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细胞转染及其筛选1.传代：细胞于10cm盘消化后接种于6cm盘向6cm盘中加入3ml培养基,“米”字形摇晃。
当细胞生长到50％-70%时，根据细胞的生长速度可进行转染2.配置转染体系:(6cm盘)2。
4ug基因载体质粒；9ul转染试剂；200ul无血清培养基.混匀后室温静置10—15min孵育。
3.将6cm盘中的旧培养基弃去，换新的培养基3ml。
4.将配置好的转染体系加入到6cm盘中，混匀6-18h内换液。
5.12小时，换液后进行显微镜拍照观察。
6.再过6h加入G418，进行筛选(始终在6cm盘中进行）,使用G418浓度：600µg/mlG418的配置：取1gG418溶于1mlHEPES液中，加蒸馏水至10ml，过滤消毒4℃保存。
7.3-5天换液一次（换液不用PBS冲洗），此时仍要加G418，浓度不变,只到细胞呈单个细胞那种，当细胞死的过多时,可考虑药物浓度减半.筛选出稳定表达的cell。
8.挑克隆：1制备细胞悬液，细胞计数，用培养基稀释细胞到1个/10ul,在96孔板中加入培养基150ul/孔,在加入细胞悬液10ul/孔,待其逐渐增多后转入24孔板、6孔板、6cm 盘增殖。
2.伴随着细胞的生长,可能最后会变成细胞簇,故可以用黄枪头把细胞菌落挑出，放入24孔板里面。
9.单克隆鉴定:提取细胞RNA后，进行RT-PCR检测其表达量。
10.先做RT-PCR筛选一部分,在做western继续筛选一部分.所需物品:1。
转染试剂（Attractene Transfection Regent）；2.96孔板；3。
24孔板；4.6孔板；5.6cm盘；6。
G418 7. 1mlHEPES液。
细胞转染的原理操作步骤以及小技巧细胞转染是一种将外源DNA、RNA、蛋白质等分子导入到细胞内的实验技术。
这种技术可以用来研究基因功能、发现新的信号通路和治疗基因疾病等。
下面将介绍细胞转染的原理、操作步骤以及一些小技巧。
一、细胞转染的原理：细胞转染主要通过三种方法实现：物理法、化学法和生物学法。
1.物理法：通过高压、电穿孔、微射流等方式，使细胞膜发生瞬时破裂，从而使DNA、RNA等外源分子进入细胞。
常用的物理法有电穿孔法和基因枪法。
2.化学法：通过化学物质，如聚吡咯、脂质体等，使外源分子与细胞膜结合，从而实现转染。
常用的化学法有聚乙烯亚胺（PEI）法、磷酸钙共沉淀法等。
3.生物学法：通过利用病毒载体将外源基因导入目标细胞，实现基因的转移。
常用的生物学法有腺相关病毒（AAV）转染、逆转录病毒（RETRO）转染等。
二、细胞转染的操作步骤：1.细胞的预处理：根据细胞类型和实验要求，将细胞培养至合适的状态。
通常细胞应处于快速生长期，但还未达到接触抑制的阶段。
对于一些特定的细胞，如悬浮细胞，可能需要将其转接至适当的培养基中。
2.外源分子的准备：将外源DNA、RNA等转染载体制备好。
如将DNA克隆并纯化至高质量的质粒DNA，或将RNA合成或纯化。
根据实验要求选择合适的转染载体。
3.转染方法的选择：根据实验要求选择合适的转染方法，如物理法、化学法或生物学法。
一般情况下，物理法适用于悬浮细胞，化学法适用于贴壁细胞，而生物学法适用于大多数细胞类型。
4.细胞转染操作：a.物理法：i.电穿孔法：将细胞悬浮于含有外源分子的缓冲液中，然后通过电穿孔仪的电极或电穿孔板进行电穿孔。
ii. 基因枪法：使用基因枪将外源分子直接“枪”入目标细胞中。
b.化学法：i.PEI法：将PEI与外源DNA或RNA按一定比例混合，在适当条件下形成复合物，然后添加至目标细胞中。
ii. 磷酸钙共沉淀法：将外源DNA与磷酸钙按比例混合，并静置形成磷酸钙- DNA沉淀，然后加入至目标细胞中。
细胞转染步骤细胞转染是一种将外来脱氧核糖核酸（DNA）或核苷酸序列引入细胞内的技术。
这个过程可以用于研究基因功能、病毒感染和基因治疗。
在细胞转染过程中，有几个重要步骤需要注意。
下面是一个关于细胞转染步骤的简要介绍。
第1步：提取DNA或RNA在细胞转染前，需要先准备好DNA或RNA。
其中，DNA可通过PCR扩增、酵母合成，或从细胞中提取。
RNA则可通过反转录酶聚合酶链式反应（RT-PCR）反转录，然后进行DNA扩增。
第2步：选择转染方法目前有很多种不同的细胞转染方法，包括电穿孔、热休克、化学转染等。
要选择适合的转染方法，需要考虑许多因素，如细胞类型、转染效率和毒性等。
常用的转染剂有聚乙烯醇、脂质体、钙磷酸盐等。
第3步：制备转染复合物转染复合物是转染时添加的液体溶液，用于将DNA或RNA引入细胞。
制备复合物通常需要将DNA或RNA与转染剂混合，然后使其与乙醇或其他化学物质形成稳定的颗粒，最终形成复合物。
转染时需要将制备好的转染复合物直接加入培养基中，让细胞与其接触。
接触后，DNA或RNA会被吸附到细胞表面并被内吞到细胞内部。
转染过程通常需要一定程度的时间，具体时间取决于细胞类型和转染复合物的选用。
第5步：培养和维护转染成功后需要对细胞进行培养和维护。
这通常需要注意以下几个因素：1）细胞浸润度：细胞密度应该适合，以便观察细胞形态和产物的表达量。
2）培养基成分：为了保持细胞生长，需要选择适当的培养基成分。
3）药物筛选：转染后可能需要添加药物对细胞进行筛选，以便筛选出目标基因。
4）稳定性维护：为了保证目标基因稳定的表达，需要适当地维护和稳定细胞系。
以上是细胞转染过程中的几个关键步骤。
在进行细胞转染时，需要注意步骤的顺序和方法的选择，以便提高转染效率和成功率。
细胞转染操作方法一、细胞转染简介细胞转染是指将外源性DNA、RNA、蛋白质等分子通过物理或化学手段导入到细胞内，从而改变细胞的基因表达或功能。
常见的细胞转染方法包括病毒载体介导转染、电穿孔法、钙磷共沉淀法和化学转染法等。
其中，化学转染法是最为常用的方法之一，因为它具有操作简便、成本低廉和适用于多种类型的细胞等优点。
二、实验前准备1. 细胞培养：选择适当的培养基和培养条件，使得细胞处于生长状态。
2. 转染试剂：选择合适的化学转染试剂，如Lipofectamine 2000、PolyJet等。
3. 质粒DNA：准备所需的质粒DNA，并进行纯化和测定浓度。
4. 培养皿：准备适当大小和形状的培养皿，以满足实验需要。
5. 显微镜：准备显微镜以观察细胞转染效果。
三、实验步骤1. 细胞接种：将需要转染的细胞接种到培养皿中，使其达到适当的生长状态。
2. 质粒DNA和化学转染试剂混合：根据试剂说明书的建议，将质粒DNA和化学转染试剂混合，形成转染复合物。
3. 转染复合物与细胞接触：将转染复合物滴加到培养皿中，让其与细胞接触。
4. 培养：将培养皿放入恰当的培养箱中，并按照所选细胞类型的要求进行培养。
5. 观察效果：经过适当时间后，使用显微镜观察细胞转染效果。
若需要，可以通过Western blot、PCR等方法进行进一步验证。
四、注意事项1. 选择适当的化学转染试剂，并按照说明书建议操作。
2. 转染前需要保证质粒DNA纯度和浓度足够，并进行必要的测定。
3. 细胞密度和培养时间应根据所选细胞类型进行调整。
4. 转染复合物与细胞接触时间不宜过长或过短，一般在4-6小时左右。
5. 培养过程中需要注意细胞状态的变化，并根据需要进行适当的处理。
五、实验结果解读通过细胞转染操作，可以实现外源性DNA、RNA、蛋白质等分子的导入，从而改变细胞的基因表达或功能。
实验结果可以通过Western blot、PCR等方法进行进一步验证。
高中生物选修三专题二细胞转染知识点本文档旨在介绍高中生物选修三专题二细胞转染的相关知识点。
1. 什么是细胞转染？细胞转染是将外源DNA、RNA或蛋白质导入靶细胞的过程。
通过细胞转染可以实现基因转染、基因抑制和蛋白质表达等应用。
2. 细胞转染的应用领域细胞转染在生物学研究和生物技术领域具有广泛的应用。
主要包括以下方面：- 基因功能研究：通过转染外源基因，研究基因在细胞中的功能及调控机制。
- 基因治疗：将修饰好的基因导入患者的细胞，来治疗某些遗传性疾病。
- 蛋白质表达和纯化：利用细胞转染技术可在细胞中高效表达目的蛋白质，并进行纯化和鉴定。
3. 细胞转染的方式细胞转染有多种方式，常见的包括以下几种：- 化学转染：利用化学物质（如离子型聚合物、脂质体等）将外源DNA导入细胞中。
- 非化学转染：利用物理方法（如电穿孔、微注射等）或生物病毒（如腺病毒、慢病毒等）将外源DNA导入细胞中。
4. 常用的细胞转染试剂- 钙磷共沉淀试剂：通常用于化学转染，能够有效将外源DNA 送入细胞内。
- 脂质体试剂：也是一种常用的化学转染试剂，能够有效将外源DNA导入细胞。
5. 细胞转染的注意事项在进行细胞转染实验时，需要注意以下几点：- 转染体系的选择：根据实验的要求，选择合适的细胞株、转染试剂和转染方法。
- 转染效率的优化：通过调节转染试剂浓度、孵育时间等参数，优化转染效率。
- 遗传毒性的考虑：某些化学转染试剂或病毒载体可能对细胞产生毒性作用，需要进行合适的对照组和评估。
- 数据分析和解释：对转染后的细胞进行相应指标检测，结合对照组进行数据分析和解释。
以上是高中生物选修三专题二细胞转染的相关知识点介绍，希望能对您的学习有所帮助。
细胞转染操作方法转染，是将外源性基因导入细胞内的一种特地技术。
随着基因与蛋白功能讨论的深化，转染目前已成为试验室工作中常常涉及的基本方法。
转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。
电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例；化学介导方法许多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。
抱负细胞转染方法，应当具有转染效率高、细胞毒性小等优点。
病毒介导的转染技术，是目前转染效率最高的方法，同时具有细胞毒性很低的优势。
但是，病毒转染方法的预备程序简单，经常对细胞类型有很强的选择性，在一般试验室中很难普及。
其它物理和化学介导的转染方法，则各有其特点。
需要指出的一点，无论采纳哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进行优化。
影响转染效率的因素许多，从细胞类型、细胞培育条件和细胞生长状态，到转染方法的操作细节，都需要考虑。
一、细胞传代1. 试验预备：200ul/1mlTip头各一盒(以上物品均需高压灭菌)，酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培育皿，离心管。
2. 弃掉培育皿中的培育基，用1ml的PBS溶液洗涤两次。
3. 用Tip头加入1ml Trypsin液，消化1分钟(37℃，5%CO2 )。
用手轻拍培育瓶壁，观看到细胞完全从壁上脱落下来为止。
4. 加入1ml的含血清培育基终止反应。
5. 用Tip头多次吹吸，使细胞完全分散开。
6. 将培育液装入离心管中，1000rpm离心5min。
7. 用培育液重悬细胞，细胞计数后选择0.8X106个细胞加入一个35mm培育皿。
8. 将合适体积完全培育液加入离心管中，混匀细胞后轻轻加入培育皿中，使其匀称分布。
9. 将培育皿转入CO2培育箱中培育，其次天转染。
二、细胞转染1. 转染试剂的预备① 将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。
细胞转染技术的使用教程细胞转染技术是生物学研究和生物医学领域中一项重要的实验技术，它能够将外源基因或其他生物分子导入到目标细胞，从而改变细胞的性状和功能。
本篇文章将介绍细胞转染技术的基本原理、常用的转染方法以及技术操作的注意事项。
一、细胞转染技术的原理细胞转染技术通过物理、化学和生物学方法将外源基因或其他生物分子导入到目标细胞中。
常见的转染方式包括病毒介导转染、化学物质介导转染、电穿孔等。
病毒介导转染是利用病毒作为基因载体，通过病毒的复制和传播机制将外源基因导入目标细胞。
化学物质介导转染则是利用化学物质改变细胞膜的通透性，使外源基因进入细胞。
电穿孔则是利用高压电脉冲破坏细胞膜的完整性，使外源基因进入细胞。
二、常用的转染方法1. 病毒介导转染病毒介导转染是细胞转染中最常用的方法之一，常见的病毒载体包括腺病毒（Adenovirus）、慢病毒（Lentivirus）和腺相关病毒（Adeno-Associated Virus，AAV）等。
病毒载体能够高效地将外源基因导入目标细胞，并在细胞内稳定表达。
病毒介导转染具有转染效率高、表达时间长等优点，但也存在一些限制，如细胞感染范围狭窄、潜在的免疫反应等。
2. 化学物质介导转染化学物质介导转染常用的试剂有磷脂体（Liposome）和聚乙烯亚胺（Polyethyleneimine，PEI）等。
这些试剂能够与外源基因形成复合物，通过与细胞膜结合而进入细胞。
化学物质介导转染方法具有转染效率高、适用于多种细胞类型等优点，但也存在一些缺点，如细胞毒性、细胞内溶酪斑形成等。
3. 电穿孔电穿孔是一种利用高压电脉冲破坏细胞膜的完整性，使外源基因进入细胞的方法。
通过施加电场，电穿孔能够短暂地增加细胞膜的通透性，使外源基因能够进入细胞质。
电穿孔方法具有转染效率高、适用于多种细胞类型等优点，但操作相对复杂，需要专业的设备和技术支持。
三、技术操作的注意事项1. 细胞的选择和培养在进行细胞转染实验之前，需要选择适宜的细胞系进行培养。
细胞转染知识点总结一、细胞转染的基本原理1.细胞膜的通透性细胞膜是生物细胞的保护屏障，对大多数物质具有选择性通透性。
它具有疏水性，对水溶性分子和带电离子有较高的抵抗力。
因此，要将外源DNA/RNA或蛋白质引入细胞内，就需要突破细胞膜的屏障。
2.转染技术的原理细胞转染的原理是通过物理方法或化学方法破坏细胞膜的结构，使得外源基因或蛋白可以穿过细胞膜，进入细胞内。
外源基因或蛋白进入细胞后，可以在细胞内表达并产生相应的生物学效应。
3.转染方法的选择根据转染的实验目的和特定的细胞类型，可以选择不同的转染方法。
常用的转染方法包括化学转染、电穿孔法、超声转染、直接微注射等。
不同的转染方法有各自的优缺点，可以根据实验需要进行选择。
二、常用的细胞转染方法1. 化学转染化学转染是利用化学物质破坏细胞膜结构，引入外源DNA或蛋白质的一种转染方法。
常用的化学转染试剂包括有机阴离子试剂如聚乙烯亚胺（PEI），阳离子表面活性剂如脂质体和脂质体样微粒等。
这些试剂可以与DNA或蛋白发生静电相互作用，形成复合物，穿过细胞膜进入细胞内。
2. 电穿孔法电穿孔法是利用电场作用引导外源DNA或蛋白进入细胞内的转染方法。
通过施加电脉冲，使细胞膜通透性增加，从而实现外源基因或蛋白质的引入。
电穿孔法转染简单、高效，适用于各种细胞类型。
3. 超声转染超声转染是利用超声波破坏细胞膜结构，引入外源DNA或蛋白质的转染方法。
超声波作用在细胞膜上会形成微小孔道，从而促进外源基因或蛋白的穿过。
超声转染操作简单，对细胞损伤小，适用于多种细胞类型。
4. 直接微注射直接微注射是指利用显微注射器将外源DNA或蛋白质直接注射进入细胞内的转染方法。
这种方法不受细胞膜的限制，能够确保外源基因或蛋白的输入量和准确性。
但微注射操作技术要求高，效率较低。
5. 基因枪法基因枪法是利用高压气枪射击金属微粒和DNA复合物，使复合物穿过细胞膜进入细胞内的转染方法。
基因枪法操作简单，转染效率高，适用于植物细胞和哺乳动物细胞。
细胞转染的步骤你了解多少？细胞转染的方法主要有三种，分别是磷酸钙-DNA 共沉淀法、DEAE-葡聚糖转染、脂质体介导DNA 转染法，今天师兄就先从磷酸钙-DNA共沉淀法讲起。
磷酸钙-DNA共沉淀法核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使DNA 附在细胞表面，这回利于细胞吞入摄取核酸，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA，仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA 整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术可以用于任何DNA导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究。
该方法往往被用于贴壁细胞的转染，也是最好的方法。
1. 试剂的配制(1)2×HBS 1.63 g NaCl ；1.19g Hepes；0.023 g Na2 PO4 ·2H2 O；加水至100 ml pH 7.1 过滤，4℃保存(2)2mmol/L CaCl2过滤除菌(3)TE：0.1mmol/L EDTA，1mmol/L Tris-HCL PH 8.0(4)G418(新霉素G418)液：1g G418溶于1mmol/L Hepes液中，加H2 O至10mL 过滤除菌4℃保存。
(5)G418选择培养基：用含10%胎牛血清的DMEM培养液配制G418，G418浓度为200～800mg/L注意：对受体细胞先做预试验，选用浓度为在10～14天内能杀死细胞50%以上的最低浓度。
2. 操作步骤(1)供体DNA制备：方法按前介绍的DNA提取法提取，溶于TE中，40mg/L。
(2)受体细胞的培养：研究癌基因转移应选择不含人类Alu序列的动物细胞系作为受体细胞。
如小鼠NIH3T3胚成纤维细胞系等，该细胞有一定自发转化倾向，一般在转染前一天接种细胞，接种密度为2×104 /cm2 ,用含10%胎牛血清的DMEM液，37℃、5%CO2培养，待细胞占50～70%瓶底面积时，用于转染试验。
一文包揽细胞转染那些事儿（含操作视频）
作者：解螺旋·子非鱼
如需转载请注明来源：解螺旋·医生科研助手
导语
细胞转染对初接触细胞实验的菜鸟而言，是一道难过的坎儿。
当科研汪们在这个坎儿上摔了无数次的跟头后，心里的阴影面积便被无限扩大，似乎只要碰到细胞转染就永无翻身之日。
然而现在就放弃该实验还为之过早。
正所谓授之以鱼不如授之以渔，同时也为了让大家成功跨过这道坎儿，小鱼这就把做细胞转染的技巧分享给大家，让你分分钟从菜鸟变成细胞转染达人！
细胞转染是指将DNA或RNA导入真核细胞中，用于研究基因功能和蛋白表达分析等，可依据是否整合到细胞基因组，分为瞬时转染（24-96h）和稳定转染。
细胞转染方法类型及不同之处如下面两张图片所示，大家可以依据自己的实验需求来选择不同的实验方法。
其中，实验中应用最广泛的是脂质体介导的细胞转染。
细胞转染具体实验步骤的视频：
一般影响转染效率的主要因素：细胞、血清、抗生素、核酸质量与数量、转染技术。
只要在这几个因素上多加注意，就可以避免掉进细胞转染效率低下的大坑。
细胞
1. 选择传代次数较低并处于对数生长期的细胞进行转染。
对大多数细胞而言，均需要在转染当天或前一天铺板，第二天上午进行转染，48h后收集细胞进行功能检测。
对于原代细胞，可用促有丝分裂刺激物进行细胞活化。
2. 对于贴壁细胞，一般要求在转染前一日，用胰酶处理为单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，最好在转染前4小时换一次新鲜培养液。
3. 支原体污染会严重降低细胞转染的效率，且支原体不会像细菌污染那么明显，因而转染前可用环丙沙星处理细胞以除去支原体。
4. 细胞转染时需要一定的细胞密度，以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜。
核酸质量和数量
1. 选择高纯度（OD260/280比值在1.8以上）且去除内毒素的DNA进行细胞转染。
如果DNA的纯度差，则其携带的少量的盐离子、蛋白、代谢物污染都会显著影响转染复合物的有效形成及转染的效率。
又因含有内毒素的质粒会对细胞有很大的毒性作用，因而建议使用QIAGEN公司的超纯质粒抽提试剂盒对DNA进行纯化。
2. DNA分子构象也会影响转染的效率。
超螺旋的质粒可达到较高的瞬时转染效率，线性质粒则更容易整合到宿主基因组中。
3. 当转染的DNA会编码对细胞有毒害作用的产物时，可使用弱启动子或可诱导的启动子限制毒性基因产物表达对细胞造成的损害。
4. 对于病毒载体还需考虑安全因素，可设立空载体和用其他基因相同载体构建的阳性对照来排除毒性影响的干扰。
5. DNA含量应该控制在4-6ug，如果超过10ug，转染效率会大大降低。
血清
1. 建议在转染前先测试出对细胞生长良好的血清批号，转染时用同一批号的血清，并设立阴性对照（不加转染试剂及外源DNA）以测试细胞生长是否正常。
2. 为了避免干扰DNA和阳离子脂质体形成复合物，在转染细胞时需用无血清无抗生素的OPTI-MEM培养基来提高转染效率。
3. 转染后4-6小时需更换培养基，一是因为脂质体具有一定毒性，二是因为培养基需要更换成有血清培养基。
一般当20%的细胞変圆时，就是加血清的最佳时机。
4. 阳离子脂质体和DNA的最佳量在使用血清时会有所不同，因此如果想在转染培养基中加入血清，需要对条件进行优化。
抗生素
1. 抗生素如青霉素和链霉素，一般对真核细胞无毒，但由于阳离子脂质体试剂增加了细胞的通透性，可使抗生素进入细胞，降低了细胞的活性，导致转染效率降低，所以转染培养基中不能使用抗生素。
2. 抗生素在细胞转染后期起到筛选作用，由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质，所以筛选不能太早;但是筛选时间也不能太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增殖较慢，时间长了，就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，最终导致筛选不出阳性克隆。
一般要在转染48小时之后才开始加抗生素筛选。
3. 挑出单克隆后就可以用维持浓度，一般是筛选浓度的1/2。
在维持抗性筛选过程中，每3~5天都要更换一次含有抗生素的筛选液。
转染试剂
1.许多转染方法需要优化DNA与转染试剂比例，细胞数量，培养及检测时间等。
转染时各种培养皿添加质粒和脂质体参考量见下表：
2. 不同质粒和脂质体的最佳搭配比例不同，转染前，需要优化一个最佳配比。
质粒：脂质体=1:1,1:1.5,1:2,1:2.5,1:3,1:
3.5的梯度比例来检测最佳转染比例（一般质粒带有荧光，可通过观察每组荧光强弱来判断转染效率，没有荧光可通过qPCR来检测各组转染效率）。
3. 用脂质体转染时，要小心轻柔的将脂质体加入到培养基中并轻轻混匀，避免粗暴吹打使脂质体失效。
4在此小鱼向大家推荐两款高性能转染试剂: X-tremeGENE 9和
X-tremeGENE HP。
它们能够提供高的转染效率、重复性和细胞存活率。
X-tremeGENE 9试剂是一类非脂质体型多组份试剂，具有极低的细胞毒性、操作简便、在含血清条件下对各类常用细胞系仍均具有较高的转染效率等诸多优点，它非常适合开展各类细胞分析应用。
X-tremeGENE HP试剂是一种无动物源成分的非脂质体转染试剂，可成功转染多种真核细胞，包括昆虫细胞和难转染细胞系（如Sf9、U-2 OS、MEF、MCF7、Hep G2、PC-3、HeLa、HT-29、HT-1080、K-562、RAW 264.7、Jurkat、PC-12和HCT 116）。
转染技术
1.设置阴性和阳性对照：一般在转染后24-48h,靶基因即在细胞内表达。
可依据不同的实验目的，24-48h后即可进行靶基因表达的检
测等实验。
2. 转染后效率的检测方法：观察转染后细胞荧光情况；qPCR验证；WB检测敲减或过表达蛋白。
3. 转染效率低，可采取以下两种方法：1 )复转染，即转染后12-24h再进行转染，前提是该细胞对脂质体的耐受性较好，转染后细胞死亡数较少。
2 )通过药筛来杀死未转入成功的细胞，前提是该质粒带有抗生素抗性的基因。
4. 电转时，不同的细胞需要的电压是不一样的，需要做预实验，摸索最佳条件。
对于大多数细胞而言，最佳电压位于250-1250v/cm。
电击后，应该将DNA和细胞混合液在室温下放置10min,使细胞恢复损伤。
细胞电转的实验步骤的视频：。
