细菌芽孢染色实验报告

【实验题目】

细菌芽孢染色

【实验目的】

1. 学习并掌握芽孢染色法

2. 了解芽孢的形态特征

【实验器材】

1、 菌种：

枯草芽孢杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物、梭状芽胞杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。

2、溶液和试剂：

a) 5％孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液、无菌水

b) 香柏油、二甲苯

3、 仪器及其它用品：

普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）、试管夹等

【实验原理】

芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子，通常为圆形或椭圆形。在合适条件下，可吸水萌发，重新形成一个新的菌体。是否产生芽孢，以及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。

与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚而致密，通透性低，不易着色，但是，芽孢一旦着色就很难被脱色。利用这一特点，首先用着色能力强的染料（如孔雀绿）在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进入芽孢，水洗脱色时，菌体中的染料被洗脱，而芽孢中的染料仍保留。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。

【实验内容及步骤】

2、 具体步骤：

1)洗片、干燥

取一块载玻片，用水浸湿，用手使用去污粉洗净玻片，竖立在一边自然干燥。干燥后在玻片的一面用记号笔做好标记。方便以后水洗染料，避免洗去细菌。

2)涂片

取一块载玻片，在上边用胶头滴管加半滴无菌水，用接种环无菌操作将沾有菌的接种环置于载玻片上的无菌水种涂抹，待看到微弱的浑浊即可；（注意取菌不要太多）

3)加热固定

涂菌面朝上，通过火焰以干燥并固定菌物，固定过程应使载玻片通过火焰2-3次，注意温度的控制，过热的温度会将细菌杀死，温度以手背感觉微微发烫为标准；

4)染色

向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌位置，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸气并维持5min，加热时注意补充染液，切勿涂片干涸。

细菌的特殊染色法实验报告

一、实验目的

学习掌握芽孢、荚膜和鞭毛的染色原理和方法。

二、实验原理

芽孢染色法是根据细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理,用不同的染料进行染色，使芽孢和菌体呈不同颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，当用弱碱性染料孔雀绿在加热的情况下进行染色时，此染料可以进入菌体及芽孢使其着色，而进入芽孢的染料则难以透出。若再复染(蕃红液)，则菌体呈红色而芽孢呈绿色。观察荚膜通常采用负染色法，即将菌体染色后，再使背景着色，从而把荚膜衬托出来。观察鞭毛是采用在染色的同时将染料堆积在鞭毛上使它加粗的方法。细菌只有在个体发育到一定的时期才具有鞭毛，一般在多次移种之后，在其旺盛生长阶段染色。

三、实验用品

1、器材

(1)显微镜(2)载波片(3)接种环(4)酒精灯(5)香柏油(6)二甲苯(7)

无菌水(8)1%盐酸(9)电炉(10)墨汁(11)20%CuSO4(12);95%乙醇(13)擦镜纸等

2、试剂和材料

(1)菌种:巨大芽孢杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌等

(2)芽孢染色用7.6%饱和孔雀绿液、0.5%蕃红液(或石炭酸复红液和吕氏美蓝液)。

(3)莢膜染色用刚果红、明胶水溶液、吕氏美蓝液等。

(4)鞭毛染色用硝酸银染色液(A、B液)或Leifson染色液(A、B、C液)。

四、实验方法与步骤

1、芽孢染色:有两种常用的方法。

(1)孔雀绿染色法:取干净载片按无菌法取巨大芽孢杆菌菌体少许制成涂片，风干固定后，在涂菌处滴加法7.6%的孔雀绿饱和水溶液，染色10分钟后，用水冲洗，再用0.5%恭红花红液染色彩1分钟，水洗，风干后镜检。芽孢被染成绿色，营养体呈红色。

(2)石炭酸复红染色法:在一支小试管(10X 100mm)中，滴入3--4滴蒸溜水，用接种环取巨大芽孢杆菌于水中，充分搅匀，使菌体分散，制成较浓的菌悬液。然后滴加等体积的(3-4滴)石炭酸复红液摇匀。将此试管放入沸水浴中煮10-15分钟,使芽孢及菌体着色。取此菌液体2--3环在洁净的载片上做成涂片，白然干燥通过火焰固定后，在白米水下缓缓冲洗，使菌体脱色，再用吕氏美蓝液复染1-2分钟。用水洗去多余染液，轻轻用吸水纸吸去水分，干后镜检，结果可见芽孢被染成红色，菌体呈现蓝色。

山 东 大 学 实 验 报 告

细菌的芽孢染色和形态观察

胡雪芳 201300261033

【实验目的】

1. 掌握芽孢染色方法，观察芽孢形态特征。

2. 了解芽孢的性质与染色的关系。

3. 巩固显微镜的使用和无菌操作技术。

【实验原理】

1. 芽孢

1.1 芽孢性质

芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆

性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子（endospore），通常为圆形

和椭圆形。是否产生芽孢以及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨

大等特征是细菌分类的重要指标。

与正常菌体相比，芽孢壁厚，通透性低而不易着色，一般染色法只

能使菌体染色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状），但是，芽孢一旦

着色就很难被脱色。

芽孢染色法根据芽孢特点设计，除了用着色力强的染料外，还需要

加热，以促进芽孢着色。当染芽孢时，菌体也会着色，然后水洗，芽

孢上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体

复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，

便于观察。

山 东 大 学 实 验 报 告

1.2 芽孢的结构

芽孢的结构如下：

图1. 细菌芽孢构造模式图

芽孢囊：是产生芽孢菌的营养细胞外壳 孢外壁：主要含脂蛋白，通透性差（有的芽孢无此层） 产芽孢细菌 芽孢衣：主要含疏水性角蛋白，抗酶解、抗药物，多价 阳离子难通过 芽孢 皮层：主要含芽孢肽聚糖及DPA-Ca，体积大，渗透压高 芽孢壁：含肽聚糖，可发展为新细胞的壁 核心 芽孢质膜：含磷脂、蛋白质，可发展成新细胞的壁 芽孢质：含DPA-Ca、核糖体、RNA和酶类 核区：含DNA

2. 芽孢染色的染料——孔雀绿

孔雀绿是一种弱碱性染料，芽孢染色主要依赖于对芽孢结构特征的

染色和利用——壁厚，通透性差等。通过依靠加热的方法促进该染料

穿过厚壁进入了芽孢，然后利用壁厚，在水洗脱时又难以出来的特征，

使芽孢保有初染染料。而该染料与细胞的结合能力较弱，被水洗后，

细菌的荚膜染色、芽孢染色及其运动性观察实验报告

马子午

生命科学学院 食品科学与工程专业 14101班 02号

1.引言

1.1实验目的

学习荚膜染色技术，观察和分辨细菌的荚膜形态，进一步理解细菌细胞的特殊结构；了解细菌芽孢染色的原理意义，掌握芽孢染色的方法。学习水浸片的制作方法，观察细菌的运动。

1.2实验原理

芽孢染色法：芽孢具有厚而致密的壁，通透性低，对各种不利因素如高温、冷冻、射线、干燥、化学药品和染料等具有很强的抵抗力。因此，当用一般染色方法染色时，只能使菌体着色，芽孢不易着色（芽孢呈透明）或仅显很淡的颜色。威力使芽孢着色便于观察，需采用特殊染色法——芽孢染色法。先用一弱碱性染料，如孔雀绿或碱性品红在加热条件在进行长时间染色，此染料不仅可以进入菌体，也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经睡洗脱掉，而进入芽孢的染料则难以透出。若再用复染液（如番红染液）或衬托染液（如黑色素液）处理，芽孢和菌体就呈现不同的颜色，借此将芽孢与菌体区别开。

荚膜染色法：荚膜的主要成分是多糖，多糖与染料亲和力差，不易着色，但荚膜通透性较好，某些染料可通过荚膜使菌体着色，正因如此，染色后呈浅色或无色的菌体就形成了一个明显的色差，荚膜染色常采用负染法，即将背景染成淡蓝色，此法使菌体和背景显色以衬托无色的荚膜。

细菌的运动性观察：细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的主要特征之一，因鞭毛较细，在普通光学显微镜下不易观察，但有鞭毛的细菌在液体中能借助鞭毛的旋转和摆动使菌体能定向的运动，可以借此判断细菌是否有鞭毛。

2.材料与方法

2.1材料与试剂

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis），孔雀绿，番红染液，无菌水，6%的葡萄糖，胶质芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus），黑色素液，甲醇，甲基紫染液，香柏油，二甲苯。

2.2仪器与设备

显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯，接种环，镊子，试管，凹玻片，擦镜纸，吸水纸。