大肠杆菌菌落总数检测步骤

菌落总数检测的基本过程
嘿，朋友们！今天咱来唠唠菌落总数检测的那些事儿。

你说这菌落总数检测啊，就好比是一场寻找小细菌的大冒险！咱得先准备好各种家伙什儿，就像战士上战场得拿好自己的武器一样。

什么培养皿啦、培养基啦，都得整得妥妥当当的。

然后呢，咱就得去采集样品啦！这就像是去寻宝，得找对地方，可不能瞎糊弄。

比如说食品啊，那可得在合适的部位取，不然咋能检测准确呢？
采完样，接下来就是关键步骤啦！把样品小心地放到培养基里，就像是给小细菌们安个家。

然后把它们放到合适的温度下，让这些小家伙们能舒舒服服地生长。

这过程就好像是在孵小鸡，得耐心等待。

过了一段时间，哇塞，你就会看到培养基上出现了各种各样的小点点，或者是一片片的东西。

这可就是小细菌们的“殖民地”啦！就像我们盖房子会形成一个个小区一样。

这时候可别高兴得太早，还得仔细数数呢！看看有多少个“殖民地”，这可关系到检测结果的准确性呢。

要是数错了，那可就闹笑话啦，就好比你数错了自己有多少颗糖果一样。

数完了，就能知道这个样品里的菌落总数啦！这就像是知道了一场比赛的最终比分。

如果菌落总数太多，那可就得小心啦，说明可能不太干净哦。

你想想看，如果我们吃的东西里有太多的小细菌，那不得闹肚子呀！所以这菌落总数检测多重要啊，就像是我们身体的小卫士，时刻保护着我们的健康呢。

检测的过程虽然不复杂，但是每一步都得认真对待，不能马虎。

就跟我们做事一样，得仔仔细细的，不然出了差错可不好收拾。

总之呢，菌落总数检测可是个很有意思的事儿，虽然有时候会有点麻烦，但为了我们能吃得放心、用得安心，这点麻烦算啥呀！大家说是吧！。

菌落总数和大肠菌群测定（固体样品）药品：1、平板计数琼脂2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）4、氯化钠设备材料：烧杯、三角瓶、广口瓶、培养皿、刻度吸管、倒气管、玻璃棒、试管、硅胶塞、洗耳球、棉花、布或报纸等。

一、准备工作（指导书是按一个样品所需物品准备的，实验室可按样品量增加）1、平板计数琼脂培养基准备----用于菌落总数测定将三角瓶放在电子称上，去皮，按平板计数琼脂使用说明称量，加200ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸加热煮沸，充分溶解，盖上硅胶塞，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧。

2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤----用于大肠菌群测定（a）将烧杯放在电子称上，去皮，按使用说明称量，加100ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸，充分溶解。

（b）用10ml（毫升）的吸管分装到9支（18*180规格）试管中，每支试管加10ml的月桂基溶液LST （合计90毫升）。

（c）9支试管分别放入倒气管（开口向下），排气，盖上硅胶塞。

3、0.85%的生理盐水----用于样品稀释将广口瓶去皮，称取氯化钠1.91g加225ml蒸馏水，摇匀，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧；同样配制第二瓶。

4、准备2个空试管，盖上硅胶塞----用于样品稀释。

5、准备8个培养皿，用布包扎好。

6、准备至少3支5ml和1支10ml带有刻度的吸管，用布包扎好（顶部可用棉球塞住，防止吸液时，液体不慎吸入洗耳球）。

7、准备操作的工具：剪刀1把、镊子1个、勺子等打开产品包装所需工具，用布包扎好。

二、使用灭菌锅灭菌1、检查灭菌锅底部加热管水位是否正常，水位要高过加热丝。

2、将上面准备好的7步骤物品逐一放入锅内，注意：滴定管吸口向下，有棉球的向上。

3、盖上火菌锅盖子时，将排气管插到排气口内，注意从对角线开始拧紧螺丝，将排气阀打开（安全阀始终关闭），通电后，待排气阀放气3分钟后（锅内冷空气已经排完），关闭排气阀。

4、查看灭菌锅的压力表，当温度升到121°，压力升到0.1MP（兆帕）时，灭菌维持15分钟后（温度和压力不能过高或者过低），断电自然冷却到接近“ 0”度后，慢慢打开排气阀，再对角拧开灭菌锅。

菌落总数检测程序是一项常见的微生物检测方法，其目的是确定样品中存在的微生物数量，以评估食品、饮料、制药和环境等领域的卫生状况。

本文将介绍菌落总数检测程序的步骤、工具和注意事项。

1. 样品采集首先需要从待测样品中采集适量的样品，并保证样品的代表性和均匀性。

在采样过程中需要使用无菌器具，并避免手部接触样品，以避免污染。

2. 样品预处理为了减少菌落总数检测时的误差，需要对样品进行预处理。

不同样品的预处理方式不同，但通常包括以下步骤：（1）对固体样品进行破碎和混合，确保样品的均匀性；（2）对液态样品进行搅拌或振荡，使样品中的微生物均匀分布；（3）对含有大量背景杂质的样品，如土壤和食品等，需要进行稀释处理，以便于后续操作。

3. 制备培养基制备培养基是菌落总数检测中至关重要的一步。

各种微生物需要不同的培养基进行培养，但是通常使用通用培养基，如营养琼脂培养基、普通琼脂培养基等。

在制备培养基时需要注意以下几点：（1）使用高质量的培养基原料和纯水；（2）遵循制备指南，按照正确的比例和顺序添加各种原料；（3）将培养基加热至沸腾，以杀死其中的细菌和孢子。

4. 分装和接种将经过预处理的样品分装到无菌平板上，并将平板放置在无菌工作台上。

然后使用无菌技术将培养基倒在平板上，并将培养基均匀涂抹。

最后使用无菌的匙子或移液器接种样品，或者将样品滴入培养基中，并确保接种均匀。

5. 培养和计数将接种好的平板在恒温培养箱中培养，通常是在30-37℃下进行。

培养时间因不同的微生物而异，但通常是24-72小时。

在培养过程中需要注意以下几点：（1）确保培养箱内的温度和湿度稳定；（2）避免平板受到震动或移动；（3）遵守无菌技术，以避免污染。

在培养结束后，使用计数器对菌落进行计数。

菌落是指可见的单个微生物群体，通常呈圆形或不规则形状，并具有明显的色彩和质地。

每个菌落代表一个微生物单元，因此可以根据菌落数量来评估样品中的微生物总数。

6. 结果分析根据菌落总数检测结果，可以评估样品的微生物质量。

大肠杆菌菌落总数检测步骤大肠杆菌是一种常见的肠道细菌，在环境卫生、食品安全等领域中具有重要意义。

因此，对大肠杆菌和细菌总数的检测非常重要，以下是大肠杆菌和菌落总数检测的详细步骤：1.试样采集：首先，需要进行试样采集。

根据实际需要，可以使用不同的方法采集试样，如直接采集水样、食品样品或其他样品，或者通过培养基进行采样。

试样采集应注意保持无菌环境，并避免样品污染。

2.试样预处理：试样采集后，需要进行预处理。

根据试样的不同特点，可以选择不同的预处理方法。

例如，对于食品样品，可以使用加热、超声波或化学处理等方法，以杀灭或抑制其他细菌的生长，保留大肠杆菌。

3.分离培养：预处理后的试样需要进行分离培养。

将试样分离到含有LB（Luria-Bertani）培养基或EC（Escherichia coli）培养基等富含葡萄糖和其他营养物质的培养基中。

将培养基倒入含有试样的培养皿中，并进行搅拌均匀。

然后，将培养皿盖好，使用适当的培养条件，如37℃温度和24小时培养时间，培养大肠杆菌。

4.鉴定大肠杆菌：在培养后，可以使用不同的方法鉴定大肠杆菌。

例如，可以通过形态学特征，如菌落形状、大小、颜色等，进行初步的鉴定。

然后，可以进一步进行生理和生化试验。

比如，可以使用氧化酚红在培养基中进行试验，观察菌落颜色变化，进行鉴定。

此外，还可以使用PCR方法进行分子鉴定，通过特定的引物和扩增反应，鉴定大肠杆菌的DNA序列。

5.菌落总数检测：除了检测大肠杆菌，还需要检测样品中的菌落总数。

菌落总数是指一定体积的试样中所有菌落的数量。

菌落总数可以用于评估样品的卫生状况和细菌污染程度。

检测菌落总数的方法包括传统的平板计数法和现代的膜过滤法。

6.平板计数法：平板计数法是最常用的菌落总数检测方法之一、方法是将试样平均分布在含有琼脂的培养皿中，然后在恰当的条件下培养细菌。

培养后，可以使用计数板或显微镜对菌落进行计数。

最后，根据计数结果和稀释倍数，计算出菌落总数。

菌落总数检验操作规程一、实验室准备工作1.准备培养基：根据实验需求选择适当的培养基，如营养琼脂培养基、大肠埃希氏菌选择性培养基等。

注意培养基的成分和质量。

2.准备培养基平板：测量合适的培养基量并加入培养皿中，使用无菌技术将培养基均匀倒入培养皿，标明编号和日期。

二、样品处理1.准备样品：如食品样品，需要将样品称重并加入适当的生理盐水中，用搅拌器或均质仪进行均匀悬浮。

2.稀释样品：根据实验需要，对样品进行系列稀释。

取适量的悬浮样品，依次加入尺量瓶中的生理盐水，振摇均匀。

三、接种培养1.无菌操作：在无菌工作台内进行操作，穿戴好无菌手套，将培养皿放入工作台上，注意防止污染。

2.接种样品：使用无菌移液器，取适量的稀释样品均匀滴入培养皿上。

3.均匀涂布：使用无菌匀涂棒，将样品在培养皿上均匀涂抹，注意避免混入外来微生物。

四、培养条件1.始菌箱：将接种后的培养皿置于始菌箱中，设定适当的温度和湿度（如37℃，24小时）。

2.孵化箱：将始菌箱中的培养皿转移到恒温培养箱中适当孵育时间，保持适宜温度及湿度。

五、菌落计数1.观察菌落：取出培养好的菌落总数平板，放在均匀光源下观察菌落的形态、颜色、大小等特征，标记异常菌落。

2.计数菌落：使用计数器或显微镜对菌落进行计数，记录结果，并用公式计算菌落总数。

每个菌落总数平板至少计数两遍，计算平均值。

六、数据分析与结果判定1.数据分析：对不同样品的检测结果进行归类整理，统计菌落总数的分布情况。

2.结果判定：根据相应的标准或规定，比较样品的检测结果与标准要求，判定样品是否合格。

七、清洗和消毒1.清洗：将培养皿彻底清洗干净，清除残留的培养基和菌落。

2.消毒：将使用过的器材进行高温高压消毒或化学消毒，确保无菌环境。

以上就是菌落总数检验操作规程的简要示例，实验过程中需严格遵守无菌操作规范，并根据具体实验要求进行相应的调整。

在实验过程中，及时记录实验数据，注意安全操作。

实验完成后，对结果进行统计分析和归档保存。

简要概括菌落总数检验过程
菌落总数检验过程主要包括以下步骤：
采样与稀释：首先进行采样，然后对样品进行十倍梯度稀释，得到系列浓度梯度的待检液。

接种：取适宜浓度的待检液1ml，注入培养皿后再倾注降温的卵磷脂-吐温80营养琼脂，同时做空白对照，然后转动培养皿使其混匀。

培养：待培养基冷却后，将平板倒置，置于36°±1°C培养箱内培养48h±2h。

注意不同产品可能需要不同的培养时间和温度。

计数与报告：培养完成后，选择平均菌落数在30~300之间的平皿进行计数。

报告单位为CFU/g或CFU/mL。

如果菌落数不在这个范围内，需要进行适当的稀释或浓缩后再进行计数。

请注意，整个过程需要在无菌环境下进行，并且从采样到倾注最后一个平皿所用的时间不宜超过20min，以防止细菌繁殖影响结果。

同时，为了确保结果的准确性，建议进行多次重复实验。

大肠杆菌群检测方法：用平板涂布法将样品稀释后（每个水样做3个浓度）涂布到伊红美蓝培养基后，待长出菌落，观察符合特征的群落，计算菌落数目，从而求出总数目。

{培养基及试剂配制}------伊红美蓝培养基1. 成分：蛋白胨 10g乳糖 10g磷酸氢二钾 2g琼脂 20~30g蒸馏水 1000ml2%伊红水溶液 20ml0.5 %美蓝水溶液 13ml2. 配制方法：先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.2~7.4。

趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min，冷却备用。

临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。

1．称量按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。

蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。

另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。

2．溶化在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。

待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。

如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。

最后补足所失的水分。

3．调pH在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH 值，直至pH达7.6。

反之，则用1mol/L HCl进行调节。

注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。

对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。

4．分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。

大肠杆菌及菌落总数检测方法为了对鸡精产品的微生物指标进行有效的控制，对微生物的检测就显的十分重要。

下面是鸡精产品的大肠杆菌及菌落总数实验检测方法。

一、大肠杆菌：1）培养基准备（以3.5g乳糖胆盐发酵琼脂为例）双料试管配制A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。

B、用0.1g称量天平秤取7g乳糖。

C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入三根装有小导管的试管中（此三根为双料试管，即双倍原料）。

单料试管配制A、用量杯量取加热的100ML蒸馏水（实验前需对蒸馏水进行高压灭菌处理，处理方法详见注一）。

B、用0.1g称量天平秤取3.5g乳糖。

C、将A、B混合均匀，并用10ml吸管各取10ml混合液分别注入六根装有小导管的试管中（此六根为单料试管，即单倍原料）。

2）将配制好的试管放入灭菌锅进行115℃进行灭菌10min。

3）将灭菌过后的试管放置在无菌室，常温保存一周。

4）若要对生产的样品检测其大肠杆菌，其步骤如下：A、量取灭菌后的蒸馏水225ml加温后与25g样品混合均匀。

（样品需要在无菌室中，有封盖的塑料杯中进行混合）B、取三个玻璃培养皿，分别标上-1、-2、-3标记。

C、取两根新试管取9ml蒸馏水分别标为a、b。

D、用吸管吸取1ml样品液体，注入-1培养皿中，并盖上盖子。

E、用吸管吸取1ml样品液体，注入a试管中，记为-2培养基液。

F、用吸管吸取1ml a试管中的液体，注入到b试管中，记为-3培养基液。

G、用1ml吸管取样品液体分别注入3根单料试管中，用10ml 吸管取样品液体分别注入双料试管中H、用1ml吸管取-2培养试管液体，分别注入到单料试管中。

I、装好液体的试管，用试管塞封好，放到36℃±1℃的恒温培养箱中24小时培养。

J、24小时培养后，取出并用肉眼观察试管的颜色及冒气泡情况，若有其中的任意状况，说明有大肠杆菌，需要通过美兰做进一步的检测。

菌落总数检验流程一、准备工作。

咱们要开始做菌落总数检验呀，得先把要用的东西都准备好。

这就像做饭得先把食材和厨具找齐一样。

像培养基就得提前准备好，营养琼脂培养基就很常用呢。

这就好比是细菌生长的小乐园，给细菌提供营养，让它们能快快长大。

还有平皿，要干净又卫生的，这是细菌未来的小房子。

再就是各种小工具啦，像接种环、酒精灯之类的。

接种环就像一个小小的魔法棒，用来把细菌接到培养基上。

酒精灯嘛，就像是个小卫士，给操作环境消消毒，保证只有咱们想检验的细菌在这儿生长。

二、样品采集。

采集样品也是个技术活呢。

如果是食品的话，得按照规定的方法去取。

比如说从大包装里取一小部分，而且要取有代表性的地方。

可不能随便挖一勺就了事呀，那就像抽奖只抽一个角儿，不准的。

要是从环境中采集呢，像采集空气里的细菌样本，就需要用专门的采样器，这就像是捕捉细菌的小网子，把空气中的细菌都抓到我们的小瓶子里。

采集的过程就像是一场小小的探险，要小心翼翼的，保证采集到的样品能真实反映出我们想要检测的情况。

三、样品处理。

采到样品之后呢，就得处理啦。

如果是固体的样品，可能需要把它捣碎或者溶解。

这就好比把一块大石头敲碎成小石子，让细菌能均匀地分布在里面。

要是液体样品相对就简单一点，但也得进行适当的稀释。

为啥要稀释呢？就像人太多住不下一个小房子一样，细菌太多了在培养基上也会长得密密麻麻，咱们就数不清啦。

稀释到合适的倍数，这样每个平皿里的细菌数量就比较好数了。

四、接种培养。

处理好样品之后，就到了接种这一步啦。

用接种环蘸取稀释好的样品，轻轻地在培养基上划几道，就像在画布上画画一样。

不过这个画画可是有规矩的，要保证细菌能均匀地分布在培养基上。

然后把平皿放到培养箱里，培养箱就像是细菌的小温室，温度、湿度都刚刚好。

一般来说，37摄氏度是比较常见的培养温度，就像给细菌创造了一个最舒服的小窝，让它们快快繁殖。

五、菌落计数。

等培养的时间到了，就可以把平皿拿出来数菌落啦。

这时候就像是在数小星星一样，不过要特别仔细哦。

菌落总数测定操作流程一、准备工作。

咱得先把要用的东西都找齐喽。

啥东西呢？像培养皿得有吧，这就像是小房子，是给那些菌落住的。

还有移液管，这就像个小吸管，能准确地把液体吸出来。

培养基也不能少，这可是菌落生长的“食物”呢。

另外，像天平、三角瓶这些东西也都得准备好。

在开始之前呢，可一定要把手洗得干干净净的，最好再消个毒，可别把咱手上的细菌也带进去捣乱了呀。

二、样品处理。

如果是固体样品，那可得费点事儿。

咱得把它弄成小块小块的，然后放到有生理盐水或者磷酸盐缓冲液的三角瓶里。

这就像是给它洗个澡，把它表面的那些杂七杂八的东西都洗干净。

如果是液体样品呢，就简单一些啦，不过也得按照一定的比例稀释一下，就像把一杯浓果汁兑点水变得淡一点一样。

为啥要稀释呢？因为如果菌落太多，都挤在一起，咱可就数不清了。

三、接种。

现在就到了把处理好的样品接种到培养皿里的时候啦。

用移液管小心地吸取一定量的样品溶液，轻轻地滴到培养皿里。

这时候动作可得轻点儿，就像照顾小婴儿一样，别把它们给弄洒了或者溅出来。

然后呢，再把已经融化并且冷却到合适温度的培养基倒进去，把培养皿轻轻地晃一晃，让样品和培养基充分混合。

这就像是给菌落铺好了床，让它们能舒舒服服地在里面生长。

四、培养。

把接种好的培养皿放到培养箱里去。

这培养箱的温度和时间可都是有讲究的呢。

一般来说，是36℃左右，培养个48小时左右。

在这个过程中，那些小小的菌落就在培养皿里悄悄地生长起来啦。

就像小种子在合适的环境里慢慢发芽一样，可神奇了。

五、计数。

培养时间到了之后，就可以把培养皿拿出来计数啦。

这时候你就会看到培养皿里有好多小点点，那些就是菌落啦。

数菌落的时候可得仔细点儿，可别多数了或者少数了。

有时候菌落会长得密密麻麻的，这时候就更考验咱的耐心了。

可以用个小记号笔，数一个就画个小圈，这样就不容易数乱了。

如果有的菌落长得特别大，或者是看起来有点奇怪，也得算进去哦，毕竟它们都是从样品里长出来的嘛。

六、结果报告。