西索米星发酵液的薄层层析生物显影测定

薄层色谱自显影法分离检测海洋放线菌T-2-3中抑菌成分目的采用薄层色谱生物自显影方法对北极海洋放线菌T-2-3提取物的抑菌成分进行研究。

方法采用大孔树脂对该放线菌活性成分进行富集，并针对活性成分进行薄层生物自显影检测。

结果经检测，Rf 0.40的点为活性化合物。

结论薄层色谱生物自显影法是一种快速分离检测抑菌成分的实验手段。

Abstract：ObjectiveTo investigate the antimicrobial components in extracts of Arctic Marine actinomycetes T-2-3 by TLC bioautography. MethodsThe active fraction was extracted by macroporous resin, and detected by TLC bioautography. ResultsThe compoud of Rf 0.40 behave antimicrobial activity. ConclusionTLC bioautography is a fast method to isolate and detect antimicrobial activity components.Key words：TLC bioautography; Marine actinomycetes; Antimicrobial activity 海洋微生物由于其特殊的生存環境，表现出特异的代谢方式，同时可以产生结构新颖且具有特殊生物活性的化合物，是海洋生物活性物质的重要来源[1]。

目前为止，已知有22000多种微生物次级代谢产物中70%由放线菌产生，而10000多种抗生素由链霉菌属产生[2]。

链霉菌属在放线菌中占有重要的地位，是生物活性物质的重要来源。

薄层色谱生物自显影法（TLC-Bioautography）是近年来应用的一种集分离、生物活性和鉴定于一体的”化合物+生物活性”的测定方法[3-4]。

HPLC法测定硫酸西索米星注射液辅料和抑菌剂含量黄春青;唐永强;曹桂红;李鸿迪;许波【摘要】Objective To establish an HPLC mothod and determine the excipients and preservatives of sisomicin sulfate injection.Methods Using Thermo Syncronis aQ (250mm×4.6mm,5μm) chromatographic column with acetonitrile-water (using phosphoric acid to adjust pH to 2.2) as the mobile phase was used.The flow rate was 1.0mL/min,the column temperature was 30℃,the detection wavelength was 200nm,and the volume of injection was 10μL.The determination of the content of L-cysteine,sodium hydrogen sulfite,disodium edetate,sodium pyrosulfite,phenol,methylparaben,propyl 4-hydroxybenzoate and benzylalcohol.Results Each components could be effectively separated.Good linearity was shown for L-cysteine in the concentration range of 0.09882～1.976mg/mL (R=0.9995).Good linearity was shown for sodium hydrogen sulfite in the concentration range of 0.4948～9.896mg/mL (R=0.9998).Good linearity was shown for disodium edetate in the concentration range of 0.03980～0.6766mg/mL (R=0.9995).Good linearity was shown for benzylalcohol in the concentration range of0.7603～15.21mg/mL (R=0.9913).Good linearity was shown for phenol in the concentration range of 0.09722～1.944mg/mL (R=0.9987).Good linearity was shown for methylparaben in the concentration range of0.05045～1.009mg/mL (R=1.0000).Good linearity was shown for propyl 4-hydroxybenzoate in the concentration range of 0.01562 ～0.3124mg/mL(R=1.0000).Good linearity was shown for sodium pyrosulfite in the concentration range of 0.9061～6.041mg/mL (R=0.9996).The average recovery rates were89.51％,91.18％,109.62％,103.38％,101.17％,99.64％,100.28％ and132.96％,and RSD (n=6) were 4.1％,1.7％,13.0％,0.3％,0.3％,1.8％,1.0％ and 2.8％.Conclusion A more accurate and efficient HPLC method for the determination of the excipients and preservatives in sisomicin sulfate injection was established,which provided a basis for the improvement of the quality standard of sisomicin sulfate injection.%目的建立HPLC法测定硫酸西索米星注射液中辅料和抑菌剂方法.方法采用ThermoSyncronisaQ(250mm×4.6mm,5μmn)色谱柱,以乙腈-水(磷酸调pH值为2.2)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0mL/min;柱温30℃,检测波长200nm,进样量10μL,测定硫酸西索米星注射液中L-半胱氨酸、亚硫酸氢钠、依地酸二钠、焦亚硫酸钠、苯酚、羟苯甲酯、羟苯丙酯和苯甲醇含量.结果各成分之间能有效分离,L-半胱氨酸在0.09882～1.976mg/mL、亚硫酸氢钠在0.4948～9.896mg/mL、依地酸二钠在0.03980～0.6766mg/mL、苯甲醇在0.7603～15.21 mg/mL、苯酚在0.09722～1.944mg/mL、羟苯甲酯在0.05045～1.009mg/mL、羟苯丙酯在0.01562～0.3124mg/mL和焦亚硫酸钠在0.9061～6.041 mg/mL范围内呈良好的线性关系,回收率分别为89.51％、91.18％、109.62％、103.38％、101.17％、99.64％、100.28％和132.96％,RSD(n=6)分别为4.1％、1.7％、13.0％、0.3％、0.3％、1.8％、1.0％和2.8％.结论建立了较为准确高效的测定硫酸西索米星注射液中辅料和抑菌剂的HPLC方法,为硫酸西索米星注射液质量标准的提高提供依据.【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2018(043)003【总页数】6页(P348-353)【关键词】硫酸西索米星注射液;辅料;抑菌剂;HPLC【作者】黄春青;唐永强;曹桂红;李鸿迪;许波【作者单位】贵州省食品药品检验所,贵阳550004;国药集团同济堂(贵州)制药有限公司,贵阳550004;贵州省食品药品检验所,贵阳550004;贵州省食品药品检验所,贵阳550004;贵州省食品药品检验所,贵阳550004【正文语种】中文【中图分类】R978.1;R917硫酸西索米星(sisomicin sulfate)是由小单孢菌所产生的一种氨基糖苷类抗生素[1]，抗菌谱与庆大霉素相似[2]。

薄层荧光扫描法测定花生根中白藜芦醇的含量韩小丽;张士真;呼亚旭;李明静【摘要】在硅胶G铝箔板上,以V (氯仿): (丙酮):V (甲酸)=8:1:0.2的溶液为展开剂,狭缝尺寸为3 mm×0.45 mm,检测波长为335 nm,采用薄层荧光扫描法测定花生根中白藜芦醇的含量.结果表明:白藜芦醇在21.6 ～108.0 ng范围内线性关系良好,回归方程为Y=-664.701+12.666 X,R = 0.996 9,花生根中白藜芦醇的含量为358.89 μg/g.【期刊名称】《化学研究》【年(卷),期】2010(021)005【总页数】3页(P88-89,96)【关键词】薄层荧光扫描法;白藜芦醇;花生根【作者】韩小丽;张士真;呼亚旭;李明静【作者单位】河南省医药学校,河南,开封,475001;商丘市技师学院,河南,商丘,476000;河南大学,化学化工学院,河南,开封,475004;河南大学,化学化工学院,河南,开封,475004【正文语种】中文【中图分类】O652.63白藜芦醇(resveratrol)是一种具有生物活性的多酚类化合物,其化学名称为3,4′,5-三羟基二苯乙烯.目前至少已经在21科31属72种植物中发现了白藜芦醇的存在,如豆科的落花生属、葡萄科的葡萄属,决明属、百合科的藜芦属、槐属[1]等.由于它具有抗氧化,抑制癌细胞增殖,抑制血小板活性,消炎等多种药理活性[2-4],因此被广泛应用于医药、食品、化妆品等行业.目前,开发利用富含白藜芦醇的保健植物愈来愈受到人们的关注,有关从葡萄皮、虎杖中提取白藜芦醇的研究已有大量的文献报道[5-7],而花生根中白藜芦醇的研究报道较少,而且主要集中于用 HPLC法测定白藜芦醇的含量[8-10].花生根为花生的不可食部分,如能充分利用,既可以提高花生种植的附加值,又可避免环境污染,对农产品资源开发与利用将有重要的意义.作者用薄层荧光扫描法对花生根中白藜芦醇的含量进行了测定,为综合利用提供参考.1.1 仪器与材料970CRT荧光分光光度计(上海精密科学仪器有限公司),CAMAG TLC SANNER 3型薄层扫描仪(瑞士),CAMAG LINOMAT5半自动点样仪(瑞士),铝箔板(德国,20 mm×20 mm×5 mm),白藜芦醇对照品(购自中科院昆明植物所植化室),其他试剂均为分析纯.将花生根(采自河南开封近郊)洗净、晾干、粉碎后,备用.1.2 色谱及扫描条件展开剂:V(氯仿)∶V(丙酮)∶V(甲酸)=8∶1∶0.2;上行展开,展距5 cm;单光束反射式荧光线性扫描,激发波长335 nm;狭缝尺寸3 mm×0.45 mm,滤光片 K400;扫描速度20 mm·s-1.2.1 对照品溶液的制备精密称取白藜芦醇对照品适量,用乙酸乙酯溶解,定容至25 mL容量瓶中,配制成浓度为0.108 0 g/L的对照品溶液备用.2.2 样品溶液的制备取花生根粗粉3 g,精密称定,置于索氏提取器中,用90 mL 95%的甲醇冷浸,分三次加入,冷浸24 h后索氏提取3 h,水浴温度75℃.提取液旋转蒸至醇干.加入等体积石油醚萃取三次,萃余液用等体积乙酸乙酯萃取三次,收集有机相,旋转蒸干.用乙酸乙酯溶解,转移至10 mL容量瓶中定容,待测.2.3 标准曲线的考察用半自动点样仪对白藜芦醇对照品溶液进行点样,点样量分别为0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1.0μL,点于同一块硅胶 G铝箔板上进行检测,以白藜芦醇峰面积(Y)为纵坐标,进样体积(X)为横坐标,绘制标准曲线,回归方程为:Y=-664.701+12.666X,R=0.996 9;在21.6 ng～108.0 ng范围内线性关系良好.2.4 样品含量测定精密称取等量的花生根粗粉(3份),按照2.2项制备样品溶液,在1.2项中的色谱和扫描条件下进行测定,测得样品含量平均值为358.89μg/g,RSD为1.49%.测定结果见表1.2.5 精密度试验精密吸取5份0.3μL的对照品溶液,分别点于同一块硅胶 G铝箔板上,展开,扫描,测得峰面积值分别为3 622.57,3 682.60,3 529.69,3 524.13,3 816.76.平均值为3 635.15,RSD为3.34%.2.6 重现性试验取2.4项中样品2,分别吸取0.3μL在同一块硅胶 G铝箔板上点 5个点,扫描,测得峰面积值分别为4 958.45,4 817.56,4 818.45,5 120.46,4 996.81,平均值为4 942.35,RSD为2.60%.2.7 稳定性试验取上述样品2,放置5 h、10 h、15 h和24 h后分别进行测定,测得样品中白藜芦醇含量分别为363.98,363.69,359.77,359.44,359.34μg/g,平均值为361.24μg/g,RSD为0.66%.可知样品在冰箱内(6℃)存放24 h后白藜芦醇含量基本稳定.2.8 回收率试验取2.4项中样品溶液5.0 mL,加入0.108 0 g/L的对照品溶液0.5 mL,用乙酸乙酯溶解,并定容至10 mL容量瓶中,在1.2项中的色谱和扫描条件下测定,回收率分别为103.86%,105.08%,105.52%,平均回收率为104.82%,RSD=0.80%(n=3).2.9 荧光激发波长的选择白藜芦醇在366 nm的紫外光照射下能产生荧光,但这并不是最佳的荧光激发波长.通过荧光分光光度计的检测得知,最佳激发波长为335 nm,荧光发射波长为375 nm,本试验中的荧光为Stokes荧光.71.[32]林英光,杨卓如,程江.纳米掺锶羟基磷灰石的制备及其抗菌性能研究[J].化工新型材料,2007,35(3):20-24.[33]Kim T N,Feng Q L,Kim J O,et al.Antimicrobial effects of metalions(Ag+,Cu2+,Zn+)in hydroxyapatite[J].J Mater Sci:MaterMed,1998(9):129-134.[34]Ahn E,Gleason N,Nakahira A,et al.Nanostructure processing of hydroxyapatite-based bioceramics[J].N ano Lett,2001,1(3):149-153. [35]Li L,Liu Y,Tao J,et al.Surface modification of hydroxyapatite nanocrystallite by a small amount of terbium provides a biocompatible fluorescent probe[J].J Phys Chem C,2008,112(32):12219-12224.[36]邓霞,陈治清,钱志勇,等.纳米羟基磷灰石/脂肪族聚酯酰胺复合材料[J].生物医学工程学杂志,2008,25(2):378-381.[37]曹惠,陈新,邵正中.羟基磷灰石/丝素蛋白复合纤维的制备及其矿化研究[J].化学学报,2008,66(18):2059-2064.[38]Chen F,Wang Z C,Lin C J.Preparation and characterization of nano-sized hydroxyapatite particles and hydroxyapatite/chitosan nano-composite for use in biomedical materials[J].Mater Lett,2002,57(4):858-861.[39]Li B,Hu Q,Qian X,et al.Bioabsorbable chitosan/hydroxyapatite composite rod prepared by in-situ precipitation for internal fixation of bone fracture[J].Acta Polymerica Sinica,2002(6):828-833.[40]Nukavarapu S,Kumbar S,Brown J,et al.Polyphosphazene/nano-hydroxyapatite composite microsphere scaffolds for bone tissue engineering[J].Biomacromolecules,2008,9:1818-1825.[41]Sundaram C S,Viswanathan N,Meenakshi S.Uptake of fluoride by nano-hydroxyapatite/chitosan,a bioinorganic composite[J].BioresTechnol,2008,99:8226-8230.[42]Reverchon E,Pisanti P,Cardea S.Nanostructured PLLA-hydroxyapatite scaffolds produced by a supercritical assisted technique[J].Ind Eng Chem Res,2009,48:5310-5316.[43]Wen J,Li Y,Zuo Y,et al.Preparation and characterization of nano-hydroxyapatite/silicone rubber composite[J].Mater Lett,2008,62:3307-3309.。

原料药事业部**生物工程有限公司l 目的建立一个西索米星菌种工艺规程，供菌种中心人员统一操作，并作为制定相应标准操作程序的依据。

2 适用范围菌种中心西索米星菌种生产工艺。

3 责任者菌种中心操作人员，菌种中心、生产部、品保部负责人，总工程师对此工艺规程负责。

目录1 产品概述 (2)2 原材料质量规格 (4)3 生化反应及工艺流程图 (5)4 工艺过程及质量控制 (6)5 菌种保存 (8)6 菌种选育 (8)7 主要设备一览表 (10)8 技术安全及防火 (11)9 附页 (11)10 修订简历 (11)1 产品概述1.1 西索米星（Sisomicin）是美国先令公司在70年代开发的一种广谱抗生素，属氨基糖苷类，以其为母核可合成另一种新抗生素奈替米星（Netilmicin），它具有疗效好，副作用小的特点。

1.2 与大多数抗生素一样，西索米星也是一种由微生物发酵产生的次级代谢产物，国外多由伊尼奥氏小单孢菌发酵产生；国产西索米星是由福建省微生物研究所筛选得的伊尼奥氏小单孢菌澄江变种产生。

1.3 目前我公司主要生产菌种为Y系列白色变株，其发酵生物效价可达1450 u/ml[抗生素名称]西索米星[化学名称]O—3—去氧—4—C—甲基—3—甲胺基—β—L—阿拉伯糖吡喃糖基(1—4)—O—[2,6—二氨基—2,3,4,6—四去氧—α—D—甘油基—4—烯己吡喃糖基—(1—6)]—2—去氧—L—链霉胺[结构式]OCH2O H2N OHNH2NHCH3OOH3CHONHCH3HO西索米星及其主要小组分、衍生物[主要产品][抗菌谱]西索米星是一种广谱抗菌素,与庆大霉素(Gentamicin)相似，对G+细菌（除链霉菌），包括结核分枝杆菌的活性很强。

对G—细菌，包括多数绿脓杆菌具有相当活性。

Neti对一些G--杆菌都有较强抗菌活性。

2 原材料质量规格2.1 生化试剂（分析纯或化学纯）2.2 工业（规格）3 生化反应及工艺流程图3.1 化学反应过程（西索米星生物合途径）2—去氧链霉胺a巴龙霉胺b庆大霉素A2c抗生素JI—20A e 庆大霉素X2d庆大霉素Af g西索米星 h 抗生素66—40B （a）加入D—葡萄糖胺（b）加入D—葡萄糖（c）C—3//：N—甲基胺化（d）C—4//：甲基化和差向异物化（e）C—6/：胺化（f）失去3/，4/--(OH)2和4/--5/--不饱化（g）C—6/：胺化和4/--5/--不饱化（h）C—4//：甲基化和差向异物化3.2 工艺流程图冷冻管母瓶种子摇瓶发酵33±2︒C 34±1︒C 120h 48±2h斜面34±1︒C5－6d生产能力测定种子34±1︒C并瓶车间一级罐 48±2h3.3 设备流程图备注：（a）冷冻管（b）250ml母瓶种子（c）500ml茄子瓶斜面（d）500ml种子瓶（e）1000ml菌丝瓶（用于车间进罐）（f）250~500ml发酵摇瓶4 工艺过程及质量控制4.1 各种培养基配比（%）原料名称固体培养基（％）摇瓶种子培养基（％）摇瓶发酵培养基（％）土豆淀粉 1.5 2.0 6.0 葡萄糖0.5 0.5K 2HPO40.05干酪素0.2 0.2玉米浆—— 1.0MgSO40.05酵母粉0.1 0.54.2 生产能力测定4.2.1 控制适当的菌龄（镜检菌丝着色均匀，伸展，以10%的接种量移入发酵瓶，33±2℃深层培养110－130小时止，放瓶。

纸层析-酶标仪法测定发酵液中γ-氨基丁酸张敏; 薛正莲; 余飞; 刘艳; 王洲【期刊名称】《《食品与发酵工业》》【年(卷),期】2019(045)015【总页数】6页(P262-267)【关键词】γ-氨基丁酸; 测定; 纸层析; 酶标仪【作者】张敏; 薛正莲; 余飞; 刘艳; 王洲【作者单位】安徽工程大学生物与化学工程学院微生物发酵安徽省工程技术研究中心安徽芜湖 241000【正文语种】中文γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)是一种天然非蛋白质类氨基酸，具有降血糖、降血压及抗抑郁等重要的生理功能，作为功能性食品在市场上具有较广的前景[1-4]。

其主要是由谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase, GAD)催化L-谷氨酸形成。

GABA的测定方法有很多种，比如柱前衍生化高效液相色谱法[5-7]、核磁共振波谱技术[8]、气质联用法[9]、毛细管电泳法[10-11]、分光光度法[12-14]、氨基酸分析仪测定法[15]等。

但以上方法大部分仪器昂贵、耗时较长、过程繁琐，不适合实验室大批量定性定量检测GABA。

纸层析能够快速定性检出各种氨基酸物质，其中GABA常用的定性方法就是通过纸层析法直观检测出来，采用洗脱手段将薄层色谱上的目标氨基酸斑点洗脱下来，结合分光光度计在一定波长下检测出对应浓度的吸光度[16-17]。

纸层析-分光光度法既能定性又能定量检测出氨基酸，且检测出的GABA是纯物质，消除了发酵液中其他物质的干扰，大大提高了试验的准确性与高效性，为后续提纯GABA试验过程奠定了基础[18]。

但分光光度计检测过程相对繁琐，耗时较长，1次能检测的样品数有限，降低了试验速度与效率。

酶标仪检测原理与分光光度计一样，但酶标仪能够同时检测多个样品，检测时间少，所需样液少，节约了大量试剂，并在一定程度上保护了环境。

目前关于纸层析-酶标仪法测定微孔板发酵液中GABA产量的方法还未见文献报道，因此本研究建立纸层析-酶标仪法，并对影响此方法的重要因素进行优化，为后续高通量选育GABA高产菌株奠定了基础。

毕业论文文献综述生物工程生物自显影技术简介一、前言目前，从天然产物中筛选、分离和提取天然抗菌成分已成为天然防腐剂和新药研发等研究领域的热点，筛选得到的产物往往需要进行生物活性鉴定，传统的鉴定方法需要在整个动物或者是器官上进行，这样不仅需要大量的活体实验体，还需要大量的目标提取物，实验过程复杂，操作要求高，无法满足实验要求，这样就使得我们去寻找并建立灵敏、方便、快捷且经济的活性检测方法，目前都采用微量生物活性物质的鉴定方法，如酶法[1]，微生物抑菌法，免疫原法等，这些方法都有各自的特点，适合于不同实验，本篇文献介绍一种操作简单、耗费低、灵敏度和专属性高的生物活性检测方法，生物自显影法，并简要介绍该方法的几种分类和应用。

二、主题1、TLC生物自显影技术简介普通生物自显影技术是一种利用薄层色谱来对生物活性进行测定的方法，薄层色谱是一种分离色谱，他能将天然产物初提物中的活性成分和非活性成分在薄层板上很好的分离并展开，再通过与混合了微生物（各种真菌，致病菌，病原微生物）的培养基相接触，通过一定的手段培养，培养基上会出现两个不同的区域，一个是被微生物覆盖的区域，即非活性区域，另一个出现抑菌圈的地方则是活性区域，相对薄层板上的展开位置就是生物活性物质的所在，通过洗脱剂可将其收集。

再参考该物质的标准展开样板，则可得知该物质的化学结构，分子式等信息。

2、TLC生物自显影技术的分类[2]2.1 琼脂扩散法琼脂扩散法是较早的一种生物自显影法，其操作步骤就是最原始的步骤，所需要注意的是，在实验过程中可在培养基中加入一定量的四挫盐（如MTT，INT等），四挫盐本身颜色较浅，但是它在接触了微生物的代谢产物之后会变成深色，有助于我们的判断，还有一点就是如果薄层板采用的是硅胶吸附剂，那么可以在硅胶和培养基之间放置一张湿润的滤纸，因为琼脂有粘性，它与硅胶层接触后会产生黏着，会破坏抑菌圈的观察。

2.2 直接TLC生物自显影法该法与上述方法的区别是它的载体由培养基变成了薄层板，用特制培养液培养细菌制成菌悬液，然后将菌悬液喷洒在展开完成的薄层板上，一定潮湿避光的条件下培养一定时间，同样加入一定量的四挫盐，但是该方法只适用于那些能在薄层板上很好生长的真菌类微生物。

西索米星发酵液的薄层层析生物显影测定陈剑锋;郭养浩;张元兴;罗义发;林春红;谢涵宾【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2002(027)004【摘要】通过对检定菌的敏感性,检定培养基、展开剂和发酵液样品等影响因素的考察,建立了一种检测发酵液中西索米星浓度的方法.采用短小芽孢杆菌为生物显影检定菌,双层琼脂扩散法于37℃培养16～18h,控制检定培养基的pH为7.5～8.0,发酵液样品pH为4.5～7.0,展开剂为15%的KH2PO4,点样量为10μl,薄板和菌层接触时间为20min等检定条件,能用于发酵液中西索米星效价的直接测定,其线性回归方程为Y=0.0115X+1.747,r=0.9877.在相同条件下,对536μg/ml的西索米星标准液连续测定6次,测定结果为(531 0±12.7)μg/ml,RSD=3.28%,该法具有较高的实验重复性和准确性,分析稳定性基本符合要求.【总页数】4页(P224-226，236)【作者】陈剑锋;郭养浩;张元兴;罗义发;林春红;谢涵宾【作者单位】福州大学药物生物技术与工程研究所,福州,350002；华东理工大学生物反应器国家重点实验室,上海,200237;福州大学药物生物技术与工程研究所,福州,350002;华东理工大学生物反应器国家重点实验室,上海,200237;福州福兴医药有限公司,福州,350011;福州大学药物生物技术与工程研究所,福州,350002;福州福兴医药有限公司,福州,350011【正文语种】中文【中图分类】R927【相关文献】1.薄层层析-生物自显影法筛选油菜蜂花粉中活性成分 [J], 孙丽萍;杜夏;徐响;董捷;安仲姚;杨佳林2.反相离子对色谱法测定发酵液中西索米星的含量 [J], 刘颖;张引;高悟岩;黄建峰;周剑3.薄层层析后生物显影检测茶多酚组分的抑菌效果 [J], 黄洋;姜建国;严媛;姚开4.薄层扫描法测定微生物发酵转化液中熊果苷含量 [J], 陈思名;梁静娟;庞宗文;农磊5.薄层层析和高效液相层析技术结合测定植物叶片水杨酸含量 [J], 李兆亮;原永兵;李冬梅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。