细胞工程复习题

第二章

2、简要说明MS培养基的基本组成。

1）大量元素母液配制

MS培养基的大量元素主要包括硝酸铵（NH4NO3）、硝酸钾(KNO3)、磷酸二氢钾（KH2PO4）、硫酸镁（MgSO4•7H2O）和氯化钾（CaCl2,CaCl2•2H2O）五种化合物。

2）微量元素母液配制

MS培养基的微量元素由7种化合物（除Fe外）组成MnSO4•4H2O、ZnSO4•7H2O、H3BO3、KI、NaMoO4•2H2O、CuSO4•5H2O、CoCl2•6H2O。

3）铁盐母液配制

MS培养基中的铁盐是硫酸亚铁（FeSO4•4H2O）和乙二胺四乙酸二钠（Na2•EDTA）的螯合物，必须单独配成母液。

4）有机母液的配制

MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、烟酸硫胺素和盐酸吡哆素。

5）激素母液配制

MS培养基中的激素有生长素类、细胞分裂素

6、初代培养时，接种的一般程序是什么

1）在接种前打开超净工作台紫外灯照射20~30min，关闭紫外灯后，打开超净工作台的风机10min以上，开始无菌操作。

2）接种人员先洗净，在缓冲室内换好经过消毒的工作服，带上口罩，并换上拖鞋等。

3）上超净工作台后，用酒精棉球认真擦拭双手，特别是指甲处，然后擦拭工作台面及四周，装有培养基的培养器皿和盛外植体的烧杯也要用酒精擦拭消毒后，再放进工作台。

4）先用酒精棉球擦拭接种工具，然后在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌或放在接种器械灭菌器中灭菌，灭菌后放在器械架上使其自然冷却。

5）把植物材料放在75%乙醇中浸泡约30s，再用%的升汞中浸泡5~10min，浸泡时刻进行搅动，使植物材料与消毒剂有良好的接触，然后用无菌水冲洗3~5次。

6）接种时培养瓶瓶口要在酒精灯火焰附近，并在接种前后灼烧瓶口。 7）接种结束后，清理和关闭超净工作台。

第三章

1.基本概念

细胞的全能性：是指细胞具有发育成完整个体的遗传潜能。

细胞分化：是指发育起始状态的合子沿个体发育方向不断分化出形态结构、生理功能不同的细胞、组织、器官而最终形成完整植株的过程。即由于细胞的分工而导致其结构和功能改变或发育方式改变的过程。

去分化：已有特定结构和功能的植物组织，在一定的条件下，其细胞被诱导改变原有的发育途径，逐步失去原有的分化状态，转变为具有分生能力的胚性细胞的过程叫脱分化或去分化。

体细胞胚： (somatic embry)又称胚状体，是指离体培养条件下没有经过受精过程而形成的胚胎类似物。

人工种子：（artificial seeds）又称合成种子（synthetic seeds）或体细胞种子（somatic seeds）。就是将离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中形成的类似种子的颗粒。

7、离体培养条件下，茎、芽和根的再生方式有几种

答:在组织培养中，通过茎芽和根而再生植株的方式大致有3种：

1.先芽后根：多数植物；

2.先根后芽：颠茄；

3.在不同部位分别形成芽和根，最后通过微管组织联系形成再生植株。

9、何谓胚状体胚状体与合子胚有何异同

答：胚状体 离体培养条件下，没有经过受精过程，但是经过了胚胎发育过程所形成的胚状类似物，此现象无论在体细胞培养还是生殖细胞培养中均可以看到，因而统称为体细胞胚或胚状体。

异同 细胞胚具有两极性，而器官发生是单极的。细胞胚维管组织分布是独立的Y 字形结构，形成的再生植株遗传性比器官发生的稳定。与合子胚相比体细胞胚子叶不规范，胚小、含水量高、对脱水敏感、没有休眠。 15、控制胚性细胞同步化的方法有哪些

答：①抑制剂法促进细胞同步分裂；②低温处理促进细胞同步分裂；③渗透压控制同步化法；④同步胚的分段收集筛选法；⑤通气法。

16、人工种子繁殖体如何处理人工种子的制备要点有哪些

答：繁殖体的处理：①体细胞胚形成后，需要在无激素培养基上经过一定阶段的后熟培养，然后进行脱水干燥，再将畸形胚选出后才能进行包埋。在脱水之前用ABA处理体细胞胚强迫其进入休眠，更有利于长期储存。②微型变态器官繁殖体不能过度脱水，但亦需要适当干燥，除去表面多余的水分，同时要进行表面消毒处理以防止包被后的感染。为了延长储存时间，需根据使用季节进行适当的休眠处理。③以微芽为繁殖体时，不能进行脱水处理，但必需筛选生长健壮、组织充实的芽进行包埋。

第四章

1.名词概念：

微繁殖：是指在离体培养条件下，将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行无菌培养，经过不断地切割和重复培养，使其增殖并再生形成完整植株，在短期内获得大量遗传性均一的个体的方法。

原球茎：兰科植物的种子在萌发初期并不出现胚根，只是胚逐渐膨大，以后种皮的一端破裂，膨大的胚呈小圆锥状，称作原球茎。

4、离体无性繁殖一般可分为哪几个阶段

简述其操作的一般程序。 离体无性繁殖一般可分为5个阶段：

1、植株的准备：供体植株应生长旺盛、健壮、不病虫害，并尽可能生长在干净的环境中。

2、无菌培养物的建立：获得无菌材料并诱导外植体生长和发育。包括从供体植株上采取外植体进行消毒、接种及启动外植体生长等程序。

3、 培养物的增殖：通过反复培养使第一阶段获得的数量有限的嫩枝、芽苗、胚状体或原球

茎等培养物的总量增加。

4、 生根培养：将增殖阶段形成的无根芽苗转移到生根培养基上诱导产生不定根，获得健壮

的具有根、芽、茎的完整小植株。

5、 试管苗的移栽及鉴定：移栽是将具根试管苗转移到土壤中的过程，是试管苗从离体培养

逐步适应温室或田间生长环境的过程

6 、离体繁殖中常见得技术问题有哪些 如何克服或防止其发生

污染问题和褐变、玻璃化

污染问题预防措施：

１）通风 ２）去湿３）光照４）防霉5）改进外植体消毒方法或使用抗生素

褐变防治措施：

1）选择合适的外植体：一般来说，最好选择生长处于旺盛的外植体。 2）合适的培养条件：无机盐成分、植物生长物质水平、适宜温度和光照、及时继代培养均可以减轻材料的褐变现象。3）使用抗氧化剂：在培养基中，使用半胱氨酸、抗坏血酸等抗氧化剂能够较为有效地避免或减轻很多外植体的褐变现象。（4）使用吸附剂：使用聚乙烯基吡咯烷酮 、%％的活性炭对防止褐变也有较为明显的效果

玻璃化防治措施：

1）降低细胞分裂素的浓度，调节激素配合2）增加培养基中的溶质水平，以降低培养基的渗透势3）降低氨态氮，提高硝态氮的含量；4）增加容器的气体交换，降低容器内相对湿度5）降低培养温度，增加自然光照。6）在培养基中添加间苯三酚、根皮苷或生长抑制剂等物质。

7、 要提高某种植物离体快繁的效率，可以采取哪些措施

9、脱除植物病毒病有哪些方法其原理是什么

物理方法

（1）、高温处理又称热疗法 原理:一些病毒对热不稳定,在高于常温的温度下(35-40 ℃)即 钝化失活,繁殖力下降,失去侵染能力,而植物基本不受伤害.

(2)、低温处理又称冷冻疗法

原理：降低温度能使病毒活力下降。

化学处理

(1).病毒抗血清预处理 ： 用齿舌兰环斑病毒（ORV）的血清处理兰属离体分生组织，提高了再生株中无ORV的植株频率。

(2).RNA抑制剂处理： 烟草愈伤组织培养基中加入2-硫脲嘧啶，可除去组织中马铃薯Y病毒（PVY）。放线菌D和放线菌酮能抑制原生质体中病毒的复制。

（3）.三氯唑核苷：病毒唑，化学名称1,2,4-3唑-3-酰胺-1-β-D-呋喃核苷，防治动物RNA

病毒和DNA病毒病的广谱性抗病毒制剂。

生物脱毒方法

（原理：培养材料中通常不含病毒，可通过植物组织培养就行脱毒）

（1）、茎尖分生组织培养

（2）、微体嫁接脱毒

（3）、愈伤组织培养脱毒

（4）、珠心胚培养脱毒

（5）、花药培养脱毒

第六章

体细胞杂交：是指在人工控制条件下，不经过有性过程，两种体细胞原生质体相互融合产生杂种细胞，并使之分化再生,形成新物种或新品种的技术。

原生质体：植物原生质体(protoplast):指将植物细胞壁去掉后得到的裸露的球形细胞。

7、试分析影响原生质体培养的主要因素

⑴供试材料的基因型和外植体

⑵酶解条件：酶质量、组合、浓度、pH、光照和温度

⑶渗透压稳定剂 ⑷质膜稳定剂

⑸分离条件：离心次数、离心速度、纯化方法、分离纯化持续时间。

⑹分离用具

11、PEG融合与电融合各有何特点电融合的原理是什么

PEG法特点：融合频率高；诱发融合无特异性；毒性较低 电融合特点：(1)融合率高、重复性强、对原生质体伤害小。 (2)装置精巧、方便简单、可在显微镜下观察或录像融合过程。 (3)免去PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控制性强等。

电融合的原理：①交流电场使原生质体表面电荷偶极化，沿着电极排列，形成串珠。②施加直流电场后，形成串珠的原生质体在质膜接触处发生穿孔，开始遗传物质的交流。

12、PEG融合法的技术关键是什么电融合的关键技术是什么

13、对称融合与非对称融合的细胞杂交有何异同

18.体细胞杂交有何意义

答：（1）实现远缘杂交，形成新的物种。

（2）创造细胞质杂种。

（3）培育作物新种质和新品种。

第七章

2、花药培养和花粉培养的区别是什么

花药培养指用植物组织培养技术将发育到一定阶段的花药剥离下来（切去花丝部分），接种在培养基上进行培养，最终形成完整植株的技术

花粉培养：又称小孢子培养，或游离小孢子培养，指在无菌条件下，将花粉从花药中分离出来使其成为分散或游离态，发育成单倍体植株的过程。

就培养材料而言，花药培养属于器官培养，花粉培养属于细胞培养。 4、花药培养时蔗糖和激素浓度如何选择依据是什么

10. 如何对获得的花粉植株进行倍性鉴定染色体加倍的方法有哪些

答：倍性鉴定有直接鉴定法和间接鉴定法两大类，其中间接鉴定法分为1.植株形态观察法 2.细胞形态鉴定法 含量测定 4.核体积测量法 5.生化与分子标记鉴定

染色体加倍的方法有1.小苗处理法 2.茎尖处理法 3.培养基处理法

第八章

5.未授粉子房培养与授粉后子房培养有何不同

答: 传粉和受精后的子房,仍需进行表面消毒后再接种

未授粉的子房可将花被表面消毒后,在无菌条件下直接剥取子房接种

6.植物胚乳有哪些类型

答:①被子植物胚乳：双受精产物，属三倍体组织

②裸子植物胚乳：很特殊，在受精前就形成，是配子体的一部分，由大孢子直接分裂发育而成，因而是单倍体组织

10.离体授粉与离体受精有何区别

答:离体授粉是指在无菌条件下培养离体的未受精子房或胚珠和花粉，使花粉萌发产生的花粉管进入胚珠完成受精而结实的过程。由于从花粉萌发、到精卵细胞融合形成种子，直至种子萌发产生幼苗都是在试管内完成的，所以也称其为试管受精。

离体受精是指离体及人工控制的环境下，精卵细胞融合形成合子的过程。它包括配子的分离、雌雄配子融合和合子培养三个阶段。

第九章

1、什么是植物体细胞无性系变异引起或影响植物体细胞无性系变异的因素有哪些

植物细胞、组织、器官在无菌条件下进行离体人工培养，经过脱分化和再分化过程，重新形成愈伤组织和完整植株时所产生的变异 称为植物体细胞无性系变异。