生化实验六酶的基本性质

一、实验目的1. 了解生化实验的基本原理和操作方法。

2. 掌握常见生化试剂的制备和性质。

3. 学习并运用生化实验技术，进行物质的定性、定量分析。

二、实验原理生化实验是研究生物体内化学反应、生物分子结构与功能及其相互关系的实验方法。

本实验主要涉及以下内容：1. 蛋白质性质及鉴定：通过观察蛋白质在不同条件下的性质变化，如盐析、变性等，以及鉴定蛋白质的方法，如双缩脲试剂、酚试剂等。

2. 酶的性质及活性测定：通过观察酶催化反应的特点，如专一性、高效性等，以及酶活性测定方法，如比色法、电化学法等。

3. 糖类及脂肪的鉴定与测定：通过观察糖类、脂肪在特定条件下的性质变化，如糖的还原性、脂肪的皂化反应等，以及鉴定、测定方法，如费林试剂、苏丹Ⅲ染液等。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋清、淀粉、葡萄糖、果糖、蔗糖、脂肪、盐酸、氢氧化钠、硫酸铜、硫酸锌、氯化钠、碘液、苏丹Ⅲ染液等。

2. 仪器：试管、烧杯、量筒、滴定管、pH计、电炉、恒温水浴锅、显微镜、离心机等。

四、实验步骤1. 蛋白质性质及鉴定实验（1）观察蛋白质盐析现象：取鸡蛋清溶液，逐滴加入饱和硫酸铵溶液，观察蛋白质沉淀现象。

（2）观察蛋白质变性现象：取鸡蛋清溶液，加入少量氢氧化钠溶液，观察蛋白质变性现象。

（3）鉴定蛋白质：取鸡蛋清溶液，加入双缩脲试剂，观察颜色变化。

2. 酶的性质及活性测定实验（1）观察酶的专一性：取淀粉溶液，分别加入淀粉酶、蛋白酶，观察酶催化反应现象。

（2）测定酶活性：取淀粉溶液，加入淀粉酶，用碘液检测淀粉分解情况，计算酶活性。

3. 糖类及脂肪的鉴定与测定实验（1）观察糖的还原性：取葡萄糖、果糖溶液，加入费林试剂，观察颜色变化。

（2）观察糖的鉴定：取蔗糖溶液，加入苏丹Ⅲ染液，观察颜色变化。

（3）测定脂肪含量：取脂肪样品，加入碱液，加热皂化，测定皂化物的质量，计算脂肪含量。

五、实验结果与分析1. 蛋白质性质及鉴定实验（1）盐析现象：观察到鸡蛋清溶液中加入饱和硫酸铵溶液后，出现白色沉淀。

令狐采学《植物生理生化》实验指导（适用专业：农学类相关专业）黑龙江八一农垦大学植物科技学院生理生化教研室目录生物化学实验部分：实验一、氨基酸的纸层析 (1)实验二、蛋白质含量测定（设计性实验） (5)实验三、酶的基本性质 (7)实验四、维生素C含量的测定 (12)实验五、还原糖和总糖的测定 (14)实验六、淀粉酶活性的测定 (17)实验七、脂肪浸提——索氏脂肪浸提法 (20)实验八、一种简单实用的提取植物DNA的方法 (22)实验九、聚丙烯酰胺电泳法测定大麦、小麦种子纯度 (24)实验十、淀粉酶的诱导、提取和活性测定（综合性实验） (26)植物生理学实验部分:实验一、植物组织水势的测定（小液流法） (28)实验二、植物伤流量的测定 (30)实验三、根系活力的测定 (31)实验四、蒸腾强度的测定 (35)实验五、叶绿体色素的提取、分离、性质和定量测定（综合性实验） (37)实验六、光合强度的测定（改良半叶法） (39)实验七、呼吸强度的测定 (41)实验八、植物抗逆性的鉴定（电导仪法） (43)实验九、植物缺水程度的测定（脯氨酸法） (45)生物化学实验部分实验一氨基酸的纸层析一、目的：层析分析法已广泛用于氨基酸、核酸、激素、维生素、糖类的分离与分析。

其优点是能够分离与分析在组成、结构及性质上极为相似的物质；设备简单，操作容易，样品用量很少，结果也较明确。

本实验的目的在于要求学生掌握纸层析法的一般原理和操作技术。

二、原理：纸层析法是以滤纸作为支持物的分配层析法。

分配层析法是利用物质在两种不同混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离的目的。

通常用α表示分配系数。

在一定条件下，一种物质在某溶剂系统中的分配系数是一个常数。

）溶质在流动相的浓度（）溶质在静止相的浓度（l s C C =α 层析溶剂是选用有机溶剂和水组成的。

由于滤纸纤维素对水有较强的亲和力（纸上有很多-OH 基与水以氢键相连），吸附很多水分子，一般达滤纸重的22%左右（其中约有6%的水与纤维素结合成复合物），因此使这一部分水扩散作用降低形成静止相；而有机溶剂与滤纸的亲和力很弱，可以在滤纸的毛细管中自由流动，便形成流动相。

普通生化实验总结一、引言普通生化实验（General biochemistry experiments）是生物化学课程中的重要内容之一，通过实验操作和数据分析，帮助学生巩固理论知识，培养实验技能和科学思维能力。

本文将总结普通生化实验的主要内容，包括实验的目的、原理、实验操作步骤以及实验结果的分析和讨论。

二、实验目的普通生化实验的目的在于深入理解生物化学的基本原理和实验技术，培养学生的实验操作能力和数据分析能力。

三、实验一：蛋白质的定性实验1. 实验原理蛋白质是生物体内重要的有机物质，通过蛋白质的定性实验可以初步判断样品中是否含有蛋白质。

定性实验的原理是基于蛋白质的特性，在特定条件下，蛋白质与某些试剂发生反应产生显色或沉淀。

2. 实验操作步骤1.取一定量的样品溶液，分别加入Biuret试剂和Millon试剂，观察颜色变化。

2.根据颜色变化结果判断样品中是否含有蛋白质。

3. 实验结果分析根据实验结果，如果样品与Biuret试剂发生变色反应，由淡蓝变为紫色，可以初步判断样品中含有蛋白质；如果样品与Millon试剂发生变色反应，由白色变为红色，也可以确定样品中存在蛋白质。

四、实验二：酶的性质与活性测定1. 实验原理酶是生物体内的催化剂，能够加速生物化学反应的进行。

了解酶的性质和活性测定方法对于研究生物体内的代谢过程非常重要。

通过测定酶活性，可以确定酶对底物的催化效果和酶的活化或抑制情况。

2. 实验操作步骤1.准备一定浓度的酶底物和辅酶溶液。

2.将一定量的酶底物加入试管中，分别加入辅酶溶液。

分别设立对照组和实验组。

3.在一定时间内测量酶底物与辅酶溶液反应的光吸收度。

3. 实验结果分析通过测量实验组和对照组的光吸收度差异，可以计算出单位时间内的酶活性。

根据酶活性的测定结果，可以初步评估酶的催化效果和活性。

五、实验三：核酸的分离与纯化1. 实验原理核酸是生物体内的遗传物质，对于研究生物体的遗传信息和进化规律具有重要意义。

一、实验目的1. 理解生化酶的基本概念及其在生物体内的作用。

2. 掌握生化酶活性测定的基本原理和方法。

3. 通过实验，观察不同条件下酶活性的变化，加深对酶动力学性质的理解。

二、实验原理生化酶是生物体内一类具有催化功能的蛋白质，能够加速生物化学反应的速率，而不改变反应的平衡状态。

酶的活性受多种因素影响，如温度、pH值、抑制剂和激活剂等。

本实验主要采用紫外分光光度法测定酶活性。

在特定波长下，酶催化底物发生反应，生成产物，产物的生成会导致溶液吸光度发生变化。

通过测定吸光度变化，可以计算出酶的活性。

三、实验材料与仪器材料：1. 酶提取液2. 底物溶液3. 酶活性测定试剂盒4. pH缓冲液5. 温度控制装置仪器：1. 紫外分光光度计2. 恒温水浴锅3. 移液器4. 试管四、实验方法1. 酶活性测定：- 将酶提取液、底物溶液和pH缓冲液按比例混合，置于比色皿中。

- 在特定波长下，测定溶液的吸光度。

- 将吸光度变化与酶活性进行线性拟合，得到酶的活性。

2. 不同pH值对酶活性的影响：- 将酶提取液、底物溶液和不同pH值的缓冲液按比例混合，置于比色皿中。

- 在特定波长下，测定溶液的吸光度。

- 分析不同pH值对酶活性的影响。

3. 不同温度对酶活性的影响：- 将酶提取液、底物溶液和不同温度的水浴锅中按比例混合，置于比色皿中。

- 在特定波长下，测定溶液的吸光度。

- 分析不同温度对酶活性的影响。

五、实验结果与分析1. 酶活性测定：- 通过实验，得到酶的活性为X U/mg。

2. 不同pH值对酶活性的影响：- 在pH值为X时，酶活性最高，为Y U/mg。

- 随着pH值偏离最适值，酶活性逐渐降低。

3. 不同温度对酶活性的影响：- 在温度为X℃时，酶活性最高，为Y U/mg。

- 随着温度升高，酶活性逐渐增加，但超过一定温度后，酶活性反而降低。

六、结论1. 本实验成功测定了酶的活性，并分析了不同pH值和温度对酶活性的影响。

2. 酶的活性受多种因素影响，其中pH值和温度是影响酶活性的重要因素。

“酶”专题知识一、酶的发现过程（略）二、酶的概念：活细胞产生的一类具有生物催化作用的特殊有机物。

1、来源：由活细胞产生。

（除某些没有细胞核的细胞外，如哺乳动物成熟的红细胞、血小板，植物筛管细胞）2、作用：催化生物化学反应（降低化学反应活化能）3、本质：绝大多数是蛋白质，少数是RNA（暂时还没有把DNA列入）。

三、酶的合成1、合成的原料：氨基酸或核糖核苷酸2、合成的场所：核糖体（与唾液淀粉酶等胞外酶合成和分泌有关的主要细胞结构有核糖体、内质网、高尔基体、线粒体和细胞膜。

）3、合成的过程：遵循中心法则，通过转录和翻译合成的4、合成的控制：酶的合成是在基因控制下进行的四、酶和激素的比较1、化学成分：前者主要是蛋白质，少数是RNA；后者有多肽及蛋白类、氨基酸衍生物、脂质等。

2、生理功能：前者对生化反应起催化作用；后者对生命活动起调节作用。

3、相互关系：能合成激素的细胞一定也能合成酶，但能合成酶的细胞不一定能合成激素。

要注意酶与激素、蛋白质、维生素、脂质的关系：维生素脂质激素蛋白质酶五、酶的类型1、按其发挥作用的场所不同分为：（1）胞外酶：消化酶、SOD（超氧化歧化酶）、基因工程中的工具酶（限制性核酸内切酶和DNA连接酶）等，在细胞外发挥作用。

注意限制性核酸内切酶和DNA连接酶的作用：DNA连接酶的作用是催化切割的DNA片段（黏性末端）形成化学键（磷酸二酯键）而拼接起来。

不是促使碱基配对形成氢键。

消化酶属于分泌蛋白如唾液淀粉酶（注意与生物膜和细胞器的联系）。

（2）胞内酶：在细胞内发挥作用。

如光合酶、呼吸酶、转氨酶、ATP酶、解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、RNA聚合酶、逆转录酶、存在于微生物中的限制性核酸内切酶等。

2、具有酶活性的蛋白质分为简单蛋白质类和结合蛋白质类：（1）简单蛋白质类的酶只由氨基酸组成，不含任何其他物质，如胃蛋白酶。

（2）结合蛋白质类的酶（又称全酶）是由蛋白质与辅因子组成，其中蛋白质部分称为酶蛋白，辅因子部分称为辅酶或辅基。

认识酶的实验报告一、实验目的本实验旨在通过探究酶的性质和功能，加深对酶作用的认识，并进一步了解酶的作用机制。

二、实验原理1. 酶的定义：酶是一种能够加速生物体内生物化学反应速率的蛋白质。

2. 酶的特性：酶具有专一性、高效性和可逆性。

3. 酶促反应：酶与底物发生特异性结合，形成酶底物复合物，通过酶的催化作用，反应速率得到加快。

三、实验步骤1. 实验材料准备：酶溶液、底物溶液、试管、试管架、试管夹、显色剂等。

2. 实验步骤：- 步骤一：取两支试管，分别加入相同体积的酶溶液和底物溶液，并将其放入不同的试管架中。

- 步骤二：将试管架放入恒温槽中，保持温度恒定。

- 步骤三：同时开始计时器，并在不同的时间点分别取出试管，加入显色剂。

- 步骤四：观察试管中颜色的变化，并记录下时间和变化情况。

四、实验结果根据实验过程中记录的数据计算得出的结果如下表所示：时间（秒）试管一颜色变化试管二颜色变化0 无变化无变化10 逐渐变淡无变化20 变得非常浅逐渐变淡30 几乎透明变得非常浅40 透明透明50 透明透明60 透明透明五、实验讨论通过实验我们可以得出以下结论：1. 酶的作用是加速生物体内生物化学反应的速率，同时具有专一性、高效性和可逆性。

2. 本实验中，试管中的酶溶液通过与底物的特异性结合，催化反应，使底物的颜色变淡或透明。

3. 随着时间的增加，试管一和试管二中的底物都逐渐变淡或透明，说明酶的催化作用随时间的增加而增强。

六、实验总结通过本次实验，我们更加深入地理解了酶的性质和功能。

酶作为生物体内的催化剂，在代谢和生产过程中起着非常重要的作用。

同时，我们也学会了如何进行酶的活性检测实验，通过观察底物的变化情况来评估酶的催化效果。

然而，本次实验的结果可能受到实验条件的限制，如实验温度、酶浓度等因素。

因此，在今后的实验中，我们应该更加精确地控制实验条件，以获取更准确的实验结果。

总之，通过认识酶的实验，我们进一步了解了酶的作用机制，提高了对酶的认识和理解，并为今后的研究和应用提供了基础。

酶的性质及其在消化中的作用实验实验目的：探究酶的性质及其在消化中的作用。

实验原理：酶是一类特殊的蛋白质，它可以在特定的条件下加速化学反应的速率，而不改变反应本身。

在消化中，人体内分泌的多种酶可以分解不同的食物成分，以便身体吸收。

本实验中，我们将使用淀粉酶和蛋白酶来模拟消化过程，观察它们的作用。

实验步骤：1.将一些淀粉加入到一个试管中，然后添加适量的淀粉酶溶液。

2.用试管夹将试管放入恒温水浴中，保持温度在37°C左右，开始计时。

3.每隔一定时间，从试管中取出一滴淀粉溶液，滴入到碘液中。

4.观察碘液颜色的变化，如果淀粉已经分解完全，则碘液的颜色会从深蓝色变为黄色，表示淀粉已经分解完全。

5.重复以上步骤，分别用不同浓度的淀粉酶溶液进行试验，观察分解淀粉的速度和效果。

6.将一些蛋白质溶液加入到一个试管中，然后添加适量的蛋白酶溶液。

7.用试管夹将试管放入恒温水浴中，保持温度在37°C左右，开始计时。

8.每隔一定时间，从试管中取出一滴蛋白质溶液，滴入到碱性铜液中。

9.观察碱性铜液颜色的变化，如果蛋白质已经分解完全，则碱性铜液的颜色会从蓝色变为紫红色，表示蛋白质已经分解完全。

10.重复以上步骤，分别用不同浓度的蛋白酶溶液进行试验，观察分解蛋白质的速度和效果。

实验结果：在淀粉酶的作用下，淀粉分解为糖类，碘液的颜色会逐渐从深蓝色变为紫色，直到变为黄色，表示淀粉已经完全分解。

不同浓度的淀粉酶溶液对分解速度和效果有影响，浓度越高分解越快。

在蛋白酶的作用下，蛋白质分解为氨基酸，碱性铜液的颜色会逐渐从蓝色变为紫红色，直到变为无色，表示蛋白质已经完全分解。

不同浓度的蛋白酶溶液对分解速度和效果有影响，浓度越高分解越快。

实验结论：本实验表明，淀粉酶和蛋白酶都是一类特殊的酶，它们可以加速特定的化学反应，将复杂的食物分解成更简单的成分以便身体吸收。

酶的分解作用在一定范围内受到浓度、温度、pH值等因素的影响，因此在实际应用中需要根据具体情况进行调整。

问答题•构象（conformation）和构型（configuration）有何区别？•简述什么是生物膜，其主要生理功能有哪些？•试述生物膜的两侧不对称性。

•简述细胞膜流动嵌壤模型及其特点。

•什么是生物膜的流动性？请从生物膜的化学组成上说明为什么生物膜会具有流动性，并说明生物膜的流动性对生物体的重要意义。

•为什么说生物膜是生命系统中最容易发生脂质过氧化的场所，会导致什么样的后果？•哪一种氨基酸在血液保持pH稳定方面起重要的缓冲作用，为什么？（血液pH= 7.35~7.45）•简述从氨基酸混合物中分离鉴定氨基酸的方法。

•常用强酸性阳离子交换树脂分离氨基酸混合物，为什么洗脱时要逐步提高洗脱液的pH 和离子强度？•肝炎患者谷丙转氨酶为何升高？•在凯氏定氮法中：蛋白质的含量=样品中含氮量*6.25。

请说明6.25的来历。

•蛋白质的氨基酸排列顺序和核酸的排列顺序以及生物功能有怎么样的关系？简述蛋白质的氨基酸顺序和它们的立体结构之间有什么关系。

•蛋白质的结构有何特点？•简述胰岛素的结构特征，并估算一下其大致的分子量，简单说明理由。

•蛋白质化学研究中常用如下一些试剂：CNBr，尿素，β巯基乙醇，胰蛋白酶，过甲酸，丹磺酰氯，6M HCl，茚三酮，异硫氰酸苯酯和胰凝乳蛋白酶等。

为完成下列试验，请选择最适宜的试剂。

实验：1. 一个小肽的氨基酸序列测定；2. 多肽链的氨基末端确定；3. 无二硫键的蛋白可逆变性；4. 芳香族氨基酸残基的羧基一侧肽键的水解；5.甲硫氨酸的羧基一侧肽键的裂解；6.通过氧化途径将二硫键打开。

•如何根据跨膜蛋白计算膜厚？•什么是蛋白质的二级结构，它主要有哪几种形式？•为什么多聚谷氨酸在pH<3.0时呈α螺旋状态，而在pH>5.0时却为松散的β折叠状态？•什么是蛋白质的复性与变性？引起蛋白质变性的因素是什么？在变性的过程中，往往有哪些现象出现？蛋白质变性之后性质有哪些改变？•蛋白质变性后为什么容易凝聚沉降？•蛋白质变性沉降与在等电点处沉降有何不同？•蛋白质折叠与复性有何异同？•蛋白质折叠与β-折叠有何区别？•测定蛋白质的二硫键位置，需要什么方法？请简述之。

生化试验的名词解释生化试验是一种科学研究方法，旨在通过实验和观测来了解生物体内发生的化学过程和反应，并研究物质在生物体内的作用机制。

在生化试验中，研究人员可以通过对生物样本或体外制备的模型系统的处理和观察，揭示细胞、组织和生物体的生物化学属性与功能。

生化试验包括了许多重要的名词和概念。

下面将依次解释这些名词，帮助读者更好地了解生化试验的基本原理和方法。

一、基因基因是生物体遗传信息的基本单位，是操控细胞功能和生物特征传递的物质。

它是由DNA序列编码的，负责合成蛋白质和调控生物体的生理过程。

生化试验通过对基因的分析和操作，可以揭示基因在疾病发生、发展和治疗中的作用，推动了基因工程和基因治疗研究的发展。

二、蛋白质蛋白质是生物体内最基本的功能分子，广泛参与细胞的结构、传导信号、催化反应等生命活动。

生化试验可以通过纯化、分离和表达蛋白质，研究其结构、功能和相互作用。

蛋白质的研究对于理解生物体的生理机制以及开发新药物具有重要意义。

三、酶酶是一类生物催化剂，可以加速化学反应的进行而不改变自身的结构和活性。

生化试验通过研究酶的性质和功能机制，揭示细胞代谢途径、信号传导和基因表达调控等重要过程。

此外，酶的研究还可以为工业生产和制药等领域提供重要的技术支持。

四、代谢代谢是生物体内各种化学反应的总称，包括合成有机物和分解有机物的过程。

生化试验通过测定代谢产物或代谢酶的活性来研究代谢途径和调控机制，帮助揭示疾病的发生机制，探索新的治疗策略。

五、信号通路信号通路是细胞内外信息传递的路径，参与调控细胞的生存、增殖和分化等过程。

生化试验通过研究信号通路中的分子、蛋白质互作和磷酸化等调控机制，揭示细胞的异常信号传导导致疾病的发生和发展。

除了以上几个重要名词，生化试验还涉及到诸如分子生物学、免疫学、药理学等学科。

这些学科在生化试验中相辅相成，共同推动着生物医学的发展。

总之，生化试验是现代生物医学研究的重要手段，通过解析生物系统中的分子和化学反应，为科学家提供了研究生物特性、探索疾病机制和开发新药物的重要工具。

酶的名词解释生物酶是一种生物催化剂，也被称为酶蛋白。

它在生物体内发挥重要的功能，促进各种生化反应的进行。

酶的作用主要在于加速化学反应的速率，使之能够在生命体内以适当的速度进行。

酶的基本特点是高选择性和高效率。

这些特点使得酶能够在低温和中性条件下催化特定的反应，而无需采用高温和强酸碱的条件。

这对于生物体来说非常重要，因为它们无法承受高温和强酸碱条件下的反应。

酶的命名通常以其催化作用的底物为依据。

常见的酶名以酶名和酶底物类型组成，如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等。

随着科学研究的深入，越来越多的酶被发现并被命名，使得酶的分类系统变得愈加复杂。

不同酶具有不同的催化机制。

最常见的催化机制是酶与底物结合形成酶-底物复合物，接着复合物发生结构变化，使得底物发生化学变化，最后生成产物。

这种催化机制被称为亚基催化机制。

此外，还有一些酶具有分子催化机制，即酶分子本身参与化学反应，而不是形成复合物。

酶的催化作用是高度特异的，其选择性是由其结构决定的。

酶的活性中心由特定的氨基酸残基构成，它们通过氢键、离子键和范德华力等相互作用与底物结合，从而产生催化效应。

每个酶只能与特定的底物结合，这种选择性使得酶具有高效率的催化作用，同时避免了不必要的化学反应。

酶在生物体内发挥着重要的作用。

例如，消化酶能够降解食物中的蛋白质、碳水化合物和脂肪，使它们转化为小分子物质，为身体提供能量。

另外，酶也参与了新陈代谢、细胞信号传导、免疫系统等多种生物过程。

酶的活性受到许多因素的影响，其中温度、pH值和底物浓度是重要的因素。

不同的酶对这些因素的敏感性不同，各有适宜的工作条件。

通过调节这些因素，可以控制酶的活性，从而对生物体内的化学反应进行调节。

除了天然的酶，科学家还通过基因工程技术制造出不同特性的人工酶。

这些人工酶能够在实验室中应用于合成化学反应、制药工业和食品工业等领域。

人工酶的出现进一步拓展了酶的应用范围，使得酶催化技术在生物化学研究和工业生产中得到广泛应用。

生物化学与分子生物学实验教程教学设计一、前言生物化学与分子生物学实验是生物学专业重要的实验之一，也是培养学生实验操作技能和科研能力的重要途径。

本文档旨在为生物化学与分子生物学实验课程的教师提供一份教学设计，以便帮助教师们更好地开展实验教学工作，提高实验课教学质量。

二、实验设计思路本实验旨在帮助学生了解生物化学反应及分子生物学技术的基本原理，培养学生实验操作技能，提高学生实验设计、数据处理与分析及科学文献阅读等能力。

实验首先介绍PCR、蛋白质电泳、Western Blotting等基本技术原理，然后让学生利用这些技术进行数据收集、数据分析以及文献阅读分析等操作，以便加深学生对生物化学实验的实质理解。

三、实验流程1.实验一：DNA提取 * 软件操作：GeneTools软件操作，学生处理自己的数据，可自由选择实验材料； * 实验目的：了解DNA提取技术原理，学习基本的PCR技术，实践DNA扩增操作； * 实验操作：基于DNA提取，利用PCR扩增目标序列，通过基因克隆技术或元素分析进行确认。

2.实验二：蛋白质分析 * 软件操作：根据实验目的不同，选择不同的实验材料，如酵母细胞、细胞生物学等； * 实验目的：了解蛋白质分析技术原理，学习基本的电泳方案的设计、样品处理、文献阅读等技能； * 实验操作：离心样品，利用SDS-PAGE技术进行分离，然后利用Western blotting技术进行成像，获得目标蛋白质信息。

3.实验三：酶动力学实验 * 软件操作：根据实验目的不同，选择不同的实验材料； * 实验目的：学习常用酶中的蛋白质特性，了解酶的基本性质； * 实验操作：利用比色法测定酶的活性、酶的浓度、反应温度及pH等因素对酶活力的影响。

四、实验设备和材料•常规实验室设备及仪器：pH计、分光光度计、电泳仪、洗净浓液泵、高速离心计；•主要实验材料：酵母cell、酵母基因、细胞总RNA、大肠杆菌总蛋白、SDS-PAGE gel、antibody、DNA纯化试剂盒等。

一、实验目的1. 了解酶的基本概念和特性。

2. 探究pH值、温度等因素对酶活性影响。

3. 分析酶催化反应的速度与底物浓度的关系。

二、实验原理酶是一种生物催化剂，具有高效、专一、温和等特性。

酶的活性受多种因素影响，如pH值、温度、底物浓度等。

本实验通过观察不同条件下酶催化反应的现象，分析影响酶活性的因素。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：淀粉、碘液、NaOH、HCl、NaCl、蒸馏水、pH试纸、温度计等。

2. 实验仪器：试管、酒精灯、烧杯、移液器、计时器等。

四、实验步骤1. pH值对酶活性的影响（1）取三支试管，分别编号为1、2、3。

（2）向1号试管中加入2ml淀粉溶液，2号试管中加入2ml淀粉溶液和1滴HCl，3号试管中加入2ml淀粉溶液和1滴NaOH。

（3）观察并记录三支试管中淀粉溶液的颜色变化。

2. 温度对酶活性的影响（1）取三支试管，分别编号为1、2、3。

（2）向1号试管中加入2ml淀粉溶液，2号试管中加入2ml淀粉溶液和1滴HCl，3号试管中加入2ml淀粉溶液和1滴NaOH。

（3）将1号试管放入冷水浴中，2号试管放入温水浴中，3号试管放入热水浴中。

（4）观察并记录三支试管中淀粉溶液的颜色变化。

3. 底物浓度对酶活性的影响（1）取三支试管，分别编号为1、2、3。

（2）向1号试管中加入1ml淀粉溶液，2号试管中加入2ml淀粉溶液，3号试管中加入3ml淀粉溶液。

（3）向每支试管中加入1滴碘液，观察并记录三支试管中淀粉溶液的颜色变化。

五、实验结果与分析1. pH值对酶活性的影响实验结果显示，1号试管（中性）淀粉溶液颜色最深，2号试管（酸性）和3号试管（碱性）淀粉溶液颜色逐渐变浅。

这说明pH值对酶活性有显著影响，最适pH值约为中性。

2. 温度对酶活性的影响实验结果显示，1号试管（冷水浴）淀粉溶液颜色最深，2号试管（温水浴）淀粉溶液颜色变浅，3号试管（热水浴）淀粉溶液颜色最浅。

这说明温度对酶活性有显著影响，最适温度约为温水浴温度。

酶的特性名词解释酶（enzyme）是一类生物催化剂，其主要功能是加速化学反应速率并降低其能量活化需求，从而在细胞中实现生物转化。

酶在生物体内广泛存在，包括植物、动物和微生物，在生物学和生物工程领域具有重要的应用价值。

下面将对酶的一些重要特性进行详细解释。

1. 底物特异性（substrate specificity）酶的底物特异性是指酶与底物之间的选择性结合。

不同的酶对特定的底物有高度的选择性，只能与特定的底物发生相互作用。

这种底物特异性是由酶的活性中心及其结构决定的。

例如，淀粉酶只能催化淀粉分子的降解，而不能催化蛋白质或脂类的反应。

2. 酶促反应的速率酶促反应的速率远远高于非酶催化的化学反应速率。

这是由于酶能降低化学反应的能量活化需求。

酶的活性通常用单位时间内产生的产物的数量来衡量，常用单位是摩尔/秒。

酶促反应的速率受到多种因素的影响，包括底物浓度、酶浓度、温度和pH值等。

3. 反应条件的适应性酶对环境条件的适应性较强，可以在相对温和的条件下发挥其催化作用。

酶活性通常在特定的温度和pH范围内最高。

如果温度过高或pH值偏离最适范围，酶的结构会发生破坏，从而导致活性丧失或失活。

这一特性使得酶在生物体内能够稳定地催化众多生物转化反应。

4. 酶的可逆性和不可逆性酶催化的反应可以是可逆的或不可逆的，取决于反应的热力学和动力学条件。

可逆反应是指催化反应的产物可以再次转变为底物，形成平衡状态。

不可逆反应则是指催化反应形成的产物无法再转变为底物。

大部分酶催化反应属于可逆反应，但也有一些催化反应是不可逆的，例如酶在某些情况下能将底物转化为产物，但产物无法再逆向转化为底物。

5. 酶的酶促作用速度酶的酶促作用速度取决于酶底物复合物的形成和解离速度。

酶与底物结合后形成酶底物复合物，这一步骤受到底物浓度和酶与底物的亲和力影响。

酶底物复合物形成后，酶催化底物转化为产物，然后酶与产物解离，重新进入反应循环。

这两个步骤的速度共同决定了酶的酶促作用速度。

课程名称： 生物化学实验 指导老师： 史影 成绩： 实验名称： 酶的基本性质实验——底物专一性、激活剂和抑制剂、最适温度 同组学生姓名： 陈莞尔，潘盛警Ⅰ.酶的基本性质——底物专一性 一、实验目的1.了解酶的专一性。

2.掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。

3.学会排除干扰因素，设计酶学实验。

二、基本原理酶是具有高度专一性的有催化功能的蛋白质。

酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶促反应要比无机催化反应快数十倍。

酶催化的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对一种或一类底物其催化作用，对其他底物无催化反应。

根据各种酶对底物的选择程度不同，可分成下列几种：1.相对专一性。

一种酶能催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。

2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。

如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。

如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。

3.立体异构专一性：有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。

如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。

本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。

用Benedict 试剂检测反应产物。

Benedict 试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化铜沉淀。

Na 2CO 3+ 2H 2O 2NaOH + H 2CO 3 CuSO 4+ 2NaOH Cu(OH)2+ Na 2SO 4专业：____生物工程 姓名：_____陈传鑫 学号：___3090104963 日期：____2011.3.22_ 地点：_生物实验楼306实验报告还原糖(—CHO or —C=O)+ 2Cu(OH)2Cu2O + 2H2O + 糖的氧化产物（黄色或砖红色）淀粉和蔗糖无半缩醛基，无还原性，与Benedict试剂无显色反应。

实验一酶的高效性和专一性2药品：铁粉（可用Fe3O4代替）、H2O2、蔗糖、可溶性淀粉、5水硫酸铜、枸橼酸钠、1水碳酸钠、纯净水、氯化钠、设备：滤纸、马铃薯、脱脂棉或、一次性纸杯研钵、漏斗、电炉、试剂瓶、药匙、玻棒、量筒、容量瓶、烧杯内容：过氧化物酶的高效性，唾液淀粉酶专一性实验二温度对酶活力的影响 2淀粉、纯净水、氯化钠、KI、I2、标签纸、滤纸、脱脂棉或、一次性纸杯漏斗、电炉、试剂瓶、药匙、玻棒、量筒、容量瓶、烧杯不同温度对唾液淀粉酶活力的影响实验三不同pH对唾液淀粉酶活力的影响pH对酶活力的影响 2淀粉、枸橼酸钠、1水碳酸钠、纯净水、氯化钠、KI、I2、磷酸氢二钠、枸橼酸、滤纸、马铃薯、脱脂棉或、一次性纸杯漏斗、电炉、试剂瓶、药匙、玻棒、量筒、容量瓶、烧杯实验四酶的激活与抑制作用唾液淀粉酶活力的激活与抑制 2淀粉、5水硫酸铜、纯净水、氯化钠、KI、I2、滤纸、马铃薯、脱脂棉或、一次性纸杯漏斗、电炉、试剂瓶、药匙、玻棒、量筒、容量瓶、烧杯过氧化物酶（POD）活性的测定实验五马铃薯中过氧化物酶的提取、测定4NaH2PO4、Na2HPO4、愈伤木酚、过氧化氢、纯净水、滤纸、标签纸试管架、试管、移液管、移液管、量筒100ml、容量瓶50ml、容量瓶25ml、烧杯50ml、烧杯100ml、漏斗、离心机(低速)、离心管(低速)、721型分光光度计、分析天平、秒表、研钵实验六柱色谱法分离色素4中性氧化铝（100—200目）、碱性氧化铝（100—200目）、95%乙醇、亚甲基蓝、荧光黄、石英砂、纯净水、滤纸、脱脂棉、石英砂、标签纸25毫升滴定管、分液漏斗（250毫升）、烧杯、滴管、试剂瓶、药匙、玻棒、容量瓶、烧杯柱色谱法分离色素实验七大蒜细胞SOD的提取与分离2磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯仿、丙酮、HCl、纯净水、大蒜研钵、试剂瓶、分析天平、药匙、离心机、玻棒、水浴锅、分光光度计、容量瓶、烧杯、容量瓶实验八超氧化物岐化酶的活性测定 2磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、tris、碳酸氢二钠、碳酸二氢钠、EDTA、肾上腺素液、邻苯三酚、HCl、纯净水、大蒜试剂瓶、分析天平、药匙、离心机、玻棒、水浴锅、分光光度计、容量瓶、烧杯容量瓶实验九酵母细胞的固定化4干酵母、Cacl2、海藻酸钠、蒸馏水、蔗糖、注射器、尿糖试纸烧杯、玻璃棒、试剂瓶、天平、药匙、滴管、玻棒、容量瓶、酒精灯、注射器、电炉、尿糖试纸实验十蛋白质标准曲线的制作 2考马斯亮蓝G－250、95%乙醇、85% H3PO4、牛血清血蛋白(BSA)、NaCl、纯净水、鸡蛋、移液枪头分光光度计、移液管（10mL）、试剂瓶、移液枪、药匙、试管及试管架、玻棒、容量瓶、烧杯实验十一果胶酶在果汁生产上的应用 2食品级果胶酶、抗坏血酸、纯净水、新鲜苹果（或其他应季水果）分光光度计、天平、试剂瓶、榨汁机、药匙、水浴锅、玻棒、压榨机或离心分离机、容量瓶、烧杯生化分析实训1.蛋白质等电点及两性性质2.酶的基本性质测试3.柱色谱法分离物质4.酶活力的测定5.还原糖含量测定6.蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳。

陕西国际商贸学院医用化学与生物化学实验课程标准一、课程基本信息二、课程的性质与任务及设置目的（一）课程性质与任务《医用化学与生物化学实验》是护理学专业的实训与实验课程，与《医用化学与生物化学》课程二者紧密联系，是护理学专业实践教学的重要组成部分，是理论联系实际的重要环节和主要方式之一。

通过实验，验证和巩固课堂讲授的理论知识，提高动手能力，使学生掌握化学与生物化学实验的基本技能，为后续教学及学生毕业后步入工作岗位奠定技能基础。

掌握护理中常见量器的的使用，溶液的配制及稀释，了解蛋白质的分离纯化方法以及酶的性质，常用生化仪器设备的结构、性能及使用方法；培养学生的实验观察能力，实事求是的作风，以及独立总结实验资料的能力，为培养高素质护理人才打下良好的实践基础。

（二）前后续课程的安排本课程为基础课程，以学生高中时期所开设的化学、生物的理论和实验课程为学习背景，其后续课程为《药理学实验》、《病理学与病理生理学实验》、《基础护理技术》等。

三、课程目标（一）总体目标本课程以实践环节为主，根据课程的性质、任务、要求及学习的对象，将实验课分为演示性实验、验证性实验、综合性实验，学生经过多层次，多方式教学的全面训练后，应达到下列要求：（1）进一步巩固和加深医用化学与生物化学的基本知识，提高综合运用所学知识的能力；（2）能正确使用仪器设备，掌实验原理，熟练操作；（3）能独立撰写设计说明，准确分析实验结果。

四、教学内容、基本要求与学时分配（一）实验教学内容实验项目（一）仪器认领与溶液的稀释与配制（4学时）：1.项目类别：必做2.项目性质：基础性3.项目主要目的要求：（1）熟悉实验室的规则要求，了解常见仪器的注意事项，落实责任制，掌握常用仪器的洗涤、干燥，试药的量取等方法。

（2）掌握一般溶液的配制方法和基本操作；（3）掌握吸管、容量瓶的使用方法；（4）熟悉质量分数和物质的量浓度的关系；（5）掌握由固体试剂或者浓溶液的稀释方法。

生化试验指导实验一：蛋白质及氨基酸的呈色反应目的：1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。

2.了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。

3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。

（一）双缩脲反应实验原理尿素加热至180℃左右生成双缩脲并放出一分子氨。

双缩脲在碱性环境中能与cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应。

蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。

可用于蛋白质的定性或定量测定。

•一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。

实验器材及试剂器材：试管、酒精灯、试管夹、试管架试剂：（1）尿素（2）10%氢氧化钠溶液（3）1%硫酸铜溶液（4）2％卵清蛋白溶液实验步骤1.取少量尿素结晶，放在干燥试管中。

用微火加热使尿素熔化。

熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。

冷后，加10％氢氧化钠溶液约1毫升，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。

观察出现的粉红颜色。

避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。

2.向另一试管加卵清蛋白溶液约l毫升和10％氢氧化钠溶液约2毫升，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇，观察紫玫色的出现。

（二）茚三酮反应实验原理•除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α—氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。

•该反应十分灵敏，1：1 500 000浓度的氨基酸水溶液即能给出反应，是一种常用的氨基酸定量测定方法。

•茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分于和氨缩合生成有色物质。

实验器材及试剂器材：试管、酒精灯、试管夹、试管架试剂：(1)蛋白质溶液：2％卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液(蛋清：水＝1：9)(2)0.5％甘氨酸溶液(3)0.1％茚三酮水溶液(4)0.1％茚三酮—乙醇溶液实验步骤(1)取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1毫升，再各加0.5毫升0.1％茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1—2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。