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二、周期蛋白依赖激酶
20世纪70年代初,哈特韦尔 (Leland Harwell)和纳斯(Paul Nurse)博士分别以不同种的酵母为 材料,利用遗传学方法先后分离出 cdc28和cdc2基因。
这类基因所编码的蛋白产物均为P34Kd的蛋白,称为P34cdc2 和P34cdc28, 它们本身不具有激酶活性,但和有关蛋白结合 后,可使多种蛋白底物磷酸化,因而它们统称为周期蛋白 依赖性激酶(cyclin dependent kinase cdk激酶)。
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限制点,R
限制点(R点):G1期对一些环境因素的敏感点,可限制正 常细胞通过周期。是控制细胞增殖的关键。
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S期 S期:从DNA合成开始到DNA合成结束的全过程,是细胞增殖周 期的关键阶段。 主要特点: 1.DNA的复制 2.染色质组装 3.中心粒的复制
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G2期 G2期 :从DNA复制完成到有丝分裂开始前的时期,为有丝分 裂进行物质条件和能量的准备(加速RNA和有丝分裂相关蛋 白的合成) 。 1. 合成微管蛋白等纺锤体的成分; 2. 合成染色质凝集相关蛋白; 3. 合成M期调控蛋白; 4. 中心粒开始向两极移动,体积膨大。
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代谢抑制法
胸苷是合成DNA的前体,是不可或缺的。其适当的浓度为 10-7~10-5mol/L。如果给与过量的胸苷(10-3mol/L)则引 起脱氧胸苷合成受到抑制,其结果DNA的合成也将终止。 在培养中的细胞给与过量的胸苷后,则S期细胞都会向G2、 M、G1前进,再次给药后,细胞大都被阻滞在G1/S期。 优点是同步化程度高,适用于任何培养体系。可将几乎所 有的细胞同步化。缺点是产生非均衡生长,个别细胞体积 增大。
cyclinA 在S期DNA合成的起始过程中起作用,当cyclinE降解后, 其作用可延续至整个S期。