无菌室标准化规程及验收规范

文件制修订记录
1.0目的
用于规范无菌室的使用，保证无菌效果及无菌操作的可靠性。

2.0范围
本标准适用于公司无菌室的使用。

3.0定义
无
4.0细则
4.1初次使用前要用紫外线灭菌灯灭菌，每次灭菌1－3个小时，灭菌过程中要悬挂“灭菌中”标示，灭菌后要悬挂“已灭菌”标示。

4.2工作服每周清洗一次，拖鞋每周清洗一遍。

并用紫外线灭菌灯灭菌。

4.3每周使用臭氧杀菌一次，臭氧发生器的时间不得少于30分钟。

4.4接种操作前，用75％的酒精棉球擦手。

进行无菌操作时，要严格认真，动作轻捷，尽量减少空气流动。

4.5接种操作后要对玻璃、地面、洁净操作台、均质器等全面进行打扫清洁。

废弃物及时处理。

4.6每个月对无菌室的灭菌效果验证一次。

验证方法：以通琼脂平皿放置无菌室洁净操作台上，开盖暴露10分钟，在37±1℃培养24小时后，检验暴露平板的细菌总数。

2个平板的平均值不得大于10cfu。

如果大于10cfu，停止使用，重新熏蒸灭菌。

验证合格后，方可使用。

4.7物品、样品只能从物流通道放进。

不得从人流通道带入。

4.8认真填写无菌室的清洁、灭菌、使用等记录，如有不正常现象发生，上报实验室负责人。

5.0记录
无菌室清洁灭菌记录
无菌室使用记录
6.0相关文件
出口罐头卫生注册规范。

无菌室标准化规程与验收规范(《洁净室沉降菌测试标准操作规程》)(《洁净室沉降菌测试标准操作规程》)无菌室标准化规程与验收规范洁净室沉降菌测试标准操作规程》 (含《洁净室沉降菌测试标准操作规程》)1.目的本规程旨在为无菌操作及无菌室的保护提供一个标准化规程。

2.适用范围生测实验室3.责任者 QC 主管生测员4.定义无5.安全注意事项严格无菌操作，防止微生物污染；操作人员进入无菌室应先关掉紫外灯。

6.规程6.1.无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到 10000 级，室内温度保持在 20-24℃，湿度保持在 45-60%。

超净台洁净度应达到 100 级。

6.2.无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

6.3.严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。

6.4.无菌室应备有工作浓度的消毒液，如 5％的甲酚溶液，70％的酒精， 0.1％的新洁尔灭溶液，等等。

6.5.无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。

6.6.需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。

6.7.工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用 70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。

6.8.无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌 30 分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。

操作完毕，应及时清理无菌室，再用紫外灯辐照灭菌 20 分钟。

6.9.供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。

检查前，用 70％的酒精棉球消毒外表面。

6.10.每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。

6 .11.吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。

6.12.接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。

6.13.带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有 5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24 小时后取出冲洗。

无菌实验室操作规范及要求一、实验前的准备工作1.实验员应接受相关的培训并具备基本的微生物学知识。

2.进入实验室前，必须穿戴干净、合适的实验服，并戴上手套、口罩、帽子和鞋套等个人防护装备。

3.实验室必须保持整洁，定期进行消毒和清洁工作。

4.无菌实验室必须具备必要的设备和材料，如灭菌器、培养箱、无菌液体培养基等。

二、无菌操作的基本要求1.在无菌台上进行无菌操作，无菌台有玻璃罩和紫外线灯，必须保持室内无菌状态。

2.实验员在操作前，必须经过消毒处理，戴上手套，并用70%酒精消毒手部。

3.所用的培养皿、试管、移液器等实验器材，必须经过高温高压灭菌处理。

4.不同实验物品如培养基、细菌液体等必须分装于不同的容器中，杜绝交叉污染。

5.在操作过程中，要注意手部、试管等接触物品的时间要最短，以减少微生物的污染。

6.操作过程中，要保持无风状态，最好不要与他人交谈，避免口液飞溅。

三、无菌培养基的制备及使用1.无菌培养基的制备必须在无菌条件下进行，实验员在制备前必须对无菌培养基进行灭菌处理。

2.制备过程中要注意避免培养基的接触物表面，以免污染培养基。

3.无菌培养基的使用要遵循严格的操作要求，防止细菌的污染。

四、无菌实验器具的处理1.实验结束后，实验员必须清洁无菌台及其他实验设备，对使用过的器材必须进行彻底的清洗和消毒。

2.实验受污染的实验器材必须经过高温高压灭菌处理，以杀灭可能存在的细菌。

3.废弃物如细菌培养物、液体培养基等必须采取合适的处理方式，避免二次污染。

五、必要的应急措施1.实验中如发生溅洒、翻倒等意外事故，应立即进行灭菌处理，并及时向实验室管理者报告。

2.如发现个人或他人出现感染症状，应立即采取相应的医疗措施，并及时报告。

六、实验记录和数据分析1.实验过程中，应及时记录实验操作、观察结果和数据，确保实验结果的准确性。

2.实验数据的处理和分析应遵循科学与公正原则，不得随意篡改或捏造数据。

以上为无菌实验室操作规范及要求，只是基本要求，实践中可能还有更为具体和细致的操作规范，实验员应按照实验室要求进行操作，并随时学习和更新相关知识，提高无菌操作的技能和水平。

无菌检验标准操作规程一、目的无菌检验是指检查经灭菌方法处理后的医疗器械(具)、植入物品、敷料等是否达到无菌标准的一种方法。

临床部门不应常规进行无菌检验，如有需要，可联系当地疾病预防控制中心派专人来采样检测。

二、试验前准备1．无菌检验应在洁净度为100级以上的洁净实验室内实施，并证实该实验室各项指标符合GB50073—2001《洁净厂房设计规范》、GB／T16292～16294—1996《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》等相关要求，且在有效期范围之内。

2．按卫生部《消毒技术规范》(2002年版)制备无菌检验用洗脱液、需氧一厌氧培养基与真菌培养基(见附)。

3．在无菌检验前三日，分别在需氧一厌氧培养基与真菌培养基内各接种1ml洗脱液，分别置30～35℃与20～25℃：培养72h，应无菌生长。

4．阳性对照管菌液制备：(1)在检验前一天取金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的普通琼脂斜面新鲜培养物，接种一环至需氧一厌氧培养基内，在30～35℃培养16～18h 后，用0．9％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml(可通过比浊法或稀释后用1m1接种平板来确认)。

(2)取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厌氧菌培养基新鲜培养物一接种环种于相同培养基内，于30～35℃培养18～24h后，用0.85％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml。

(3)取白念珠菌[CMCC(F)98001]真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物一接种环种于相同培养基内，于20～25℃培养24h后，用0．85％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml。

三、样本制备根据检样的类型与大小，以及带孔(腔)与否，可以按照以下不同的方法进行制备。

1．敷料类等非管道类样品：取2个包装内的样本，剪成约10mm×30mm 大小的样片21片，接种需氧一厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管。

每培养管含培养基40m1，各接种3片样片。

无菌室标准国家标准无菌室是用于进行微生物学实验和生产的特殊实验室，其设计和使用需要符合国家标准，以确保实验结果的准确性和安全性。

本文将介绍无菌室标准的相关内容，包括设计要求、操作规范和设备要求等，以供相关人员参考。

一、设计要求。

1. 空间布局，无菌室应具有明确的空间划分，包括操作区、准备区和清洁区等。

操作台、洗涤台和设备应合理布置，以保证操作流程的顺畅和安全。

2. 空气净化，无菌室应配备空气净化设备，保证室内空气的无菌度符合要求。

空气净化设备应定期维护和检测，确保其正常运行。

3. 照明设施，无菌室内应有充足的照明设施，以便操作人员进行实验操作和观察。

二、操作规范。

1. 人员要求，进入无菌室工作的人员应经过严格的培训，了解无菌操作的要求和规范。

操作人员应穿戴符合要求的无菌服装和手套，避免对实验材料造成污染。

2. 操作流程，在无菌室内进行实验操作时，应按照规定的操作流程进行，避免交叉污染和误操作。

实验结束后，应及时清洁和消毒操作台和设备。

3. 废弃物处理，实验产生的废弃物应按照规定的程序进行处理，避免对环境和人员造成污染和伤害。

三、设备要求。

1. 空气净化设备，无菌室应配备高效的空气净化设备，确保室内空气的无菌度符合要求。

空气净化设备应具有自动监测和报警功能，一旦出现异常情况能够及时报警。

2. 操作台和设备，无菌室内的操作台和设备应具有防护性能，避免对实验材料造成污染。

操作台应易于清洁和消毒，设备应具有稳定的运行性能。

3. 废弃物处理设备，无菌室内应配备废弃物处理设备，用于对实验产生的废弃物进行处理和清洁，避免对环境和人员造成污染。

四、维护和管理。

1. 定期检测，无菌室应定期进行空气和表面微生物检测，确保室内环境的无菌度符合要求。

检测结果应及时记录和分析，发现问题应及时处理。

2. 设备维护，无菌室内的设备应定期进行维护和保养，保证其正常运行。

设备维护记录应及时填写和归档，以便日后查阅和分析。

3. 管理制度，无菌室应建立健全的管理制度，包括人员管理、设备管理和实验操作管理等。

无菌实验室操作规范及要求一、无菌室的过滤级别：根据无菌室内的空气洁净度的不同，无菌室大致可以分为：百级无菌室，千级无菌室，万级无菌室，十万级无菌室，百万级无菌室等。

净化等级一般分为100级、1000级、10000级、100000级，从2010年版的GMP净化车间规范中，已经改变了叫法，大致分为ABCD四个洁净级别，分别相对应以前的98版的几个级别，通过检测区域内的尘埃粒子数、浮游菌数、沉降均数来评价净化级别，各个级别有不同的要求。

净化等级分静态、动态两种。

二、无菌室设计建设要点：无菌室内的地面、墙壁必须平整，不易藏污纳垢，便于清洗。

工作台的台面应该处于水平状态。

无菌室和缓冲间都装有紫外线灯，无菌室的紫外线灯距离工作台面 1 米。

工作人员进入无菌室应穿灭过菌的服装，戴帽子。

当前无菌室多存在于微生物工厂，一般实验室则使用超净台。

超净台其主要功能是利用空气层流装置排除工作台面上部包括微生物在内的各种微小尘埃。

通过电动装置使空气通过高效过滤器具后进入工作台面，使台面始终保持在流动无菌空气控制之下。

而且在接近外部的一方有一道高速流动的气帘防止外部带菌空气进入。

在条件较困难的地方，也可以用木制无菌箱代替超净台。

无菌箱结构简单，便于移动，箱正面开有两个洞，不操作时用推拉式小门挡住，操作时可以将双臂伸进去。

正面上部装有玻璃，便于在内部操作，箱内部装有紫外线灯，从侧面小门可以放进去器具和菌种等。

三、无菌室操作规范1. 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

2. 严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。

3. 无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5%的甲酚溶液，70%的酒精，0.1%的新洁尔灭溶液，等等。

4. 无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。

5 . 需要带入无菌室使用的仪器，器械，平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。

6. 无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。

无菌技术操作规程及评分细则一、无菌技术操作原则1.操作环境清洁且宽敞①操作室应清洁、宽敞、定期消毒；无菌操作前半小时停止清扫、减少走动，避免尘埃飞扬。

②操作台清洁、干燥、平坦，物品布局合理。

2.工作人员仪表符合要求无菌操作前，工作人员应着装整洁、修剪指甲、洗手、戴口罩，必要时穿无菌衣、戴无菌手套。

3.无菌物品管理有序规范①存放环境:适宜的室内环境要求温度低于24C，相对湿度＜70%，机械通风换气4～10次/小时；无菌物品应存放于无菌包或无菌容器内，并置于高出地面20m、距离天花板超过50cm、离墙远于5cm处的物品存放柜或架上，以减少来自地面、屋顶和墙壁的污染。

②标识清楚:无菌包或无菌容器外需标明物品名称、灭菌日期；无菌物品必须与非无菌物品分开放置，并且有明显标志。

③使用有序:无菌物品通常按失效期先后顺序摆放取用。

必须在有效期内使用，可疑污染、污染或过期应重新灭菌。

④储存有效期:使用纺织品材料包装的无菌物品如存放环境符合要求，有效期宜为14天，否则一般为7天；医用一次性纸袋包装的无菌物品，有效期宜为30天；使用一次性医用皱纹纸、一次性纸塑袋、医用无纺布或硬质密封容器包装的无菌物品，有效期宜为180天；由医疗器械生产厂家提供的一次性使用无菌物品遵循包装上标识的有效期。

4.操作过程中加强无菌观念进行无菌操作时，应培养并加强无菌观念:①明确无菌区非无菌区、无菌物品、非无菌物品，非无菌物品应远离无菌区。

②操作者身体应与无菌区保持定距离。

③取、放无菌物品时，应面向无菌区。

④取用无菌物品时应使用无菌持物钳。

⑤无菌物品一经取出，即使未用，也不可放回无菌容器内；⑥手臂应保持在腰部或治疗台面以上，不可跨越无菌区，手不可接触无菌物品。

⑦避免面对无菌区谈笑、咳嗽、打喷嚏。

⑧如无菌物品疑有污染或已被污染，即不可使用，应予以更换。

⑨一套无菌物品供一位病人使用。

二、无菌技术操作评分细则。

1.目的：建立无菌检查的标准操作规程，确保检验结果的准确性。

2.围：适用于本厂质监科化验室对本厂生产的注射剂进行无菌检查。

3.责任：化验员有责任按本操作规程操作，并对检验结果负责。

4.定义：无菌检查法系指检查药品是否无菌的一种方法。

5.容：5.1无菌操作设备：无菌操作室或超净工作台，无菌衣、口罩、帽子、消毒鞋、酒精灯等。

5.1.1无菌室分无菌操作室和缓冲间。

在缓冲间应有洗手盆、干手器、无菌衣放置架及挂钩、拖鞋等。

无菌操作室应具有空气除菌过滤的层流装置，局部洁净度100级超净工作台。

缓冲间及操作室均设置能达到空气消毒的紫外光灯和照明灯，操作室或工作台应保持空气正压。

5.1.2无菌室应每周和每次操作前用0.1％新洁尔灭或2％甲酚液擦拭操作台及可能污染的死角，开动无菌空气过滤器及紫外光灯杀菌1小时。

在每次操作完毕，同样用2％甲酚或0.1％新洁尔灭溶液擦拭工作台面，用紫外光灯杀菌半小时。

5.1.3无菌室的无菌程度检查：无菌室在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数。

取直径90mm双碟，在接种室点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将双碟半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板：在35-37℃预培养48小时，证明无菌后将3个平板以无菌方式带入无菌操作间的洁净区域左、中、右各放1个；打开碟盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将盖盖好，置35-37℃培养48小时，取出检查，3个平板上生长的菌落数相加总数不得超过10个。

无菌操作台面或超净工作台应定期请有关部门检测其洁净度，应达到100 级（一般用尘埃粒子计数仪），检测尘埃粒径≤5μm的粒数不得超过3.5个／升；空气流量应控制在0.75-1.0m3/s；细菌菌落数平均<1个，可根据无菌状况定期置换过滤器。

5.1.4无菌室应准备好盛有消毒用5％甲酚的玻璃缸、酒精灯、火柴、镊子、75％酒精棉及拖鞋等。

5.2仪器、用具：5.2.1真空泵、恒温培养箱、生物显微镜、托盘天平（精度0.1g）、抽滤瓶（500ml）、三角瓶（100、500 ml）、移液管（1、10ml）、注射器（要求规格）、试管、双碟（9cm）、注射针、镊子、剪刀、白金耳、橡皮管、纱布、棉花（原棉）、不锈钢吸管筒、接种环、微孔滤膜（直径约5cm），孔径应在0.45±0.02μm )载玻片、洒精灯、取样勺、吸耳球、喷雾瓶。

微生物检验无菌室洁净标准及其操作规程无菌室(洁净室)是微生物检验室的核心。

无菌室普通是在微生物试验室内开拓的一个自立小房间。

无菌室的规划设计、建设要符合《洁净室施工及验收规范》(GB50591-2010)的要求。

(一)无菌室洁净标准无菌操作间洁净度应达到10000级，超净工作负清净度应达到100级，室内温度维持在18～27℃，湿度保持在30%～70%。

详细要求见表4-3。

表4-3 无菌室(洁净室)空气洁净度级别注：1.浮游菌m3和沉降菌/皿可任测一种。

2.100级洁净室(区)0.8m高工作区的截面最低风速：垂直单向流0.25m/s，水平单向流0.35m/s。

(二)无菌室操作规程 (1)无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。

(2)无菌室应定期用相宜的消毒液灭菌清洁，以保证洁净度符合要求。

按照无菌室的净化状况和空气中含有的杂菌种类，可采纳不同的消毒剂，如、、、3%气溶胶喷雾(20mL/m3)、(配成1%浓度喷洒)、5%气溶胶喷雾(2.5mL/m2)等。

(3)工作人员进入无菌室前，必需用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服、鞋、帽子、口罩和手套。

(4)无菌室用法前，应将全部物品置于操作部位(待检物除外)，然后打开紫外灯杀菌30min以上，并同时打开超净工作台举行吹风。

操作完毕，应准时清理无菌室，再打开紫外灯灭菌20min。

(5)凡带有活菌的物品，必需经高压灭菌后才干清洗或丢弃。

(6)每2～3周用3%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌椅及地面。

(7)无菌室应每月检查菌落数。

在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的养分琼脂平板3～5个，分离放置在工作位置的左、中、右等处，开盖裸露30min后，倒置于30～35℃培养箱内培养48h，取出检查。

100级洁净室平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平板杂菌数平均不得超过3个菌落。

如超过限度，应对无菌室举行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。