高效液相色谱法测定叶绿素铜钠盐中铜紫红素18的含量

顶空进样-气相色谱法测定着色剂叶绿素铜钠盐中溶剂残留量郑利军1，邓晓庆2*（1.中大智能科技股份有限公司，湖南长沙 410000；2.湖南振华检测技术有限公司，湖南长沙 410000）摘 要：建立顶空进样-气相色谱测定着色剂叶绿素铜钠盐中溶剂残留量的分析方法。

对平衡温度、分流比及色谱柱型号等参数进行考察，氢火焰离子化检测器（Flame Ionization Detector，FID）检测，内标法定量。

结果表明，通过CD-624毛细管色谱柱分离，平衡温度设为80 ℃时效果最优，6种残留溶剂可实现完全分离，线性关系良好，r均大于0.999，加标回收率为84.50%～98.83%，相对标准偏差（n=6）均低于10%。

该方法简单、快速、准确，可满足着色剂叶绿素铜钠盐中溶剂残留量的检测。

关键词：顶空进样-气相色谱；叶绿素铜钠盐；溶剂残留Determination of Solvent Residues in Sodium CopperChlorophyllin by Headspace Gas ChromatographyZHENG Lijun1,DENG Xiaoqing2*(1.Zhongda Intelligent Technology Co., Ltd., Changsha 410000, China;2.Hunan Zhenhua Inspection Technology Co., Ltd., Changsha 410000, China)Abstract: A method was established for the determination of solvent residues in sodium copper chlorophyllin by headspace gas chromatography. The parameters such as equilibrium temperature, split ratio and chromatographic column model were investigated, detected by hydrogen f l ame ionization detector (FID) and quantified by internal standard method. The results showed that CD-624 capillary column was used for separation, and the equilibrium temperature was 80 ℃. The six residual solvents could be completely separated, and the linear relationship was good, r was greater than 0.999, and the recovery of spiked standard was 84.50%～98.83%, and the relative standard deviation (n=6) was less than 10%. The method is simple, rapid and accurate, and can be used for the determination of solvent residues in sodium copper chlorophyllin.Keywords: headspace gas chromatography; sodium copper chlorophyllin; solvent residue叶绿素（Chlorophyl）作为一类常见色素，自然界中高等植物中叶绿素以叶绿素a和b为主。

高效液相色谱法测定牙膏中叶绿素铜钠盐的含量李玉静;王雪平【期刊名称】《日用化学工业》【年(卷),期】2018(048)011【摘要】在酸性条件下,以聚酰胺粉吸附牙膏中叶绿素铜钠盐,解吸附洗脱,经YMC Carotenoid C30 (4.6 mm×250 mm,3μm)色谱柱分离,光二极管阵列检测器(PDA)检测,建立了高效液相色谱法测定牙膏中叶绿素铜钠盐含量的方法.样品经甲醇-叔丁基甲醚-0.5％醋酸混合溶液为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长405 nm.结果表明,叶绿素a铜钠盐和叶绿素b铜钠盐在5.0～ 100.0 mg/L 质量浓度范围内,具有较好的线性关系,相关系数分别为0.999 8和0.999 7;检出限均为1.5μg/kg,定量限均为5.0 μg/kg;加标回收率为87.2％～97.8％,RSD为1.7％～2.9％.【总页数】4页(P661-664)【作者】李玉静;王雪平【作者单位】黄河水利职业技术学院,河南开封475004;黄河水利职业技术学院,河南开封475004【正文语种】中文【中图分类】TQ658.4【相关文献】1.高效液相色谱法测定叶绿素铜钠盐中铜紫红素18的含量 [J], 胡轶娟;魏克民;梁卫青;浦锦宝;郑军献;李践2.分光光度法测定牙膏中叶绿素铜钠盐的含量 [J], 孙志勇;沈兆雷3.分光光度法测定牙膏中叶绿素铜钠盐的含量 [J], 孙志勇;沈兆雷4.高效液相色谱法测定牙膏中紫丁香苷的含量 [J], 孙东方;徐春生;赵姗姗;杨万里;高智强;郑伟5.高效液相色谱法测定牙膏中紫丁香苷的含量 [J], 孙东方;徐春生;赵姗姗;杨万里;高智强;郑伟;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

叶绿素含量的测定之南宫帮珍创作二、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收, 利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度, 即可用公式计算出提取液中各色素的含量.根据朗伯—比尔定律, 某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C 和液层厚度L成正比, 即A＝αCL式中：α比例常数.当溶液浓度以百分浓度为单元, 液层厚度为1cm时, α为该物质的吸光系数.各种有色物质溶液在分歧波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在分歧波长下的吸光度而求得.如果溶液中有数种吸光物质, 则此混合液在某一波长下的总吸光度即是各组分在相应波长下吸光度的总和.这就是吸光度的加和性.今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量, 只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A, 并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度.在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰, 所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最年夜吸收峰.已知叶绿素a、叶绿素b的80%丙酮溶液在红外区的最年夜吸收峰分别位于663、645nm处.已知在波长663nm下叶绿素a、叶绿素b 在该溶液中的吸光系数的分别为82.04和9.27；在波长645nm处的吸光系数分别为16.75和45.60.根据加和性原则列出以下关系式：A663=82.04Ca+9.27Cb（1） A645=16.76Ca+45.60Cb （2）式（1）（2）A 663nm 和A645nm 为叶绿素溶液在663nm 和645nm 处的吸光度, C a C b 分别为叶绿素a 、叶绿素b 的浓度, 以mg/L 为单元.解方程（1）（2）组得C a 2 A 663—2.59 A 645 (3) C b =22.88 A 645—4.67 A 663 (4) 将C a +C b 相加即得叶绿素总量C TC T ＝ C a 十C b ＝20.29A 645—5 A 663 (5)从公式（3）、（4）、（5）可以看出, , 就可计算出提取液中的叶绿素a 、b 浓度另外, 由于叶绿素a 叶绿素b 在652nm 的吸收峰相交, 两者有相同的吸光系数（均为）, 也可以在此波长下测定一次吸光度（A 652）而求出叶绿素a 、叶绿素 b 总量所测定资料的单元面积或单元重量的叶绿素含量可按下式进行计算： C T ＝5.341000652 A (6)有叶绿素存在的条件下, 用分光光度法可同时测出溶液中类胡萝卜素的含量.Licht-enthaler 等对Arnon 进行了修正, 提出了80%丙酮提取液中3种色素含量的计算公式：C a ＝A 663—2.59 A 646 (7) C b = A 646—A 663 (8)＝22910427.31000470ba C C A -- (9)式中：C a C b 分别为叶绿素a 、叶绿素b 的浓度；Cx.c 为类胡萝卜素的总浓度；A 663 A 646 A 470 分别为叶绿素提取液在波长663nm 646nm 470nm 下的吸光度.由于叶绿素在分歧溶剂中的吸收光谱有不同, 因此, 在使用其他溶剂提取色素时, 计算公式也有所分歧.绿素a 、叶绿素b 在95%乙醇中最年夜吸收峰的波长分别为665nm 和649nm,类胡萝卜素为470nm,可据此列出以下关系式；C a ＝A 665—A 649 (10) C b = A 649—A 665(11)＝2488.11405.21000470b a C C A --(12)三、资料、仪器设备及试剂（一）资料新鲜（或烘干）的植物叶片.（二）仪器设备1. 分光光度计；2. 电子顶载天平（感量0.01g ）；3. 研钵；4. 棕色容量瓶；5. 小漏斗；6. 定量滤纸；7. 吸水纸；8. 擦境纸；9. 滴管.（三）试剂 1.96％乙醇（或80％丙酮）. 2.石英砂.3.碳酸钙粉.三、实验步伐 1. 取新鲜植物叶片（或其它绿色组织）或干资料, 擦净组织概况污物, 剪碎（去失落中脉）, 混匀.四、称取剪碎的新鲜样品0.2g, 共3份, 分别放入研钵中, 加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml95％乙醇, 研成均浆, 再加乙醇10ml, 继续研磨至组织变白.静置3～5min.五、取滤纸1张, 置漏斗中, 用乙醇湿润, 沿玻棒把提取液倒入漏斗中, 过滤到25ml 棕色容量瓶中, 用少量乙醇冲刷研钵、研棒及残渣数次, 最后连同残渣一起倒入漏斗中.六、用滴管吸取乙醇, 将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中.直至滤纸和残渣中无绿色为止.最后用乙醇定容至25ml, 摇匀.七、把叶绿体色素提取液倒入光径1cm 的比色杯内.以95％乙醇为空白, 在波长665nm 、649nm 下测定吸光度.四、实验结果计算与分析按公式(10)、(11)、(12)（如用80%丙酮, 按公式7、8、9）分别计算绿素a 、叶绿素b 和类胡萝卜素的浓度（mg/L ）.(10)、(11)式相加即得叶绿素总浓度.求得色素的浓度后再按下式计算组织中个色素的含量（mg/L 鲜质量或干质量暗示）：叶绿素含量（mg/g ）=1000⨯⨯⨯W NV C式中：C 为色素含量(mg/L);V 为提取液体积 (mL)；N 为稀释倍数；W 为样品鲜质量或干质量(g)；1000即1L=1000ml. 注意事项(1)为了防止叶绿素光解, 把持时应在弱光下进行, 淹没时间应尽量短些.(2)叶绿体色素提取液不能浑浊.可在710nm或750nm下丈量吸光度, 其值应小于当波长为叶绿素a吸收峰时吸光之哦的5%, 否则应重新过滤.(3)用分光光度计法测定叶绿素含量, 对分光光度计的波长精确度要求较高.如果波长与原吸收峰波长相差1nm,则叶绿素a的测定误差为2%, 叶绿素b为19%, 使用前必需对分光光度计的波长进行校正.校正方法除按仪器说明书外, 还应以纯的叶绿素a和叶绿素来校正（表2-12-1）表2-12-1叶绿素含量测定记载表。

叶绿素铜钠盐的制备与分析检测[摘要]叶绿素类色素主要包括叶绿素及其衍生物，高等植物和藻类中包含大量的叶绿素，本文在前期提取蓝藻叶绿素的基础上，研究了叶绿素铜钠盐的制备条件并分析了其结构，结果表明：温度60℃、时间40min以上时皂化较彻底；酸化置铜ph1-2、温度50℃、时间超过60min铜化较彻底，再成盐结晶得到叶绿素铜钠盐，得率为1.91%；通过hplc、uv、lc/ms等方法，分析测试所得到的叶绿素铜钠盐并进行结构鉴定，得出cu chlorin p6为叶绿素铜钠盐主要成分，根据它的分子结构和产生的分子离子峰碎片，推测分析了其电离机理。

[关键词]叶绿素铜钠盐制备分析检测蓝藻为原核生物，又称蓝绿藻或蓝细菌。

蓝藻是所有藻类生物中最简单、最原始的一种光合放氧生物，蓝藻在地球表面从无氧的大气环境变为有氧环境过程中起了巨大的作用，蓝藻中含有丰富的藻胆蛋白、天然色素、多糖、油脂等，因此综合利用蓝藻成为近年来开发研究的热点，其中研究得最为广泛为蓝藻中的叶绿素。

叶绿素类色素主要包括叶绿素及其衍生物，高等植物和藻类中包含大量的叶绿素[1]。

叶绿素类似物中的卟啉环结构类似人体血红素结构，可促进创伤和溃疡愈合、活化细胞、抗贫血、抗菌消炎等多种活性功能，同时它也能预防心血管疾病、护肝以及抗衰老；研究表明，叶绿素能有效抑制多环芳烃类的诱变作用，对抑制癌细胞生成也有一定的效果[2]。

叶绿素衍生物也得到较为广泛的应用，如叶绿素铜钠可作食品添加剂和日用化工的染色剂[3]、脱臭剂[4]，且还可用来制造光敏剂[5]、汽油和涂料的添加剂等，叶绿素铜钠盐还可作为医药原料起到保肝、护胃、抗贫血的作用[4]，对传染性肝炎、十二指肠溃疡、慢性肾炎、胰腺炎、以及白血病等疾病有一定的疗效[6]。

本文在提取蓝藻叶绿素的基础上，研究了叶绿素铜钠盐的制备并对其结构进行了分析。

一、材料与方法（一）材料与试剂干蓝藻取自无锡某公司：新鲜蓝藻脱水后再喷雾干燥，4℃冰箱储存。