生物化学实验指导

实验一植物DNA的提取与测定一、目的本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA的原理和方法，进一步了解DNA的性质。

二、原理细胞中的DNA绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。

提取DNA时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA从抽提液中沉淀出来。

DNP与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。

以NaCl溶液为例：RNP在0.14 mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP在其中的溶解度仅为纯水中的1％。

当NaCl浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP的溶解则随之不断增加。

当NaCl浓度大于1mol/L时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2倍，因此通常可用1.4 mol/L NaCl提取DNA。

为了得到纯的DNA制品，可用适量的RNase处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。

关于植物总DNA的提取主要有两种方法：1．CTAB法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇中。

2．SDS法：利用高浓度的阴离子去垢剂SDS（sodium dodecyl sulfate，十二烷基硫酸钠）使DNA与蛋白质分离，在高温（55～65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。

《生物化学》实验指导实验室规则一、实验目的生物化学是医学教育中的一门实践性较强的基础学科。

实验教学是过程的重要组成部分，是理论教学的延伸和补充。

实验目的是：1、初步学会生物化学实验的基本操作技能及实验研究的基本方法。

2、熟悉生物化学实验原理，了解一些临床生化检验项目。

3、培养严肃认真的工作方法、实事求是的科学态度、团结协作的工作作风和观察分析、思考、独立解决问题的能力。

二、实验基本要求实验教学包括实验前准备、实验操作、整理实验结果、书写实验报告等环节，为了提高实验效果，实现实验目的，要求学生必须做到以下几点。

（一）实验前1、仔细阅读实验指导，了解实验目的和要求，充分理解实验原理，熟悉实验步骤、操作程序和注意事项。

2、预测实验各个步骤可能得到的结果，对预期实验结果能做出合理的解释。

3、注意和估计实验中可能发生的误差，并制定防止误差的措施。

（二）实验时1、保持实验室肃静，不能进行与实验无关的活动。

2、在教师或实验技术人员的指导下，熟悉仪器的构造、性能及操作规程。

3、实验器材摆放整齐，有条不紊、装置正确。

4、按照实验步骤，严肃认真的循序操作，不能随意更动。

5、爱护公物，注意节省实验器材和药品。

注意安全，严防触电、火灾、酸碱灼伤及中毒事故的发生。

6、仔细、耐心地观察实验田中出现的现象，随时客观的记录实验结果，以免发生错误或遗漏。

实验条件应始终保持一致，如有变动,应加文字说明。

（三）实验后1、整理实验结果，书写实验报告，按时交给指导教师评阅。

2、整理实验仪器和清洗玻璃仪器，关闭仪器、设备和电源。

清点实验器材，办理借还手续。

3、做好实验室清洁卫生工作，关闭水、气阀门，切断电源，关闭门窗，确保安全。

实验一生化实验基本操作一、实验目的通过基本操作训练，学会熟练进行进行玻璃仪器洗涤；吸量管使用；溶液的混合；离心机使用；７２１型分光光度仪使用。

二、实验用品烧杯、试管；吸量管、移液管；旋涡混合（振荡）器、玻璃棒；离心机使用；７２１型分光光度仪三、实验内容及步骤（一）玻璃仪器的洗涤在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的重要环节。

第一部分生物化学与分子生物学概论本部分的内容为生物化学实验中所涉及的主要原理。

介绍如何正确记录实验过程及书写实验报告的一般规则，是训练学生进行正规实验寻林的重要内容。

普通实验技术包括玻璃仪器的洗涤，洗液的配制，吸量管的使用、混匀的方法以及过滤、离心等一般实验室技术。

实验样品的制备着重讨论在生物化学实验中，血液、尿液样品及组织材料的采集和处理，匀浆制备和组织浸出液制备。

离心分离技术、电泳原理、分光分析、层析分离技术，重点讨论这些重要技术的原理，内容则尽可能简洁扼要，作为具体实验内容的参考。

一.实验记录和实验报告的书写实验是在理论指导下的科学实践，目的在于经过实践掌握科学观察的基本方法和技能，培养学生科学思维、分析判断和解决实际问题的能力。

也是培养探求真知、尊重科学事实和真理的学风，培养科学态度的重要环节。

（一）实验记录记录实验中观察到的现象、结果和数据，及时地记录在激烈路本上。

原始数据必须准确简练、详尽、清楚。

记录时不能夹杂主观因素，在定量实验中观测的数据，如称量物的重量、滴定管的读数、光密度值等，都应设计一定的表格，依据仪器的精确度记录有效数字。

完整的实验记录包括实验日期、实验题目、目的、操作、结果。

（二）实验报告实验结束后，应及时整理和总结实验结果及记录，按照下列顺序写出实验报告：1.实验名称（The title of experiment ）：2.目的（Objective）：3.原理（Principle）：最好使用简式。

4.操作步骤（Operational procedure）：5.实验记录6.计算与结果（Calculation and Results）：7.讨论（Discussion）：对实验方法，实验结果和异常现象进行探讨和评论，以及对于实验设计的认识、体会和建议。

二、普通实验技术（一）玻璃仪器的洗涤与清洁玻璃仪器的洗涤与清洁直接影响实验结果的准确性，因此玻璃仪器的洗涤工作是很重要的。

1.新购置玻璃仪器的清洗新购置来的玻璃仪器表面附着有游离碱质，应先用肥皂水洗刷后再用流水冲洗，浸泡于I－2％HCl中过夜，取出后再用流水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2－3次，在干燥箱中烤干或自然晾干，备用。

生化实验室的一般规则1. 进入实验室应穿着工作服。

留长发的同学应挽短、戴帽。

2. 整洁。

实验台必须洁净，各种仪器放置要有秩序。

实验完毕，必须将仪器洗净、放好，拭净台面，方可离开实验室。

3. 安静。

实验时不可谈笑，如有问题可以小声请教师解答。

4. 废物及废液处理。

实验完的废液应倾入水槽中，并用水冲净。

但浓酸、浓碱及氰化物等不可倒入水槽，应倾入预先准备的废液盆或污物桶中。

少量浓酸、浓碱可直接倾入水槽，然后以大量流水冲净。

火柴梗、废滤纸、棉花等不可扔入水槽，应弃入废物盆或垃圾箱中，以免堵塞水管。

5. 试剂与标准溶液。

取用试剂后，应立即将瓶塞盖好；放回原处。

取用有毒试剂时，须用滴定管或滴管。

取样时，应注意用多少取多少。

如未用完只可弃去，不可倒回瓶中；6. 凡可产生烟雾或有毒气体的实验必须在通风橱中操作。

7. 在用恒温水浴箱保温时，应注意随时盖好箱盖。

调节温度到所需温度后，即不再旋动调温旋扭。

8. 贵重仪器如分光光度计、离心机等必须爱护，使用前应熟读使用方法，记住操作要点，按操作规程工作。

如有问题应请教师帮助，不得自行拆卸检修。

9. 防火。

勿使酒精、乙醚或其它易燃试剂靠近火焰。

若蒸发此类溶液时，应用水浴，不得直火加热，以免发生火灾。

10. 实验前应熟读实验指导，记住要点。

实验时应仔细操作并注意观察现象及结果，及时记录。

生化实验的基本操作-1-一、玻璃器皿的洗涤玻璃器皿的洗涤在生物化学实验中是一项重要的工作。

实验性质不同所采取的洗涤方法也不同。

例如研究酶制备的反应时，组织匀浆对金属的污染是非常敏感的，至于细菌的悬浮液对少量的金属可能不敏感，但少量的维生素和其它有机物质则有较大的影响。

一般氧化剂洗液如重铬酸洗液不能有效地除去油脂、硫酸钡等污迹。

因此污迹不同所应采用的洗涤试剂和方法也不同。

如可用汽油或洗涤剂（洗衣粉液或洗洁净）除去油脂，用酸性硫代硫酸钠溶液或热草酸除去氧化性污迹MnO2等，用40％尿素除去附着管内壁的血凝块等。

《生物化学》实验指导书2017年03月28日修订目录实验一生物化学实验常用仪器设备及使用实验二甲醛滴定法实验三糖的定量：3，5－二硝基水杨酸比色法实验四粗脂肪提取和含量测定实验五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳实验六动物组织中脱氧核糖核酸的制备及测定实验一生物化学实验常用仪器设备及使用一、生物化学实验须知1．实验室规则(1) 实验课必须提前5 分钟到实验室,不迟到,不早退，应自觉遵守课堂纪律。

(2) 使用仪器、药品、试剂和各种物品必须注意节约, 应特别注意保持药品和试剂的纯净, 严防混杂污染。

(3) 实验台、试剂药品架必须保持整洁, 仪器药品摆放井然有序。

实验完毕,需将药品、试剂排列整齐, 仪器洗净倒置放好, 实验台面抹拭干净, 经教师验收仪器后, 方可离开实验室。

(4) 使用和洗涤仪器时, 应小心谨慎, 防止损坏仪器。

使用精密仪器时, 应严格遵守操作规程, 发现故障应立即报告教师, 不要自己动手检修。

(5) 在实验过程中要听从教师的指导, 严肃认真地按操作规程进行实验, 并简要、准确地将实验结果和数据记录在实验记录本上。

课后写出实验报告, 由课代表收齐交给教师。

(6)仪器损坏时, 应如实向教师报告, 真填写损坏仪器登记表, 然后补偿一定金额。

(7)每次实验课安排同学轮流值日, 值日生要负责当天实验的卫生和安全检查。

2．实验记录实验课前应认真预习实验内容，将实验名称、实验原理、实验内容和步骤等简单扼要写在记录本上。

实验记录本要标明页码，不能随意撕掉任何一页。

实验中使用的试剂纯度和终浓度以及使用的仪器类型等都要记录清楚。

实验中观察到的现象、结果和得出的数据，应及时直接记在记录本上，绝对不可以随意记在单片纸上。

原始记录必须准确、简练、清楚。

3．实验报告的书写实验结束后,应及时整理和总结实验结果, 写出实验报告。

（1）标题标题应包括实验名称、实验时间、实验室名称、实验组号、实验者及同组者姓名、实验室条件。

（2）实验目的（3）实验原理应简述基本原理，不要完全照抄实验指导书。

生物化学实验指导李峰李荣张建平编湖南文理学院生命科学系前言生物化学实验是以生物为研究对象，利用生物化学的原理和方法，阐明生物体内化学分子的结构与化学反应的机理，从分子水平探讨生命现象的本质，并为人类服务的一门实验科学，是生物科学、农学、动物科学专业、生命学科相关专业本科生及与湖南省中学生物学教师及科技人员重要的专业基础技术。

它是在植物生物学、动物生物学、微生物学等普通生物学实验有比较全面了解及一定基础训练基础上开设的实验技术。

旨在培养具有现代生物学知识，掌握现代生物化学技术的创新人才培养具有现代生物学知识前沿、掌握现代生物学基本技术，具有综合设计、创新实验能力的创新人才。

《生物化学实验指导》是熊大胜教授主持的“生物学基础实验‘531’课程体系研究”的实验教材之一。

生物化学实验模块按生物化学及生化大实验的实验功能构建，承担《生物化学实验》及《生物化学与分子生物学大实验》。

生物化学实验模块以提高学生应用生物化学原理和方法，解决生产实践中的实际问题为目标，改革以往生物化学实验教学大纲，从加强基础的观点出发，侧重于学生基本技能，综合能力，创新能力三个层次的培养，同时也注意增加一些新近发展起来的重要的生物化学研究方法和技术。

生物化学实验模块共包括15个实验。

实验注重加强学生基本技能的培养，使学生掌握蛋白质和核酸的基本结构及组分鉴定方法；掌握蛋白质性质的综合测定，了解蛋白质沉淀和变性等重要概念；掌握最常用的蛋白质制备、分离和纯化过程和方法；通过淀粉酶的提取，活性测定以及淀粉酶动力学分析实验，加深对酶的特性认识；进一步熟悉掌握微量滴定法的基本操作技术；注重培养学生综合能力，通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作，掌握氨基酸含量的测定方法；掌握核酸的提取过程以及核酸含量和纯度的测定技术；熟悉掌握电泳技术的基本原理和操作技术；血糖的定量测定和脂肪酸的β－氧化实验，掌握有关物质代谢中生理生化指标的测定方法；在生化大实验中开设了《总RNA的提取及鉴定》和《半定量RT-PCR检测基因的表达差异》两个综合性大实验；本实验模块还开设了为期6周的选修开放项目《基因的克隆、鉴定及生物信息学分析》（创新实验），使学生更好的将基础知识与专业技术衔接。

生物化学实验指导生物化学实验是探索生命奥秘的重要手段，通过实验操作，我们能够更深入地理解生物体内的化学反应和物质代谢过程。

本实验指导将帮助您顺利完成生物化学实验，提高实验技能和科学素养。

一、实验前的准备（一）了解实验目的在进行每个实验之前，务必清楚地知道实验的目的是什么。

这将有助于您在实验过程中保持专注，并理解实验结果的意义。

（二）预习实验内容认真阅读实验教材和相关的参考资料，熟悉实验的原理、步骤和注意事项。

如果有不明白的地方，可以向老师或同学请教。

（三）准备实验用品根据实验要求，准备好所需的仪器、试剂和材料。

检查仪器是否完好，试剂是否过期，并确保材料的质量和数量符合实验要求。

二、实验安全（一）个人防护在实验过程中，要穿戴好实验服、手套和护目镜等防护用品，以保护自己免受化学试剂和生物样本的伤害。

了解所使用化学试剂的性质和危险特性，遵守化学品的储存、使用和处理规定。

避免直接接触有毒、有害和腐蚀性试剂，如果不慎接触，应立即用大量清水冲洗，并寻求医疗帮助。

（三）生物安全对于涉及生物样本的实验，要遵循生物安全操作规范，防止感染和交叉污染。

在处理微生物、细胞和组织样本时，要在无菌条件下进行，并妥善处理废弃物。

（四）防火防爆实验室中严禁烟火，要熟悉灭火器和紧急喷淋装置的位置和使用方法。

对于易燃易爆的试剂和气体，要严格按照操作规程使用和储存。

三、常用仪器的使用（一）移液器移液器是定量移取液体的常用工具。

使用前要根据所需移液量选择合适的移液器和吸头，并进行校准。

移液时要保持垂直，缓慢按下和释放按钮，避免产生气泡。

（二）离心机离心机用于分离不同密度的物质。

使用前要平衡样品，选择合适的转速和离心时间。

离心结束后，要等离心机完全停止转动后再打开盖子，以免发生危险。

分光光度计用于测定溶液中物质的浓度。

使用前要进行仪器校准，选择合适的波长和比色皿。

测量时要确保比色皿清洁，溶液无气泡和杂质。

（四）pH 计pH 计用于测量溶液的酸碱度。

实验一糖的呈色反应和定性鉴定目的要求(1) 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法。

(2) 了解鉴定还原糖的方法及其原理。

Ⅰ. Molish反应——α-萘酚反应实验原理糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环，因此又称紫环反应。

自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应。

此外，各种糠醛衍生物、葡萄糖醛酸以及丙酮、甲酸和乳酸均呈颜色近似的阳性反应。

因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有糖的存在。

试剂Molish试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇溶解至100mL，临用前配制，棕色瓶保存。

1%葡萄糖溶液；1%蔗糖溶液；1%淀粉溶液。

操作方法取试管，编号，分别加入各待测糖溶液1 mL，然后加两滴Molish试剂，摇匀。

倾斜试管，沿管壁小心加入约1mL浓硫酸，切勿摇动，小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化。

用水代替糖溶液，重复一遍，观察结果。

Ⅱ. 蒽酮反应实验原理糖经浓酸作用后生成的糠醛及其衍生物与蒽酮（10-酮-9，10-二氢蒽）作用生成蓝绿色复合物。

试剂蒽酮试剂：取0.2g 蒽酮溶于100mL 浓硫酸中，当日配制。

待测糖溶液，同Molish试验。

操作方法取试管，编号，均加入1mL蒽酮溶液，再向各管滴加2 ~ 3滴待测糖溶液，充分混匀，观察各管颜色变化并记录。

Ⅲ. 酮糖的Seliwanoff反应实验原理该反应是鉴定酮糖的特殊反应。

酮糖在酸的作用下较醛糖更易生成羟甲基糠醛。

后者与间苯二酚作用生成鲜红色复合物，反应仅需20-30秒。

醛糖在浓度较高时或长时间煮沸，才产生微弱的阳性反应。

试剂Sediwanoff试剂：0.5g 间苯二酚溶于1升盐酸（H2O∶HCl=2∶1）(V/V)中，临用前配制。

1%葡萄糖；1%蔗糖；1%果糖。

操作方法取试管，编号，各加入Sediwanoff试剂1mL，再依次分别加入待测糖溶液各4滴，混匀，同时放入沸水浴中，比较各管颜色的变化过程。

生物化学实验指导电子版生物化学实验指导一、试剂1. 氯仿：用于芳香族化合物的溶解、清洗；2. 硫酸：用于提取溶液中的某些物质，同时也作为能溶解蛋白质的酸性溶剂；3. 乙酸：用于碱化反应，可能提升蛋白质的溶解性；4. 盐酸：用于常温下蛋白质的溶解；5. 磷酸：用于常温下极酸性物质的溶解；6. 氯化钾：用于静电，渗析，也用于调节溶液酸碱度；7. 硝酸铵：用于碱化反应，可以提高某些物质的溶解度；8. 碳酸二铵：用于碱化反应，也可以帮助提高溶液中某些物质的溶解度；9. 氯化钠：用于溶液稀释，也可以作为是pH调节剂；10. 氢氧化钠：用于调节溶液的酸碱度；二、器材1. 酸性硫酸铜滴定池：用于检测溶液中硫酸盐的浓度；2. 温度控制仪：用于控制反应温度；3. 硅胶色谱柱：用于分离混合液中的物质；4. 浴室：用于沸煮某类蛋白；5. 真空泵：用于将液体抽出；6. 多管共振探头：用于测定比色法中的较高浓度；7. 比色杯：用于比色现象；8. 高效液相色谱仪：用于快速地分离多种物质；9. 微型反应釜：用于芳香族化合物的反应；10. 微量称量管：用于精确称量少量物质；三、步骤1. 准备：将所需试剂和器材准备好；2. 溶解：使用氯仿等溶剂将芳香族化合物溶解；3. 提取：用硫酸和乙酸将混合液中的物质进行提取；4. 能谱检测：采用高效液相色谱仪，对混合液进行谱线检测；5. 碱化反应：利用硝酸铵或其他碱性物质进行溶液的碱化反应；6. 比色：用比色杯分析混合物中物质浓度；7. 极化：利用多管共振探头检测混合液中的蛋白质浓度；8. 冷却：将比色法中高浓度物质稀释后，再加入冰水将温度控制在冰点以下；9. 沸煮：将某类蛋白放入温度控制仪能控制的浴室中，进行沸煮；10. 离心：利用真空泵将液体从比色杯中离心，以便收集蛋白质沉淀。

生物化学与分子生物学-实验指导实验一氨基酸纸层析法一、实验目的通过氨基酸的分离，了解层析法的基本原理和操作方法。

二、实验原理纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。

纸层析法又称纸色谱法，是用滤纸为支持物，所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，纸纤维上吸附的水分是固定相，有机溶剂是流动相。

溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。

将样品点在滤纸上(此点称为原点)，进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。

由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。

溶质在滤纸上的移动速率用Rf值表示：在一定条件下某种物质的Rf值是常数。

Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。

只要条件(如温度、展层溶剂的组成)不变，Rf值是常数，故可根据Rf值作定性判断。

样品中如有多种氨基酸，其中某些氨基酸的Rf值相同或相近，此时如只用一种溶剂展层，就不能将它们分开。

为此，当用一种溶剂展层后，将滤纸转动90度，再用另一溶剂展层，从而达到分离目的，这种方法称为双向纸层析法。

氨基酸无色，可利用茚三酮显色反应，将氨基酸层析点显色作定性、定量用。

所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质，只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（亮）黄色物质。

原点到层析斑点中心的距离原点到溶剂前沿的距离Rf =三、药品器材 1实验器材层析滤纸（新华1号）、喷雾器、剪刀、层析缸、毛细管、电吹风、刻度尺、铅笔。

2实验试剂(1)氨基酸溶液：赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸溶液以及他们的混合溶液（各组分浓度0.5%）。

(2)展层剂：V[正丁醇（A.R.）]:V(80％甲酸):V(水)=15:3:2 (3)显色剂:0.5g茚三酮溶于100mL无水丙酮，贮存于棕色瓶中备用。

实验一缓冲溶液的配制和氨基酸两性性质测定一、目的要求1．了解缓冲溶液的作用原理及缓冲原理，学习缓冲溶液的设计、配制及酸度计的使用方法。

2．观察甘氨酸的两性性质和缓冲作用。

二、实验原理能抵抗一定量酸或碱的影响，而保持溶液pH值基本不变的溶液称为缓冲液。

缓冲液一般是由弱酸或弱碱与它的盐组成。

如乙酸和乙酸钠组成乙酸缓冲液、硼酸和硼砂组成硼酸缓冲液等。

缓冲液可分为一般缓冲液(或通用缓冲液)和标准缓冲液两类。

标准缓冲液pH值是一定的(与温度有关)，叫做pH标准液，当用酸度计测量溶液的pH值时，就要用pH标准液来校正仪器。

一般缓冲液的pH值可用下式计算：式中的Ca、Cb、Cs分别为弱酸、弱碱、盐的浓度(mol/L)；Ka、Kb分别为弱酸、弱碱的电离常数；Kw为水的离子积。

当温度一定时，pKa(或pKb)为一常数，因此缓冲液pH值就随着盐和酸(或碱)的浓度比值而变化。

如果制备缓冲液时所用的盐和酸的浓度相同，则配制时所取盐和酸的溶液的体积比就等于它们的浓度比，故上式可写为：可见只要按盐和酸溶液的毫升数的不同比值配制就可得到不同pH值的缓冲液。

如加水稀释，其盐和酸的浓度都以相同比例降低，比值不变，因此适量稀释不影响缓冲液的pH值。

缓冲液能抵抗一定量酸或碱的作用称缓冲作用，缓冲作用的大小称为缓冲能力或缓冲容量(β)，可定义为每升缓冲液改变一单位pH值所需加入强碱或强酸的量(摩尔数)。

一种特殊的酸和它相配对的碱在它们浓度相等(即pH值等于酸的pKa)时，缓冲能力最大。

缓冲能力除与其共轭酸碱对的比率有关外，还与总浓度有关，总浓度越大，缓冲能力越强，一般缓冲液浓度在0.05～0.20mol/L，pH=pKa±1的范围内具有满意的缓冲能力。

α－氨基酸是一类两性物质；既可以和酸作用，又可以和碱作用，对酸、碱的加入具有一定的缓冲能力；通过甘氨酸的酸、碱滴定及测量不同浓度的酸、碱条件下甘氨酸溶液的pH值，绘出—条滴定曲线，从中可以看到这种变化。

《临床生物化学和生物化学检验》实验指导前言实验教学作为基础医学教学中的一项重要内容，在培养学生分析问题、解决问题及动手能力等方面发挥着十分重要的作用。

临床生物化学检验实验教学是临床生物化学检验课程的重要组成部分，本教研室根据中医本科专业的特点，并依据《临床生物化学检验》实验大纲要求，结合多年的教学实践，组织编写了《临床生物化学和生物化学检验》实验指导。

本实验指导内容共12项实验。

每项实验包括实验目的、实验原理、实验内容（材料、方法、结果分析及注意事项）等项目，同时后附思考题，以供学生独立思考、加深理解。

实验学时：48学时实验一基本操作（综合性实验，4学时）【实验目的】1.掌握移液管、微量加样器正确使用方法。

2.掌握721分光光度计的正确使用方法及简单维护3.熟悉试验结束后试管、移液管的清洗方式【实验仪器、器材与试剂】1.实验仪器和器材：721分光光度计、玻璃试管、微量加样器、移液管、试管架、洗耳球、记号笔等。

2.实验试剂：蒸馏水、生理盐水等。

【实验项目、方法与步骤】1、微量移液器使用（1）根据取用溶液体积选用适当量程的微量移液器a)P20 2 ~ 20b)P200 21 ~ 200c)P1000 201 ~ 1,000（2）容量设定从大值调整到小值时，刚好即可。

从小值调整到大值时，需要调超过三分之一圈后再返回，这是因为计数器里面有一定的空隙，需要弥补。

不要将按钮旋出量程，这将导致移液器损坏。

（3）吸液头安装正确的安装方法是：把白套筒顶端插入吸液头，在轻轻用力下压的同时，把移液器按逆时针方向旋转180度。

切记用力不能过猛，更不能采取剁吸液头的方法来进行安装，那样做会对移液器造成不必要的损伤。

（4）预洗吸液头安装了新的吸液头或增大了容量值以后，应把需要转移的液体吸取、排放两到三次。

这样做是为了让吸液头内壁形成一道同质液膜，确保移液工作的精度和准度，使移液过程具有重现性。

（5）吸液先将移液器排放按钮按至第一停点，再将吸液头垂直浸入液面。

运动生物化学实验指导实验一实验基本技术操作一、实验目的（一）了解实验室规则及注意事项。

（二）学习运动生物化学实验常用仪器的使用及清洗方法。

（三）学习721型分光光度计的使用方法。

二、实验原理运动生物化学是研究人体运动时体内的化学变化。

运动生物化学的实验方法基本上是化学的方法，用定量及定性的分析方法来观察机体内物质代谢的规律，所以实验时必须做到定性的洁净及定量的精确，因此实验取样要准确、样品要无污染。

对于相同物质和相同波长的单色光来说，溶液的光密度和溶液的浓度呈正比。

配制各种浓度的CuSO4溶液，然后在780nm波长下比色，测定各种浓度的CuSO4溶液吸光度值，并制作曲线图。

三、实验器材试管、CuSO4溶液、蒸馏水、721分光光度计、移液管、吸耳球等。

四、实验步骤（一）玻璃仪器的清洗。

（二）使用移液管的移液操作及721分光光度计的使用。

取4支大试管，编号，按表7-1进行操作：表7-1 CuSO4溶液的测定以CuSO4溶液浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，将3种不同浓度的CuSO4溶液的光密度值分别点在坐标纸上，通过3点绘制成曲线图，并对实验结果进行分析。

五、注意事项（一）玻璃仪器清洗后注意检查，管壁不能留有水珠。

（二）使用移液管吸取液体时一定要缓慢平稳，不要太快、太猛。

六、作业与思考（一）玻璃仪器的清洗有哪些基本要求？实验二血红蛋白的测定血红蛋白（Hb）是红细胞中的一种重要蛋白质，1分子的Hb是由4分子的亚铁血红素和1分子的珠蛋白结合而成的。

Hb的主要生理功能是运输氧气（O2）、二氧化碳（CO2）和对酸性物质（H+）起缓冲作用，参与体内的酸碱平衡调节。

运动时机体需氧增加，故血红蛋白增加，有利于为组织提供氧气，促进物质的有氧代谢和带走CO2，而且也能起中和酸性的作用。

如果血红蛋白下降，氧供应减少，影响运动能力。

运动员安静时血红蛋白值与正常人没有明显差异。

一般人Hb的正常值男性为120-160g/L；女性110-150g/L。

《生物化学》实验指导(8个实验)生物化学实验指导吕杰编著新疆大学资源与环境科学学院生态学教研室内容介绍《生物化学实验指导》是新疆大学资源与环境科学学院《生物化学》课程组的教师在参考国内重点院校、科研院所的生物化学实验与实习教材的基础上，结合教师的教学经验汇编而成。

该实习指导围绕教学大纲设计了8个实验内容。

目目录实验一氨基酸纸层析4实验二DNS-CL法测定N末端氨基酸5实验三考马斯亮蓝法测定蛋白质的浓度7实验四酪蛋白的制备8实验五葡萄糖标准曲线的绘制10实验六酵母蔗糖酶的提取及活力测定12实验七酵母RNA的分离及组分鉴定14实验八维生素C的定量测定16 实验一一氨基酸纸层析一、实验目的1、通过氨基酸的纸层析分离，学习纸层析的基本原理和操作方法。

二、实验原理纸层析：是以滤纸作为支持物的分配层析法，是20世纪40年代发展起来的一种生化分离技术。

由于设备简单，操作方便，所需样品量少，分辨力较高等优点而广泛的用于物质的分离，并可进行定性和定量的分析。

缺点是展开时间较长。

分配层析法：是利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的的一种实验方法。

在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分配系数是一个常数即=溶质在固定相的浓度/溶质在流动相的浓度。

溶剂系统：由有机溶剂和水组成，水和滤纸纤维素有较强的亲和力，因而其扩散作用降低形成固定相，有机溶剂和滤纸亲和力弱，所以在滤纸毛细管中自由流动，形成流动相，由于混合液中各种氨基酸的分配系数值不同，其在两相中的分配数量及移动速率（即迁移率Rf值）就不同，从而达到分离的目的。

三、实验材料、仪器和试剂：1、实验材料：标准氨基酸溶液2、仪器:层析缸，层析纸，毛细管，天平，吹风机等。

3、、试剂：（1）氨基酸标准溶液：0.1M丙氨酸和0.1M谷氨酸标准溶液。

（2）溶剂系统：正丁醇：甲酸：水=15：3：2（体积比）摇匀；（3）0.1%的茚三酮丙酮溶液；茚三酮15克，丙酮100毫升四、实验步骤：纸层析(1)取一长方形滤纸，在滤纸纵向对应的两边距边沿2cm处，用铅笔轻轻的各画两条平行线，一条作前沿标志，一条作点样线，在点线上每隔2cm画一个+作为点样位置，共5个点。

《生物化学实验》指导书西安工程大学生物工程系二〇一一年十一月二十五日目录实验1 蛋白质的沉淀,变性反应 (3)实验2 蛋白质含量的测定 (8)实验3 氨基酸的分离鉴定—薄层层析法 (10)实验4 液化淀粉酶活力测定 (13)实验5 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法 (17)实验6 核酸浓度测定—紫外线（UV）吸收法 (20)实验7 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 (22)实验8 植物中抗坏血酸含量的测定 (24)实验1 蛋白质的沉淀,变性反应目的要求：了解蛋白质的沉淀反应,变性作用和凝固作用的原理及它们的相互关系。

原理：在水溶液中，蛋白质分子的表面，由于形成水化层和双电层而形成稳定的胶体颗粒，所以蛋白质溶液和其他亲水胶体溶液相类似。

但是，蛋白质胶体颗粒的稳定性是有条件的，相对的。

在一定物理化学因素影响下，蛋白质颗粒失去电荷，脱水，甚至变性，则以固态形式从溶液中析出，这个过程称为蛋白质的沉淀反应，这种反应可以分为以下两种类型。

一、可逆沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质虽已沉淀析出，但它的分子结构并未发生显著的变化，基本上保持原有的性质，沉淀因素除去以后，能再溶于原来的溶剂中。

这种作用称为可逆沉淀反应，又叫做不变性沉淀反应，属于这一类的反应有盐析作用；在低温下，乙醇，丙酮对蛋白质的短时间作用以及利用等电点的沉淀等。

二、不可逆沉淀反应在发生沉淀反应时，蛋白质分子结构，空间构象遭到破坏，失去原来的天然性质，这时蛋白质已发生变性。

这种变性蛋白质的沉淀不能再溶于原来溶剂中的作用叫做不可逆沉淀反应。

重金属盐，植物碱试剂，过酸，加热，震荡，超声波，有机溶剂等都能够使蛋白质发生不可逆沉淀反应。

实验操作一、试剂1．蛋白质溶液取5mL鸡或鸭蛋清，用蒸馏水稀释至100mL，搅拌均匀后用4—8层纱布过滤，新鲜配制。

2．蛋白质氯化钠溶液取20mL蛋清，加蒸馏水200mL和饱和氯化钠溶液100mL，充分混匀后，以纱布过滤不溶物（加入氯化钠的目的是溶解球蛋白）。