基因工程专题习题 一、回答有关基因工程的问题。
（10分）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割微点，图一、图二中箭头表示相关限制酶的酶切位点。
64．限制酶Sma I 和限制酶Xma I 作用的相同点是________________________________，不同点是____________________________________________。
65．研究发现复制原点的碱基序列特点通常含A 、T 碱基较多，其意义是_______________________。
66．图二中的目的基因需要同时使用Mse 酶和Pst I 酶才能获取，而图一所示的质粒无相应的限制酶切位点。
所以在用该质粒和目的基因构建重组质粒时，需要对质粒改造，构建新的限制酶切位点。
试写出构建需要的限制酶切位点的过程（提供构建需要的所有条件）：①首先用_______________酶处理质粒；②然后用DNA 聚合酶处理质粒，使被酶切开的质粒末端连接上相应的脱氧核糖核苷酸； ③再运用_______________酶处理质粒，从而形成新的限制酶切位点，即可被__________酶识别。
基因工程中的检测筛选是一个重要的步骤。
下图表示运用影印培养法（使在一系列培养皿的相同位置上能出现相同菌落的一种接种培养方法）检测基因表达载体是否导入大肠杆菌。
限制酶 Mse I Pst I EcoR I Sma I Xma I识别序列及切割位点GAATTAATTC CTTAATTAAG CTGCAG GACGTC GAATTC CTTAAG CCCGGG GGGCCC CCCGGGGGGCCC67．培养基除了含有细菌生长繁殖必需的成分外，培养基A 和培养基B 分别还含有______________、________________。
从检测筛选的结果分析，含目的基因的是__________菌落中的细菌。
二、人类是乙型肝炎病毒的唯一宿主，现有的肝硬化、肝癌多从乙肝发展而来，接种乙肝疫苗是预防乙肝病毒感染的最有效方法。
乙型肝炎疫苗的研制先后经历了血源性疫苗和基因工程疫苗阶段。
55. 血源性“乙型肝炎疫苗”是取用乙肝病毒感染者的血液，用高速离心提纯血液中的乙肝病毒，之后再灭活，制成乙肝疫苗。
乙肝病毒结构中的 成分是激发免疫反应的抗原。
乙肝工程疫苗的生产和使用过程如下：56. 从上图可知，该目的基因的具体功能是57. 若要迅速获取大量的目的基因，以提高重组质粒生产的效率，常用的技术是（写全称） 。
过程①合成重组质粒需要限制酶，还需要 酶58. 用基因工程疫苗接种比血源性疫苗更安全，试从疫苗的结构特点解释原因：59. 目的基因在人体细胞和大肠杆菌细胞中均能表达出相同的抗原，这是因为 原因所致。
形成有效的重组质粒，选择适当的限制性内切酶很重要。
下图1示意大肠杆菌质粒的相关基因与限制酶切点；图2示意有关限制酶在DNA 分子中的具体切点。
图2图1Eco RV Bam HI 目的基因 卡那霉素 抗性基因 Eco RI Eco RV四环素抗性基因 Hind III Eco RV Bam HI Bam HIEco RIHind III 目的基因 重组质粒导入大肠杆菌 乙肝病毒外壳注射型接种出现抗体①②③④⑤60.要成功转入目的基因，有两种选择限制酶的方案，它们分别是或。
其中有一组方案重组效率较高，其原因是61. 用上述两种方案酶切大肠杆菌质粒与目的基因，再一并加入相关合成酶。
一段时间后，最多可以获得种含完整四环素抗性基因的质粒。
62. 写出筛选、获取含有目的基因大肠杆菌的培养和鉴别方法：。
三、大肠杆菌与人类的生产生活密切相关。
据图表回答下列有关问题：63.科研人员用放射线处理某大肠杆菌获得两个突变株A和B，然后对A和B进行实验，结果如上表。
①突变株A不能在一般培养基上生长的直接原因是______________________________。
将突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中，却能正常生长的最可能原因是______________ ______ ____。
②根据上表可知，营养物质甲、乙对突变株A、B来说属于___________________（成分）64.上图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。
大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列位于该质粒的lacZ基因中。
若lacZ基因完整，便可表达出β-半乳糖苷酶，并能将培养基中含有的IPTG和X-gal水解成蓝色，形成蓝色菌落；若lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达β-半乳糖苷酶，将形成白色菌落；pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。
①作为受体的大肠杆菌应，以便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。
②图中获取人体基因时所用到的酶是_______________________，其与切割质粒的酶是否相同？ ；试管Ⅰ中必需加入的酶是 _______________________。
③图中的选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入___________________等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。
培养基的灭菌处理要求通常是 。
④将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果：a)_______________________________________________________________。
b)_________________________ __________________________________。
四、回答下列有关遗传信息传递表达和基因工程的问题。
（10分）● 图10表示基因的结构示意图及利用基因工程培育抗虫棉的过程示意图。
59．图10中进行①操作时，切割运载体和目的基因酶的特点是 。
图中Ⅲ是导入目的基因的根细胞，经培养、筛选获得一株有抗虫特性的转基因植株。
③过程所用的现代生物技术是____________，从遗传学角度来看，根细胞通过③过程，能形成棉植株的根本原因是 。
60．下列是几种氨基酸的密码子，据此推断图10中合成的多肽，其前三个氨基酸依次是_____________________。
（甲硫氨酸AUG 、丝氨酸UCU 、酪氨酸UAC 、精氨酸CGA 和AGA 、丙氨酸GCU ）● 图11为某种作为运载体的质粒简图，箭头所指分别为限制酶EcoRI 、BamHI 的酶切位点，amp R为青霉素抗性基因，tet R为四环素抗性基因。
已知目的基因的两端分别有EcoRI 、BamHI 的酶切位点。
将含有目的基因的DNA 与该质粒分别用EcoRI 酶切，酶切产物用DNA 连接酶进行连接后，将上述连接产物导入原本没有amp R 和tet R的大肠杆菌（受体细胞）。
61．将上述大肠杆菌涂布在含四环素的培养基上培养，能生长的大肠杆菌所含有的连接产物是 。
为了得到“目的基因－运载体”连接物，防止酶切后DNA 片段之间产生的末端发生任意连接，切割时应选用的酶是 。
图10图112007年日本和美国两位科学家，他们用逆转录病毒为载体，将四个不同作用的关键基因间接转入人体体细胞内，令其与原有基因发生重组，然后使体细胞变成了一个具有类似胚胎干细胞功能的细胞。
62．上述材料中“以逆转录病毒为载体”，但逆转录病毒不能直接携带目的基因，主要原因是。
因此需要将目的基因进行何种处理，才能与病毒RNA重组。
五、癌症源于一群不受控制地进行分裂的细胞，某白血病具有遗传性，主要是某条染色体的DNA上的基因E突变为e导致（见图甲）。
（10分）I. 有一对年轻夫妇，其家族这种疾病的发病率较高。
现知某种能识别序列CTNAG的酶（N=任意一种核苷酸A、T、G或C），可在该序列的CT碱基之间进行切割。
科学家提取该对夫妇（M和P），他们的新生儿以及非家族成员人士（J和K）的DNA，利用CTNAG酶切割DNA。
经凝胶电泳后，结果如图乙。
56.研究所用的酶称为______________。
57.J样本电泳后有两条带，K样本只有一个条带，请据图分析造成这个现象的原因是_______ _______。
58.写出双亲的基因型：父______________ 母______________。
II. 该疾病目前采取的治疗措施有放疗、化疗、基因治疗等方法。
基因治疗的基本步骤是：59.治疗该白血病的目的基因是指_______基因，基因在体外增殖的主要方法是_____。
60.病毒在此治疗中的作用是__________________。
假如在实验室进行如下操作：用限制酶EcoRV 单独切割该普通质粒，可产生14kB （1kB 即1000个碱基对)的长链，而同时用限制酶EcoRV 、Mbol 联合切割同一种质粒，得到三种长度的DNA 片段，见下图，其中*表示EcoRV 限制酶切割的一个粘性末端。
61. 若Mbol 限制酶独立切割该普通质粒，则可以产生的长度为 、 的DNA 片段。
62. EcoRV 限制酶切割普通质粒的切割位点如下图，*为切割点。
请在图上的大致位置上也用箭头标出Mbol 限制酶的酶切位点，并标示相应片段长度。
六、回答有关生物工程的问题。
（8分）普通番茄细胞中含有多聚半乳糖醛酸酶基因，控制细胞产生多聚半乳糖醛酸酶，该酶能破坏细胞壁，使番茄软化，不耐贮藏。
为满足人们的生产生活需要，科学家们通过基因工程技术，培育出了抗软化、保鲜时间长的番茄新品种。
（操作流程如图）请回答：普通质粒Eco RV* 普通质粒Eco RVEco RV +Mbo I 14kb 2.5kb 5.5kb 6kb * ** *抗多聚半乳糖醛酸酶基因（目的基因）质粒重组DNA含重组DNA 的土壤农杆菌土壤农杆菌普通番茄细胞培养②多聚半乳糖醛酸酶基因 抗多聚半乳糖醛酸酶基因培养③抗多聚半乳糖醛酸酶基因多聚半乳糖醛酸酶基因 mRNA1mRNA2mRNA1与mRNA2结合番茄软化过程培育示意图①66．过程①需要的工具酶有 。
67．由于含________________的土壤农杆菌成功导入普通番茄细胞的频率低，所以在转化后通常需要进行 操作。
68．图示中，目的基因导入普通番茄细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，可以通过 来确定。
导入目的基因的植物细胞一般需要通过 的方法，培育成能表现新性状的植株。
图示中培养②、培养③就是该过程中的 步骤。
69．从图中可见，mRNA1和mRNA2的结合直接导致了 无法合成，最终使番茄获得了抗软化的性状。
70．上述转基因番茄会通过花粉将抗多聚半乳糖醛酸酶基因传播给其它植物而造成基因污染，原因是 。
七、普通烟草转入抗盐基因培育抗盐烟草的过程如下图所示。
