《医学免疫学》实验设计
期别：xxx 班级：xx 学号：xxxxxxxx 姓名：OOO
IL-35对小鼠Ⅰ型糖尿病的治疗效果及免疫机制
【立题依据】
自身免疫性疾病（Autoimmune diseases）是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。如今越来越多的自身免疫性疾病被不断发现和认识，也越来越引起人们的关注。Ⅰ型糖尿病(T1DM 自身免疫性胰腺炎)就是其中的一员，在全球大约有2000万患者，中国至少有100万的患者，但是Ⅰ型糖尿病常常在幼儿和青少年时期发生且为一种多基因遗传病有较高的遗传度（75%），表现为明显的家族遗传性。同时，Ⅰ型糖尿病患者如治疗不善将引发严重的并发症，如失明、肾衰竭、心脏病、截肢等。因此如果能正确了解Ⅰ型糖尿病的免疫学机制，并探索更加有效治疗及预防方案，对于患者本身乃至整个家族的身体和生活质量的提高意义重大。
Ⅰ型糖尿病的免疫学发病机制是体内除了抗原提呈细胞（APC）和活化的T淋巴细胞外正常细胞几乎不表达MHC-Ⅱ类分子，研究表明IFN-γ转基因小鼠的胰岛β细胞分泌IFN-γ，由于IFN-γ刺激MHC-Ⅱ分子的表达这种小鼠的胰岛β细胞高表达MHC-Ⅱ类分子，这样以来免疫细胞就会结合并识别胰岛β细胞然后对其进行攻击，使其丧失胰岛素分泌活性，最终导致体内胰岛素缺乏。调节性T细胞（Treg)是一些CD4+T cell还可高表达IL-2受体的α链（CD25）分子，胞质中表达Foxp3转录因子的T细胞分化亚群。它的主要功能是通过抑制CD4+ Tcell和CD8+ Tcell的活化与增殖从而达到免疫的负调节作用。通过协调Treg水平来调节Ⅰ型糖尿病患者的免疫功能可能成为新的治疗手段。
白细胞介素-35（IL-35） 是2007年新发现的一种独特的具有免疫抑制功能的调节因子，属于IL—12细胞因子家族，IL-35为异源二聚，主要由活化的Treg分泌，对多种免疫细胞和细胞因子均有明显的抑制作用，参与介导机体免疫耐受的形成。IL-35是否对Ⅰ型糖尿病患者具有治疗作用及其相关的免疫机制，还不十分清楚，仍有待继续研究和解决。
《医学免疫学》实验设计
期别:xxx 班级:xx 学号:xxxxxxxx 姓名:OOO
IL-35对小鼠Ⅰ型糖尿病的治疗效果及免疫机制
【立题依据】
自身免疫性疾病(Autoimmune diseases)是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。如今越来越多的自身免疫性疾病被不断发现和认识,也越来越引起人们的关注。Ⅰ型糖尿病(T1DM 自身免疫性胰腺炎)就是其中的一员,在全球大约有2000万患者,中国至少有100万的患者,但是Ⅰ型糖尿病常常在幼儿和青少年时期发生且为一种多基因遗传病有较高的遗传度(75%),表现为明显的家族遗传性。同时,Ⅰ型糖尿病患者如治疗不善将引发严重的并发症,如失明、肾衰竭、心脏病、截肢等。因此如果能正确了解Ⅰ型糖尿病的免疫学机制,并探索更加有效治疗及预防方案,对于患者本身乃至整个家族的身体和生活质量的提高意义重大。
Ⅰ型糖尿病的免疫学发病机制是体内除了抗原提呈细胞(APC)和活化的T淋巴细胞外正常细胞几乎不表达MHC-Ⅱ类分子,研究表明IFN-γ转基因小鼠的胰岛β细胞分泌IFN-γ,由于IFN-γ刺激MHC-Ⅱ分子的表达这种小鼠的胰岛β细胞高表达MHC-Ⅱ类分子,这样以来免疫细胞就会结合并识别胰岛β细胞然后对其进行攻击,使其丧失胰岛素分泌活性,最终导致体内胰岛素缺乏。调节性T细胞(Treg)是一些CD4+T cell还可高表达IL-2受体的α链(CD25)分子,胞质中表达Foxp3转录因子的T细胞分化亚群。它的主要功能是通过抑制CD4+ Tcell 和CD8+ Tcell的活化与增殖从而达到免疫的负调节作用。通过协调Treg水平来调节Ⅰ型糖尿病患者的免疫功能可能成为新的治疗手段。
白细胞介素-35(IL-35)是2007年新发现的一种独特的具有免疫抑制功能的调节因子,属于IL—12细胞因子家族,IL-35为异源二聚,主要由活化的Treg分泌,对多种免疫细胞和细胞因子均有明显的抑制作用,参与介导机体免疫耐受的形成。IL-35是否对Ⅰ型糖尿病患者具有治疗作用及其相关的免疫机制,还不十分清楚,仍有待继续研究和解决。
1 医学微生物学与医学免疫学实验大纲
第1次 细菌形态结构
1. 观察细菌的基本形态与特殊结构
2. 革兰染色（操作）
3. 显微镜观察细菌的动力
4. 油镜的使用与保护
第2次 细菌培养与代谢
1. 培养基的制备（录像）
2. 细菌接种方法（操作，平板、斜面、液体、半固体接种）
3. 细菌生长现象观察（示教）
4. 观察细菌代谢产物及生化反应（糖发酵、H2S、吲哚试验；色素）
第3次 外界因素对细菌的影响与细菌的变异
1. 热力灭菌（高压、干烤），紫外线杀菌作用（操作，每两人一个）
2. 碘酒酒精对皮肤的消毒作用，空气细菌培养（每室一套）
3. 药敏试验（操作，抗生素对细菌作用及耐药变异）
4. 观察噬菌体的特异溶菌现象，变形杆菌的迁徙现象及对照
5. 接种脓汁标本接种血平板（每组一个，下次实验用）
6. 病原性球菌分离、鉴定实验设计
第4次 病原性球菌
1. 病原性球菌的形态染色与培养（脓汁标本，革兰染色，操作）
2. 致病性葡萄球菌的分离和鉴定（甘露醇发酵（示教）、血浆凝固酶玻片法（操作，提供菌种）、血浆凝固酶试管法（示教））
3. 抗“O”试验（结果示教）
4. 粪便标本接种于SS培养基（每人一个，下次实验用）
5. 致病性肠道杆菌分离、鉴定实验设计
第5次 肠道杆菌（1）
1. 录像
2. 肠道杆菌生化反应（糖发酵、吲哚、H2S试验）与培养特点（SS培养基上菌落）（结果示教）
3. 粪便标本中肠道致病菌的分离鉴定（操作，接种双糖铁基）
第6次 肠道杆菌（2）
1. 肠道致病菌的进一步鉴定（生化反应结果与玻片凝集（操作））
2. 肥达反应（操作）
3. 吞噬细胞吞噬功能实验设计（下次实验前准备）
第7次 免疫学诊断，凝集反应，细胞免疫体外检测
1. 录像
2. 介绍免疫学诊断
3. 玻片凝集（操作，血型鉴定）
4. 白细胞的吞噬（操作）
第8次 凝集反应与沉淀反应
1. 录像
2. 双向扩散（操作）、对流免疫电泳（示教） 2 3. 抽血（每组一人，下次实验用）
医学微生物学与免疫学实验
实验一 微生物的形状学检测 （2学时）
实验二 理化因素对微生物的阻碍（2学时）
实验三 肠道致病性细菌的分离与鉴定（4学时）
实验四 抗酸染色（2学时）
实验五 寄生虫学实验（2学时）
微生物与寄生虫学实验
序 言
本实验在于使学生加深和巩固课堂内容，并在把握系统理论知识的基础上，学习微生物与寄生虫学的差不多操作技能，通过实验加大无菌概念，培养独立工作和分析咨询题的能力，为今后有关的疾病诊断与中医中药的科学研究工作打下良好的基础。
本实验指导共包括五个试验项目，共计教学12学时，按教学打算及大纲要求供我院中医学专业、针灸推拿专业、骨伤学专业、护理学专业、中西医结合等专业学生使用。
实 验 室 规 则
本门学科实验的对象大多是病原微生物，如果不慎发生意外，不仅自身可能遭致感染，并有可能将病原微生物传给他人。因此，进入实验室必须遵守以下规则：
1. 非实验必需物品，不准带进实验室。
2．进入实验室必须穿工作服，按规定就座，保持寂静。
3．上实验课要严格遵守课堂纪律，不得高声谈笑及乱动物品，禁止吸烟和进食。
4． 实验时听从老师指导，牢固树立无菌观点，严格遵守无菌操作规程，若发生菌液污染，损坏物品等事故，应赶忙报告老师及时处理。
5．实验中用过的染菌器材如吸管，试管和用过的玻片等应及时放人含有消毒液的容器内，不得放在桌上，也不可在水槽里冲洗。
6．爱护公物，节约使用实验材料；注意安全使用水、电、煤气。 7．实验完毕，按要求整理器材物品，打扫卫生。脱下工作服，消毒洗手后，离开实验室。
8．作业应在规定时刻内完成，实验报告要求简洁扼要，字迹清晰，画图力求正确、客观。
实验一 微生物的形状学检测
一、实验目的
1、把握细菌的差不多形状（球菌、杆菌、弧菌）。
2、把握革兰氏染色的操作方法。
3、熟悉生物显微镜的使用，专门是油镜的使用和爱护；
