生理学实验4 红细胞渗透脆性的测定ppt课件
- 格式:ppt
- 大小:180.00 KB
- 文档页数:13
红细胞渗透脆性试验一、原理红细胞渗透脆性试验(erythrocyte osmotic fragility test)是检测红细胞对不同浓度低渗盐溶液抵抗力的一种半定量试验。
在低渗盐溶液中,由于水分渗入细胞内,红细胞会膨胀甚至破裂、溶血。
因此将红细胞加到不同浓度的低渗盐溶液中,观察发生溶血的情况,可判断红细胞对低渗盐溶液的抵抗能力。
红细胞开始出现溶血的低渗盐溶液浓度为开始溶血浓度,红细胞完全溶血的盐溶液浓度为完全溶血浓度。
当某些原因导致红细胞对低渗盐溶液抵抗能力降低时,红细胞容易破碎,发生溶血,称为红细胞渗透脆性增加;反之,称为红细胞渗透脆性降低。
二、检测方法(一)试剂与器材1、器材:分析天平、注射器、针头、无菌小试管等。
2、试剂:1% NaCl溶液:用分析天平称取分析纯 NaCl 1.000g,加少量蒸馏水溶解,于100ml容量瓶中用蒸馏水定容,置于玻璃瓶中灭菌后使用。
(二)操作1、取12支无菌小试管编号,配制不同浓度的 NaCI 溶液。
2、用肝素湿润的注射器抽取待检者血液1ml,向各管中加入1滴(中度以上贫血的标本加2滴)全血,轻轻摇,室温静置2小时后观察结果。
3、结果判断从1号管开始观察溶血情况。
不溶血:上清液透明无红色;开始溶血:上清液刚呈浅红色,管底有较多未溶的红细胞;完全溶血:溶液呈透明红色,管底无红细胞。
三、参考区间开始溶血 NaCl浓度:3.8~4.6g/L;完全溶血 NaCl浓度:2.8~3.2g/L四、注意事项1、NaCl必须干燥,可将分析纯氯化钠于100℃下烘干,置于干燥器中完全冷却后再准确称量使用。
2、所用器具应干燥清洁,避免出现人为溶血。
向试管内滴加血液时须将血液直接注入试剂中,不可沿管壁注入,混匀时动作须轻柔。
3、观察溶血情况时以白色背景为宜。
4、结果不易判断时,可低速短时离心后观察5、每次试验应以相同实验条件做正常对照。
被检者与正常对照开始溶血管的 NaCI浓度相差0.4g/L即有诊断价值。
红细胞渗透脆性实验Measuring for erythrocyte osmotic fragility【教学对象与学时】一、教学对象:五年制本科二、学时:4学时【预习要求】预习红细胞生理特性【目的要求】一、操作:学习用试管法测定红细胞渗透脆性二、理论:1.了解红细胞渗透脆性实验的原理。
2. 观察红细胞对不同渗透张力的细胞外溶液的抵抗力,进一步理解细胞外液渗透张力对维持红细胞正常形态与功能的重要性。
【重点和难点】一、重点1. 准确配制不同渗透张力的溶液,掌握正确的红细胞渗透脆性测量方法。
2. 理解红细胞渗透脆性实验的原理。
二、难点1. 准确配制不同渗透张力的溶液。
2. 掌握正确的红细胞渗透脆性测量方法。
【教学过程设计】1.课前提问和预习检查。
2.讲解红细胞渗透脆性实验的原理。
3.介绍不同渗透张力溶液的配制法和抗凝血液的制备。
4. 学生分组进行实验,观察红细胞对蒸馏水、1.9%尿素溶液和不同浓度的NaCl溶液的抵抗力。
5.实验结束前汇总全班实验结果,讨论实验结果,理解实验结果出现的原因。
【课前预习检查或提问】一、何谓红细胞渗透脆性?其正常值是多少?二、影响红细胞渗透脆性的因素有哪些?【课前讲解】一、实验设计的原理将红细胞悬浮于低渗盐溶液中,水将在渗透压的作用下渗入细胞,于是红细胞发生膨胀,由正常的双凹圆碟形(图1A)变成球形(图1B),并开始破裂而发生溶血。
红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗透脆性。
但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力,这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性的指标。
对低渗盐溶液抵抗力小,表示渗透脆性高;相反,则表示渗透脆性低。
同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。
将血液滴入不同浓度的低渗NaCl溶液中可检测其抵抗力的大小,刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为该血液中红细胞的最小抵抗力;出现完全溶血溶液浓度,为该血液中红细胞的最大抵抗力。
前者代表红细胞的最大渗透脆性,后者代表红细胞的最小渗透脆性。
二、影响红细胞渗透脆性的因素有哪些?红细胞自身因素;凡能影响红细胞表面积/体积的因素均可影响红细胞渗透脆性,如珠蛋白数量不足或完全缺乏、遗传性球形细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血伴继发球形细胞增多、缺铁性贫血、红细胞寿命、等实验因素:血液放置时间较长(一般不能超过6小时)、低渗盐溶液的浓度不准确、实验器具未清洁干燥、试管编号错误、向试管内滴加血液或混匀含红细胞的液体时动作用力过大、有凝血、抗凝剂用量过多、等【课前讲解】一、实验设计的原理将红细胞悬浮于低渗盐溶液中,水将在渗透压差的作用下渗入细胞,于是红细胞发生膨胀,由正常的双凹圆碟形变成球形,并开始破裂而发生溶血。
红细胞在低渗盐溶液中发生膨胀破裂的现象称红细胞渗透脆性。
但红细胞对低渗盐溶液具有一定的抵抗力,这种抵抗力的大小可作为衡量红细胞渗透脆性高低的指标。
对低渗盐溶液抵抗力小,表示渗透脆性高;相反,则表示渗透脆性低。
同一个体的红细胞对低渗盐溶液的抵抗力并不相同。
将血液滴入不同浓度的低渗NaCl溶液中可检测其抵抗力的大小,刚开始出现溶血的NaCl溶液浓度为该血液中红细胞的最小抵抗力;出现完全溶血溶液浓度,为该血液中红细胞的最大抵抗力。
前者代表红细胞的最大渗透脆性,后者代表红细胞的最小渗透脆性。
生理学上将渗透压与血浆的渗透压相等的溶液称为等渗溶液;能使悬浮于其中的红细胞保持正常体积和形态的溶液称为等张溶液。
等渗溶液不一定是等张溶液,如1.9%的尿素溶液虽是等渗溶液,但不是等张溶液;而等张溶液溶液一定是等渗溶液,如浓度为0.85%的NaCl 溶液既是等渗溶液又是等张溶液。
成败关键(注意事项)1. 血液最好新鲜制备。
2. 准确配制不同浓度的低渗盐溶液。
3. 所有玻璃器皿要求干燥清洁。
4. 向试管内滴加血液时不可用力挤压,不可将血泡沫注入试管。
混匀含红细胞的液体时动作应轻,以免造成溶血。
5. 观察溶血情况时以白色为背景。
6. 为使各管加血量相同,加血时持针角度应一致。
红细胞渗透脆性实验红细胞渗透脆性实验是一种常用的血液分析方法,用于评估红细胞膜的稳定性和弹性。
该实验利用了红细胞在不同渗透压下的脆性变化,可以对红细胞膜的功能、水平和吸收能力进行评估和分析,具有重要的临床意义。
实验原理:红细胞内部有一定的渗透压,当红细胞分离出体外时,如果外部环境的渗透压高于红细胞内的渗透压,则会通过半透膜透过膜进入红细胞内部,使红细胞体积膨胀,红细胞膜被撑开。
反之,当外部环境的渗透压低于红细胞内的渗透压时,水会从红细胞内部流出,红细胞体积缩小。
实验过程:1、准备标准盐水浓度,即0.9%的氯化钠溶液。
2、取一定量的患者血液样本,离心去上清液,弃去上清液后,将沉淀物用相同体积的0.9%氯化钠溶液洗涤3次。
3、取少量的红细胞沉淀,加入不同浓度的盐水,称出每种浓度的盐水加入相应的样本内。
4、使样本和盐水充分混合,放置不同的时间(一般为30分钟),孵育后进行离心处理。
5、标记沉淀物的红细胞体积,对分离出的上清液测定其吸光度(或乳胶凝集率)。
6、计算红细胞的溶血率,溶血率越高,表示红细胞的渗透脆性越高。
实验结果:在不同盐水浓度下孵育后,红细胞和盐水发生渗透压差异,导致红细胞脆性变化,失去完整性。
通过测定溶血率,可以得到红细胞的溶血程度,从而分析红细胞渗透脆性的高低,反映红细胞膜的稳定性和弹性。
一般来说,红细胞膜的完整性越强,渗透脆性越低,溶血程度越小;反之,红细胞膜的完整性越弱,渗透脆性越高,溶血程度越大。
实验注意事项:1、样本应在离心前密闭保存,避免污染。
2、孵育时间需控制在一定范围内,过长过短都会影响实验结果。
3、盐水和样本的比例应准确。
4、实验过程需严格按照操作流程,避免误差。
结论:红细胞渗透脆性实验可以反映红细胞膜的稳定性和弹性,对于临床疾病诊断、治疗和预后评估有着很高的应用价值。
在具体应用时,需结合其他临床检测项目综合分析,才能准确地诊断疾病并制定科学的治疗方案。
生理学实验讲义实验三影响红细胞渗透脆性及血液凝固的因素一、影响红细胞渗透脆性的因素【实验目的】1、本实验学习测定红细胞渗透脆性的方法。
2、加深对细胞外液渗透张力在维持红细胞正常形态与功能重要性方面的理解。
3、观察不同因素对红细胞渗透脆性的影响。
【实验原理】将红细胞悬浮于等渗NaCI液中,其形态不变。
若置于低渗NaCI溶液中则发生膨胀破裂,此现象称为红细胞渗透脆性。
但红细胞对低渗盐溶液具有一定抵抗力,其大小可用NaCI溶液浓度的高低来表示。
将血液滴入不同浓度的低渗NaCI溶液中,开始出现溶血现象的NaCI溶液浓度为该血液红细胞的最小抵抗力(正常为0.42-0.46%NaCI溶液)。
出现完全溶血现象时的NaCI溶液浓度为该红细胞的最大抵抗力(正常为0.28-0.32%NaCI溶液)。
前者代表红细胞的最大脆性(最小抵抗力),后者代表红细胞最小脆性(最大抵抗力)。
生理学上将能使悬浮于其中的药细胞保持正常形态的溶液称为等张溶液,不能跨过细胞膜的微粒所形成的力,但等渗溶液并不一定是等张溶液(如1.9%的尿素溶液)。
【材料与方法】一、实验对象家兔二、器械药品:试管架、小试管45支、载玻片、盖玻片、注射器、8号注射针头、棉签,1%NaCI 溶液、0.85%氯化钠溶液、蒸馏水,1.9%尿素溶液、地塞米松、皂甙。
三、方法与步骤(一)配制不同浓度的低渗NaCI溶液取口径相同的干洁小试管36支,分别编号排列在三个试管架上,按下表分别向各试管内加入1%NaCI溶液和蒸馏水混匀,配制从0.68-0.24%12种不同浓度的NaCI低渗溶液,每管总量均为2.5ml。
表7-1 不同浓度低渗氯化钠溶液的配制试剂试管编号1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 121%NaCl(ml) 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6蒸溜水(ml) 0.8 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9NaCl浓度% 0.68 0.64 0.60 0.56 0.52 0.48 0.44 0.40 0.36 0.32 0.28 0.24实验结果皂甙(ml)另取9支小试管,在三个试管架中分别编号13-15,分别加入0.85%NaCI溶液、1.9%尿素和蒸溜水2.5ml。
红细胞的渗透脆性一、实验目的及原理目的:测定动物的红细胞对低渗溶液的脆性。
原理:将红细胞放置于等渗溶液中,红细胞的形态不发生改变。
放置于高渗和低渗盐溶液中红细胞的形态均出现改变,至于高渗液中,红细胞出现皱缩;置于低渗液中则发生膨胀,最后破裂,细胞内容物溢入血浆或溶液,这种现象称为溶血。
将血液滴入不同浓度的低渗盐溶液中,可以检查红细胞对低渗溶液的抵抗力。
开始出现溶血现象的低渗盐溶液浓度,为该血液红细胞的最小抵抗力(约0.40%~0.45% NaCl溶液),而完全溶血则为该血液红细胞的最大抵抗力(约0.30%~0.35% NaCl溶液)。
对低渗盐溶液的抵抗力小表示红细胞的脆性大,反之表示脆性小,最大抵抗力到最小抵抗力的范围,称脆性范围。
二、实验准备1.实验对象:家兔2.实验药品:1%氯化钠、蒸馏水3.实验器材:5ml试管10支、2ml滴管2支、5ml注射器、试管架、棉签4.环境:安静的实验室三、实验学时1学时四、实验方法1.低渗盐溶液的配制取试管10支,洗净烤干,编号后依次排列于试管架上,参照下图向各试管中加入1% NaCl溶液,然后再加入蒸馏水,每管溶液均2ml。
2.采血从家兔颈总动脉取血2ml,立即向每个试管各加血液1滴,轻摇试管,使血液与盐溶液充分混合。
静置30分钟。
3.实验观察按各试管液体颜色和透明度判断是否溶血、部分溶血或完全溶血。
①未发生溶血试管内下层为混浊红色,上层为无色或淡黄色液体,说明红细胞尚未破坏。
②部分溶血试管内下层为混浊红色,上层为透明淡红色,表示红细胞部分溶解,最先出现部分溶血的盐溶液为红细胞的最大脆性(即最小抵抗力)。
③完全溶血试管内溶液呈透明红色,管底无红细胞,说明红细胞全部破裂。
最先出现完全溶血的盐溶液为红细胞的最小脆性(即最大抵抗力)。
五、实验结果认真完成实验,将实验结果记录于下表。
红细胞的渗透脆性观察项目试管编号未发生溶血部分溶血完全溶血六、思考1.什么是红细胞的渗透脆性?红细胞的渗透脆性一般是指红细胞,在低渗溶液中发生溶血的性能,称为渗透脆性。