高效液相色谱法测定谷氨酰胺的含量
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240科技资讯 SCIENCE & TECHNOLOGY INFORMATION谷氨酰胺(Glutamin)亦被称作麸酰胺酸,为人体中含量最丰富的非必需氨基酸。临床上主要用于改善胃溃疡和十二指肠溃疡的症状。常见的分析方法有毛细管电泳法[1]。本文建立了通过高效液相色谱法测定谷氨酰胺的方法,实验证明该方法操作简便、专一性及灵敏度高,结果准确可靠。1 材料与方法1.1仪器HLPC色谱仪型号:LC-20A,色谱仪编号:L20134506488AE,分析天平型号:AE100 分析天平编号:LS012,超声波型号:AS3120A,检测波长:λ＝215nm。1.2色谱条件检测器型号:SPD-20A,检测器灵敏度:2.0AUFS柱温:35℃,进样体积:20ul流速:1.0ml/min,流动相:0.05moL/L的磷酸二氢钾(取磷酸二氢钾6.8g,加水至1000ml,用磷酸调节PH值为4.0)∶乙腈＝70∶30,色谱柱:NH￠4.6×250mm,色谱柱号:312316。1.3材料与试剂乙腈(色谱纯,康科德公司),磷酸二氢钾(AR级),磷酸(AR级),谷氨酰胺对照品(山东宝齡生物技术有限公司),高纯水。1.4样品制备标准溶液的制备:精密称取谷氨酰胺标准品250mg于50ml容量瓶中,用纯化水稀释并定容至刻度,摇匀,再精密吸取2ml于10ml容量瓶中,用流动相稀释定容至刻度,摇匀,备用。其浓度为1mg/ml。样品溶液的制备:称取本品约250mg,精密称定于50ml容量瓶中,用纯化水稀释并定容至刻度,摇匀,再精密吸取2ml于10ml容量瓶中,用流动相稀释定容至刻度,摇匀,备用。其浓度为1mg/ml。1.5测定方法分别取标准品溶液和供试品溶液盛装于2ml自动进样瓶中,进行自动进样(进样量为20ul),注入液相色谱仪,按外标法以峰面积计算供试品中谷氨酰胺的含量。2 实验结果2.1系统适用性试验在上述色谱条件下,取标准溶液进行自动进样,连续进样6针,谷氨酰胺峰与其相邻色谱峰的分离度均大于1.5;理论板数、拖尾因子,6次色谱峰峰面积的相对标准偏差(RSD)、六次色谱峰的保留时间分别为:9.80、9.79、9.79、9.78、9.70、9.71,其相对标准偏差RSD＝1.2%,小于2.0%;6次色谱峰面积分别为:1205488、10665、1200380、1204391、1170905、1186594,其相对标准偏差标准偏差(RSD)为1.2%小于5%;拖尾因子分别为:1.2、1.2、1.3、1.4、1.4、1.4,其相对标准偏差标准偏差(RSD)为0.7%均小于2%;理论塔板数分别为:4886、4867、5001、5185、5545、5867,均大于4000。2.2线性用对照品制备不同浓度的样品,使其高效液相色谱法测定谷氨酰胺的含量①秦朝英 冯瑞彩 姜媛嫒 崔节荣 陈平 闫倩莹 田智慧(山东鲁抗医药股份有限公司 山东济宁 272100)摘 要:建立高效液相色谱法测定谷氨酰胺含量的方法。色谱柱为氨基柱,流动相为:0.05mol/L的磷酸二氢钾(取磷酸二氢钾6.8g,加水至1000ml,用磷酸调节pH值为4.0)∶乙腈＝70∶30,检测波长为215nm,结果表明该方法在所试验的浓度范围内具有良好的线性关系,r为0.999,精密度RSD等于0.37%,平均回收率为98.3%。关键词:谷氨酰胺 高效液相色谱法 测定中图分类号:R927文献标识码:A文章编号:1672-3791(2014)05(b)-0240-02
①作者简介:秦朝英(1971—),女,高级化验员,工程师。图1 谷氨酰胺浓度与峰面积关系 10.012.515.017.520.022.525.027.5min0500010000150002000025000300003500040000uV图2 谷氨酰胺、谷氨酸、焦谷氨酸的色谱比较图(下转242页).com.cn. All Rights Reserved.科技资讯2014 NO.14SCIENCE & TECHNOLOGY INFORMATION学 术 论 坛
242科技资讯 SCIENCE & TECHNOLOGY INFORMATION浓度分别为0.5mg/ml、0.75mg/ml、1.0mg/ml、1.25mg/ml、1.5mg/ml。每个浓度连续进样3针。以检测得到的峰面积平均值、浓度作线性回归,其线性回归方程为y=1188457x,其中y为峰面积,x为谷氨酰胺浓度(见图1),线性相关系数R2为0.999。结果表明在目标浓度0.5mg/ml～1.5mg/ml内,该方法具有良好的线性关系。2.3准确度分别制备浓度约为1mg/ml的对照品溶液和浓度约为1mg/ml的样品溶液。分别吸取样品溶液1ml和标准溶液0.8ml;样品溶液1ml和标准溶液1.0ml;样品溶液1ml和标准溶液1.2ml分别加入10ml容量瓶中,用流动相稀释定容至刻度,制备浓度分别为80%、100%、120%的三种浓度的混合溶液。每个浓度连续进样三针,记录实验结果。实验结果表明该方法在三个浓度下其回收率分别为99.5%、97.6%、97.9%。平均回收率达到98.3%,表明该测定方法具有较高的检测准确度。2.4精密度称取标准品约250mg,精密称定于50ml容量瓶中,用纯化水稀释并定容至刻度,摇匀,作为贮备液备用。再分别加标准贮备溶液0.8ml、1.0ml、1.2ml,用流动相稀释定容至刻度,摇匀,制成浓度分别为80%、100%、120%的三种浓度,备用。每个浓度连续进样三针,记录色谱图。实验结果表明三个实验下其相对标准偏差RSD分别为0.47%、0.42%、0.20%,平均相对标准偏差RSD=0.37%。该结果表明该方法重现性较好。2.5专一性从图2可以看出,用该方法可以较好的分离测定谷氨酰胺的相关物质如谷氨酸、焦谷氨酸等,具有专一性高的特点。3 讨论本文建立的高效液相色谱法测定谷氨酰胺含量的方法,其检测波长为215nm,流动相为0.05mol/L的磷酸二氢钾(用磷酸调节PH值为4.0)∶乙腈＝70∶30,实验结果表明该方法在其线性范围内具有专一性高,检测结果准确的特点。参考文献[1]吴建,邓留杰,郭利芬,等.毛细管电泳法检测转化液中谷氨酰胺和谷氨酸[J].食品科学,2008,29(4).着用这种全新的科普活动来突破科普传播的瓶颈。3 菠萝科学奖概况“菠萝科学奖”是由浙江省科协支持,浙江省科技馆与科技媒体果壳网合力打造的科学奖项。希望通过征集科学领域内“好笑而严肃”的研究成果,与更多的人一起分享科学技术有趣的一面。2012年4月7日,首届菠萝科学奖在杭州举行颁奖典礼。“向好奇心致敬”是菠萝科学奖的口号,菠萝科学奖算是中国版的“搞笑诺贝尔奖”,奖励那些有想象力、有趣的科学研究成果,唤起人们对科学的好奇心和热情。“菠萝科学奖”和普通科学奖项最大的特点,在于既有学术研究的严谨性,又不乏趣味性。其研究的对象和方法,往往能令普通人会心一笑。比如,首届菠萝科学奖化学奖得主——华中农业大学食品科学技术学院的“瓦罐鸡汤主要滋味物质研究”,就是通过严谨、科学的调研方法来研究瓦罐鸡汤为什么味道比较好的原因,研究内容看似搞笑,但研究过程严肃科学。菠萝科学奖共设置了5个常规奖项,分别是物理奖、化学奖、医学生物奖、数学奖和心理学奖;2个专项奖,发明奖和幻想奖;2个特殊奖项,菠萝U奖和菠萝Me奖。评委组由科学家评委团、星光评委团和路人评委团构成,以保证颁奖结果的“科学性”“趣味”“想象力”等指标[1]。4 菠萝科学奖对科普工作的借鉴意义相较于以往的科普活动,菠萝科学奖的不同之处,或者说是借鉴意义有以下几点。首先,科普理念的创新。“向好奇心致敬”这句口号掷地有声地喊出了菠萝科学奖的科普理念,就是要唤起公众对科学的好奇心。兴趣是最好的老师,许多伟大的科学家和伟大的研究成果,都是从最初的兴趣、好奇和热情一步步发展而来的。虽然社会各界多年以来都在呼吁科普工作不能枯燥乏味,要抓住公众的兴趣点。但是在实际操作过程中却又掉入了科学传播“高端、大气、上档次”、“枯燥、乏味、没兴趣”的陷阱。菠萝科学奖试图打破这种理念上的束缚,把唤起民众对科学的好奇心和热情作为科普工作的首要任务,进一步拉近公众和科学之间的距离,让科学变得更亲民,让“生活处处有科学”不再是一句空的口号。其次,科普形式的创新。菠萝科学奖是社会团体发起的科技奖项,而我国其他许多科技奖项都是官方的,是政府颁发的。因此,菠萝科学奖的出现,某种程度上是回应了科技发展的时代需求,反映了我国非政府科技奖励在地方的探索和尝试,对于推动我国科技奖励工作的创新和发展具有重要意义。类似菠萝科学奖这样的非政府科技奖项成为了国家科技奖励体系中的重要补充,不仅在一定程度上弥补了国家科技奖励无法顾及的地方,同时也扩大了整个科技奖励的范围。我国政府科技奖励的对象主要针对能够获得重大社会收益的发明创造,内容和形式比较正统,氛围过于严肃。相比较而言,菠萝科学奖针对个体且侧重于打造奖项的独特个性。该奖项将娱乐与科学两个要素相结合,以娱乐的方式传播科学,更好地激发公众对科学的兴趣。在一定程度上填补了我国社会科学领域的空白,且较好地避免了奖项交叉重复情况的发生,更好地激发我国科技工作者的积极性和创造性,为促进我国科学技术事业的发展起到独特作用[2]。5 结语我国科技馆建设虽然起步较晚,但发展较快。面对日新月异的社会,科学技术日益更新,科技馆只有不断创新科普传播手段,才能满足公众不断增强的科学文化需求。菠萝科学奖只是科技馆科普工作创新中的一个环节,我们期待科技馆能够推层出新,更好地承担起科普教育的功能。参考文献[1]菠萝科学奖[EB/OL].http://baike.baidu.com/.[2]张楠．从菠萝科学奖探析非政府科技奖项的发展轨迹[J]．齐齐哈尔大学学报,2012(6):2．(上接240页).com.cn. All Rights Reserved.
