革兰氏染色实验报告

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细菌革兰氏染色实验报告

作者:刘冲

地址:山东大学

摘要:本次实验是通过一种特殊的染色方法-----革兰氏染色法进行细菌鉴定。

细菌一般可分为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌,本实验将通过革兰氏染色使细菌

呈现不同的颜色以达到鉴别菌种的目的。革兰氏阴性菌将呈现红色,革兰氏阳性

菌将呈现紫红色。要想达到此目的,要求革兰氏染色必须成功。因此,在实验中

要特别注意革兰氏染色的注意事项和影响实验成功的关键因素。除了掌握革兰氏

染色法外,我还掌握了油镜的使用。实验得到了应有的结果,通过其颜色不同鉴

别了实验菌种的革兰氏阴阳性。

关键词:革兰氏染色 细菌 鉴定 颜色 油镜

前言:本实验的目的主要是通过动手操作使我们学习并掌握革兰氏染色法,了解

革兰氏染色的原理,巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。革兰氏染色法可把细

菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两种类型,这是由这两种细菌细胞壁结构和组成

的差异所决定的。(细胞壁的组成结构比较可看下图)革兰氏染色有很大的意义,

主要如下鉴别细菌、选择药物、细菌致病性(革兰氏阳性菌能产生外毒素,革兰

氏阴性菌能产生内毒素,两者的致病作用不同)。因此,革兰氏染色法有着广阔

的应用前景。在若干疾病中中,有很多都是由细菌引起的。在生活中,细菌无处

不在,不会由单一的菌种存在(除了特殊培养以外)。因此,在探明病人病因时

了解致病菌种是非常重要的。革兰氏染色可以将病菌分为G+ G- 两种类型,我们

可以通过这种方法对菌种加以鉴别,在医学上加以应用。利用革兰氏阴阳性可以

了解细菌的致病性情况,应用于医学造福人类。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1菌种

大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌

1.1.2 试剂

试剂:革兰氏染液、草酸铵结晶紫染液、碘液、95%乙醇、番红复染液、水

仪器:酒精灯、载玻片、显微镜、双层瓶(内装香柏油和二甲苯)、擦镜纸、接

种环、试管架、镊子、载玻片夹子、滤纸、滴管

1.2 方法

操作步骤示意图:

制片 干燥、固定

初染 媒染 水 媒染

脱色 水

水 复染 镜检 晾干 步骤(一)

制片。分别取大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌

按常规方法依次进行涂片(不宜过厚)、干燥(可以用酒精灯烘干)和固定。

步骤(二)

初染。滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位,染色1-2min后倾去染液,

水洗至流出水无色。

步骤(三)

媒染。先用卢戈氏碘液冲去残留水迹,再用碘液覆盖1min,倾去碘液,

水洗至流出水无色。

步骤(四)

脱色。将玻片上残留水用吸水纸吸去,在白色背景下用滴管流加95%乙醇

脱色(一般20-30s),当流出液无色时立即用水洗去乙醇。

步骤(五)

复染。将玻片上残留水用吸水纸吸去,用番红复染液染色2min,水洗,吸

去残水晾干。

步骤(六)

镜检。向涂片涂菌部位滴加适量香柏油,进行油镜观察。

2 结果与分析

2.1结果

图1大肠杆菌 图2 枯草芽孢杆菌

如图是油镜下细菌涂片的照片。可以看出,

枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌呈紫红色,属

革兰氏阳性菌;大肠杆菌呈红色,属革兰氏阴性

菌。 如下表:

图3 金黄色葡萄球菌

表1 实验结果分析 菌名 菌体颜色 细菌形态 结果

大肠杆菌 红色 椭圆状

G-

金黄色葡萄球菌 紫红色 圆形,团聚 G+

枯草芽孢杆菌 紫红色 杆状 G+

2.2分析

可以看出,枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌呈紫红色,属革兰氏阳性菌;大

肠杆菌呈红色,属革兰氏阴性菌。通过其在油镜下显色不同,即其革兰氏阴阳性

不同区分不同菌种。

2 小结

该小结共包括两部分。

1、 实验内容:

①通过本次实验,掌握了革兰氏染色的具体操作过程,锻炼了自己的动手操作能力,学会了通过革兰氏染色辨别细菌菌种。

②实验成功关键之一:选用活跃生长期长的菌种染色,老龄的革兰氏阳

性细菌会被染成红色而造成假阴性。

③实验成功关键之二:涂片不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性。

④实验成功关键之三:脱色是革兰氏染色是否成功的关键,脱色不够造

成假阳性,脱色过度造成假阴性。

⑤关于油镜的使用,已知香柏油的折射率是1.52,玻璃的折射率是1.55,

两者的折射率相近,因此用香柏油做油镜实验。

⑥了解革兰氏染色法原理:

G﹢菌:细胞壁厚,肽聚糖网状分子形成一种透性障,当乙醇脱色时,

肽聚糖脱水而孔障缩小,故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。

Gˉ菌:肽聚糖层薄,交联松散,乙醇脱色不能使其结构收缩,其脂

含量高,乙醇将脂溶解,缝隙加大,结晶紫-碘复合物溶出细胞壁,沙黄

复染后呈红色。

2、 实验过程:

① 实验开始前,认真观察了老师示范,并做了相关记录。

② 实验过程中应注意,加热时使用载玻片夹及试管夹,以免烫伤。

③ 使用染液时应避免沾在衣物上。

④ 使用乙醇时勿靠近火焰。

⑤ 实验后要洗手。

⑥ 实验结束以后,要自觉把油镜擦干净,不易擦除的污点可以涂适量二

甲苯然后擦除。

3 参考文献

沈萍,陈向东. 微生物学实验 [M]. 4版.北京;高等教育出版社,2007