土壤铵态氮测定-靛酚蓝比色法

土壤中氨氮的测定步骤----K C l浸提-靛酚蓝比色法精品文档 土壤中氨氮的测定-KCl 浸提-靛酚蓝比色法-《土壤农化分析》鲍士旦主要仪器：1. 震荡机；2. 分光光度计试剂和药品及其配制1. 2mol/L KCl 溶液。

149.1gKCl （化学纯）溶于1L 水中2. 苯酚溶液。

苯酚（化学纯）10g 和 硝基铁氰化钠 100mg 稀释至1L 。

不稳定，须贮于棕色瓶中，4℃保存3. 次氯酸钠碱性溶液。

4. 掩蔽剂。

400g/L 的酒石酸钾那（化学纯）与100g/L 的EDTA 二钠盐等体积混合。

每100ml 混合液中加入10mol/L 的氢氧化钠溶液0.5ml5. 2.50μg ∙mL −1铵态氮（NH 4+−N ）标准溶液。

干燥的硫酸铵（分析纯）0.4717g 溶于水中，后定容至1L ，得铵态氮100μg ∙mL −1的贮存溶液；使用前将其加水稀释至40倍，即得标准溶液分析操作步骤NaOH （化学纯）10g 七水磷酸氢二钠（化学纯）7.06g 十二水磷酸钠（化学纯）31.8g 52.5g/L 次氯酸钠 10ml 溶于水，稀释至1L ，贮于棕色瓶中，4℃保存称取相当于20.00g 的干土，准确至0.01g置于200mL 具塞三角加入KCl 溶液振荡1h ，取出静置澄清后，取上清液吸取土壤浸出液2mL~10mL 置于50mL 容量瓶用KCl 溶液补充至加入苯酚溶液5mL 和次氯酸钠碱性溶液20℃左右室温放置加掩蔽剂1mL ，用水1cm ，波长625nm ，比吸收0.00、2.00、4.00、6.00、置于50mL 容量各加入10mLKCl。

⼟壤铵态氮的测定⼟壤铵态氮的测定⼀、⽅法原理⼟壤铵态氮是⼟壤速效氮的重要组成部分，测定⼟壤NH4+-N 的⽅法主要有直接蒸馏法和浸提法两类，直接蒸馏法是在氧化镁的存在下直接蒸馏⼟壤，但此法在弱碱性蒸馏时仍可能使⼀些简单的有机氮微弱⽔解有NH3蒸出，易使结果偏⾼，同时该法操作复杂，不适合⼤批量分析。

故在ASI法中采⽤氯化钾溶液提取⼟壤中的NH4+，提取液中的NH4+⽤靛酚蓝⽐⾊法，靛酚蓝⽐⾊法的灵敏度⾼，准确度也较⾼，适合于⼤批量样品的⾃动化分析。

靛酚蓝⽐⾊法的基本原理是：⼟壤胶体上的NH4+被K+交换下来后，在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚反应，⽣成⽔溶性染料靛酚蓝，其深浅与溶液中的NH4+-N含量呈正⽐，线性范围为0.05～0.5mg/L之间。

⼆、试剂配制1. NaOH溶液将6.75g NaOH、0.75g EDTA⼆钠、1.25g 醋酸钠溶解于250ml⽔中，储存于250ml 的容量瓶中。

其中EDTA⼆钠作为⾦属离⼦的掩蔽剂，防⽌⼲扰。

醋酸钠可增强颜⾊的稳定性。

2. 90%苯酚溶液将45g 苯酚溶解于50ml⽔中，注意苯酚易结块，可加热到60-70℃。

3. 碱性苯酚溶液测定当天，将36ml 90%苯酚溶液加到250ml 溶液中，摇匀。

4. 次氯酸钠溶液在400ml 的⽔中加⼊100ml 的NaClO溶液即可。

5. NH4+-N 标准溶液的配制(改进的地⽅)称取1.9105g NH4Cl（65℃烘4h），于500ml的容量瓶中，加⽔定容⾄刻度。

该溶液的浓度为1000mg/L.⽤移液管吸取1ml于100ml的容量瓶中，⽤蒸馏⽔定容⾄刻度，摇匀，此时容量瓶中溶液浓度为10mg/ml。

再对该溶液分别取0，0.5，1，2，4，8ml于25ml 的⽐⾊⽫中，，对应的浓度为0.0，0.2，0.4, 0.8, 1.6，3.2 ppm(mg/L).6. 浸提剂KCl溶液的配制称取74.5g KCl 溶解于500ml ⽔中，并加0.25g 聚丙烯酰胺⾄1000ml 容量瓶中。

土壤速效氮的测定实验报告一、实验目的土壤速效氮是指在短期内能被植物吸收利用的氮素形态，包括铵态氮和硝态氮。

本次实验的目的是掌握测定土壤速效氮含量的方法，了解土壤中氮素的供应状况，为合理施肥提供科学依据。

二、实验原理1、碱解扩散法在扩散皿中，土壤在碱性条件下进行水解，使易水解态氮转化为氨态氮。

然后用硼酸溶液吸收释放出的氨，再用标准酸滴定，计算出土壤中速效氮的含量。

2、靛酚蓝比色法在碱性条件下，土壤中的铵态氮与次氯酸盐和苯酚反应生成靛酚蓝，在一定波长下比色测定其吸光度，从而计算出铵态氮的含量。

三、实验仪器与试剂1、实验仪器扩散皿、半微量滴定管、移液管、分光光度计、恒温箱、玻璃棒、表面皿等。

2、实验试剂（1）18mol/L 氢氧化钠溶液：称取 720g 氢氧化钠溶于水，冷却后定容至 1L。

（2）硼酸指示剂溶液：称取 20g 硼酸溶于约 900mL 热水中，冷却后加入 20mL 混合指示剂（0099g 溴甲酚绿和 0066g 甲基红溶于 100mL 乙醇中），用稀盐酸或氢氧化钠溶液调节至紫红色（pH 约 45），然后定容至 1L。

（3）001mol/L 盐酸标准溶液：量取083mL 浓盐酸（ρ=119g/mL），用水定容至 1L，然后用基准物质碳酸钠标定其准确浓度。

（4）碱性酒石酸钾钠溶液：称取 200g 酒石酸钾钠和 100g 氢氧化钠溶于水，定容至 1L。

（5）纳氏试剂：称取 134g 氢氧化钾溶于 460mL 水中，冷却。

称取 20g 碘化钾溶于 50mL 水中，在搅拌下将其缓慢加入冷却后的氢氧化钾溶液中。

称取 10g 碘化汞，溶于少量水，在搅拌下缓慢加入上述溶液中，用水稀释至 1L，贮于棕色瓶中，暗处保存。

（6）铵态氮标准溶液：准确称取 04717g 干燥的氯化铵（NH₄Cl，分析纯）溶于水，定容至 1L，此溶液含铵态氮100μg/mL。

四、实验步骤1、碱解扩散法（1）称取通过2mm 筛孔的风干土样200g 均匀平铺于扩散皿外室，水平轻轻旋转扩散皿，使土样铺平。

土壤铵态氮测定方法靛酚蓝比色法引言：土壤中的氮素是植物生长和发育的关键因素之一。

土壤中的氮素形态有铵态氮和硝态氮两种形式，其中铵态氮对植物的吸收利用更为重要。

因此，准确测定土壤中的铵态氮含量对于合理施肥和提高农作物产量具有重要意义。

本文将重点介绍一种常用的土壤铵态氮测定方法——靛酚蓝比色法。

一、实验原理：靛酚蓝比色法是一种常用的测定土壤铵态氮含量的方法。

其原理是利用靛酚蓝与铵离子之间的化学反应产生的颜色变化来测定土壤中铵态氮的含量。

二、实验步骤：1. 取适量土壤样品，将其过筛并去除杂质。

2. 将土壤样品与蒸馏水按一定比例混合，使土壤中的铵态氮溶解于水中。

3. 取一部分土壤溶液，加入靛酚蓝试剂，充分混合。

4. 静置一段时间后，使用分光光度计测定溶液的吸光度。

5. 根据标准曲线，计算出土壤溶液中铵态氮的浓度。

三、实验注意事项：1. 在实验过程中，应注意避免与空气中的二氧化碳接触，以免造成铵态氮的损失。

2. 靛酚蓝试剂应储存在避光、干燥的环境中，以保持其稳定性。

3. 实验中的仪器和试剂应严格按照操作要求使用，以确保测定结果的准确性。

四、结果分析：靛酚蓝比色法是一种简便、快速、准确的测定土壤铵态氮的方法。

通过测定土壤样品中溶解的铵态氮的含量，可以评估土壤的肥力和植物的养分供应情况。

同时，该方法还可以用于研究不同施肥措施对土壤铵态氮含量的影响，为合理施肥提供科学依据。

结论：靛酚蓝比色法是一种常用的测定土壤铵态氮含量的方法，具有操作简便、结果准确等优点。

通过该方法可以快速测定土壤中的铵态氮含量，为合理施肥和提高农作物产量提供重要依据。

在实际应用中，需要严格控制实验操作和仪器试剂的使用，以确保测定结果的准确性。

氮的测试方法1.铵态氮采用靛酚蓝比色法测定硝态氮采用联氨铜还原比色法测定，亚硝态氮采用重氮化偶合分光光度法测定。

氨态氮测定:采用氯化钾浸提一氧化镁蒸馏法;亚硝态氮测定:N一(l一蔡基)乙二胺光度法;硝态氮测定:氯化钾浸提一还原蒸馏法;有机态氮测定:凯氏定氮法。

1.有机氮测定采用硫酸消化一蒸馏法(即凯氏定氮法):无菌移液管移取5mL细菌培养液，加入浓硫酸和催化剂(硫酸铜、硫酸钾)，400℃消化1小时后，凯氏定氮仪中加入40%氢氧化钠蒸馏，4%硼酸液吸收后，0.!m。

l/L盐酸滴定。

有机氮的计算公式为:X=(V，一VZ)xCx14.007x1000/5X—为样品中有机氮含量(m创L);v，—样品消耗盐酸标准液的体积(mL);vZ—空白试验消耗盐酸标准液的体积(mL);C一盐酸标准溶液通过标定后的摩尔浓度(Inol/L)。

2.按态氮测定采用蒸馏法:用无菌移液管移取5mL细菌培养液培养液，加IOmL40%氢氧化钠溶液凯氏定氮仪蒸馏，4%硼酸吸收后，用0.lmol/L盐酸滴定，计算含量。

钱态氮的计算公式为:A二(V，一VZ)xCx14.007x1000/5A—为样品中钱态氮含量(m叭);Vl—样品消耗盐酸标准液的体积(mL);vZ—空白试验消耗盐酸标准液的体积(mL);C一盐酸标准溶液通过标定后的摩尔浓度(mol/L)。

3.亚硝酸盐氮测定采用a一蔡胺分光光度法:弱酸条件下:对氨基苯磺酸与a一蔡胺偶合生成紫红色染料，其颜色深度与亚硝酸盐氮含量成正比。

可测定亚硝酸盐氮含量范围在0.05m叭之间，若超过该范围可稀释后测定。

取适量培养液稀释后，依次加入氯化按缓冲液、60%冰乙酸、对氨基苯磺酸和a一禁胺等体积混合液和蒸馏水，于550nm波长下进行比色测定，同时绘制标准曲线，计算含量。

4.硝酸盐氮测定采用磺基水杨酸消化法:在浓硫酸存在下，NO3“能与磺基水杨酸反应，生成硝基水杨酸。

所生成的硝基水杨酸在碱性条件(PH>12.0)条件下，于410nm处有最大吸收;并且，在一定范围内与N03’含量成线性关系。

（二）土壤硝态氮的测定1、酚二磺酸比色法1）方法原理土壤用饱和CaSO4 2H2O溶液浸提，在微碱性条件下蒸发至干，土壤浸提液中的NO3－—N在无水的条件下能与酚二磺酸试剂作用，生成硝基酚二磺酸。

C6H3OH(HSO3)2+HNO3→C6H2OH(HSO3)2 NO2+H2O2，4-酚二磺酸6-硝基酚-2，4-二磺酸此反应必须在无水条件下才能迅速完成，反应产物在酸性介质中无色，碱化后则为稳定的黄色溶液，黄色的深浅与NO3－—N含量在一定范围内成正相关，可在400～425nm处（或用蓝色滤光片）比色测定。

酚二磺酸法的灵敏度很高，可测出溶液中0.1mg•L-1 NO3－—N，测定范围为0.1～2mg•L-1。

2）主要仪器分光光度计、水浴锅、瓷蒸发皿。

3）试剂（1）酚二磺酸试剂：称取白色苯酚（C6H5OH，分析纯）25.0g置于500mL三角瓶中，以150mL纯浓H2SO4溶解，再加入发烟H2SO475mL并置于沸水中加热2h，可得酚二磺酸溶液，储于棕色瓶中保存。

使用时须注意其强烈的腐蚀性。

如无发烟H2SO4，可用酚25.0g，加浓H2SO4225mL，沸水加热6h配成。

试剂冷后可能析出结晶，用时须重新加热溶解，但不可加水，试剂必须贮于密闭的玻塞棕色瓶中，严防吸湿。

（2）10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液：准确称取KNO3（二级）0.7221g溶于水，定容1L，此为100µg•mL-1 NO3－—N 溶液，将此液准确稀释10倍，即为10µg•mL-1 NO3－—N标准溶液。

（3）CaSO4•2H2O（分析纯、粉状）、（4）CaCO3（分析纯、粉状）、（5）1:1 NH4OH、（6）活性碳（不含NO3－），用以除去有机质的颜色。

（7）Ag2SO4（分析纯、粉状）、Ca(OH)2（分析纯、粉状）和MgCO3（分析纯、粉状），用以消除Cl-1的干扰。

4）操作步骤（1）浸提：称取新鲜土样（注1）50g（风干土样25g）放在500mL三角瓶中，加入CaSO4•2H2O 0.5g（注2）[凝聚剂的作用，使滤液不混浊而澄清]和250.00mL蒸馏水，盖塞后，用振荡机振荡10min。

靛酚蓝比色法测定土壤中铵态氮注意事项
靛酚蓝比色法是一种测定土壤中铵态氮的方法，在土壤肥力评价中应用广泛。

但是，在进行测试时需要注意以下几个方面。

首先，样品的选取必须严格按照规定程序进行，以确保测试数据的准确性。

在采集土壤样品时，要尽量避免污染和混杂，选择代表性强的样品进行测试。

同时，测试样品的数量和质量也应当有所把握。

通常情况下，每次测试所用土壤样品的质量应不少于100g，以保证测试数据的可靠性。

其次，实验操作需要准确无误，各种试剂的用量和浓度、反应时间、加热温度等都需要控制好。

特别是在制备土壤提取液时，一定要按照比例配好试剂，否则会影响测试数据的准确性。

此外，在样品提取和过滤的过程中，也需要注意操作方法和细节，以保证试剂的完全反应和样品提取液的净化。

最后，测试结果的分析和解释也要尽可能准确、客观。

在使用靛酚蓝比色法测定土壤中铵态氮时，测试结果的解释需要考虑到土壤的环境特征、施肥历史、周围环境的因素等。

同时，还需要参考其他相关数据，综合分析，确定土壤铵态氮的含量及其对作物生长的影响。

总之，使用靛酚蓝比色法测定土壤中铵态氮时需要注意实验操作细节和数据解释的准确性，以确保测试结果的科学准确性和可靠性。

铵态氮（靛酚蓝比色法）方法与原理：土壤浸出液中的NH4+在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝,溶液的蓝色很稳定，在NH4+-N浓度为0.05—0.5mg.L-1范围内，其深浅与NH4+-N含量呈正比.试剂：1.酚溶液：10g苯酚和100mg(0.1g)硝普钠（剧毒）【Na2Fe(CN)5·2H2O】→1L水暗瓶存于4℃冰箱2.次氯酸钠碱性溶液：10gNaOH,7.06gNa2HPO4·7H2O,31.8g Na3PO4·12H2O和10 ml次氯酸钠【w(NaOCl)=5.25%】→1L水中暗瓶存于4℃冰箱3.掩蔽剂:①酒石酸钾钠溶液【ρ（KNaC4H4O6·4H2O）】=400 g.l-1与EDTA二钠盐溶液【C10H14O8N2Na2】100 g.l-1等体积混合.每100 ml混合液加入0.5 mlNaOH溶液（10mol/L）,即得清亮的掩蔽剂②酒石酸钾钠【KNaC4H4O6·4H2O】400g↓EDTA二钠盐【C10H14O8N2Na2·2H2O】110.7 g稀释至2L. 每100 ml混合液加入0.5 mlNaOH溶液（10mol/L）,即得清亮的掩蔽剂4.【ρ（NaOH）】=10 mol.l-1 ：400g NaOH用蒸馏水定容至1L5.NH4+-N标准液：0.4717g烘干的（NH4）2SO4→1L水中(定容) 此为NH4+-N贮备标准液。

测定当天将此液用蒸馏水水准确稀释20倍（如5ml稀释至100ml）即为NH4+-N标准液【ρ（NH4+-N）=5 mg.l-1】操作步骤：1．土壤30g 置于150ml三角瓶中加入100 ml 2M KCl浸提，振荡(140rpm)30min 过滤（约30ml以上滤液）2．10 ml样液于50ml容量瓶+约20 ml水+5 ml酚+5 ml NaOCl摇匀，在20℃左右置1小时↓1ml掩蔽剂以溶解沉淀物定容50 ml λ=625nm 比色3．0/0.5/1/2/3/4/5ml NH4+-N标准液于50ml容量瓶+10 ml KCl+约20 ml水+5 ml 酚+5 ml NaOCl摇匀，在20℃左右置1小时后加入1ml掩蔽剂以溶解沉淀物定容50 ml λ=625nm比色注意事项:掩蔽剂应在显色后加入，加入过早，会使显色很慢。

土壤铵态氮测定方法原理:用2mol/L KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH+4及水溶性NH+4浸提出来。

土壤浸出液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。

在含氮0.05~0.5mg/L的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。

实验步骤：（1）称取10.00g新鲜土样（精确到0.01g），置于200ml三角瓶中，加入KCl 溶液100ml，在摇床里振荡30min，取出静置后，取上清液过滤；（2）吸取浸提液5ml放入50ml容量瓶中，后加入KCl溶液10ml、苯酚溶液5ml、次氯酸钠碱性溶液5ml,摇匀；（3）在25℃左右室温下放置1小时后，加入掩蔽剂1ml,然后用水定容至刻度，在625nm波长处进行比色。

工作曲线绘制：分别取0.00 ，0.50 ，1.00 ，2.00 ，3.00 ，4.00 ，5.00ml铵态氮标准溶液于50ml容量瓶中，各加入10ml KCl溶液,然后同(2) (3)步骤进行。

试剂配制：【2mol/L KCl溶液】: 称取149.1g KCl(分析纯)溶入水中，稀释至1L。

【苯酚溶液】：称取苯酚（分析纯）10g、NaOH（分析纯）5g和消极铁氰化钠(分析纯)0.1g稀释至1L。

（此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在冰箱中4℃保存，使用时用酸调节PH酸性）【次氯酸钠碱性溶液】：称取NaOH（分析纯）10g、磷酸氢二钠（分析纯）7.06g、磷酸钠（分析纯）31.8g和52.5g/L次氯酸钠（分析纯，即含5%有效氯的漂白粉溶液）10mL溶于水中，稀释至1L.(贮于棕色瓶中，在冰箱中4℃保存，使用时放置至室温)【掩蔽剂】: 将400g/L的酒石酸钾钠（分析纯）与100g/L的EDTA二钠盐溶液等体积混合。

每100ml混合液中加入10mol/L NaOH溶液0.5ml。

【铵态氮标准溶液】：称取0.4717g于105℃烘2小时的(NH4)2SO4(分析纯)溶于水，定容至1L。

土壤铵态氮‎测定方法原理:用2mol‎/L KCl溶液‎浸提土壤，把吸附在土‎壤胶体上的‎N H+4及水溶性‎NH+4浸提出来土壤浸出液‎中的铵态氮‎在强碱性介‎质中与次氯‎酸盐和苯酚‎‎。

作用，生成水溶性‎染料靛酚蓝‎，溶液的颜色‎很稳定。

在含氮0.05~0.5mg/L的范围内‎，吸光度与铵‎态氮含量成‎正比，可用比色法‎测定。

实验步骤：（1）称取10.00g新鲜‎土样（精确到0.01g），置于200‎m l三角瓶‎中，加入KCl‎溶液100‎m l，在摇床里振‎荡30mi‎n，取出静置后‎，取上清液过‎滤；（2）吸取浸提液‎5m l放入‎50m l容‎量瓶中，后加入KC‎l溶液10‎m l、苯酚溶液5‎m l、次氯酸钠碱‎性溶液5m‎l,摇匀；（3）在25℃左右室温下‎放置1小时‎后，加入掩蔽剂‎1m l,然后用水定‎容至刻度，在625n‎m波长处进‎行比色。

工作曲线绘‎制：分别取0.00 ，0.50 ，1.00 ，2.00 ，3.00 ，4.00 ，5.00ml铵‎态氮标准溶‎液于50m‎l容量瓶中‎，各加入10‎m l KCl溶液‎,然后同(2) (3)步骤进行。

试剂配制：【2mol/L KCl溶液‎】:称取149‎.1g KCl(分析纯)溶入水中，稀释至1L‎。

【苯酚溶液】：称取苯酚（分析纯）10g、NaOH（分析纯）5g和消极‎铁氰化钠(分析纯)0.1g稀释至‎1L。

（此试剂不稳‎定，须贮于棕色‎瓶中，在冰箱中4‎℃保存，使用时用酸‎调节PH酸‎性）【次氯酸钠碱‎性溶液】：称取NaO‎H（分析纯）10g、磷酸氢二钠‎（分析纯）7.06g、磷酸钠（分析纯）31.8g和52‎.5g/L次氯酸钠‎（分析纯，即含5%有效氯的漂‎白粉溶液）10mL溶‎于水中，稀释至1L‎.(贮于棕色瓶‎中，在冰箱中4‎℃保存，使用时放置‎至室温)【掩蔽剂】: 将400g‎/L的酒石酸‎钾钠（分析纯）与100g‎/L的EDT‎A二钠盐溶‎液等体积混‎合。

土壤铵态氮的测定(靛酚蓝比色法)(一)方法提要土壤浸出液中的NH4+在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的蓝色很稳定，在NH4+-N浓度为0.05~0.5u g·mL-1范围内，其深浅与NH4+含量成正比。

反应体系的pH应为10.5～11.7。

硝普钠[硝基铁氰化钠，或称亚硝酰基五氰基合铁(Ⅲ)酸钠，。

Na2Fe(CN)5N0]是此反应的催化剂，能加速显色，增强蓝色及其稳定性。

在20℃左右室温时一般须放置l h后比色，完全显色约需2~3h。

生成的蓝色很稳定，24 h内吸收值无显著变化。

比色时在625nm处测量吸收值。

待测液中如有干扰的金属离子，可用EDTA等螯合剂掩蔽。

（二）适用范围本方法适用于各类土壤铵态氮含量的测定。

（三）主要仪器设备1、分光光度计。

2 、往复式或旋转式振荡机，满足180r·min-1±20r·min-1的振荡频率或达到相同效果。

3、塑料瓶，200mL。

（四）试剂1、酚溶液：10 g苯酚(C6H50H)和100mg硝普钠[Na2Fe(CN)5NO·2H20]溶于1 L水中。

此试剂不稳定，须贮于棕色瓶，存放在4℃冰箱中，用时须温热至室温。

注意硝普钠有剧毒2、次氯酸钠碱性溶液：10g氢氧化钠(NaOH)，7.06g磷酸氢二钠(Na2HP04．7H20)，31.8g 磷酸钠(Na3P04·12H20)和10mL次氯酸钠(w (NaOCl)=5.25％，即含有效氯5%的漂白剂溶液]溶于1L水中。

此试剂应与酚溶液同样保存。

3、掩蔽剂：酒石酸钾钠溶液[p(KNaC4 H406·4H20)=400g·L-1与EDTA二钠溶液[p(C10H1408N2Na2)=100g·L-1]等体积混合，每100mL混合液中加0．5mLNaOH溶液[c(NaOH)=10mol·L-1]，即得清亮的掩蔽剂溶液。

靛酚蓝比色法测定土壤中铵态氮注意事项介绍靛酚蓝比色法是一种常用于测定土壤中铵态氮含量的方法。

本文将详细介绍靛酚蓝比色法的原理、操作步骤以及注意事项。

希望通过本文的阐述，读者能够全面理解并正确运用这种方法来测定土壤中铵态氮的含量。

原理靛酚蓝是一种酸性指示剂，能够与铵离子形成稳定的蓝色络合物。

根据络合物的颜色深浅可以判断铵态氮的含量。

操作步骤1.样品处理1.将土壤样品通过筛网筛选，去除大颗粒杂质。

2.将筛选后的土壤样品晾干，并将其研磨成细粉末状。

3.随机选取适量土壤样品，称重定量，记录质量。

2.提取铵态氮1.取一定质量的土壤样品，并加入一定体积的钡钠颗粒。

2.加入蒸馏水，使土壤样品完全浸泡。

3.静置一段时间，使铵离子与水中的氢离子反应生成氨气。

4.过滤提取液，获取含有铵态氮的溶液。

3.靛酚蓝比色1.取一定体积的提取液，并加入适量的刚果红溶液和氢氧化钠溶液。

2.加入适量的靛酚蓝指示剂，溶液呈现蓝紫色。

3.使用标准铵溶液制备一系列已知浓度的标准溶液。

4.将标准溶液与待测溶液一同置于比色皿中，比较它们的颜色深浅。

5.根据比色结果，利用光度计或比色计测定铵态氮的含量。

注意事项在使用靛酚蓝比色法测定土壤中铵态氮的过程中，需要注意以下几点：1.样品处理–筛选过程中要保证筛网干净，防止杂质污染样品。

–研磨后的土壤样品应密封保存，避免水分和氧气的接触，以防样品质量损失。

2.提取铵态氮–加入的钡钠颗粒应足够多，以充分消耗土壤中的氢离子。

–提取液中的铵态氮应在一定浓度范围内，过高或过低都会影响测定结果。

–静置时间要适当，一般为4小时左右，时间过短会导致反应不完全，时间过长则可能发生铵氧化反应。

3.靛酚蓝比色–加入刚果红溶液和氢氧化钠溶液时要注意控制用量，避免溶液变得过聚集。

–比色时需使用已知浓度的标准溶液，确保比较的准确性。

–光度计或比色计的参数设置要正确，以获得准确的测量结果。

4.仪器使用和维护–使用仪器前要进行校准，确保其准确可靠。

铵态氮（靛酚蓝比色法）方法与原理：土壤浸出液中的NH4+在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝,溶液的蓝色很稳定，在NH4+-N浓度为0.05—0.5mg.L-1范围内，其深浅与NH4+-N含量呈正比.试剂：1.酚溶液：10g苯酚和100mg(0.1g)硝普钠（剧毒）【Na2Fe(CN)5·2H2O】→1L水暗瓶存于4℃冰箱2.次氯酸钠碱性溶液：10gNaOH,7.06gNa2HPO4·7H2O,31.8g Na3PO4·12H2O和10 ml次氯酸钠【w(NaOCl)=5.25%】→1L水中暗瓶存于4℃冰箱3.掩蔽剂:①酒石酸钾钠溶液【ρ（KNaC4H4O6·4H2O）】=400 g.l-1与EDTA二钠盐溶液【C10H14O8N2Na2】100 g.l-1等体积混合.每100 ml混合液加入0.5 mlNaOH溶液（10mol/L）,即得清亮的掩蔽剂②酒石酸钾钠【KNaC4H4O6·4H2O】400g↓EDTA二钠盐【C10H14O8N2Na2·2H2O】110.7 g稀释至2L. 每100 ml混合液加入0.5 mlNaOH溶液（10mol/L）,即得清亮的掩蔽剂4.【ρ（NaOH）】=10 mol.l-1 ：400g NaOH用蒸馏水定容至1L5.NH4+-N标准液：0.4717g烘干的（NH4）2SO4→1L水中(定容) 此为NH4+-N贮备标准液。

测定当天将此液用蒸馏水水准确稀释20倍（如5ml稀释至100ml）即为NH4+-N标准液【ρ（NH4+-N）=5 mg.l-1】操作步骤：1．土壤30g 置于150ml三角瓶中加入100 ml 2M KCl浸提，振荡(140rpm)30min 过滤（约30ml以上滤液）2．10 ml样液于50ml容量瓶+约20 ml水+5 ml酚+5 ml NaOCl摇匀，在20℃左右置1小时↓1ml掩蔽剂以溶解沉淀物定容50 ml λ=625nm 比色3．0/0.5/1/2/3/4/5ml NH4+-N标准液于50ml容量瓶+10 ml KCl+约20 ml水+5 ml 酚+5 ml NaOCl摇匀，在20℃左右置1小时后加入1ml掩蔽剂以溶解沉淀物定容50 ml λ=625nm比色注意事项:掩蔽剂应在显色后加入，加入过早，会使显色很慢。

靛酚蓝比色法测定土壤氮靛酚蓝比色法测定土壤铵态氮提取方法：取新鲜土样10.0g，放入100mL三角瓶中，加入2mol?L-1 KCL溶液50.0mL。

用橡皮塞塞紧，振荡30min，立即过滤于50mL三角瓶中（若土壤NH4+—N含量低，可将液土比改为2.5:1）A 试剂：1)复合液：28g NaOH、5g Na2EDTA·2H2O和50g 酒石酸钾钠溶于1L去离子水中，保存于棕色瓶中。

2)催化液：150g 水杨酸钠和0.3g硝普钠溶于1L去离子水中，保存于棕色瓶中。

3)显色液：200g NaOH和250g 苯酚定容至1L，保存于棕色瓶中。

4)混合液：催化液和显色液1:1混合，用前进行配制。

5)次氯酸溶液：60mL 5.25% 次氯酸钠溶液稀释至1L，保存于棕色瓶中。

6)氮标准溶液：a. 2.5 mg NH4+-N/mL储备液：11.79g (NH4)2SO4定容至1L。

b.10μg NH4+-N/mL 工作溶液：吸收1mL储备液，稀释至250mL.B 步骤1）打开分光光度计，预热30min；2）吸取2mL样品液加入10mL容量瓶或刻度试管中；3）吸取0，0.1，0.2，0.4，0.6和0.7mL工作溶液加入10mL容量瓶中，铵离子的浓度分别为0.0，0.1，0.2，0.4，0.6和0.7μg/mL。

若超过0.8μg/mL，则不成线性关系；4）加入5滴0.25%正硝基酚；5）用5N NaOH中和。

在碱性条件下，溶液显黄色；6）加入1mL 复合液和1mL 混合液，摇匀；7）加入1mL 次氯酸溶液，摇匀；8）稀释至10mL，室温放置60min后，在626nm处比色；9）绘制工作曲线，并寻找样品氮浓度。

C 计算：含氮率（mg/kg）=(C×Vs)/WsC：标准曲线上查得的铵浓度（μg/mL）Vs：样本溶液总体积(mL)Ws：样本重量。

紫外分光光度法测定硝态氮提取方法：取新鲜土样25g，放入250mL三角瓶中，加入CaSO4?2H2O 0.25g和125mL水，盖塞后，用振荡机振荡10min。

土壤铵态氮测定（2 mol﹒L-1 KCl浸提-靛酚蓝比色法）【方法原理】 2 mol﹒L-1 KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。

土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性燃料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。

在含氮0.05~0.5 mol﹒L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。

【试剂】（1）2 mol﹒L-1 KCl溶液：称取149.1 g氯化钾（分析纯）溶于水中，稀释至1L。

（2）苯酚溶液：称取苯酚（分析纯）10g和硝基铁氰化钠（硝普钠，有剧毒）100mg，稀释至1L。

此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

（3）次氯酸钠碱性溶液：称取氢氧化钠（分析纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4﹒7H2O）7.06g、磷酸钠（Na3PO4﹒12H2O）31.8g和52.5 g﹒L-1次氯酸钠（即含5%有效率的漂白粉溶液）10 mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

（4）掩蔽剂：将400g﹒L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6.4H2O,化学纯）溶液与100 g﹒L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。

每100mL混合液中加入10 mol﹒L-1氢氧化钠0.5mL。

（5）2.5μg.ml-1铵态氮（NH4+-N）标准溶液：称取干燥的硫酸铵[（NH4）2SO4,分析纯]0.4717g溶于水中，定容至1L。

即配制成含铵态氮（N）100μg.m L-1的贮存溶液；使用前将其加入水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5μg.m L-1的标准溶液备用。

【分析步骤】（1）浸提称取相当于10.00g干土的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g，置于250mL三角瓶中，加入氯化钾溶液50mL，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h。

取出静置，放置澄清后，将悬液的上部清液用干滤纸过滤，澄清的滤液收集于干燥洁净的三角瓶中。

6.1.3土壤中铵态氮的测定6.1.3.1靛酚蓝比色法1.方法选择测定土壤铵态氮，主要有直接蒸馏法、浸提后测定法和扩散吸收法等。

直接蒸馏法是在氧化镁存在下直接蒸馏土壤，但此法在弱碱蒸馏时仍可能使一些简单的有机氮微弱水解成氨气蒸出，易使结果偏高。

浸提后测定法多采用中性盐(硫酸钾、氯化钾、氯化钠等)浸提土壤，土壤溶液中的NH4+，可选用蒸馏、比色、或氨电极法测定。

浸提蒸馏法的操作简便，易于控制条件，适合于NH4+含量较多的土壤。

氨气敏电极法测定土壤中的NH4+，操作简便，快速，灵敏度高，重复性和测定范围后很好，但仪器的质量必须可靠。

在这里我们详细介绍浸提比色法和扩散吸收法。

比色法有多种，这里介绍靛酚蓝比色法。

靛酚蓝比色法的灵敏度和准确度高，适用于大批样品自动化分析（本法测定范围0.05~0.5mg·L-1铵态氮）。

扩散吸收法利用氧化镁水悬液的弱碱性，交换吸附在土壤胶体上的铵态氮，不致破坏土壤矿质部分。

此法适用于各种类型土壤样品的测定，特别是对于还原性强的沼泽土和潜育土，可省去消除还原性物质的手续，同时，由于扩散吸收法不须蒸馏装置，设备简单，适用于大批样品的分析（本法测定范围50~300µg铵态氮）。

2.基本原理土壤浸出液中的NH4+在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的蓝色很稳定，在NH4+浓度为0.05~0.5mg·L-1范围内，其深浅与NH4+含量成正比。

3.主要仪器及试剂主要仪器：振荡机；分光光度计。

主要试剂：（1）2mol·L-1KCl溶液：称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于水中，稀释至1L。

（2）苯酚溶液：称取10g苯酚（C6H5OH，化学纯）和100mg硝基铁氰化钠（硝普钠）[Na2Fe （CN）5NO·2H2O]稀释至1L【1】。

此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

（3）次氯酸钠碱性溶液：称取10g氢氧化钠（NaOH，化学纯），7.06g磷酸氢二钠（Na2HPO4·7H2O，化学纯），31.8g磷酸钠（Na3PO4·12H2O，化学纯）和52.5g·L-1次氯酸钠（NaOCl，化学纯，即含5%有效氯的漂白粉溶液）10mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。

铵态氮---靛酚蓝比色法一、方法原理土壤浸出液中的NH4+在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定，在NH4+-N浓度为0.05mg/L-0.5 mg/L范围内，其深浅与NH4+-N含量成正比。

反应体系PH应为10.5-11.7之间。

硝普钠{硝基铁氰化钠，或称亚硝酰基五氰合铁（ⅲ）酸钠，Na2Fe(CN)5NO.2H2O}是反应的催化剂，能加速显色，增强蓝色及其稳定性。

在20℃左右室温时一般须放置1h后比色，完全显色约需2h-3h。

生成的蓝色很稳定，24h内吸收值无显著变化。

比色时在625nm处测量吸收值。

待测液中如有干扰的金属离子，可用EDTA等螯合剂掩蔽。

二、主要仪器分光光度计三、试剂（1）酚溶液：10g苯酚和100mg硝普钠（Na2Fe(CN)5NO.2H2O）溶于1L蒸馏水中。

此溶剂不稳定，须贮存于暗色瓶中，存放于4℃冰箱中，同时需温热至室温。

注意硝普钠有剧毒！（2）次氯酸钠碱性溶液：10gNaOH，7.06gNa2HPO4.7H2O，31.8gNa3PO4.12H2O和10ml 次氯酸钠{w(NaClO)=5.25%（即有效氯5%的漂白剂溶液）溶于1L水中。

此试剂应与酚溶液同样保存}。

（3）掩蔽剂：酒石酸钾钠{p(KNaC4H4O6.4H2O)=400g/L}与EDTA二钠盐溶液N2Na{p(C10H14O8)=100g/L}等体积混合。

每100ml混合液加入0.5mlNaOH（C（NaOH）=10mol/L）溶液，即得清亮的掩蔽剂溶液。

（4）NH4+-N标准溶液：0.4717g烘干的(NH4)2SO4（二级）溶于蒸馏水中，定容至1L。

此p （NH4+-N）=100mg/L贮存液。

测定当天将此溶液用蒸馏水准确稀释20倍（取5ml稀释至100ml），即为5mg/L NH4+-N标准溶液（p(N)= 5mg/L）。

（5）KCl溶液（2mol/L）：称取149.1g分析纯KCl，加水定容至1L的容量瓶中。

1 方法依据本方法依据L Y/T1228-2015 6.1铵态氮的测定 靛酚蓝比色法2 仪器和设备紫外-可见分光光度计3 分析步骤详见L Y/T1228-2015 森林土壤铵态氮的测定 靛酚蓝比色法 6.1.44 试验结果报告4.1校准曲线及线性范围按L Y/T 1228-2015 6.1.4操作，数据见表1。

表1 校准曲线数据回归方程: y =0.2334x+0.0008 r=0.9997 4.2 方法检出限在10个空白样品中分别加入5倍检出限浓度的标准物质，进行测定，按照HJ 168-2010规定MDL=S t n ⨯-)99.0,1(进行计算，结果见表2。

表2 方法检出限测定结果（N=10）由N W =mtV c c ⨯⨯-)(0计算得出方法检出限，为0.50mg/kg其中：N W — 铵态氮含量， 单位为mg/kg ；c — 由标准曲线上获得待测液的铵态氮的浓度，单位为mg/L ；0c — 由标准曲线上获得的空白溶液铵态氮的浓度，单位为mg/L ； V — 显色液的体积，50mL ； t — 分取倍数，10；m —土样质量， m=20.00g ；4.3精密度实验取高低2个浓度水平的样品，按照步骤3，分别做6次平行实验，计算出铵态氮平均值，最大相对偏差，相对标准偏差，结果见表3。

表3 精密度测试数据4.4准确度（人员比对）对同一样品，两名实验员分别做3次平行实验，计算平均值，相对偏差，检测结果见表4。

表4 人员比对测试数据5结论5.1检出限实验室检出限为0.50mg/kg。

5.2精密度样品1平均值为10.3mg/kg，最大相对偏差为2%，相对标准偏差为2%；样品2平均值为50.0mg/kg，最大相对偏差为2%，相对标准偏差为0.8%；标准中要求两个平行测定结果相对偏差≤8%。

5.3人员比对对同一样品进行人员比对，马霞测得样品的平均值为26.3 mg/kg，吴欢测得平均值为25.8mg/kg，相对偏差为1%。