SOP-P-IF-002-03 菌种岗位标准操作规程

文件制修订记录1、主题内容本标准规定了本公司原生粉灭菌操作的方法和要求。

2、适用范围本标准适用于本公司原生粉灭菌岗位的操作。

3、责任者操作人员、班组长：负责按规程执行和实施。

工艺管理员、现场监控员：负责本规程的过程指导、监控和检查。

现场监控办主任、车间主任：负责本规程的监督执行。

4、内容4.1开工准各4.1.1操作人员按要求进入操作间。

4.1.2生产前检查及准备工作按相关文件执行。

4.1.3按要求更换相应状态标示。

4.2装盘4.2.1将灭菌盘叠放在物料架或垫板上并铺好垫布。

4.2.2用不锈钢撮箕将需灭菌的物料转移到灭菌盘内铺展均匀，平均厚度不超过lcm。

4.2.3将装好物料的盘从上到下放到车架上。

待车架装满盘将车架推入灭菌烘箱。

4.2.4本批物料全部装完推入灭菌烘箱后，并将灭菌烘箱门关好准备灭菌。

4.3灭菌4.31按照设各操作规程的要求进行操作。

4.3.2灭菌工艺参数：灭菌温度***℃，臭氧浓度，灭菌时间。

4.3.3检查灭菌烘箱控制面板各功能按钮及参数，确保各参数设置与工艺要求一致。

4.3.4灭菌操作期间操作人员要不停的观察各数据的变化情况，保证压力表的示数在工艺要求的范围内。

4.4收料4.4.1按照设备操作规程，将灭菌后的物料按从下至上的顺序从车架上取出灭菌盘，将物料通过收集在洁净容器中，备用。

4.4.2生产过程中要严格按生产流程时准确填写批生产记录及相关记录。

4.5清场4.5.1按规程对操作间、工器具、容器等进行清场。

4.5.2按设各清洁操作规程对设备进行清洁。

4.5.3清场完毕填写清场记录，由复核人检查合格后，通知QA检查，QA确认合格后，发放“清场合格证”。

微生物可根据其自身或其所产生的毒素的危害程度分为四个不同的生物安全等级。

对健康成年人（动物）已知无致病作用的微生物的生物安全级别为一级；对人（动物）或环境具有中等潜在危害的微生物的生物安全级别为二级；主要通过呼吸途径使人（动物）传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物（通常已有预防传染的疫苗）的生物安全级别为三级；对人体（动物）具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物的生物安全级别为四级。

不同生物安全级别微生物菌种的操作，如分离、培养、鉴定和保藏，应在相应生物安全防护的条件下进行。

本规范根据当前国家自然科技资源平台建设的总体要求，结合微生物菌种资源的特点制定，便于在微生物菌种资源的收集、保存、鉴定、评价、研究和利用过程中，尽量避免环境和人员受到微生物本身及其代谢产物的危害，实现菌种资源的高效共享和可持续利用。

1范围本规程规定了微生物生物安全分类标准，以及不同生物安全级别防护级别进行微生物的操作规程。

本规程适用于各菌种保藏单位所保藏的菌种资源的操作，如分离、培养、鉴定和保藏。

2规范性引用文件下列文件中的条款通过本规范的引用而成为本规范的条款。

凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改（不包括勘误内容）或修订版均不适用于本规范，然而，鼓励根据本规范达成的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规范。

《病原微生物实验室生物安全管理条例》（国务院第424条令）《兽医实验室生物安全管理规范》（2003年农业部302号公告）WS233-2002微生物和生物医学实验室生物安全通用准则OIE2003国际动物卫生法典WHO《实验室生物安全手册》第二版GB19489-2004《实验室生物安全通用要求》3术语、定义、符号、缩写语3.1一类微生物对个体和群体危害程度高，通常引起人和/或动物严重疫病且暂无有效的预防和治疗措施的致病微生物。

微生物实验室SOP文件一、引言微生物实验室标准操作规程（SOP）文件旨在确保微生物实验室的操作符合标准化要求，保障实验室内的实验安全和数据的准确性。

本文档将详细介绍微生物实验室的SOP文件内容和要求。

二、SOP文件的编写和管理1. SOP文件的编写a. 每个实验室的SOP文件应根据具体实验室的实际情况进行编写。

b. 编写SOP文件时，应明确实验室的操作流程、安全措施、实验方法、设备操作等内容。

c. SOP文件应包含标题、引言、目的、范围、定义、缩写词、材料和设备、操作步骤、安全注意事项、结果记录、附录等部分。

2. SOP文件的管理a. 实验室负责人应负责SOP文件的编写、审查和更新。

b. 每个SOP文件应有唯一的标识符，以便于管理和查找。

c. 所有实验室成员应熟悉并遵守SOP文件中的操作规程。

三、微生物实验室SOP文件的内容要求1. 标题a. SOP文件的标题应简明扼要地描述实验室操作的内容。

b. 标题应具备唯一性，以便于识别和管理。

2. 引言a. 引言部分应介绍实验室的背景和目的，明确SOP文件的编写目的。

b. 引言部分还应包括实验室的基本信息，如实验室名称、地址、联系方式等。

3. 目的a. 目的部分应明确该SOP文件的目的和作用，以及所要达到的效果。

4. 范围a. 范围部分应明确该SOP文件适用的实验室操作范围和限制。

5. 定义a. 定义部分应对SOP文件中使用的专业术语和缩写进行解释和定义，以便于读者理解。

6. 缩写词a. 缩写词部分应列出SOP文件中使用的缩写词及其解释。

7. 材料和设备a. 材料和设备部分应列出实验所需的材料和设备清单，并对其进行详细描述。

8. 操作步骤a. 操作步骤部分应按照实验的顺序，详细描述每个操作步骤。

b. 操作步骤应包括操作前的准备工作、实验操作流程、操作注意事项等内容。

9. 安全注意事项a. 安全注意事项部分应列出实验中需要特别注意的安全事项和操作规范。

b. 包括但不限于个人防护措施、实验室安全操作、废弃物处理等内容。

标准菌种管理程序1.目的为对微生物实验需要的标准菌株进行有效控制和规范管理，防止污染、变异、丢失或损坏，以保证溯源性和稳定性，制定本程序。

2.适用范围适用于微生物实验中标准菌种（原始标准菌种、标准储备菌株和工作菌株）的申购、验收、保管、领用、使用、传代及存储等方面。

3.职责3.1采购部负责依据采购申请规定的名称、规格、数量执行原始标准菌种申购工作；3.2微生物检测人员负责菌种的验收、菌种的领用、、及传代与保存。

3.3生物安全责任人负责批准菌种的双人双锁保管管理\领用、使用及销毁，原始标准菌种的接收工作，标准菌种采用双人双锁保管管理。

3.4生物安全责任人负责组织定期的生物安全检查活动。

4.工作程序4.1标准菌种申购本公司购买的原始标准菌种来源于美国典型菌种保藏中心（ATCC），英国典型菌种保藏中心（NCTC），中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC），中国医学微生物菌种保藏管理中心（CMCC），中国食品发酵工业研究所（IFFI）。

综合部依据《外部服务和供应品采购程序》实施采购工作。

菌种来源机构详见附件一：微生物菌种保藏机构名称和缩写。

4.2菌种分类4.2.1本公司保存的菌种仅包括部分致病性细菌，不包括病毒、螺旋体、衣原体、立克次氏体等菌种。

本公司的标准菌株除了实验所用之外，还应包括应用于培养基（试剂）验收/质量控制、方法确认/证实、阳性对照、阴性对照、人员培训考核和结果质量的保证等所需的菌株。

4.2.2菌种的分类根据其危险性决定（包括实验室感染的可能性，感染后发病的可能性，症状轻重及愈后情况，有无致命危险及有效的防止实验室感染方法，用一般的微生物操作方法能否防止实验室感染、我国有否此种菌种及曾否引起流行、人群免疫力等情况）。

依其危险程度的大小，我国的菌种分为四类。

第一类：实验室感染的机会多，感染后发病的可能性大，症状重并能危及生命，缺乏有效的预防方法，以及传染性强，对人群危害性大的烈性传染病，包括国内未发现或虽已发现，但无有效防治方法的烈性传染病菌种。

标准菌种管理规程目的：规药品微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。

职责：QC主管负责菌种的申购、接受、保存、分发，微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。

围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。

容：1 术语标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。

传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。

工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。

菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。

2.标准：2.1检定菌的申购QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）药检所购买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。

2.2检定菌的接收菌种到达实验室后，由QC主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌接收记录》（附表1）上，容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，贴好标签并储存于2-8˚C直到需要使用时。

储存期最长不超过5年。

2.3 检定菌的保存2.3.1 工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。

将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱中保存。

此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。

保存时间根据菌种种类而不同，细菌：1个月；酵母菌：2个月；霉菌及芽胞：3个月。

2.3.2传代用菌种的保存采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡保存法。

黑龙江正康生物技术股份有限公司GMP管理文件一、目的：为了规范细菌菌种生产岗操作，特制定细菌疫苗菌种生产岗标准操作规程。

二、适用范围：适用于细菌疫苗菌种生产岗。

三、责任者：分发部门负责人，质量监督员，工艺员，操作人员。

四、正文：1准备工作：1.1生产操作人员根据生产指令在按《生产用菌（毒）种管理制度》领取生产用基础种子。

1.2 操作人员按《十万级洁净区出入标准操作规程》洗手、更衣进入十万级洁净区。

1.3 生产操作人员根据生产指令准备物品及培养基、灭菌等。

灭菌后物品放在洁净物品暂存间；生产操作人员生产前将以上物品送入万级洁净区缓冲间后，传入细菌疫苗原液生产线。

1.4 操作人员按《万级洁净区出入标准操作规程》洗手、更衣进入细菌疫苗菌种生产线。

1.5 进入生产人畜共患传染病抗原生产线时必须穿戴个体防护用品（防护帽、护目镜、口罩、工作服、手套等）。

1.6 生产操作前操作人员必须检查确认生产现场的温湿度及压差在规定范围内，温度控制在18-26℃，相对湿度30-65%，压差符合规定；1.7 生产操作前操作人员必须检查确认设备有“已清洁”状态标志；产操作前操作人员必须检查确认生产现场无前批生产的产品或物料，生产现场的工艺卫生符合《洁净区工艺卫生管理规程》的检查标准，应有厂房“已清洁”状态标识，并在有效期内；应有上一批次产品“清场合格证”（副本），确认后方可进行生产；1.8 生产操作前操作人员必须检查确认批生产记录及相应的配套记录已准备齐全；1.9 认真核对菌种、培养基的品名、代次、批号、有效期等信息，确认无误后方可进行操作。

2生产操作：2.1一级种子繁殖冻干菌种开封后，加适量的胰蛋白䏡培养基、普通肉汤或马丁氏肉汤溶解，用接种环沾取菌种液，划线接种于适宜平板，平板倒扣，36～37℃培养24～72小时，显微镜下观察菌落形态。

选取典型菌落5～10个，混合接种斜面小管若干只，36～37℃培养24～72小时，经纯粹检验合格，作为一级种子。

车间种子制备操作规程1 目的建立车间种子制备操作规程，规范其操作。

2 范围适用于车间种子岗位操作人员。

3 责任车间组织制定，QA监督实施。

4 生产过程4.1 种子制备4.1.1 一般流程出发菌种→斜面→单孢子悬浮液→稀释涂双碟→单菌落接斜面F1(第一代)→斜面F2(第二代)→摇瓶筛选→保存4.1.2 自然分离用具准备空白双碟20个、1ml吸管40支、10ml吸管5支、玻璃接种环5支、无菌蒸馏水1瓶（装60ml蒸馏水）、带漏斗三角瓶（250ml）1个（内装15～20个玻璃珠）大试管10支（内装9ml蒸馏水）、121℃、30分钟消毒备用,器具用纱布包住，内装水的试管和瓶子用无菌袋或是密闭包装包住注意无菌保护。

4.1.3 操作过程4.1.3.1 在无菌双碟中分别加入无菌的琼脂培养基15～20ml冷却凝固后恒温培养两天，检查无菌后方可使用4.1.3.2 用10ml吸管吸取20ml无菌蒸馏水，接入茄形瓶斜面菌种内，用接种环针把菌苔洗下，制成菌悬液，倒入带有漏斗的三角瓶内，轻轻振摇数下，利用玻璃珠把菌体打散。

4.1.3.3 用递次稀释法将菌悬液制成不同浓度的菌液，吸1ml菌悬液，加入盛有9ml无菌水的试管内，充分混合后，此菌悬液为10-1，再吸1ml接入第二支管中，依次类推，至10-9浓度。

4.1.3.4 取合适浓度的菌液，10-7，10-8,10-9，各吸取1ml,接入已准备好的双碟培养基中，用玻璃刮棒涂匀，以求长成分散的单菌落，便于挑选。

4.1.3.5 将双碟放入30℃±1℃，相对湿度40％～50％恒温室反面培养，培养周期为48h～72h，每天及时记录培养温度和湿度。

4.1.3.6 挑选单菌落时，要根据其菌落所在区域，菌落生长饱满程度以及色素沉着情况进行挑选，镜检结果，要求菌落粗壮，整齐。

4.1.3.7 自然选育注意事项：出发菌种应选择在生产实践过程中生产能力高，具有良好性能的菌株作为亲本。

出发菌株要求新鲜，菌体处于对数生长期，粗壮整齐。

文件制修订记录1.目的规范本中心标准菌种和野生菌种的管理。

2.范围本规程适用于标准菌种和实验过程中分离纯化的野生菌种的管理。

3.职责3.1菌种管理员：负责菌种的申购、接收、保存、分发。

3.2微生物检验员：负责菌种的确认、传代、使用及销毁。

3.3科室负责人：负责指导、监督检验员和管理员对菌种的管理。

4.术语4.1标准菌种(冻干菌种)：由国内或国际菌种保藏机构保藏的，遗传学特性得到确认和保证并可追溯的菌种。

4.2标准储备菌种：又称传代用菌种，由标准菌种经一次传代得到的培养物，是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作菌种。

4.3工作菌种：工作菌种是指用标准菌种或标准储备菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。

4.4代：菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从）。

菌种保藏中心获得的冷冻菌种为第0代（G5.程序5.1菌种的申购菌种管理员每年根据菌种的使用情况（包括临时检验需要）提出购买计划，经批准后，向菌种保藏中心购买标准菌种（冻干菌种），采购执行《服务和供应品的采购程序》。

5.2菌种的接收菌种到达实验室后，由菌种管理员接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写《标准菌种接收记录表》，贴好标签并按照该菌适宜储存条件进行储存（储存期及储存条件见菌种说明书）。

5.3菌种的编号5.3.1标准/标准储备菌种采用字母加数字表示：英文缩写字母-来源编号-代次-传代日期-顺序号。

菌种的英文缩写字母：大肠埃希菌（E.c）、金黄色葡萄球菌（S.a）、枯草芽孢杆菌（B.s）、黑曲霉菌（A.n）、白假丝酵母（C.a）等，来源以购进方编号为准；代数用一位带有下标数字的字母表示；标准/标准储备菌种用G表示；工作菌种用W表示；如G3表示标准菌种第3代；W3表示工作用菌种第3代。

传代日期用6位数字表示：年份取最后两位数，月、日分别用两位数。

标准菌株的管理与使用操作规程一、目的规范用于微生物实验质量控制和操作评估的标准菌株管理与使用程序，尽量减少交叉污染确保实验结果可靠与实验室安全。

二、范围本工作指引适用于微生物实验室所有标准菌株的管理与使用。

三、内容3.1 程序1.标准菌株的复壮a.将复壮所用的0.5-1ml液体培养基（如TS或BPW）置于室温；b.将标准菌株从冰箱取出置于室温；c.无菌操作去除菌株的包装物；d.无菌操作敬液体培养基导入菌株容器；或者无菌操作剪开菌株包装物，将菌株倒入液体培养基；e.将试管在37℃下放置一段时间后，使菌种完全溶解到培养基中；f.轻轻摇动试管形成悬浮液；g. 从菌种悬浮液中接种几环到培养基平板（如营养琼脂）划线培养；h. 将接种过的平板置于合适的温度和条件下培养复壮。

2. 从培养过的平板或斜面上挑取几个菌落，按照相应的LI接种到选择性培养基上。

3. 将挑选出的菌落按照相应的LI进行菌种确认。

进行革兰氏染色或者镜检，并纯化后按照相应的LI进行生化试验确认。

记录下所有的现象。

4. 在每年复壮或者买入是都要进行菌种确认实验。

5. 菌种确认达到要求后，使用Microbank Frozen Beads标准储备菌株。

a.取一定量的标准菌株培养物（18-24h），无菌操作接种到装有小珠的小瓶内并加入肉汤（BPW）。

关紧小瓶并颠倒4-5次乳化培养物。

不要剧烈摇晃，避免液体洒出；b.将多余的液体吸出。

关紧小瓶；c.在小瓶上贴上标签，标明菌种名称和准备日期；d.小瓶在冷冻条件下（大约-20℃）可储存一年；e.从Microbank中准备工作菌株：从小瓶中无菌操作取出一个小珠，接种到非选择性培养基平板或斜面，或者放入液体培养基中。

小珠从小瓶中取出后决不可以再放回。

立即将小瓶放回冷冻；f. 接种过的平板、斜面或者肉汤放在37℃培养24-48h。

一旦发现平板、斜面或者肉汤有微生物生长后立即从培养箱取出；g.在平板、斜面或者肉汤上粘贴标签，注明菌种名称、准备日期和有效期。

菌种进出洁净区操作规程菌种进出洁净区操作规程一、目的和适用范围为了确保菌种进出洁净区操作过程中的卫生与安全，制定本操作规程。

适用于所有菌种进出洁净区的操作。

二、操作前准备1.操作员必须接受相关培训，并具备相关操作证书。

2.进入洁净区前，操作员必须穿戴洁净服、帽子、口罩、手套等防护用品，并进行洗手消毒。

3.准备好所需的洁净车、容器等器材，并进行彻底清洁和消毒。

4.核对菌种准确性和数量，并确保菌株完整无损。

三、菌种进出洁净区操作流程1.将准备好的洁净车推入洁净区，确保车辆表面干净无尘，并紧密封闭。

2.操作员先进行手部消毒，然后戴上手套。

3.操作员将菌种从菌种库取出，按照规定的容器进行储存，并确保容器密封可靠。

4.操作员将菌种放置在已清洁消毒的洁净车上，确保菌种容器与车辆表面接触完全。

5.操作员再次检查菌种的数量和标签的准确性，并记录在操作记录表上。

6.关闭洁净车的盖子，将洁净车推出洁净区。

7.将菌种送往指定地点，根据实际情况进行冷藏或冷冻等保藏。

四、菌种退库操作流程1.接收菌种的人员对菌种进行检查，确保菌株完整无损。

2.将菌种送入洁净区，按照步骤3-6执行菌种进出洁净区操作流程。

3.将洁净车推回指定存储位置，并确保车辆密封可靠。

4.操作员将已使用过的洁净车进行清洁、消毒，并归还到指定位置。

五、操作注意事项1.操作员须严格遵守洁净区的卫生和安全规定，不得私自进出洁净区。

2.操作员在操作过程中不得随意触碰菌种容器和洁净区设备，以防污染。

3.如有任何意外或异常情况发生，应立即报告上级处理，并进行相应的控制措施。

4.操作记录必须及时、准确地记载，以备查验和追溯。

六、操作规范的验证和监督1.定期进行安全培训和操作规程的教育宣传，加强操作员的安全意识。

2.通过内部审核和经验总结，不断完善和改进操作规程。

3.建立相关的检查和监控机制，对操作过程进行监督，确保操作规程的执行。

以上是菌种进出洁净区操作规程的基本内容，希望能够对菌种进出洁净区的操作有所帮助。

菌种岗位操作规程一、菌种岗位工艺流程安培管无糖斜面斜面摇瓶种液生产种液接种上罐二、开安培管制备无糖斜面1、目的：将经过休眠的安培管菌种扩大培养到无糖斜面上。

2、操作规程：2.1前期准备工作：先将无菌间、摇瓶间、缓冲间擦拭干净，擦拭部位包括摇瓶机、冰箱、超净工作台、培养箱、桌子、凳子、吊顶、墙面、地板以及其他无菌室内必须的物品和工具。

擦拭过程应先用清水擦拭，再用消毒液擦拭。

然后将无菌风通入，调试好摇瓶间的温度控制装置。

通风2天待无菌室、摇瓶间温度稳定并符合要求后，做无菌平板，检验无菌度合格后，无菌室才能投入使用。

2.2进无菌室前准备工作：进无菌室前半小时，先打开无菌室超净工作台使之运行，然后将消毒过的需要使用的物品和未经接种的经过挑选空白无糖斜面放入缓冲间，最后依次打开超净工作室、无菌室、缓冲间的紫外灯。

进入无菌室应先关闭紫外灯，然后打开日光灯，进入缓冲间前应先用75%酒精棉球擦拭手和需要使用的器皿，然后将安培管放进用75%酒精棉球擦拭过的100ml烧杯中（烧杯内部与先放入消毒过的纱布垫好）一起带入缓冲间，先用消毒液洗手然后更换无菌衣，然后将待接种斜面和安培管一起带入无菌室，进入无菌间每道门应侧身迅速进入，并迅速关闭每道门。

进入无菌间后动作要轻，先用消毒液洗手，关闭超净工作台上的紫外灯，打开台面日光灯，然后用消毒液擦拭超净工作台台面，然后将待接种的斜面和安培管用消毒液擦拭，轻轻有序的放在超净工作台台面上，然后取75%酒精棉球擦手和安培管外表面，在试管斜面背面用记号笔做好标示，将包裹在斜面口上的牛皮纸拿掉，解取斜面口上扎纱布的绳子，准备接种。

2.3开安培管：接安培管需二人配合用小砂轮片在安培管上口部位磨一圈，然后在酒精灯火焰附近打开安培管，若开不了，在酒精灯火焰上烘烤划口部位，再在划扣部位滴75%的酒精使加热部位急剧冷却，在酒精灯火焰附近用酒精棉球包住划扣上部掰开安培管。

2.4接种：在酒精灯火焰附近剥开接种环外包裹的牛皮纸，取出接种环，在酒精灯火焰上用火稍微烧一下，然后将接种环放在安培口，同时另一人在酒精灯火焰附近轻轻取出待接种的斜面棉塞，带接种环冷却后用接种环将安培管内的奶粉搅碎，挑取一环奶粉划线涂布到待接种斜面上，接种完毕后另一人将接好种的斜面棉塞先用酒精火焰燎一下，然后塞上棉塞，包好纱布，在接种下一支斜面，打开安培管要一次接完。

深圳市蓝安琪生物工程股份有限公司发酵岗位标准操作规程1.目的建立GM-CSF工程菌发酵岗位标准操作规程。

2.范围实用与GM-CSF工程菌从二级种子培养液上罐、发酵、离心收菌的操作。

3.职责发酵岗位操作人员、车间负责人及QA生产区检查员对本规程实施负责。

4.规程4.1.生产前的准备：4.4.1.根据生产指令开出领料单。

领取时，核对物料名称、数量、批号、有效期等，然后将其送到传递窗。

4.1.2.岗位生产操作人员按《进出十万级洁净区更衣标准操作规程》进行更衣，然后进入岗位。

4.1.3.岗位生产操作人员检查设备、设施完好性，设备、容器、工具、室内卫生是否有清洁合格证，清洁合格证是否在有效期内，如不合格按其清洁标准操作规程重新清洁。

4.2操作方法4.2.1培养基配制LB培养基按比例配制（100L）蛋白胨16g/L酵母粉10g/L氯化钠5g/L4.2.3实罐灭菌4.2.3.1 按《BI0SATA-D型发酵罐标准操作规程》将配制好的培养基加入到发酵罐中,加入5ml消泡剂,121℃、30min灭菌。

设定搅拌速度为150rpm左右，保证培养基加热均匀。

4.2.3.2灭菌时当温度升至121℃时，打开DO电极电源，设定DO电极零点。

当灭菌温度降至30℃时，设定DO电极百点。

4.3上罐4.3.1 调节通气量到15L/min，搅拌速度为150rpm，稳定3分钟后设定DO电极100%。

4.3.2 调节通气量，使罐内保持正压。

4.3.3通过接种管道从种子管向发酵罐中打入二级种子液，整个过程注意无菌操作。

4.3.4 取样测OD600值。

4.4培养4.4.1上罐后，设定通气量为10L/min、搅拌速度为150rpm、温度为30℃，开始培养。

4.4.2培养过程中，注意DO值和pH值的变化，调节通气量和搅拌速度使DO值为40%。

4.4.3每隔1小时取样测量OD600值。

取样前后取样管用纯蒸汽流通灭菌10分钟。

做好生产记录。

4.4.4生产过程中，注意及时用蘸有0.1%新洁尔灭溶液的抹布擦去洒落在不锈钢罐体表面及地面的液体,维持发酵罐清洁和生产车间的整洁。

微生物实验室操作规程完整专业资料分享.微生物实验室操作规程【SOP】细菌室工作守则（微生物室SOP之一）细菌室消毒隔离措施（微生物室SOP之二）微生物实验室安全与防护（微生物室SOP之三）细菌室内质控制度（微生物室SOP之四）细菌室操作技术规范（微生物室SOP之五）无菌间规章制度（微生物室SOP之六）菌（毒种）管理办法（微生物室SOP之七）细菌室仪器维护保养及质控措施（微生物室SOP之八）•标准菌株保存及使用（微生物室SOP之九）细菌室内务管理规定（微生物室SOP之十）标本采集及保存要求（微生物室SOP之十一）室内质控失控处理程序（微生物室SOP之十二）标本拒收标准（微生物室SOP之十三）温度失控处理措施（微生物室SOP之十四）超净工作台作业指导（微生物室SOP之十五）标本的接种和移种法（微生物室SOP之十六）WORD完美格式.专业资料分享.细菌室工作守则微生物室SOP之一）1.每日工作前用紫外线映照实验室半小时以上。

2.入室前应穿工作服，并做好实验前的各项准备工作。

3.实验室内应保持肃静，不准吸烟、吃东西及用手触摸面部。

尽量减少室内活动，以免引起风动，无关人员禁入。

4.非必要物品禁止带入实验室，必要资料和书籍带入后，应远离操作台。

5.做好标本的登记、编号及实验记录。

未发出报告前，请勿丢弃标本。

6.标本处理及各项实验应在操纵间进行，接种环用完后应立即火焰灭菌，沾菌吸管、玻片等用后应浸泡在消毒液内。

7.实验时手部污染，应立即用过氧乙酸消毒或浸于3%来XXX溶液中5-10分，再用肥皂洗手并冲洗干净；如误入口内，应立即吐出，并用1:1000高锰酸钾溶液或3%双氧水漱口，根据实际情况服用有关药物。

8.实验过程中，如污染了实验台或地面，使用3%来XXX 覆盖其上半小时，然后清洗；如污染工作服，应立即脱下，高压灭菌。

9.若出现着火情况，应沉着处理，切勿XXX，立即关闭电闸，积极灭火。

易燃物品（如酒精、二甲苯、乙醚和丙酮等）必需远离火源，妥善保存。

菌种岗位操作规程1 主题内容与适用范围本操作规程规定了菌种岗位安全操作和生产操作规程中涉及的人员职责、工作标准、工艺参数、质量标准、复核交接制度、卫生与清洁、安全生产和劳动保护、异常问题处理及记录管理等内容。

本规程适用于菌种岗位。

2 引用标准3术语摇瓶种子——摇瓶培养基接种后在一定条件下培养得到的培养物。

分离纯化——将菌种稀释后分离培养,从中挑选出保持原有特性的菌落的方法。

4职责5 操作标准5.1 准备工作：5.1.1提前10分钟到岗更换好干净的工作服、工作鞋，同时检查各设备的状态是否正常。

无菌操作时更应注意个人清洁卫生，要做到定时洗澡。

5.1.2棉塞的制备5.1.2.1三角瓶棉塞的制备a将纱布剪成19cm×19cm的正方形，备用。

b取优质脱脂棉花8～9克，在操作台上铺开，折叠，卷紧，用纱布包好。

c左手取三角瓶，右手握棉花，均匀地将棉花塞入三角瓶，塞入长度不超过瓶颈长，皱折部分整理平整。

d将管口外的棉花整形；纱布对角包扎好。

e棉塞的性状和大小应与管口完全配合，棉塞要松软，外露部分要短些。

f将棉塞连同三角瓶放入筐中，置入消毒柜以温度118-121℃、压力0．10-0．11MPa灭菌1小时，使棉塞定形。

5.1.3无菌衣的清洁消毒进入无菌室所穿戴的无菌衣及口罩，操作完后带出无菌室。

用洗衣粉或肥皂搓洗干净后用饮用水冲洗干净，晾在室内。

将晾干的无菌衣及口罩折叠好用一层牛皮纸包扎好，以温度118-121℃、压力0．10-0．11MPa 灭菌20－30分钟，取出，置缓冲间晾干备用,并及时填写《无菌衣清洗灭菌记录》，灭菌后的无菌衣应在两天内使用，否则重新灭菌。

5.2 操作管理程序5.2.1菌种操作基本工艺流程：菌种分离纯化冻存管摇瓶种子斜面种子罐5.2.2冻存管的制备及保藏5.2.2.1准备工作a工具的准备(1)根据生产确定每只布袋装吸管数量，取布袋，口朝右平铺于操作台面，取吸管分散装入袋内，盖上袋盖，由里向外卷布袋；当剩下一只袋口时。

标准菌株使用标准操作规程1 检验目的对实验室的标准菌株进行合理的保存，并规范合理的使用流程，保证菌株的性能稳定可靠。

2 范围微生物实验室保存的标准菌株。

3 职责微生物组工作人员正确执行本操作规程。

4 术语和定义4.1标准菌株其特征进行了分类和描述，有明确的来源。

ATCC（American Type Culture Collection）美国标准菌株收藏中心。

4.2标准储备菌株标准菌株经过一代转接后获得的同种菌株。

4.3 工作菌株标准储备菌株传代后得到的同种菌株。

4.4 标准培养物标准菌株、标准储备菌株、工作菌株的统称。

4.5质控菌株ATCC最佳，但当无法获得时可以使用ATCC演化的菌株或我国国家菌种库储存的标准菌株。

特殊情况，例如定性试验可用已知的菌种作为质控菌株。

室间质评的菌株即可。

5 保存程序5.1标准菌株5.1.1商业购买的ATCC标准菌株干粉，-80℃低温保存，可以2年以上。

安瓿真空包装的，-80℃可长期稳定保存。

将标准菌株进行编号和登记。

5.1.2复苏用1ml无菌的小牛血清或营养肉汤溶解。

根据菌种的生长特点，接种到新鲜培养基上选择适宜的培养条件培养18-24h。

酵母菌要求3天，形成孢子的微生物宜保存孢子。

5.2标准储备菌株5.2.1由复苏后的ATCC标准菌株制备。

复苏后的标准菌株要检查其纯度，必要时进行生化试验检查。

刮取培养物上的菌体，用足量的菌悬浮于防冻培养基中。

防冻液可以是无菌脱纤维羊血、10%甘油肉汤。

储存足够量的标准储备菌株，可用1-2年。

一年52周需要52支以上。

5.2.2甘油肉汤保存法成分有蛋白胨、牛肉浸出粉、氯化钠、甘油、纯化木。

相当于20%的甘油。

挑取5环菌落加入到1ml甘油肉汤中混匀。

苛养菌可以适当增加菌量。

-80℃保存。

除链球菌和嗜血杆菌以外细菌均可使用。

保存期限1-5年。

5.2.3全血保存法成分为脱纤维羊血。

挑取5环菌落加入到1ml甘油肉汤中混匀。

苛养菌可以适当增加菌量。

荣仁药业目的：规范试验菌的复活、传代和保存操作，保证试验菌种的质量。

范围：适用于本公司试验菌的复活、传代和保存操作。

责任人：QC。

依据：《中华人民共和国药典》2015年版。

内容：1.实验准备灭菌移液管、灭菌平皿、废物收集桶、接种环、酒精灯、镊子、75%乙醇消毒液、75%酒精胶花、胰酪大豆胨液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、PH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、沙氏葡萄糖琼脂培养基、0. 05% (m l/m l)聚山梨酯8 0的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、砂轮2.菌种的复活2.1把冻干菌种管、灭菌1ml移液管、灭菌平皿、镊子、灭菌培养基、灭菌琼脂斜面数支、相应的无菌稀释液和废物收集桶，通过传递窗移入阳性间净化工作台。

2.2先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出刻痕,再将冻干菌种管外壁用75%乙醇擦洗消毒、稍干,用75% 乙醇胶擦净,放在灭菌平皿内,待干.点燃酒精灯,将菌种管的封口一端在火焰上,烧灼红热,用灭菌滴管吸取0.9%无菌氯化钠QC-SOP(B)001-01 第1页共4页溶液,滴在灼热的菌种管封口一端,使骤冷而炸裂。

2.3取灭菌镊子,在火焰旁,将炸裂的管口打开,放入灭菌平皿内,另取1支灭菌移液管,在火焰旁吸取灭菌液体培养基少许,加至菌种管底部,将冻干菌搅动促使溶解,随即将管内菌液分别接种至适宜的灭菌琼脂斜面及液体培养基内,并将滴管及菌种管投入消毒液内,将已接种的琼脂斜面及液体培养基于适宜的条件下进行培养。

2.4根据安瓿上所标明的不同菌种类型而将其培养于相应的温度（细菌培养温度30～35℃，培养18～24小时；真菌培养温度20～25℃，培养3～5天。

观察是否浑浊，浑浊说明菌种复苏生长；若不浑浊，细菌应延长培养时间至7天，真菌应延长培养时间至14天，若仍未浑浊，灭菌处理。

2.5黑曲霉的菌悬液先室温待菌悬液融化后用无菌吸管吸取管内液体1～2滴滴在沙氏葡萄糖琼脂斜面上，用吸管涂布均匀，置20～25℃培养5～7天，斜面正面为黑褐色厚绒状，色泽均一，不应有杂色，斜面侧面无色，接近菌层培养基略带黄色。

标准微生物操作规程微生物操作规程是用于规范实验室中微生物的处理和操作的一套标准化程序。

这些规程的制定和执行有助于确保实验室中的微生物操作的安全性和准确性。

下面是一份标准微生物操作规程的示例，包括样品的处理、培养基的配制、菌种的传代和储存等方面。

一、样品的处理1. 所有样品在处理前必须进行消毒处理，使用酒精喷雾器或其他消毒方式进行表面消毒。

2. 需要处理的液体样品应使用无菌移液器进行移液操作，避免污染。

二、培养基的配制1. 根据实验需求选择合适的培养基，并按照标准配方准备。

2. 使用无菌的培养基瓶或试管，避免外界污染。

3. 配制好的培养基需要经过高温高压灭菌处理，确保无菌。

三、菌种的传代1. 选择新鲜菌落进行传代，避免使用已经繁殖过多的菌落。

2. 使用无菌的培养基瓶或试管接种菌落，并尽量避免接触到容器外部。

3. 传代过程中需要进行切口贴片观察，确保菌种纯度。

四、菌种的储存1. 储存菌种时，选择适合的储存方法，如冷冻、冷藏或干燥保存。

2. 冷冻保存时，使用无菌的冷冻管存放菌种，加入保护剂并封存，冷冻温度为-80℃。

3. 冷藏保存时，使用无菌的试管或培养基瓶进行存储，冷藏温度为4℃。

4. 干燥保存时，使用无菌的琼脂坡上存放菌种，放入干燥箱中进行干燥处理。

五、废弃物的处理1. 废弃的培养基、试剂和细菌培养物等实验废弃物必须进行规范的处置。

2. 废弃物应放置在专用的生物危险废弃物容器中，并进行正确的标识。

3. 废弃物容器应定期消毒和按规定处理。

六、个人安全措施1. 在进行微生物操作前必须正确佩戴个人防护用品，如实验服、手套和口罩等。

2. 在操作过程中应避免直接接触微生物，尽量使用无菌移液器等工具。

3. 操作完毕后，洗手消毒并正确处理实验室工作区域，确保清洁和消毒。

七、事故处理1. 发生微生物泄漏或其他事故时，立即向上级报告，并按指导进行相应的处理。

2. 发生化学品或其他危险品泄漏时，立即采取措施进行清理和处理，并按相关规定报告。

实验室菌种管理规程目的：保证菌种合理、有效地使用和保存，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，保证实验室和社会的生物安全。

职责：主管负责菌种的出入库保管、保存、分发，组员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。

范围：本规程适用于实验室菌种的管理，包括菌种的保存、传代、使用及销毁等。

1菌种的保存工作用菌种的保存工作用菌种采用平板低温保存法。

将菌种接种在适宜的固体培养基上，待菌生长充分以后，转移至2〜8C冰箱中保存。

此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。

保存时间为 1 周，超过该期限前挑取单菌落重新于琼脂平板划线活化，若菌落活力下降则从-80 C冰箱中取用甘油冷冻管。

传代用菌种的保存采用甘油冷冻管保藏法。

甘油冷冻管保存法用无菌接种环轻轻刮平板上的单菌落并接种至适宜的液体培养内，置于适宜的培养条件下培养，菌液充分振荡后取适宜体积加入到已灭菌的冷冻管内，再加入等体积的无菌甘油（浓度40%），即为20%甘油菌悬液，轻轻振摇，使内容物充分混合，在-80 C冷冻条件下保存，保存期限为3年。

每个菌株保存至少30 个无菌冷冻管。

使用时，取出一支放至室温，接种增菌培养或接种至琼脂平板复苏，挑取纯菌落传代或工作用。

2菌种的传代工作用菌种的传代当工作用菌种代数小于 5 时，在规定保存期限内，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种。

取在冰箱2〜8 C保存的工作用菌种用普通琼脂平板传代，并将新传代的培养物替代原有的菌种，作为工作用菌种。

也可取用“甘油冷冻管保藏法”保存的菌种，进行复苏，直接作为工作用菌种。

菌种每 1 周传代一次，当超过 5 代，须用“甘油冷冻管保藏法”保存的原始菌种传代。

传代用菌种的传代首先划线接种确认，根据日常检验工作的需要量，挑取纯菌落转接平板，作为工作用菌种；同时，结合菌种的代数和最长保存期限，挑取纯菌落制成菌悬液，按“”的方法制备甘油冷冻管数支，作为传代用菌种。