第七章放射免疫分析第一节放射免疫技术第二节放射免疫分析第三节免疫放射分析第四节放射免疫分析技术的应用第一节放射免疫技术放射免疫分析是利用放射性核素可探测的灵敏性、精确性和抗原抗体反应特异性相结合的一种免疫技术。
早期的放射免疫技术是基于竞争性结合反应原理的放射免疫分析（RIA），稍后又发展了非竞争性结合的免疫放射分析（IRMA）。
一、基本类型及原理1.放射免疫分析（RIA）是以放射性核素标记的抗原与反应系统中未标记抗原竞争结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。
2.免疫放射分析（IRMA）是用放射性核素标记的过量抗体与待测抗原直接结合，采用固相免疫吸附载体分离结合与游离标记抗体的非竞争放射免疫分析法。
二、常用的放射性核素放射免疫技术常用的放射性核素有125Ⅰ、131Ⅰ、3H、14C等。
使用最广泛的是125Ⅰ。
三、标志物制备及鉴定采用放射性碘（如125Ⅰ）制备标志物的基本原理是以放射性碘原子通过取代反应置换被标志物分子中酪氨酸或酪胺残基以及组胺残基上的氢原子。
（一）标记及类型1.直接标记法最常用于肽类、蛋白质和酶的碘化标记，其原理是采用化学或酶促氧化反应直接将125Ⅰ结合于被标志物分子中酪氨酸残基或组胺残基上。
其特点是标记方法操作简便，容易将较多的125Ⅰ结合到被标记蛋白分子上，易得到比放射性较高的标志物。
常用的方法为：①氯胺T（ch-T）法；②乳过氧化物酶标记法。
2.间接标记法也称连接标记法（Bolton-Hunter法），是最常用的间接碘标记方法。
该法主要用于甾体类化合物、环核苷酸、前列腺素等缺乏碘标记基团的小分子化合物的标记。
纯化标志物的方法有利用分子筛机制的凝胶过滤法、利用游离125Ⅰ与标志物分子极性差异进行吸附解离的离子交换层析法、按分子所带电荷和直径不同在电场作用下分子迁移速率不同进行分离纯化的聚丙烯酰胺凝胶电泳法（PAGE）以及高效液相色谱法。
（二）标志物的纯化125Ⅰ标志物反应后，标志物需进行分离纯化以去除游离125Ⅰ和其他杂质。
