NSE生产工艺规程
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质控品的配制：在人血清中加入不同量的NＳE溶液,使质控品各点的浓度分别为～7、~20、~８0ng／mL,以企业标准品校正。分装，冷冻干燥后于-2０℃贮存。
五、实验所须缓冲液的配制
NＳE分析缓冲液:50mmol/ｌ Tｒis-HCl,pH 7.8,含２% ＢＳA，0．9% ＮａCl，０.1％Tween2０,40ｕｍoｌ／ＬEDＴA,０．05％ NaＮ3，0.05%牛IgG,0.１5％小鼠血清，0.005%鸡冠花红。2-８℃贮存。
４.浓缩洗液，一瓶，40ml
5.荧光增强液,一瓶,20ml
6．分析缓冲液，一瓶,２0ml
7．吸头：2０支
8．说明书，一份
5.试剂盒的技术指标
5．1物理性能
液体组分应澄清,无沉淀或絮状物;冻干组分应呈结晶或粉末状;所有组分应无包装破损。
5.2准确性
试剂盒校准品与相应浓度的企业标准品同时进行分析测定，用Ｌog B-ｌog拟合,要求两条剂量－反应曲线不显著偏离平行;以NSE企业标准品为对照品,试剂盒校准品的实测效价与标定效价的比应在0.９００~1.10范围内。
2.作用和用途：定量检测血清中ＮSE含量，用于SCLC的鉴别诊断等。
3.分离方法：包被抗体的固相分离法。
4.试剂盒的组成：
１ 包被有抗人NSE单抗的9６孔板，一块(12孔×８）
2.铕（Eｕ3+)标记的抗NSE单抗(铕标记），一瓶，1．0ml
3．校准品(A、Ｂ、C、D、Ｅ、F ）,一套,0.５ｍl/瓶，冻干品
19）荧光增强液 自制
20）ห้องสมุดไป่ตู้缩洗液 自制
二、 固相抗ＮSE ＭcＡb的制备
工作液制备:移取一定量抗NSＥMcAb于所需体积的碳酸钠缓冲液中(0.0５ mｏl／Ｌ, ｐH９.５)，使其浓度约为5μg/ml。
封闭缓冲液的配制:在50mmol/LＴris－HCl缓冲液 (pH7.8)中加入一定量的BSA，NａN３,使BSA,ＮaN3的浓度分别为1%，0.０５％。
六、血清NSE－DＥＬFIA的分析步骤
１.试剂准备
（1）洗涤液:将40ｍl浓缩洗液和9６0ml蒸馏水在干净的洗液瓶中混合,作为工作洗涤液。
（2）校准品:在校准品中加入0．5mｌ去离子水，复融约10分钟,混匀备用。
（3）铕标记物：使用前一小时内,按照需要用量以分析缓冲液稀释铕标记（１:20）。
（4）将分析缓冲液、校准品、待测样品和所需数量的微孔反应条平衡至室温(２0～２5℃)。
2．吸取2５μl校准品和待测样品,加入反应板微孔内。
5.６质控血清测定值
应在允许范围内。
５.7特异性
与AFP、CEＡ、CＡ1２5交叉反应小于０.7ｎｇ/mL。
５.8稳定性
37℃放置７天，测定结果应符合上述5.１～5.7项要求。
6.正常值、病理值
以本试剂盒对504例正常人血清进行测定，ＮＳＥ临界值为１4.0０ng/ml。
７．原材料及规格：
名称 规格 厂家
.NSE生产工艺规程
———————————————————————————————— 作者：
———————————————————————————————— 日期：
苏州新波生物技术有限公司
文 件 编 号
生产工艺规程
Q/SB-ＺD(7）-ＰD-ＴＷP０01
版本
A／0
NＳE定量检测试剂盒
分发编号
页数
6
主管部门:生 产 部
1）抗ＮＳEＡb中检维康
2）ＮSE抗原纯品Hytesｔ
3）96孔板（钴辐射活化板)国产
4）Trｉs(三羟甲基氨基甲烷） 进口／国产
5）盐酸 G．R 上海化学试剂公司
6）鸡冠花红 A．R 上海试剂三厂
7）叠氮钠 G.R 上海生工生物工程有限公司
8）牛γ-球蛋白 SＩGMA
9）双馏水 自制
10）Ｔwｅeｎ20 上海生工生物工程有限公司
5.3剂量-反应曲线的线性
用Log B-ｌog或其他数学模型拟合,在校准品B与校准品F之间的浓度范围内，剂量-反应曲线相关系数(r）的绝对值应不低于0．９900。
5.４精密度
分析内精密度（CV%）应不高于15.0%;分析间精密度(CV％）应不高于20.0%。
５．5分析灵敏度
试剂盒分析灵敏度为最低检测限不大于0.７ng/mL。
11）BＳA 进口/上海赛达生物药业有限公司
12）无水碳酸钠 A.R 上海虹光化工厂
13）ＤＴTA－Ｅu 国产
14）碳酸氢钠 A.R 上海虹光化工厂
15）氯化钠 G.R 上海化学试剂公司
16）醋酸钠A.R 上海化学试剂公司
17）醋酸A.R 上海化学试剂公司
18）乙二胺四乙酸二钠 （EDＴA） Ａ．R 上海化学试剂公司
分离：Aｂ－Eu与游离DTTA-Ｅu通过Ｓeｐhadex G５0 （8ｃm)+Ｓeｐhａrose 6B (３8cm)色谱柱 (1.５×５０ｃｍ）分离。洗脱液为TＳA ：０.０5Ｍ Ｔris－ＨCｌ,pＨ ７.８,0.05%NaN３，０.９%ＮaCl。分离过程以核酸蛋白仪监控。
四、ＮSE血清校准品和质控品的配制
将抗NSEMｃAｂ工作液按每孔１0０μｌ加入微孔,室温静置24小时（注意要防止水分蒸发）。以洗板机吸干－洗涤二次。将封闭缓冲液按每孔1５０μl加入微孔,室温封闭1２小时（注意要防止水分蒸发),然后倒掉封闭液，洗衣机甩干,抽干,热封。
三、抗NSEMcAｂ的标记和分离
标记：将抗NSE抗体于4~8℃用0.1 ｍoｌ/L碳酸盐缓冲液(含0．9% NaCl,ｐH 9．６)透析36小时。取出抗NSE抗体，在电磁搅拌下按抗体/DTTA-Eu＝5/１的比例加入DTＴA－Eu，成分混匀后静置3６小时。
校准品稀释液的配制:NaAc 1.60g，HAc 0.480mL，NａCｌ0．9g，BSA3．0g，NaN３0.05g，纯水100mＬ，pH值为５.0。
校准品配制:用缓冲液将NSE浓缩液稀释成A、Ｂ、Ｃ、Ｄ、E、Ｆ六个点(浓度分别约0、1、5、20、100、500nｇ/mL),以ＮSE企业标准品校正。分装,冷冻干燥后于2～8℃保存。
编 制 人：
审 核 人:
批 准 人:
批准日期
发布日期
实施日期
神经元特异性烯醇化酶(ＮSＥ)定量检测试剂盒
（时间分辨免疫荧光法)
生产工艺规程
一、总述
1.名称:中文:神经元特异性烯醇化酶（NSE）定量检测试剂盒
英文：Time-resolved immuｎｏｆluoｒoｍetriｃ assay kit forNＳE
五、实验所须缓冲液的配制
NＳE分析缓冲液:50mmol/ｌ Tｒis-HCl,pH 7.8,含２% ＢＳA，0．9% ＮａCl，０.1％Tween2０,40ｕｍoｌ／ＬEDＴA,０．05％ NaＮ3，0.05%牛IgG,0.１5％小鼠血清，0.005%鸡冠花红。2-８℃贮存。
４.浓缩洗液，一瓶，40ml
5.荧光增强液,一瓶,20ml
6．分析缓冲液，一瓶,２0ml
7．吸头：2０支
8．说明书，一份
5.试剂盒的技术指标
5．1物理性能
液体组分应澄清,无沉淀或絮状物;冻干组分应呈结晶或粉末状;所有组分应无包装破损。
5.2准确性
试剂盒校准品与相应浓度的企业标准品同时进行分析测定，用Ｌog B-ｌog拟合,要求两条剂量－反应曲线不显著偏离平行;以NSE企业标准品为对照品,试剂盒校准品的实测效价与标定效价的比应在0.９００~1.10范围内。
2.作用和用途：定量检测血清中ＮSE含量，用于SCLC的鉴别诊断等。
3.分离方法：包被抗体的固相分离法。
4.试剂盒的组成：
１ 包被有抗人NSE单抗的9６孔板，一块(12孔×８）
2.铕（Eｕ3+)标记的抗NSE单抗(铕标记），一瓶，1．0ml
3．校准品(A、Ｂ、C、D、Ｅ、F ）,一套,0.５ｍl/瓶，冻干品
19）荧光增强液 自制
20）ห้องสมุดไป่ตู้缩洗液 自制
二、 固相抗ＮSE ＭcＡb的制备
工作液制备:移取一定量抗NSＥMcAb于所需体积的碳酸钠缓冲液中(0.0５ mｏl／Ｌ, ｐH９.５)，使其浓度约为5μg/ml。
封闭缓冲液的配制:在50mmol/LＴris－HCl缓冲液 (pH7.8)中加入一定量的BSA，NａN３,使BSA,ＮaN3的浓度分别为1%，0.０５％。
六、血清NSE－DＥＬFIA的分析步骤
１.试剂准备
（1）洗涤液:将40ｍl浓缩洗液和9６0ml蒸馏水在干净的洗液瓶中混合,作为工作洗涤液。
（2）校准品:在校准品中加入0．5mｌ去离子水，复融约10分钟,混匀备用。
（3）铕标记物：使用前一小时内,按照需要用量以分析缓冲液稀释铕标记（１:20）。
（4）将分析缓冲液、校准品、待测样品和所需数量的微孔反应条平衡至室温(２0～２5℃)。
2．吸取2５μl校准品和待测样品,加入反应板微孔内。
5.６质控血清测定值
应在允许范围内。
５.7特异性
与AFP、CEＡ、CＡ1２5交叉反应小于０.7ｎｇ/mL。
５.8稳定性
37℃放置７天，测定结果应符合上述5.１～5.7项要求。
6.正常值、病理值
以本试剂盒对504例正常人血清进行测定，ＮＳＥ临界值为１4.0０ng/ml。
７．原材料及规格：
名称 规格 厂家
.NSE生产工艺规程
———————————————————————————————— 作者：
———————————————————————————————— 日期：
苏州新波生物技术有限公司
文 件 编 号
生产工艺规程
Q/SB-ＺD(7）-ＰD-ＴＷP０01
版本
A／0
NＳE定量检测试剂盒
分发编号
页数
6
主管部门:生 产 部
1）抗ＮＳEＡb中检维康
2）ＮSE抗原纯品Hytesｔ
3）96孔板（钴辐射活化板)国产
4）Trｉs(三羟甲基氨基甲烷） 进口／国产
5）盐酸 G．R 上海化学试剂公司
6）鸡冠花红 A．R 上海试剂三厂
7）叠氮钠 G.R 上海生工生物工程有限公司
8）牛γ-球蛋白 SＩGMA
9）双馏水 自制
10）Ｔwｅeｎ20 上海生工生物工程有限公司
5.3剂量-反应曲线的线性
用Log B-ｌog或其他数学模型拟合,在校准品B与校准品F之间的浓度范围内，剂量-反应曲线相关系数(r）的绝对值应不低于0．９900。
5.４精密度
分析内精密度（CV%）应不高于15.0%;分析间精密度(CV％）应不高于20.0%。
５．5分析灵敏度
试剂盒分析灵敏度为最低检测限不大于0.７ng/mL。
11）BＳA 进口/上海赛达生物药业有限公司
12）无水碳酸钠 A.R 上海虹光化工厂
13）ＤＴTA－Ｅu 国产
14）碳酸氢钠 A.R 上海虹光化工厂
15）氯化钠 G.R 上海化学试剂公司
16）醋酸钠A.R 上海化学试剂公司
17）醋酸A.R 上海化学试剂公司
18）乙二胺四乙酸二钠 （EDＴA） Ａ．R 上海化学试剂公司
分离：Aｂ－Eu与游离DTTA-Ｅu通过Ｓeｐhadex G５0 （8ｃm)+Ｓeｐhａrose 6B (３8cm)色谱柱 (1.５×５０ｃｍ）分离。洗脱液为TＳA ：０.０5Ｍ Ｔris－ＨCｌ,pＨ ７.８,0.05%NaN３，０.９%ＮaCl。分离过程以核酸蛋白仪监控。
四、ＮSE血清校准品和质控品的配制
将抗NSEMｃAｂ工作液按每孔１0０μｌ加入微孔,室温静置24小时（注意要防止水分蒸发）。以洗板机吸干－洗涤二次。将封闭缓冲液按每孔1５０μl加入微孔,室温封闭1２小时（注意要防止水分蒸发),然后倒掉封闭液，洗衣机甩干,抽干,热封。
三、抗NSEMcAｂ的标记和分离
标记：将抗NSE抗体于4~8℃用0.1 ｍoｌ/L碳酸盐缓冲液(含0．9% NaCl,ｐH 9．６)透析36小时。取出抗NSE抗体，在电磁搅拌下按抗体/DTTA-Eu＝5/１的比例加入DTＴA－Eu，成分混匀后静置3６小时。
校准品稀释液的配制:NaAc 1.60g，HAc 0.480mL，NａCｌ0．9g，BSA3．0g，NaN３0.05g，纯水100mＬ，pH值为５.0。
校准品配制:用缓冲液将NSE浓缩液稀释成A、Ｂ、Ｃ、Ｄ、E、Ｆ六个点(浓度分别约0、1、5、20、100、500nｇ/mL),以ＮSE企业标准品校正。分装,冷冻干燥后于2～8℃保存。
编 制 人：
审 核 人:
批 准 人:
批准日期
发布日期
实施日期
神经元特异性烯醇化酶(ＮSＥ)定量检测试剂盒
（时间分辨免疫荧光法)
生产工艺规程
一、总述
1.名称:中文:神经元特异性烯醇化酶（NSE）定量检测试剂盒
英文：Time-resolved immuｎｏｆluoｒoｍetriｃ assay kit forNＳE
