酚氯仿抽提dna原理

DNA和RNA提取方法及原理

DNA提取方法及原理：

1.酚/氯仿法：

酚/氯仿法是最常用的DNA提取方法之一、其原理是通过酚类物质将细胞质膜破坏，使DNA从细胞内溶解出来，然后利用氯仿的重度稠化剂作用，将DNA上层的蛋白质、脂类等杂质与下层的DNA分离。

2.盐溶液法：

盐溶液法是一种温和的DNA提取方法，适用于多种植物和动物样品。其原理是将样品细胞裂解后，加入高浓度盐溶液中，通过离心分离出DNA上层液相。

3.硅胶柱法：

硅胶柱法是一种高效纯化DNA的方法，可去除杂质并提高DNA的纯度。该方法利用硅胶柱对DNA进行吸附，去除杂质，然后通过洗脱得到纯净的DNA。这种方法常用于分离较小的DNA片段。

4.酶解法：

酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法，通过特定的酶切酶对细胞膜进行消化，将DNA释放出来。常用的酶解酶有蛋白酶K和蛋白酶E等。

RNA提取方法及原理：

1.酚酸法： 酚酸法是最常用的RNA提取方法之一、它基于RNA和DNA的相对稳定性差异，利用酚酸破坏细胞膜、沉淀RNA，然后利用酚酸与蛋白质和DNA形成复合物，分离RNA。

2.硅胶柱法：

硅胶柱法也适用于RNA提取。与DNA的硅胶柱法不同的是，RNA在硅胶柱上结合后会进行一系列的洗脱步骤，除去污染物。该方法能有效去除DNA、蛋白质、盐和其他杂质。

3.离心收集法：

离心收集法是一种简便、快速的RNA提取方法。根据RNA在水相中的溶解性，通过离心将细胞裂解液中的RNA分离出来，然后加入酒精沉淀纯化。

4.硅酸盐法：

硅酸盐法是一种特异性较高的RNA提取方法，通过利用试剂中的硅酸盐吸附RNA，并在洗涤步骤中去除杂质，从而得到纯净的RNA。

作者: 渭水凡夫 (站内联系TA) 发布: 2013-04-06

最近在博客上看到的一篇 可以作为入门级 《分子生物学十万个为什么》

和大家分享一下

用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？

使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。

使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。

缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。2. 不能完全抑制RNase的活性。

氯仿的作用？

氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。

最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）

用酚－氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？

异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？

用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。

原理：动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白（DNP）可溶于水或浓盐溶液（如1mol/L氯化钠），但在L氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白（RNP）则在L氯化钠中溶解度最大，利用这一性质可将其分开。

将沉淀物溶解于生理盐水，加入去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）溶液，使DNA与蛋白质分离开。加入固体氯化钠使其浓度达到1mol/L，使DNA溶解。加氯仿-异戊醇去除蛋白质，也可重复该步操作得较纯DNA。最后用95%乙醇沉淀DNA。

溶解：将离心后除去RNA的沉淀，用30ml生理盐水溶解，充分搅拌后，匀浆一次。加4毫升10％SDS溶液，使溶液的SDS浓度达到1％左右，边加边搅拌，放置60 ℃水浴保温10分钟（不停搅拌），冷却。加固体氯化钠，使溶液氯化钠浓度达到1mol/L，充分搅拌10分钟；

酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理

酚氯仿法提取DNA主要步骤：

1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。每个梯度脱水时间为5-10min

2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。

3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。

4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。

5.离心：12000R，7min，4℃。离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。

6.吸取上层液体加入新的离心管。

7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。

8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。

9.离心：12000R，7min，4℃。

10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。

11.离心：12000R，7min，4℃。

12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。-20℃过夜。

13.将样品取出，12000R，7min，4℃离心。

14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。

15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。

16.提取DNA完成。

溴氯仿法提取DNA的原理：

用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？

使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA

联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。

使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。

缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。2. 不能完全抑制RNase的活性。

氯仿提取dna的原理

氯仿提取DNA的方法是一种常用的DNA提取方法，其原理是通过氯仿的疏水特性和DNA的亲水特性，使DNA分子从细胞内脱离并溶于氯仿中，最后通过离心的方式分离DNA。

氯仿是一种有机溶剂，具有较高的疏水性，能与水相互分离。而DNA是一种带有负电荷的大分子，具有较强的亲水性。在细胞内，DNA通常以螺旋结构存在于细胞核中，与蛋白质、脂类等其他细胞组分共同存在。为了获取纯度较高的DNA样品，需要将DNA从细胞内分离出来。

氯仿提取DNA的步骤如下：

1.细胞破碎：首先，将待提取的DNA样品中的细胞进行破碎。可以使用机械破碎、超声波破碎或化学破碎等方法。目的是将细胞膜和细胞核膜破坏，让细胞内的DNA暴露出来。

2.细胞溶解：然后，将破碎后的细胞悬浮液转移到一个离心管中，加入适量的洗涤缓冲液（如TE缓冲液），并增加含有蛋白酶的溶液。蛋白酶的作用是降解蛋白质，使DNA从蛋白质中解离出来。

3.处理RNA：在细胞溶解步骤中，还需要添加核酸酶，以降解RNA分子，防止其被DNA污染。

4.加入酚-氯仿：接下来，在细胞溶解后的混合物中加入酚-氯仿混合溶液。酚具有亲水性，而氯仿则具有疏水性。它们的加入使混合液分为两相，上层为水相，下层为有机相，DNA主要分布于界面上。 5.离心分离：然后，将离心管放入离心机中，进行高速离心，以分离DNA。高速离心会使DNA被迅速沉淀到两相的交界处。此时，由于DNA的亲水性，能与水相结合，因而DNA以团块状或棉絮状存在于交界处。

6.沉淀清洗：将上层的水相小心转移至另一个干净的离心管中，并加入醇，如乙醇或异丙醇，沉淀DNA。醇的存在能够破坏DNA与水相的亲和力，让其从水相中沉淀出来。

7.重悬：最后，将DNA的沉淀物用稳定的溶液（如TE缓冲液）重悬。这样就得到了纯度较高的DNA溶液，可供进一步的实验使用。

总之，氯仿提取DNA的原理是通过氯仿的疏水特性和DNA的亲水特性，使DNA从细胞内脱离并溶于氯仿中，最后通过离心的方式分离DNA。该方法简单易行，可获得高纯度的DNA样品，适用于多种DNA分析和实验。