下载文档原格式
烟草土壤微生物与土壤酶活性分析摘要：从湖北省恩施咸丰县烟田采集烟草（Nicotiana tabacum L.）不同生长时期的土壤样品，采用稀释平板涂布法进行细菌、放线菌、氨化细菌、硝化细菌、真菌的分离并对土壤蔗糖酶、脲酶、磷酸酶、过氧化氢酶进行酶活性的测定。
试验结果表明，①土壤中氨化细菌数量最多，真菌数量最少。
各种类群微生物在烟草整个生育期间变化波动较大，不同类群微生物消长趋势不同，整体呈上升趋势；其中，烟草生长旺盛期微生物数量最多。
②在烟草生长前期，土壤脲酶活性较高；磷酸酶活性在前、中期均处于比较高的水平；在后期，随着土壤熟化程度的提高，蔗糖酶活性增强较明显；过氧化氢酶活性在各个时期的变化较平稳。
关键词：烟草（Nicotiana tabacum L.）；土壤微生物；土壤酶活性烟草（Nicotiana tabacum L.）是一种特殊的叶用经济作物，其生长发育和质量形成与土壤生物学特性和生态环境有着密切的关系。
土壤微生物是土壤的重要组成部分，它对土壤肥力的形成和植物营养的转化起着积极的作用[1]。
土壤微生物种类、数量可以作为评价土壤肥力的指标[2]。
土壤酶活性与土壤微生物类群密切相关，土壤酶活性反映了土壤微生物群落的代谢状况。
土壤微生物和土壤酶既是土壤有机物转化的执行者，又是植物营养元素的活性库[3]。
此外，酶是土壤组分中最活跃的有机成分之一，土壤酶活性反应了土壤的生物学活性。
研究烟草土壤中微生物类群和数量以及土壤酶活性随着烟草不同生长时期的变化动态有助于分析影响烟草生长发育的土壤生态因子。
本试验对湖北省恩施咸丰县烟田不同生长时期的土壤微生物进行分离，并对土壤酶活性进行测定，分析了土壤微生物数量和土壤酶活性在烟草不同时期的差异和变化动态，探索土壤微生物、酶活与烟草生长的关系。
1 材料与方法1.1 试验材料供试样品采自湖北省恩施咸丰县高乐山镇小模村烟田。
土壤类型为黄棕壤，质地疏松，通透性好。
年平均气温15～17 ℃，年降水量为1 300～1 500 mm，相对湿度80%。
土壤酶活性的测定方法土壤酶活性的测定方法主要包括测定土壤中的蔗糖酶、脲酶、过氧化氢酶和过氧化物酶等多种酶活性，这些酶活性的测定可以反映土壤的微生物代谢能力和土壤质量。
本文将详细介绍几种常用的土壤酶活性测定方法。
一、酶活性测定方法的准备工作1. 样品处理：收集土壤样本后，将其放在4C冷藏保存，保持样品活性，避免酶的降解。
2. 取样：根据需要，从土壤样品中取出一定量的湿重或干重样品。
3. 土壤处理：依据实验要求，对土壤样品进行处理，如水分调整、添加营养物质等。
二、蔗糖酶活性测定方法蔗糖酶是一种常见的土壤酶，可反映土壤中的碳循环能力。
蔗糖酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤，去除杂质。
2. 准备培养基：其中包括蔗糖作为底物、缓冲液、指示剂等。
3. 加入适量的土壤样品和培养基到离心管中，混匀后，放置在恒温摇床上培养一定时间。
4. 培养结束后，通过离心将土壤颗粒沉淀到底部。
5. 取沉淀后的上清液，用酚酞指示剂进行比色检测，根据比色结果计算蔗糖酶活性。
三、脲酶活性测定方法脲酶是一种重要的土壤酶，参与土壤中尿素的分解过程。
脲酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，在10C恒温条件下接种脲酶底物，使底物完全被土壤降解。
2. 在一定时间后，通过添加草酸溶液阻止进一步反应，停止脲酶的活性。
3. 取样品，加入酚硫酸溶液，进行比色测定。
4. 根据比色结果计算脲酶活性。
四、过氧化氢酶活性测定方法过氧化氢酶是一种催化过氧化氢分解的酶，可反映土壤的抗氧化能力。
过氧化氢酶活性的测定方法如下：1. 取一定量的土壤样品，并通过筛网过滤去除杂质。
2. 准备含过氧化氢底物和其他试剂的反应体系。
3. 将土壤样品加入反应体系中，充分混匀后，在一定时间内反应。
4. 在反应结束后，通过添加硫酸钠溶液停止反应，阻止进一步的化学反应。
5. 使用紫外分光光度计测定样品的吸光度，根据结果计算过氧化氢酶活性。
五、过氧化物酶活性测定方法过氧化物酶是一类重要的土壤酶，在土壤中参与有机物降解和氧化还原反应。
土壤微生物生物量测定方法及其应用
土壤微生物生物量测定方法是土壤微生物生态学研究的重要工具。
它不仅可以准确测定出土壤中微生物的数量，还可以对微生物的类型、结构、发育演化等有着比较全面的认识。
土壤微生物生物量测定方法一般可分为单因子测定法和量变主成分2类。
单因子测定法基于单一的尺度，如活性碳或酶，来直接测定土壤中的微生物活力；而量变主成分的数据分析，基于多变量的综合分析，对于研究土壤中的物种多样性有着重要作用。
通过这两类方法，我们可以准确测定出土壤中各种微生物的数量，以及其结构、发育演化变化的趋势，为研究土壤微生物生态学提供了重要的帮助。
土壤酶指标测定土壤生物化学指标测定一、土壤脱氢酶(dehydrogenase)活性测定（比色法）（一）分析意义脱氢酶能酶促发展过氧化氢充分反映，它起至着氢的中间传达题的促进作用。
在土壤中，碳水化合物和有机酸的脱氢酶作用比较活跃，他们可以作为氢的工体。
脱氢酶能自基质中析出氢而进行氧化作用。
（二）方法挑选与原理lenhard(1956)最先明确提出用ttc做为氢的受体分解成红色的tf，入行闭塞测定，以溶液的光密度值表示酶活性。
后来对上述的方法搞了相同的改良和健全。
用土壤有机质做为氢的供体或用葡萄糖搞氢的供体，用分解成的tf数量或折算成氢的体积去则表示脱氢酶的活性。
（三）试剂配制1、0.5%ttc溶液2、甲苯3、tris-hcl缓冲液ph7.6：0.1m三羟甲基氨基甲烷（12.114g/l）50ml与0.1mhcl38.5ml混合后，用水稀释至100ml。
4、硫化钠5、0.1mol/l葡萄糖溶液。
（四）实验步骤1、标准曲线的绘制：称取相当于50mg纯品量的已烘干的ttc于50ml比色管中，定容，制成1mg/l的母液。
分别向6支50ml比色管中依次注入1、2、3、4、5、6mlmg/ml标准ttc溶液，用蒸馏水定容，是为工作液：取7只带塞比色管（50ml）依次加入2mltris-hcl演算缓冲液，1ml不同浓度的ttc工作液，1ml10%硫化钠新配溶液，摇匀，放置20分钟；反应完全后，准确加入10ml甲苯，振摇。
完全提取tf，稳定数分钟，取上层有机溶液在紫外分光光度计492nm处闭塞（在比色皿中也需稳定2分钟）绘制标准曲线。
2、操作过程：取0.5g新鲜土壤，置于50ml比色管中，依次加入2mltris-hcl盐酸缓冲液、1ml0.1mol/l葡萄糖溶液、1ml0.5%ttc溶液,震荡均匀，离心（4000转/分）5分钟后，将甲苯提取液在分光光度计492nm处闭塞测定。
同时设无土壤和无ttc的对照（以蒸馏水替代）。
一、实验目的1. 了解土壤活性的基本概念和测定方法。
2. 掌握土壤酶活性的测定原理和操作步骤。
3. 通过实验，了解土壤酶活性与土壤肥力的关系。
二、实验原理土壤活性是指土壤中微生物、植物、动物等生物体及其代谢产物的综合活性。
土壤酶活性是土壤活性的重要指标，可以反映土壤中生物体的代谢能力和土壤肥力状况。
本实验通过测定土壤酶活性，了解土壤活性水平。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、过氧化氢酶、磷酸酶、脲酶、蛋白酶、转化酶、脱氢酶等试剂。
2. 实验仪器：恒温水浴锅、pH计、分光光度计、滴定管、移液管、烧杯、试管等。
四、实验方法1. 土壤样品的采集与处理采集不同类型土壤样品，过筛后，置于4℃冰箱中保存。
2. 土壤酶活性的测定（1）过氧化氢酶活性测定原理：过氧化氢酶催化过氧化氢分解，产生水和氧气。
通过测定氧气的产生量来计算过氧化氢酶活性。
操作步骤：①配制过氧化氢酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的过氧化氢酶反应液，加入一定量的过氧化氢，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用分光光度计测定反应液的吸光度，根据标准曲线计算过氧化氢酶活性。
（2）磷酸酶活性测定原理：磷酸酶催化磷酸苯二钠水解，产生酚和磷酸。
通过测定酚的产生量来计算磷酸酶活性。
操作步骤：①配制磷酸酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的磷酸酶反应液，加入一定量的磷酸苯二钠，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用分光光度计测定反应液的吸光度，根据标准曲线计算磷酸酶活性。
（3）脲酶活性测定原理：脲酶催化尿素水解，产生氨和二氧化碳。
通过测定氨的产生量来计算脲酶活性。
操作步骤：①配制脲酶反应液：取一定量的土壤样品，加入一定量的磷酸盐缓冲液，混匀，置于4℃冰箱中保存。
②取一定量的脲酶反应液，加入一定量的尿素，在恒温水浴锅中反应一段时间。
③用滴定法测定氨的产生量，根据标准曲线计算脲酶活性。
土壤微生物数量测定方法土壤微生物是指生活在土壤中的微小生物，包括细菌、真菌、放线菌、古菌等。
土壤微生物在土壤的生物地球化学循环、有机质分解、养分转换和植物健康等过程中起着重要的作用。
因此，对土壤微生物数量的准确测定具有重要意义。
本文将介绍一些常用的土壤微生物数量测定方法。
1.瓶培法：将适量的土壤样品与适量的培养基混合，在37°C下培养约24小时，然后通过平板计数法或最凼稀释法进行测定。
2.膜过滤法：将土壤提取液通过特定孔径的膜过滤器滤过，然后将膜放置在培养基上进行细菌的生长，最后进行计数。
3.间接法：通过测定土壤样品的可培养细菌指标，如氧化还原酶、脱氢酶等的活性，从而推算出土壤中的细菌数量。
4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的细菌基因，如16SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行细菌数量的测定。
1.直接镜检法：直接在显微镜下观察土壤样品中的真菌，通过计数来估算真菌的数量。
2.平板计数法：将土壤样品均匀撒在培养基上，通过培养方法使真菌生长形成菌落，最后进行计数。
3.膜过滤法：与细菌数量测定相似，将土壤提取液通过膜过滤器滤过，然后将膜放置在适当的培养基上进行真菌的生长，最后进行计数。
4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的真菌基因，如18SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行真菌数量的测定。
1.直接镜检法：直接在显微镜下观察土壤样品中的放线菌，通过计数来估算放线菌的数量。
2.平板计数法：将土壤样品均匀撒在培养基上，通过培养方法使放线菌生长形成菌落，最后进行计数。
3.膜过滤法：与细菌和真菌数量测定类似，将土壤提取液通过膜过滤器滤过，然后将膜放置在适当的培养基上进行放线菌的生长，最后进行计数。
4.分子生物学方法：通过PCR扩增土壤DNA中的放线菌基因，如16SrRNA基因，再通过测定PCR产物进行放线菌数量的测定。
通过上述方法测定土壤中微生物的数量，可以了解土壤微生物对土壤生态系统功能的影响，并为土壤质量评价和科学合理利用提供依据。
土壤微生物测定方法
目前常用的土壤微生物测定方法主要包括直接计数法、培养法、DNA
分析法和生化方法等。
1.直接计数法：直接计数法是指通过显微镜观察和计数土壤中微生物
的数量。
这种方法简单直观，可以快速测定土壤中微生物的数量。
但是，
由于土壤微生物数量庞大，直接计数方法需要大量的样品和时间，且对操
作者的要求较高。
2.培养法：培养法是指通过将土壤样品接种在富含营养物质的培养基上，并在一定温度和湿度下培养一段时间，通过观察和计数可见的菌落来
测定土壤中微生物的数量和种类。
这种方法可以有效地测定土壤中常见的
细菌和真菌等，但是对于无法培养的微生物种类相对有限。
3.DNA分析法：DNA分析法是指通过提取土壤中微生物的DNA，并通
过PCR扩增和DNA测序等技术来测定土壤中微生物的种类和多样性。
这种
方法可以检测到所有存在的微生物，无论是否可以培养。
因此，DNA分析
法可以更全面地测定土壤中微生物的多样性和种类。
但是，这种方法对实
验条件和技术要求较高。
4.生化方法：生化方法是指通过测定土壤中微生物代谢产物的含量或
活性来测定土壤中微生物的数量。
例如，通过测定脲酶、葡萄糖酶、氧化
还原酶等土壤微生物常见的酶活性来评估微生物的活性和数量。
生化方法
可以快速测定土壤微生物的数量和活性，但是受土壤理化性质的影响较大。
总之，以上所述的方法各有优缺点，可以根据实际情况选择合适的方
法或多种方法相结合来测定土壤微生物的数量和多样性。
此外，测定方法
的选择还要考虑实验所需的样品数量、可行性和经济性等因素。
土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法土壤酶活性测定取样工具及取样方法在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或者塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。
土样在自然条件下烘干装入袋中备用。
所需试剂：酒石酸钠、NaCl、阿拉伯胶、纳氏试剂、硫酸铵[(NH4)2SO4]、甲苯、苯磷酸二钠、NaAc.3H2O、HAc、酚、铁氰化钾、4-氨基安替吡啉、碘化钾、氯化汞、氢氧化钾、、配置方法：铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100µg N。
往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在490nm下比色，并绘制标准曲线。
醋酸缓冲液：PH5.0，NaAc.3H2O50g，溶于适量水中，加6mol/LHAc34ml，稀释至500ml。
硼酸缓冲液：PH9.0，80毫升0.05mol/l硼砂（Na2B4O7.10H2O）与0.2mol/l的硼酸混合。
纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱与水溶液，直至生成的红色沉淀不再溶解为止。
加入氢氧化钾30g并溶解之，再加入氯化汞饱与溶液1ml，加水至200ml。
静置，取上层清液，贮于棕色瓶中酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升，溶液在暗色中稳固，（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含0.05mg酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35毫克酚），待颜色稳固后，570nm比色绘制标准曲线。
测定方法磷酸酶活性测定一、试验原理土壤中的磷，很大部分以有机磷化合物的形式存在。
2 土壤微生物量测定土壤微生物量（MB）是指土壤中体积小于5x103叩3的生物总量，但活的植物体如植物根系等不包括在内］。
它通过调控土壤中能量和养分循环以及有机物转化，来反映土壤同化和矿化能力。
土壤微生物生物量包括土壤微生物生物量碳、土壤微生物生物量氮、土壤微生物生物量磷和土壤微生物生物量硫，但一般情况下土壤微生物生物量的大小以土壤微生物生物量碳来表示。
2.1熏蒸浸提法2.1.1原理利用不同的浸提剂，通过氧化滴定法来测定土壤浸提液中有机C、N和P提取的可溶性有机碳含量和微生物量C之间存在较稳定的比例关系。
2.1.2则定步骤1.根据土壤样品含水量，调节土壤含水量为田间持水量的50%，25 ℃下密封培养10 d，以保持土壤均匀和不同地方所得结果的可比性。
2.氯仿熏蒸24 h后，用真空泵反复抽气，直到土壤闻不到氯仿气味为止。
根据所测对象不同选择不同的提取剂浸提，振荡浸提30 min后，立即分析浸提液中所测对象的含量或放入-15 ℃下保存。
表1指出氯仿熏蒸浸提法测定不同土壤微生物量所选用的浸提剂及其条件。
表1姓熏薪髓喉土就生帽条件Table I F'E fcrdieneasuirm aitcondiocnsof soilm riobialbmass土情即鄢Detemiia血cfhdicaMr Eitatnt土觥生醯K(=D,3S 或D.45土觥物1小K国加士躺蜘M恻般注®拓牖腌雄魂航觥刎楠融脑机装痴螭定雕耐帕帆小麒眼3 土壤酶活性测定土壤酶活性均用风干土壤。
土壤转化酶活性和过氧化氢酶活性、脲酶活性、磷酸酶活性依次用硫代硫酸钠滴定法、高锰酸钾滴定法、靛酚蓝比色法和磷酸苯二钠比色法测定（关松荫,1986）3.1脲酶一一靛酚蓝比色法脲酶的活性可以用来表示土壤供氮能力（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。
土壤酶活性及微生物测定配置方法：铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100µg N。
往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在490nm下比色，并绘制标准曲线。
醋酸缓冲液：PH5.0，NaAc.3H2O50g，溶于适量水中，加6mol/LHAc34ml，稀释至500ml。
硼酸缓冲液：PH9.0，80毫升0.05mol/l硼砂（Na2B4O7.10H2O）和0.2mol/l的硼酸混合。
纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱和水溶液，直至生成的红色沉淀不再溶解为止。
加入氢氧化钾30g并溶解之，再加入氯化汞饱和溶液1ml，加水至200ml。
静置，取上层清液，贮于棕色瓶中酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升，溶液在暗色中稳定，（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含0.05mg酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30、0.35毫克酚），待颜色稳定后，570nm比色绘制标准曲线。
七、八、实验步骤取5克过20目筛的风干土样于50毫升容量瓶中，用0.8(16滴)毫升甲苯处理，15分钟后，加入5毫升苯磷酸二钠溶液（6.75克苯磷酸二钠溶于水，并稀释至1升）和5毫升相应的缓冲液（碱性磷酸酶用pH10的硼酸缓冲液，中性磷酸酶用pH7.0的柠檬酸缓冲液，酸性磷酸酶用pH5.0的醋酸缓冲液）。
仔细混合后，将反应物置于37摄氏度恒温箱中培养12小时，然后用蒸馏水定容至刻度，摇匀过滤，用5毫升水代替基质以设置对照。
为了测定反应混合物中的酚量，取1毫升滤液于100毫升容量瓶中，加5毫升硼酸缓冲液（pH9.0），再加入3毫升2.5%的铁氰化钾和3毫升0.5%的4-氨基安替吡啉，摇动，溶液呈粉红色，然后再加水定容，待颜色褪到稳定时（约需20~30分钟），在分光光度计上于波长570纳米处测定溶液的光密度，根据用酚制备的标准曲线查出供试滤液中酚的含量。
土壤酶活性及土壤微生物计数测定方法The manuscript was revised on the evening of 2021土壤酶活性及微生物测定土壤酶活性测定取样工具及取样方法在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。
土样在自然条件下烘干装入袋中备用。
所需试剂：酒石酸钠、NaCl、阿拉伯胶、纳氏试剂、硫酸铵[(NH4)2SO4]、甲苯、苯磷酸二钠、、HAc、酚、铁氰化钾、4-氨基安替吡啉、碘化钾、氯化汞、氢氧化钾、、配置方法：铵态氮标准溶液：称取0.4717g(精确至0.0001g)干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4]溶于水中，再加水稀释至1000mL，此溶液1mL含100μg N。
往500ml容量瓶中注入10、25、40、60、75、90ml标准溶液并用蒸馏水稀释至刻度，制备成的溶液在490nm下比色，并绘制标准曲线。
醋酸缓冲液：，50g，溶于适量水中，加6mol/LHAc34ml，稀释至500ml。
硼酸缓冲液：，80毫升l硼砂（）和l的硼酸混合。
纳氏试剂：将碘化钾10g溶于10ml水中，边搅拌边慢慢地加入氯化汞饱和水溶液，直至生成的红色沉淀不再溶解为止。
加入氢氧化钾30g并溶解之，再加入氯化汞饱和溶液1ml，加水至200ml。
静置，取上层清液，贮于棕色瓶中酚的标准溶液：（1）原液—1克酚溶于蒸馏水中定容至1升，溶液在暗色中稳定，（2）工作液—取50ml原液稀释至1升（1ml含酚）；分别向100ml容量瓶中注入1、2、3、4、5、6、7ml工作液并显色定容（分别相当于、、、、、、毫克酚），待颜色稳定后，570nm比色绘制标准曲线。
测定方法磷酸酶活性测定一、试验原理土壤中的磷，很大部分以有机磷化合物的形式存在。
磷酸酶能促进有机磷化合物的水解。
实验表明，土壤微生物对于土壤含磷有机物质的矿化起着主要作用；土壤的磷酸酶活性，在很大程度上取决于土壤的腐殖质含量，活性磷量，能矿化有机磷化合物的微生物数量，植物类型等因素，土壤的磷酸酶活性可以表征土壤的肥力状况。
二、实验仪器恒温箱、分光光度计、三、实验药品甲苯、苯磷酸二钠、酚、醋酸缓冲液、硼酸缓冲液、铁氰化钾、4-氨基安替吡啉、四、实验步骤取5克过20目筛的风干土样于50毫升容量瓶中，用(16滴)毫升甲苯处理，15分钟后，加入5毫升苯磷酸二钠溶液（6.75克苯磷酸二钠溶于水，并稀释至1升）和5毫升相应的缓冲液（碱性磷酸酶用pH10的硼酸缓冲液，中性磷酸酶用的柠檬酸缓冲液，酸性磷酸酶用的醋酸缓冲液）。
仔细混合后，将反应物置于37摄氏度恒温箱中培养12小时，然后用蒸馏水定容至刻度，摇匀过滤，用5毫升水代替基质以设置对照。
为了测定反应混合物中的酚量，取1毫升滤液于100毫升容量瓶中，加5毫升硼酸缓冲液（），再加入3毫升%的铁氰化钾和3毫升%的4-氨基安替吡啉，摇动，溶液呈粉红色，然后再加水定容，待颜色褪到稳定时（约需20~30分钟），在分光光度计上于波长570纳米处测定溶液的光密度，根据用酚制备的标准曲线查出供试滤液中酚的含量。
磷酸酶活性以每克土壤的酚毫克数表示。
脲酶活性测定一、试验原理土壤的脲酶活性，与土壤的微生物数量、有机物质含量、全氮和速效氮含量呈正相关。
根基土壤可测得最大的脲酶活性，人们常用土壤的脲酶活性表征土壤的氮素状况。
二、实验仪器锥形瓶、定性滤纸、震荡器、分光光度计、1mm筛、三、实验药品酒石酸钠、NaCl、阿拉伯胶、纳氏试剂、铵态氮标准溶液、双蒸水四、实验步骤1、准确称取10.00g过1mm筛的风干土样，置于150mL锥形瓶中，注入50mL20%的NaCl溶液，将瓶塞紧，在振荡30min(120r/min)后，用定性滤纸过滤。
2、取20mL滤液于50mL容量瓶中，加双蒸水稀释至40mL左右，加2mL25%酒石酸钠，充分摇动静置5min，使其与Cd，Mg离子络合；3、再加入10滴1%阿拉伯胶，摇动后加2mL纳氏试剂，边加边摇，定容至刻度，5min后用490nm比色，配制铵态氮标准溶液，绘制标准曲线，比色后求算土壤脲酶活性。
4、结果分析滴定法测定过氧化氢酶活性一、试验原理土壤的过氧化物酶活性，与土壤的呼吸强度和土壤微生物活动相关，在一定程度上反映土壤微生物过程的强度。
根际土壤的过氧化物酶活性，远较根际外土壤为高。
有机质含量高的土壤，过氧化氢酶活性较强。
因此，土壤过氧化物酶的活性可以表征土壤总的生物学活性和肥力状况。
本试验采用滴定法测定过氧化氢酶活性，即通过定量滴定酶促反应后剩余的过氧化氢量。
二、实验仪器致密滤纸、酸式滴定管、1mm筛三、实验药品双蒸馏水、H2SO4、过氧化氢、KMnO4、四、实验步骤准确称取5.00g过1mm筛的风干土样，置于150mL锥形瓶中，注入40mL 双蒸馏水和%过氧化氢，另设对照，塞紧瓶盖，振荡30min(120r/min)后，注入LH2SO4终止反应，用致密滤纸过滤，取滤液25mL，用LKMnO4滴定至微红色。
土壤的过氧化氢酶活性，用100g土重的LKMnO4毫升数表示。
土壤微生物检测一、取样工具无菌刮铲、土样采集器、镊子、手套、无菌小塑料袋和塑料瓶等。
二、采土方式：在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。
为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品立即进行处理或放在4℃冰箱中暂存。
三、所需培养基及配置方法1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用）牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl?5g，琼脂15～20g，水1000ml，～，121℃灭菌20min。
2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用）可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4 0.5g，MgSO4.7H2O 0.5g，FeSO40.01g，琼脂20g，水?1000ml，～。
配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其它成分，溶化后，补足水分至1000ml。
121℃灭菌20min。
3、无氮培养基（自身固氮菌、钾细菌）甘露醇（或葡萄糖）10g，KH2PO4 0.2g，MgSO4·7H2O 0.2g，NaCl 0.2g，CaSO4·2H2O 0.2g，CaCO3 5g，蒸馏水1000ml，～，113℃灭菌30min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g，蛋白胨5g，KH2PO4 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，1/3000孟加拉红（rosebengal，玫瑰红水溶液）100ml，琼脂15～20g，pH自然，蒸馏水800ml，121度灭菌30min。
临用前加入%链霉稀释液10ml，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
5、蛋白胨琼脂培养基蛋白胨5克、KH2PO40.5g，NaCl 0.25g，琼脂18克，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4 0.01克，水1000毫升，，一气压灭菌20分钟灭菌。
四、所需药品牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、可溶性淀粉、KNO3、K2HPO4、MgSO4、FeSO4、甘露醇（或葡萄糖）、CaSO4·2H2O、CaCO3、孟加拉红、链霉素五、检测方法土壤中放线菌的检测一、试验原理应用稀释平板法从土壤中检测放线菌二、实验仪器及试剂7个土样，3个重复，共需252个灭菌培养皿；灭菌试管、灭菌吸管、灭菌三角烧瓶高氏一号培养基可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4 0.5g，MgSO40.5g，FeSO40.01g，琼脂20g，水?1000ml，～。
配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其它成分，溶化后，补足水分至1000ml。
121℃灭菌20min。
三、实验步骤1、在超净工作台中，无菌称取所取土样10g，分别溶于装90ml无菌水及玻璃珠三角瓶中，于摇床震荡30分钟。
用移液管分别无菌吸取各样品土壤悬液1ml 移入装9ml无菌水试管中，此即为10-2稀释的土壤悬液。
如此操作，一直到10-10。
稀释。
(另外，要知道所称土样的含水量)2、倒人45℃恒温水浴的灭菌高氏l号培养基，水平放置，凝固待用；分别无菌吸取各样品10-4、10-5、10-6、10-7稀释液，加入灭菌平皿中(每稀释度3皿，每皿lml)，用玻璃涂布棒涂抹均匀，将平皿倒置于28℃恒温培养箱中培养。
放线菌的培养时间较长，故制平板的培养基用量可适当增多3、培养48h后，取出培养平皿，选出土样适合菌落计数的稀释度，算出同一稀释度3个平皿上的菌落平均数（选择平均菌落数在30-300之间的），并按下列公式进行计算，最后换算成每克干土壤中菌落形成单位。
每克土壤中菌落形成单位＝同一稀释度3次重复的平均菌落数×稀释倍数。
土壤中细菌的检测一、试验原理应用稀释平板法从土壤中分离细菌二、实验仪器及试剂7个土样，3个重复，共需252个灭菌培养皿；灭菌试管、灭菌吸管、灭菌三角烧瓶牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl?5g，琼脂15～20g，水1000ml，～，121℃灭菌20min。
三、实验步骤1、在超净工作台中，无菌称取所取土样10 g，分别溶于装90ml无菌水及玻璃珠三角瓶中，于摇床震荡30分钟。
用移液管分别无菌吸取各样品土壤悬液1ml移入装9ml无菌水试管中，此即为10-2稀释的土壤悬液。
如此操作，一直到10-10。
稀释。
(另外，要知道所称土样的含水量)2、分别无菌吸取各样品10-5、10-6、10-7、10-8稀释液，加入灭菌平皿中(每稀释度3皿，每皿lml)，倒人45℃恒温水浴的灭菌牛肉膏蛋白胨培养基，混匀。
（稀释倍数是情况而定）3、待培养基凝固后，将平皿倒置于37℃恒温培养箱中培养。
4、培养24h后，取出培养平皿，选出土样适合菌落计数的稀释度，算出同一稀释度3个平皿上的菌落平均数（选择平均菌落数在30-300之间的），并按下列公式进行计算，最后换算成每克干土壤中菌落形成单位。
每克土壤中菌落形成单位＝同一稀释度3次重复的平均菌落数×稀释倍数。
土壤中真菌的检测一、试验原理应用稀释平板法从土壤中检测真菌二、实验仪器及试剂7个土样，3个重复，共需252个灭菌培养皿；灭菌试管、灭菌吸管、灭菌三角烧瓶、灭菌水马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用）葡萄糖10g，蛋白胨5g，KH2PO4 1g，MgSO4·7H2O 0.5g，1/3000孟加拉红（rose bengal，玫瑰红水溶液）100ml，琼脂15～20g，pH自然，蒸馏水800ml，121度灭菌30min。
