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油镜及荧光显微镜的原理及使用方法(PPT课件)

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荧光显微镜的基本原理及应用PPT课件

荧光显微镜的基本原理及应用PPT课件
个性化定制
未来荧光显微镜的发展将更加注重个性化定制，根据不同 领域和不同需求，定制特定的光学系统和成像方案，以满 足不同用户的需求。
06 参考文献
参考文献
参考文献1
介绍荧光显微镜的基本原 理，包括激发光、发射光 和滤色片的原理和作用。
参考文献2
介绍荧光显微镜的应用， 包括生物学、医学、化学 等领域的应用案例和效果。
荧光显微镜的基本原 理及应用ppt课件
目录
CONTENTS
• 荧光显微镜简介 • 荧光显微镜的基本原理 • 荧光显微镜的应用 • 荧光显微镜的优缺点 • 荧光显微镜的发展趋势与未来展望 • 参考文献
01 荧光显微镜简介
荧光显微镜的发展历程
01
02
03
荧光显微镜的起源
19世纪末，科学家开始研 究荧光现象，并尝试将其 应用于显微镜中。
多色观察
荧光显微镜可以同时观察多个 荧光标记物的表达，通过不同 的荧光颜色来区分不同的标记 物。
非破坏性
荧光显微镜观察样本时不会对 样本造成破坏，因此可以观察
同一样本的不同层面。
缺点
01
02
03
04
光毒性
荧光显微镜需要使用高强度光 源来激发荧光，长时间观察会
对样本造成光毒性损伤。
光漂白
荧光标记物在受到高强度激发 光照射时容易发生光漂白，导
环境化学
荧光显微镜用于检测环境中的有害物 质和污染物。例如，利用荧光标记的 探针检测水体中的重金属离子或有机 污染物。
04 荧光显微镜的优缺点
优点
高灵敏度
荧光显微镜能够检测到非常微 弱的荧光信号，因此可以用于
观察低浓度的荧光标记物。
高对比度
荧光显微镜能够通过选择合适 的激发和发射波长，获得高对 比度的荧光图像。

实验三__显微镜油镜的使用及细菌形态观察ppt课件

实验三__显微镜油镜的使用及细菌形态观察ppt课件

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菌体 水滴
涂片
载玻片
完整版课件
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染色前必须固定细菌，其目的是： 一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。 二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和
化学固定两种方法。固定时尽量维持细胞原 有的形态。
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24
⑵ 干燥：把上面涂好的片于室温下自然干燥。
⑶ 涂面朝上，在火焰上方过几次以热固定菌体（此操 作的目的是使得细胞质凝固，以固定细胞形态，并使 之牢固附着在载玻片上）。固定时通过火焰1—2次即 可。
D=λ/2n·sin(α/2 )
式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距 离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ：镜口角（即入射角）。
D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰
完整版课件
6
油镜使用的原理
油镜，即油浸接物镜。当光线由 反光镜通过玻片与镜头之间的空 气时，由于空气与玻片的密度不 同，使光线受到曲折，发生散射， 降低了视野的照明度。若中间的 介质是一层油（其折射率与玻片 的相近），则几乎不发生折射， 增加了视野的进光量，从而使物 象更加清晰。
碎玻片或损伤镜面。
4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更 不可倾斜拿。
5.油镜使用结束后，物镜用擦镜纸擦三遍：第一遍擦去多余的香柏 油；第二遍擦镜纸蘸上二甲苯再擦镜头；第三遍再用干净的擦 镜纸擦去多余的二甲苯。
6.显微镜应存放在阴凉用擦镜纸擦干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐
蚀镜片。
完整版课件
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根据革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌之间细胞壁的结 构差异来达到染色的目的的。
先用结晶紫初染，所有的细菌都被染成初染料的蓝 紫色；
然后用碘媒染，它与结晶紫结合成结晶紫—碘复合 物，从而增强了染料与细菌的结合力。

实验三__显微镜油镜的使用及细菌形态观察ppt课件

实验三__显微镜油镜的使用及细菌形态观察ppt课件
根据公式D=λ/2n·sin(α/2 ) ，增大分母，使得D 值减小，分辨率增大。
7
显微镜保养和使用中的注意事项
1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视
接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压 碎玻片或损伤镜面。 4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更 不可倾斜拿。 5.油镜使用结束后，物镜用擦镜纸擦三遍：第一遍擦去多余的香柏 油；第二遍擦镜纸蘸上二甲苯再擦镜头；第三遍再用干净的擦 镜纸擦去多余的二甲苯。 6.显微镜应存放在阴凉用擦镜纸擦干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐 蚀镜片。
D=λ/2n·sin(α/2 )
式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距 离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ：镜口角（即入射角）。
D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰
6
油镜使用的原理
油镜，即油浸接物镜。当光线由 反光镜通过玻片与镜头之间的空 气时，由于空气与玻片的密度不 同，使光线受到曲折，发生散射， 降低了视野的照明度。若中间的 介质是一层油（其折射率与玻片 的相近），则几乎不发生折射， 增加了视野的进光量，从而使物 象更加清晰。
⑷ 初染：滴数滴结晶紫于菌膜上（以刚好完全覆盖菌 膜为宜）初染1--2分钟min，水洗。
⑸ 媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖约1min，水洗。
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⑹ 脱色：用滤纸吸去载玻片上面的残水，将玻片倾斜， 用95％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止， 约20—30s，立即用水冲净酒精。
注意：革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是整个操 作的关键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌， 脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌。

荧光显微镜的原理和使用方法课件

荧光显微镜的原理和使用方法课件
荧光显微镜的原理和使用方法课 件
目录
• 荧光显微镜简介 • 荧光显微镜的原理 • 荧光显微镜的使用方法 • 荧光显微镜的维护与保养 • 荧光显微镜的应用实例
01
荧光显微镜简介
荧光显微镜的发展历程
01
02
03
荧光显微镜的起源
19世纪末，随着光学和化 学的发展，荧光显微镜开 始出现。
荧光显微镜的发展
荧光灯泡表面不可直接触摸，清洁时 应使用软布或手套。
清洁载物台
用干燥的软布擦拭载物台，避免污渍 和划痕。
荧光灯泡的更换与保养
更换荧光灯泡
当荧光灯泡亮度降低或出现闪烁时，应更换荧光灯泡。更换时应关闭电源，并按照说明书正确操作。
保养荧光灯泡
荧光灯泡应在低电流下使用，避免频繁开关灯，以延长使用寿命。
常见故障排除与维修
20世纪初，荧光显微镜技 术逐渐成熟，并广泛应用 于生物学、医学等领域。
荧光显微镜的改进
随着科技的进步，现代荧 光显微镜在分辨率、成像 质量、自动化等方面不断 得到提升。
荧光显微镜的基本组成
光源
发出特定波长的光，激 发样品中的荧光物质。
滤色片
选择性地透过特定波长 的光，阻挡其他波长的
光。
物镜
将样品中的荧光图像放 大，并传递给目镜或摄
电源故障
检查电源插头是否松动，电源线 是否破损。如有问题，应更换电
源线或修理电源插座。
图像模糊
可能是镜头污染或载物台移动造成 的。应清洁镜头和载物台，确保其 表面干净无痕。
荧光灯泡不亮
可能是灯泡损坏或电路故障。应检 查灯泡是否正常，如有问题应更换 ；同时检查电路是否正常，如有故 障应及时维修。
05
荧光显微镜的调试

实验一、油镜的使用和细菌三型的观察ppt课件

实验一、油镜的使用和细菌三型的观察ppt课件
香柏油中，容易撞上载玻片； • 使用油镜后处理：1.镜头的处理；2.玻片的处理．
精选ppt
4
作业
• P18 • 1.结果，分别绘出你在油镜下观察到的细菌
三种形态并注明放大倍数。
• 2.思考题：(1)，(4)．
• 录象观看：
精选ppt
5
感谢亲观看此幻灯片，此课件部分内容来源于网络， 如有侵权请及时联系我们删除，谢谢配合！
分辨率=λ/2n·sin(α/2 )
分辨率：物镜分辨出物体两点间的 最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。
：镜口角（即入射角）。
值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰精选pptBiblioteka 2• 油镜使用的原理
油镜，即油浸接物镜。当光 线由反光镜通过玻片与镜头 之间的空气时，由于空气与 玻片的密度不同，使光线受 到曲折，发生散射，降低了 视野的照明度。若中间的介 质是一层油（其折射率与玻 片的相近），则几乎不发生 折射，增加了视野的进光量， 从而使物象更加清晰。
实验一、油镜的使用和细菌三形观察
一、目的要求 1.掌握油镜的原理和使用方法 2.观察细菌的三种形态 二、原理 为什么要使用油镜？ 1.增加照明亮度 2.增加显微镜的分辨率
分辨率＝λ ／2NA λ 为光波波长 NA为物镜的数值孔径值 NA=n*sinα
精选ppt
1
• 显微镜的放大倍数和分辨率
1.放大倍数：物镜放大倍数×目 镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率:是表示显微镜 辨析两点之间距离的能力。可用 公式表示为：
根据公式分辨率=λ/2n·sin(α/2 ) ，增大分母，使得
分辨率值减小，分辨率增大。
精选ppt
3
使用油镜的操作步骤: 1.低倍镜观察。 2.高倍镜观察。 3.转出高倍镜头，滴加香柏油后用油镜观察。 4.擦拭显微镜镜头时，应向一个方向擦拭。

微生物学显微镜油镜的使用和细菌形态的观察PPT[优选版]

微生物学显微镜油镜的使用和细菌形态的观察PPT[优选版]
• 而革兰氏阴性菌由于细胞壁的肽聚糖层较薄、类脂含 量高，所以当脱色处理时类脂被乙醇溶解，细胞壁透 性增大，结晶紫—碘复合物被洗脱，复染时细胞被染 上复染剂的颜色（红色）。
（三）、实验操作
1，采用三区涂片法 步骤：
1、在玻片的左右端各加1滴水，用无菌接种环挑 少量金黄色葡萄球菌与左边水滴充分混合成仅有 金黄色葡萄球菌的区域，并将少量菌液延伸至玻 片的中央。
、 照明装置(聚光镜、 虹彩光 圈、 反光镜等)。 它使检视物 放大,造成物象。
2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒
、物镜转换器、载物台、载物 台转移器、粗调节器、细调节 器等部件。它起着支持、调节 、像原理
显微镜的放大倍数和分辨率
1.放大倍数=接物镜放大倍数× 接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为：
D=0.61λ/n·Sinα/2
式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 ：可见光的波长（平均m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
D值越小，分辨率越高，看到的物象越清晰
（二）油镜使用的原理
油镜，即油浸接物镜。当光
线由反光镜通过玻片与镜头
之间的空气时，由于空气与 微生物学显微镜油镜的使用和细菌形态的观察
有芽孢的杆菌和绝大多数球菌以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏阳性反应；
玻片的密度不同，使光线受 第三遍再用干净的擦镜纸擦去多余的二甲苯。
以画图的方式完成该实验的报告
到曲折，发生散射，降低了 ：可见光的波长（平均 m)
n: 物镜和被检标本间介质的折射率。
当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。

实验三__显微镜油镜的使用及细菌形态观察 ppt课件


实验三__显微镜油镜的使用及细菌 形态观察
由于革兰氏阳性菌细胞壁主要由肽聚糖形成网状结构、 壁厚、类脂质含量低，脱色时网孔收缩，结晶紫—碘 不易被洗脱而保留在细胞内，复染时仍保持蓝紫色。
而革兰氏阴性菌由于细胞壁的肽聚糖层较薄、类脂含 量高，所以当脱色处理时类脂被乙醇溶解，细胞壁透 性增大，结晶紫—碘复合物被洗脱，复染时细胞被染 上复染剂的颜色（红色）。
实验三 油镜使用和细菌形态观察
1、显微镜油镜的使用 2、细菌形态的观察（示教） 3、革兰氏染色 4、芽胞染色
实验三__显微镜油镜的使用及细菌 形态观察
（一）显微镜油镜的使用
一、实验目的 学习并掌握普通光学显微镜的构造和油镜 的使用技术及维护的基本知识
实验三__显微镜油镜的使用及细菌 形态观察
二、显微镜及油镜使用原理
根据公式D=λ/2n·sin(α/2 ) ，增大分母，使得D 值减小，分辨率增大。
实验三__显微镜油镜的使用及细菌 形态观察
显微镜保养和使用中的注意事项
1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。
2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度
3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视 接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压 碎玻片或损伤镜面。
注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取 菌不宜过多，涂片要均匀，不可过于浓厚
实验三__显微镜油镜的使用及细菌 形态观察
菌体 水滴
涂片
载玻片
实验三__显微镜油镜的使用及细菌 形态观察
染色前必须固定细菌，其目的是： 一是杀死细菌并使菌体粘附于玻片上。 二是增加其对染料的亲和力。常用的有加热和
4.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更 不可倾斜拿。

医学PPT课件显微镜油镜的使用


实验用品
小试管 培养皿 吸管 三角玻扒 烧杯 量筒 玻棒 药匙 剪刀
高压灭菌器 营养 半固体 蛋白胨水 天平 玻璃吸管 标签贴纸 铁丝 电炉
实验程序
（一）培养基的配制
同学们先将试管贴好标签。注明培养基名称，组别， 日期。标签粘贴位置在离管口1/3管身处。 注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。
实验程序Ⅱ（显微镜的使用）
显微镜保养和使用中的注意事项： 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证 光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用 油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可 使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯， 以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘 图。 5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不 可单手拿，更不可倾斜拿。 6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而 腐蚀镜片。
2. 辨认细菌的特殊构造 变形杆菌的周鞭毛 铜绿假单胞菌绿脓杆菌丛鞭毛 破伤风芽胞梭菌芽孢 肺炎球菌荚膜
实验材料
显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水 纸等。
细菌三型：葡萄球菌、大肠杆菌、霍乱弧 菌等示教片。
细菌特殊结构：变形杆菌、绿脓杆菌、破 伤风梭菌等细菌的特殊结构示教片。
基本形态的观察
金黄色葡萄球菌
接种菌名及接种划线方式、接种工具：
细菌：枯草杆菌，大肠杆菌，单球菌，谷氨酸菌，假单孢杆
菌，巨大芽孢杆菌（6支） （接种方式：“之”字划线，接种工具：接种环）
霉菌：黑曲霉，黄曲霉，根霉（3支）
（接种方式：点植或划直线，接种工具：接种钩或接种环）
酵母菌：面包酵母菌，古巴酵母菌，假丝酵母菌（3支）

实验一显微镜油镜的使用课件


油层制备
在载玻片上滴加适量香柏油，用玻璃 棒将油均匀涂布在载玻片上，形成一 层透明的油膜。
04
实验结果及分析
实验结果展示
使用油镜观察到细胞形态清晰，色彩 鲜艳，结构分明。
实验过程中操作规范，未出现损坏显 微镜或影响观察的情况。
结果分析
油镜具有高倍率放大效果，能够更清晰地观察细胞细节。
使用油镜观察时，需注意使用方法，避免油污染和损坏显微镜。
实验一显微镜油镜的使用课 件
contents
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果及分析 • 实验总结及建议
01
实验目的
掌握油镜的使用方法
油镜是显微镜中使用最高倍数的镜头，通过使用油浸法可以 更加清晰地观察到样本的细微结构。学习如何正确地使用油 镜对于观察和识别细胞等样本具有重要意义。
误差来源及改进方法
误差来源
01
02
油镜使用不当导致观察效果不佳。
显微镜本身精度不高或损坏。
03
改进方法
04
仔细阅读油镜使用说明书，了解正确的使 用方法。
05
06
对显微镜进行定期维护和校准，确保其精 度和稳定性。
05
实验总结及建议
实验总结
01 实验目的
02 实验原理
03 实验步骤
04 实验结果
05 实验分析
掌握显微镜的使用技巧
使用显微镜时需要注意正确的操作方法和安全事项，例如如何调节焦距、如何更 换镜头、如何保护眼睛等。掌握显微镜的使用技巧对于提高观察和识别样本的能 力具有重要意义。
使用显微镜时应该注意保持身体姿势稳定，避免过度用力或快速移动，以免损坏 显微镜或造成意外伤害。同时还需要注意保持实验室整洁和卫生，遵守实验室规 定。
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3．用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置， 调整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。
4．放置标本片，调焦后即可观察。
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荧光显微镜的使用方法
注意事项： 1.末装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤； 2.用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊油镜； 3.高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需经5分钟后才
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压制滤板
压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过，提供相应波 长范围的荧光。
紫外光
紫外光压制滤板
紫 外蓝光压制滤板
紫蓝光压制滤板
可见光
>510nm
>460nm
16
荧光显微镜的种类
落射式
透射式
17
荧光显微镜的主要部件
落射式
• 汞灯光源 • 激发滤版 • 分光镜 • 压制滤版
透射式
• 汞灯光源 • 激发滤版 • 暗场聚光镜 • 压制滤版
能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。
21
Thank You
22
放映结束 感谢各位的批评指导！
谢 谢！
让我们共同进步
23
18
300-490nm
520-560nm >510nm
19
荧光显微镜的使用方法
1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。
2．落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发 滤版／分光镜／压制滤板。
透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的 激发滤版，在物镜的后面装上相应的压制滤板。
13
激发滤板
根据光源和荧光色素的特点，可选用以下三类激发滤板， 提供一定波长范围的激发光。
400nm 可见光
紫外光激发滤板
紫 外蓝光激发滤板
紫蓝光激发滤板
400nm 紫外光
300-450nm 光
350-490nm 光
14
分光镜
•分光镜反射短波，透射长波。 •短波激发光在分光镜处反射，由 物镜到荧光物质，产生的长波长 发射光经物镜返回，并透过分光 镜。
如吖啶橙，能使细胞内的DNA呈绿色荧光；RNA呈红色荧光。
10
荧光显微镜
➢荧光显微镜(Fluorescence microscope) 是以紫外线为光源， 用以照射被检物体， 使之发出荧光， 然后在显微镜下观察物体的 形状及其所在位置。
➢荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、 运输、化学物质的分布及定位等。荧光显微 镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工 具之一。
3
光学显微镜的使用方法
•低、高倍镜观察 •进一步放大的部分移到视野的中心
4
光学显微镜的使ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ方法
•集光器上升到最高位置 •光圈开到最大
5
光学显微镜的使用方法
•高倍镜头离开通光孔，在需观 察部位的玻片上滴加一滴香柏油 •转换油镜时，从侧面水平注视 镜头与玻片的距离
6
光学显微镜的使用方法
•用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。 不出现物象 目标不理想
光学显微镜的使用方法 及注意事项
荧光显微镜的使用原理
1
1 光学显微镜的使用方法 2 光学显微镜注意事项 3 荧光显微镜的使用原理
2
光学显微镜
➢光学显微镜（Optical Microscope， 简写OM）是利用光学原理，把人眼所 不能分辨的微小物体放大成像，以供 人们提取微细结构信息的光学仪器。
11
12
汞灯光源
•多采用200W的超高压汞灯作光源。 •原理：电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光 量子的结果。 •作用：它发射很强的紫外和蓝紫光，足以激发各类荧光物质， 因此，为荧光显微镜普遍采用。 •注意：超高压汞灯也散发大量热能。因此，灯室必须有良好 的散热条件，工作环境温度不宜太高。
低倍→高倍→油镜
低倍→油镜
•油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和 标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。
7
光学显微镜注意事项
1.持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势； 2.水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台， 如果沾污应立即擦净； 3.放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反 放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜； 4.不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也 不要任意拆卸各种零件，以防损坏； 5.使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内。
8
荧光显微镜的使用原理
9
什么是荧光？
概念：物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能 状态，再回到低能状态时释放出的光。 即：物质吸收短波光，发射出的长波光。
分类
自发性荧光 细胞内的成分经短波长照射后，可以发出荧光
一般很微弱，如叶绿素。
诱发性荧光 细胞内的成分经紫外线照射后不发荧光，但
与荧光染料结合后可呈现一定颜色的荧光