/96TMMP-2 人基质金属蛋白酶2/明胶酶A 规格:48T/96T MMP-13 人基质金属蛋白酶13 规格:48T/96TMMP11 人基质金属蛋白酶11 规格:48T/96TMMP-10 人基质金属蛋白酶10 规格:48T/96TMMP-1 人基质金属蛋白酶1 规格:48T/96TMGP 人基质γ羧基谷氨酸蛋白规格:48T/96Tlumican 人基膜聚糖规格:48T/96TMSTN 人肌抑素规格:48T/96Tdystrophin 人肌养蛋白规格:48T/96TMYOG 人肌细胞生成素规格:48T/96TCK-MB 人肌酸激酶同工酶MB 规格:48T/96TCK-MB 人肌酸激酶同工酶MB 规格:48T/96TCK 人肌酸激酶规格:48T/96TMHC 人肌球蛋白重链规格:48T/96TMLCK 人肌球蛋白轻链激酶规格:48T/96TMLC 人肌球蛋白轻链规格:48T/96TMyosin 人肌球蛋白规格:48T/96TTN-R 人肌腱蛋白R 规格:48T/96TTN-R 人肌腱蛋白R 规格:48T/96TMYO/MB 人肌红蛋白规格:48T/96TMYO/MB 人肌红蛋白规格:48T/96TTn-Ⅰ人肌钙蛋白Ⅰ规格:48T/96TFⅫa 人活化凝血因子Ⅻ规格:48T/96TAPCR 人活化蛋白C抵抗素规格:48T/96TAPC 人活化蛋白C 规格:48T/96TLHRH 人黄体生成素释放激素规格:48T/96T cAMP 人环磷酸腺苷规格:48T/96TcGMP 人环磷酸鸟苷规格:48T/96TCOX-2 人环加氧酶2 规格:48T/96TCsA 人环孢素A 规格:48T/96Ttalin 人踝蛋白规格:48T/96TALOX-5 人花生四烯酸5脂加氧酶规格:48T/96T AA 人花生四烯酸规格:48T/96TEPOR 人红细胞生成素受体规格:48T/96TEPO 人红细胞生成素规格:48T/96TEMP 人红细胞膜蛋白规格:48T/96TESF 人红细胞刺激因子规格:48T/96Tsm Actinin-α人横纹肌辅肌动蛋白α规格:48T/96T MLZE 人黑素瘤衍生亮氨酸拉链额外核因子规格:48T/96T MC Ab 人黑色素细胞抗体规格:48T/96TMSH 人黑色素细胞刺激素规格:48T/96TMMSAM 人黑色素瘤转移表面黏附分子规格:48T/96T MAGE 人黑色素瘤相关抗原规格:48T/96TMAGE 人黑色素瘤相关抗原规格:48T/96TMART/Melan-A 人黑色素瘤标记物规格:48T/96TNF-κB p65 人核因子-κB亚基p65亲和肽规格:48T/96T RANKL 人核因子κB受体活化因子配基规格:48T/96T RNASE 人核糖核酸酶规格:48T/96TAg-NORs 人核仁形成区嗜银蛋白规格:48T/96TNMP-22 人核基质蛋白22 规格:48T/96TLPO 人过氧化脂质/乳过氧化物酶规格:48T/96TPPAR-γ人过氧化物酶体增殖因子活化受体γ规格:48T/96T PPARs 人过氧化物酶体增殖因子活化受体规格:48T/96T PPAR-α人过氧化物酶体增殖物激活受体α规格:48T/96T C4a 人过敏毒素/补体片断4 规格:48T/96TFDA 人果糖1,6二磷酸醛缩酶规格:48T/96TP-CK 人广谱细胞角蛋白规格:48T/96TCasp-9 人胱天蛋白酶9 规格:48T/96TCasp-3 人胱天蛋白酶3 规格:48T/96T Casp-12 人胱天蛋白酶12 规格:48T/96T oligomeric 人寡聚蛋白规格:48T/96TON 人骨粘连蛋白规格:48T/96TBMP-6 人骨形成蛋白6 规格:48T/96T BMPs 人骨形成蛋白规格:48T/96TBSP 人骨涎蛋白规格:48T/96TCTX-2 人骨退化特异标志物规格:48T/96T ALP-B 人骨特异性碱性磷酸酶B 规格:48T/96T MPIF-1/CCL23 人骨髓抑制因子1 规格:48T/96T OPN 人骨桥素规格:48T/96TCr 人骨胶原交联规格:48T/96T BALP 人骨碱性磷酸酶规格:48T/96TOT/BGP 人骨钙素/骨谷氨酸蛋白规格:48T/96T BMPR-Ⅱ人骨成型蛋白受体Ⅱ规格:48T/96T BMPR-1A 人骨成型蛋白受体1A 规格:48T/96T BMP-7 人骨成型蛋白7 规格:48T/96TBMP-4 人骨成型蛋白4 规格:48T/96TBMP-2 人骨成型蛋白2 规格:48T/96T OPGL 人骨保护素配体规格:48T/96TOPG 人骨保护素规格:48T/96TGSTpi 人谷胱甘肽硫转移酶pi基因规格:48T/96TGSH-Px 人谷胱甘肽过氧化酶规格:48T/96T GSH 人谷胱甘肽规格:48T/96TGAD-Ab 人谷氨酸脱羧酶自身抗体规格:48T/96T GAD 人谷氨酸脱羧酶规格:48T/96TGDH 人谷氨酸脱氢酶规格:48T/96TOFQ/N 人孤腓肽规格:48T/96T Lebtospira 人钩端螺旋体IgM 规格:48T/96T Lebtospira 人钩端螺旋体IgG 规格:48T/96THGV-IgM 人庚型肝炎病毒IgM 规格:48T/96T HGV-IgG 人庚型肝炎病毒IgG 规格:48T/96TT 人睾酮规格:48T/96THVA 人高香草酸规格:48T/96TMHB 人高铁血红蛋白规格:48T/96Tu-T4 人高敏甲状腺素规格:48T/96THDL-C 人高密度脂蛋白胆固醇规格:48T/96THDL 人高密度脂蛋白规格:48T/96TGP-73 人高尔基蛋白73 规格:48T/96THGF 人肝细胞生长因子规格:48T/96THB-EGF 人肝素结合性表皮生长因子规格:48T/96T HCⅡ人肝素辅因子Ⅱ规格:48T/96TMR 人甘露糖受体规格:48T/96TMBLR 人甘露糖凝集素受体规格:48T/96TMBP/MBL 人甘露糖结合蛋白/甘露糖结合凝集素规格:48T/96T Mannose 人甘露糖规格:48T/96TCG 人甘胆酸规格:48T/96TSCFR 人干细胞因子受体规格:48T/96TSCF/MGF 人干细胞因子/肥大细胞生长因子规格:48T/96TIP-10/CXCL10 人干扰素诱导蛋白10 规格:48T/96TIRF 人干扰素调节因子规格:48T/96TCNR-1 人钙粘蛋白相关的神经受体1 规格:48T/96TCRT 人钙网蛋白规格:48T/96Tcalnexin 人钙联蛋白规格:48T/96TVGCC 人钙离子通道抗体规格:48T/96TCR 人钙结合蛋白规格:48T/96TCAM 人钙调素规格:48T/96TCaN 人钙调磷酸酶规格:48T/96TCaN 人钙调磷酸酶规格:48T/96TCALD 人钙调结合蛋白规格:48T/96TCALD 人钙调结合蛋白规格:48T/96Thistatin 5 人富组蛋白规格:48T/96TPNP 人副肿瘤性天疱疮抗体规格:48T/96TRPA-70 人复制蛋白A 规格:48T/96TCPSA 人复合前列腺特异性抗原规格:48T/96TBA 人封闭抗体规格:48T/96TSLPI 人分泌性白细胞蛋白酶抑制因子规格:48T/96TSIgA 人分泌型免疫球蛋白A 规格:48T/96TMP-Ab 人肺炎支原体抗体规格:48T/96TCpn-Ab 人肺炎衣原体抗体规格:48T/96TPARC/CCL18 人肺部活化调节趋化因子规格:48T/96TSP-D 人肺表面活性物质相关蛋白D 规格:48T/96TSP-C 人肺表面活性物质相关蛋白C 规格:48T/96TSP-B 人肺表面活性物质相关蛋白B 规格:48T/96TSP-A 人肺表面活性物质相关蛋白A 规格:48T/96T人肺癌标志物ELISA Kit,48T/96T 人肺癌标志物ELISA Kit,48T/96T 规格:48T/96TDR-70TM 人肺癌标志物DR-70 规格:48T/96TLTA 人非小细胞肺癌抗原规格:48T/96TNNE 人非神经元性烯醇化酶规格:48T/96TNON 人非甲基化寡核苷酸规格:48T/96TAhR 人芳香烃受体规格:48T/96TE1/UBAE 人泛素激活酶规格:48T/96TUb 人泛素蛋白规格:48T/96TrT3 人反三碘甲状腺原氨酸规格:48T/96TDNM2 人发动蛋白规格:48T/96TDPPⅣ人二肽基肽酶Ⅳ规格:48T/96T人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基转移酶2家族肽B4 人二磷酸尿核苷葡糖醛酸基转移酶2家族肽B4 规格:48T/96TSLC/CCL21 人二级淋巴组织趋化因子规格:48T/96TDAO 人二胺氧化酶规格:48T/96TCA 人儿茶酚胺规格:48T/96TPMN Elastase 人多形核白细胞弹性蛋白酶规格:48T/96TPMN Elastase 人多形核白细胞弹性蛋白酶规格:48T/96TPTN 人多效生长因子规格:48T/96TPTN 人多效生长因子规格:48T/96Tpoly-IgR 人多免疫球蛋白受体规格:48T/96TPHSA 人多聚血清蛋白规格:48T/96TPARP 人多聚ADP核糖聚合酶规格:48T/96TDDC 人多巴胺脱羧酶规格:48T/96TDBH 人多巴胺-β羟化酶规格:48T/96TD2R 人多巴胺D2受体规格:48T/96TD1R 人多巴胺D1受体规格:48T/96TD1R 人多巴胺D1受体规格:48T/96TDA 人多巴胺规格:48T/96TPON 人对氧磷酶规格:48T/96TPABA 人对氨基苯甲酸规格:48T/96TTE 人端粒酶规格:48T/96TTSST-1 人毒性休克综合征毒素1 规格:48T/96THDV IgM 人丁型肝炎IgM 规格:48T/96THDV IgG 人丁型肝炎IgG 规格:48T/96TAZT 人叠氮胸苷规格:48T/96TASK-1 人凋亡信号调节激酶I 规格:48T/96TFASL 人凋亡相关因子配体规格:48T/96TFAS/CD95 人凋亡相关因子规格:48T/96TβAPP 人淀粉样前体蛋白规格:48T/96TAmylase 人淀粉酶规格:48T/96TETFB 人电子转移黄素蛋白β肽规格:48T/96TFⅧAg 人第八因子相关抗原规格:48T/96TResistin 人抵抗素规格:48T/96THIF-1α人低氧诱导因子1α规格:48T/96TLRP-6 人低密度脂蛋白受体相关蛋白6 规格:48T/96TLDLR 人低密度脂蛋白受体规格:48T/96TLDL-IC 人低密度脂蛋白免疫复合物规格:48T/96TLDL 人低密度脂蛋白规格:48T/96TLMP7/PSMB9 人低分子质量蛋白7 规格:48T/96TLMWH 人低分子肝素规格:48T/96TNGF 人的神经生长因子规格:48T/96T人的牛血清白蛋白残留检测ELISA Kit,48T/96T 人的牛血清白蛋白残留检测ELISA Kit,48T/96T 规格:48T/96TConA 人刀豆素A 规格:48T/96TPLP 人蛋白脂质蛋白抗体规格:48T/96TPR3-ANCA 人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体规格:48T/96T PPP1R1A 人蛋白磷酸酶1调控/抑制因子亚基1A 规格:48T/96T PP 人蛋白磷酸酶规格:48T/96TPTP/PTPase/CD148 人蛋白酪氨酸磷酸酶规格:48T/96TPTP/PTPase/CD148 人蛋白酪氨酸磷酸酶规格:48T/96TPTK/CD115 人蛋白酪氨酸激酶规格:48T/96TPTK/CD115 人蛋白酪氨酸激酶规格:48T/96TPKC 人蛋白激酶C 规格:48T/96TPKB 人蛋白激酶B 规格:48T/96TPKA 人蛋白激酶A 规格:48T/96TPDI 人蛋白二硫化物异构酶前体规格:48T/96TPDIA3 人蛋白二硫化物异构酶A3 规格:48T/96TProtein Z 人蛋白Z 规格:48T/96TProtein S 人蛋白S 规格:48T/96TProtein C 人蛋白C 规格:48T/96T肽酰脯氨酰顺/反异构酶人蛋白规格:48T/96TElastase 人弹性蛋白酶规格:48T/96TElastin 人弹性蛋白规格:48T/96TCholic acid 人胆酸规格:48T/96TCCK-8 人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽规格:48T/96TCCK 人胆囊收缩素/肠促胰酶肽规格:48T/96TCHAc 人胆碱乙酰化酶规格:48T/96TCETP 人胆固醇酯转移蛋白规格:48T/96T listeriolysin 人单核细胞增多性李斯特菌素规格:48T/96T MCP-4/CCL13 人单核细胞趋化蛋白4 规格:48T/96T MCP-3/CCL7 人单核细胞趋化蛋白3 规格:48T/96T MCP-2/CCL8 人单核细胞趋化蛋白2 规格:48T/96T HSV-Ag2 人单纯疱疹病毒抗原2 规格:48T/96THSV-Ag1 人单纯疱疹病毒抗原-1 规格:48T/96THSV-Ag1 人单纯疱疹病毒抗原-1 规格:48T/96THSVⅡ-Ab 人单纯疱疹病毒Ⅱ型抗体规格:48T/96T MAO 人单胺氧化酶规格:48T/96TBig ET 人大内皮素规格:48T/96TBig ET 人大内皮素规格:48T/96Tcolicin 人大肠菌素规格:48T/96TCCSA-4 人大肠癌专一抗原4 规格:48T/96T CCSA-3 人大肠癌专一抗原3 规格:48T/96T CCSA-2 人大肠癌专一抗原2 规格:48T/96TPRL 人催乳素规格:48T/96TMF/MPF 人促有丝分裂因子规格:48T/96TGnRH 人促性腺激素释放激素规格:48T/96TDSIP 人促睡眠肽规格:48T/96TGHRH 人促生长激素释放激素规格:48T/96TACTH 人促肾上腺皮质激素规格:48T/96TCRH 人促肾上皮质激素释放激素规格:48T/96TFSH 人促卵泡素规格:48T/96TTRH 人促甲状腺素释放激素规格:48T/96TTSH 人促甲状腺素规格:48T/96TTSHR 人促甲状腺激素受体抗体规格:48T/96TLH 人促黄体激素规格:48T/96T人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 人促分裂素原活化蛋白激酶激活的蛋白激酶3 规格:48T/96TE3 人雌三醇规格:48T/96TE 人雌激素规格:48T/96TER 人雌二醇受体规格:48T/96TE2 人雌二醇规格:48T/96TPACAP 人垂体腺苷酸环化酶激活肽规格:48T/96TVMA 人垂草扁桃酸规格:48T/96TPF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白规格:48T/96TPF/PFP 人穿孔素/成孔蛋白规格:48T/96TVLA 人迟现抗原规格:48T/96TVLA 人迟现抗原规格:48T/96TMPF 人成熟促进因子规格:48T/96TOGP 人成骨生长肽规格:48T/96TSOD 人超氧化物歧化酶规格:48T/96Ths-CRP 人超敏C反应蛋白规格:48T/96T Sag 人超抗原规格:48T/96TiFABP 人肠脂肪酸结合蛋白规格:48T/96T Enterovirus 人肠病毒规格:48T/96T LATS 人长效甲状腺刺激素规格:48T/96T OPAs 人不透光相关蛋白规格:48T/96TLTB 人不耐热肠毒素B亚单位规格:48T/96T LTB 人不耐热肠毒素B亚单位规格:48T/96T ADMA 人不对称二甲基精氨酸规格:48T/96T ADMA 人不对称二甲基精氨酸规格:48T/96T CFH 人补体因子H 规格:48T/96TC5b 人补体片断5b 规格:48T/96TC5b 人补体片断5b 规格:48T/96TC5a 人补体片断5a 规格:48T/96TC4b 人补体片断4b 规格:48T/96TC4b 人补体片断4b 规格:48T/96TC3b 人补体片断3b 规格:48T/96TC3b 人补体片断3b 规格:48T/96TC3a 人补体片断3a 规格:48T/96TC3bR 人补体片段3b受体规格:48T/96T CCP 人补体调节蛋白规格:48T/96TC4 人补体蛋白4 规格:48T/96TC3 人补体蛋白3 规格:48T/96T。