紫外可见分光光度计的原理与使用方法

752紫外可见分光光度计一、仪器的工作原理分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下，产生了对光的吸收效应，物质对光的吸收是具有选择性的。

各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，也即符合于比色原理—一比耳定律。

τ=I/Iolog I/Io=KCLA= KCL从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液的光径长度不变时．透过的光是根据溶液的浓度而变化的，752紫外可见分光光度计的基本原理是根据上述物理光学现象而设计的。

二、仪器的安装、使用、安装1 仪器在安装使用前应对仪器的安全性进行检查，电源电压是否正常，接地线是否牢固可靠，在得到确认后方和接通电源使用。

2 仪器经过运输和搬运等原因，会影响波长准确度，应进行仪器调校后使用。

使用：仪器使用前需开机预热30min。

本仪器键盘共有4个键，分别为； 1 A /τ/C/F1SD2 ▽／0％3?／100％4 A /τ/C/F键：每按此键来切换A、τ　、C、F之间的值。

A——吸光度（Absorbance）T——透射比（Trans）C——浓度（conc）F——斜率（Factor）(2)F值通过按键输入（后面介绍如何设置）5SD键：该键具有2个功能a)用于RS232串行口和计算机传输数据（单向传输数据，仪器发向计算机）。

b)当处于F状态时，具有确认的功能，即确认当前的F值，并自动转到C，计算当前的C 值（C=F*A）。

6 ▽／0％键：该键具有2个功能a）调零；只有在τ状态时有效，打开样品室盖，按键后应显示0.000。

b）下降键：只有在F状态时有效，按本键F值会自动减1，如果按住本键不放，目动减1会加快速度；如果F值为0后，再按键它会自动变为1999。

而按键开始自动减1。

7 ?／100％键；该键具有2个功能a）只有在A、τ状态时有效，关闭样品室盖，按键后应显示0.000、100.0。

紫外可见分光光度计的原理是怎样的？
紫外可见分光光度计具有灵敏度高、准确度高、选择性好、适用浓度范围广等优点，广泛地应用于化工、冶金、地质、医学、食品、制药等部门及环境监测系统。

紫外可见分光光度计的原理：
物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。

由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同；
因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。

紫外可见分光光度计的使用方法：
（1）接好线路后，先检查各开关是否在“关”处，光路闸门放在黑点处，再将电源插头插入220V交流电源上，打开电源开关和光源开关，将光路闸门放在红点处。

（2）取出比色皿，将其中一只装空白溶液，其余三只装待测溶液，放在定位盒内，盖上暗箱盖，装溶液前比色皿用蒸馏水洗净；
并用溶液荡洗数次后，再盛至体积，池外应赶紧，若有水滴，应用镜头纸吸干，取用时用手捏住比色皿的毛玻璃面。

（3）用波长调节器调到所需的波长，将空白溶液正对光路，调光量调节器，使检
流计上光点准线对准透光率为100的位置；
拉动拉杆，使待测溶液进入光路，读取微电计标尺上的透光率，测定完毕，及时关闭光路闸门，检查电计的零点位置，保护硒光电池。

（4）紫外可见分光光度计应安放在清洁、干燥、无腐蚀气体和较暗的室内；
仪器使用完毕后应擦拭干净，各开关关闭，紫外可见分光光度计连续使用时间不应超过4h。

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紫外可见分光光度计。

紫外可见分光光度计的工作原理与应用光度计工作原理产品原理分子的紫外可见吸取光谱是由于分子中的某些基团吸取了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸取光谱。

由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸取光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸取光谱曲线，可依据吸取光谱上的某些特征波优点的吸光度的高处与低处判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。

分光光度分析就是依据物质的吸取光谱讨论物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。

它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息。

可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。

依据Lambert—Beer定律说明光的吸取与吸取层厚度成正比，比耳定律说明光的吸取与溶液浓度成正比；假相像时考虑吸取层厚度和溶液浓度对光吸取率的影响，即得朗伯—比耳定律。

即A=bc，（A为吸光度，为摩尔吸光系数，b为液池厚度，c为溶液浓度）就可以对溶液进行定量分析。

将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸取光谱。

若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。

假如没有标样，也可以和现成的标准谱图对比进行比较。

这种方法要求仪器精准，精密度高，且测定条件要相同。

试验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判定化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。

产品应用在水和废水监测中的应用，对于一个水系的监测分析和综合评价，一般包括水相（溶液本身）、固相（悬浮物、底质）、生物相（水生生物）。

在水质的常规监测中，紫外可见分光光度法占有较大的比重。

由于水和废水的成分多而杂多变，待测物的浓度和干扰物的浓度差别很大，在实在分析时必需选择好分析方法。

在农产品和食品分析中可用于检测的组分或成分有蛋白质、赖氨酸、葡萄糖、维生素C、硝酸盐、亚硝酸盐、砷、汞等；在植物生化分析中可用于检测叶绿素、全氮和酶的活力等；在饲料分析中可用于检测烟酸、棉酚、磷化氢和甲酯等。

可见分光光度计原理、工作环境及使用方法一、可见分光光度计工作原理可见分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。

常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。

基本原理：分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。

它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。

朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即A=kcl式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。

c为吸光物质浓度，l 为透光液层厚度。

二、可见分光光度计正常工作的环境要求1、避开高温高湿环境。

请不要将仪器安装在高温高湿的环境下。

仪器必须在5℃~35℃度温度、≤85%的湿度条件下安装使用。

2、避免仪器受外界磁场干扰。

请尽量远离发出磁场、电场、高频波的电器装置。

3、远离腐蚀气体。

请不要将仪器安装在空气中氯气、盐酸气体、硫化氢气体、亚硫酸气体等腐蚀性气体超标场所。

4、仪器应放置在稳定的工作台上。

放置仪器的工作台应水平、稳定、不能有振动；仪器的风扇附近应留有足够的空间，使其排风顺畅。

5、不要与其他用电设备共用电源插座。

请为仪器单独设计一个电源插座，不要与其它用电设备共用，电源应具备保护地线。

6、不要将仪器放置在阳光直接照射的地方。

7、避免灰尘多环境。

三、可见分光光度计的使用方法1、在接通电源之前，电表的指针必须位于“0”刻线上，否则应旋动电表上的校正螺丝调节到位。

2、打开比色皿室的箱盖和电源开关，使光电管在无光照射的情况下预热15分钟以上。

3、旋转波长调节器，选择测定所需的单色光波长。

选择适当的灵敏度，一般先将灵敏度旋钮至中间位置，用零点调节器调节电表指针至T值为0%处。

若不能调到，应适当增加灵敏度。

4、放入空白溶液和待测溶液，使空白溶液置于光路中，盖上比色皿室箱盖，使光电管受光，调节光量调节旋钮使电表指针在T值为100%处。

应用分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。

常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。

我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。

基本原理分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。

它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。

朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即A= kcl式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。

c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。

组成各种型号的紫外－可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。

1.光源在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。

热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。

2．单色器单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。

单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。

色散元件常用棱镜和光栅。

3.吸收池吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。

吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。

4、检测器检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。

现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。

5、信号显示系统常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。

操作步骤操作之前1.1开启电源进行初始化开启主机电源，分光光度计将按屏幕所显示的项目进行自检和初始化，如下图所示。

所有项目检测完毕，初始化结束，整个过程大约需要4min（若使用多池检测需5min）。

每个项目进行初始化操作时将被加亮显示，当初始化完成后，该项右边的星标也将加亮显示。

紫外可见分光光度计普析紫外可见分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域的研究和实验中。

本文将从紫外可见分光光度计的原理、应用以及操作步骤等方面进行介绍。

一、紫外可见分光光度计的原理紫外可见分光光度计是利用物质对紫外可见光的吸收特性进行定量分析的仪器。

根据光的波长范围，可分为紫外光区和可见光区两部分。

紫外光区的波长范围为200-400 nm，可见光区的波长范围为400-800 nm。

紫外可见分光光度计的工作原理是通过光源产生的光经过样品后，被光电二极管或光电倍增管接收，形成光谱图，再通过计算机进行数据处理和分析。

在分析过程中，样品溶液的吸收特性会使光强发生变化，根据吸光度与物质浓度之间的线性关系，可以通过测量吸光度来确定物质的浓度。

二、紫外可见分光光度计的应用紫外可见分光光度计在科研和实验中有着广泛的应用。

以下是其中几个常见的应用领域：1. 生物化学分析：紫外可见分光光度计可用于蛋白质、核酸、酶等生物大分子的浓度测定和纯度分析，如蛋白质含量的测定、核酸的纯度检测等。

2. 药物分析：紫外可见分光光度计可用于药物的含量测定、质量控制和稳定性研究，如药物溶液的吸光度测定、药物的光解动力学研究等。

3. 环境监测：紫外可见分光光度计可用于水质、大气和土壤等环境样品的污染物分析和监测，如水中重金属离子的测定、大气中挥发性有机物的测定等。

4. 食品安全检测：紫外可见分光光度计可用于食品中添加剂、农药残留、重金属等有害物质的检测，如食品中硝酸盐含量的测定、食品中防腐剂的测定等。

三、紫外可见分光光度计的操作步骤使用紫外可见分光光度计进行实验时，需要按照以下步骤进行操作：1. 打开仪器电源，并预热一段时间，使光源和光电二极管稳定工作。

2. 根据实验需要选择合适的光源和检测器，设置光的波长范围。

3. 取一定量的样品溶液，注入样品池中，并调节样品池的位置，使光线通过样品溶液。