科研思路和方法作业
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研究思路和方法范文研究思路:在选择研究思路时,需要充分考虑研究的目的、对象和可行性。
一种综合分析的研究思路是采用定量和定性相结合的方法,以获取全面的研究结果。
定量研究是基于数理统计学原理,通过收集和分析大量的有关数据,计算出统计结果,以揭示变量之间的定量关系。
定性研究则注重通过深入的访谈、观察和分析,从参与者的个体经验中获取感性的、丰富的信息,以了解他们的看法、态度和行为。
研究方法:1.文献综述:首先进行文献综述,了解已有的研究成果和理论基础。
这有助于确定研究的切入点和问题,并避免重复研究。
2.设计研究框架:根据研究目的和问题,设计研究的理论框架和概念模型。
概念模型是研究思路和方法的指导,它描述了关键概念之间的关系,并提出了具体的假设。
3.数据收集:根据研究对象和研究问题,选择合适的数据收集方法。
定量研究可以采用问卷调查,通过问卷收集大量的统计数据;定性研究可以采用深度访谈、焦点小组等方法,通过观察和交流获取参与者的主观感受和看法。
4.数据分析:根据研究目的和问题,采用适当的统计方法和数据分析工具进行数据分析。
对于定量研究,可以使用描述统计分析、相关分析、回归分析等方法;对于定性研究,可以使用内容分析、主题编码等方法,从文本数据中提取有用信息。
5.结果解释:对于定量研究,需要根据统计结果解释变量之间的关系,验证或否定研究假设;对于定性研究,需要结合参与者的言论和行为,解释问题的本质和特点。
6.讨论和总结:综合研究结果,讨论研究发现和研究方法的局限性,并提出对未来研究的建议。
最后,总结研究的主要结论和贡献,并对实践和政策提出建议。
综合分析的研究思路和方法的优点在于可以充分发挥定量和定性研究方法的优势,既能够客观地分析数量化的数据,又能够深入地理解参与者的主观意义。
这样的研究思路和方法对于解决复杂的现实问题具有重要的意义。
学校科研工作计划及思路一、指导思想:以“二期”课改的新理念、新思维为指导,紧密配合学校三年自主发展规划和目标,聚焦课堂,研究课堂,坚持以科研促教改、向科研要质量,不断提高教师的科研意识和科研能力。
通过科研不断提高课堂教学的效益,把素质教育不断推向深入。
二、具体工作:1、配合学校三年自主发展中所规划的特色目标,广泛收集相关资料,争取完成自主发展规划中确立的龙头课题《学校自主教育实践初探》(暂定名)的立项工作,并邀请有关专家对课题进行论证修订,取得理论上的支持。
积极鼓励各教研组、备课组围绕学校龙头课题进行相关子课题的立项,以课题研究提高教师的教育教学水平,促进教师的专业化成长和发展,同时促进学校的自主发展。
2、努力配合区教研室举行的课例征选,精心辅导、反复修改,把学校最优秀的课例选送到区,争取出成果、出精品,在区课例评选中有获奖作品。
通过评选,争取把学校的优质教育资源向全区推广。
做好校级课题、区级一般课题和重点课题的立项工作。
3、通过学校校本培训和邀请有关专家进行专题讲座等方式,全方位、全员性地对教师进行科研能力培训,改变教师科研的方式,拓展教师科研的途径,提高教师科研的积极性,争取打造一支有较强能力的科研队伍,从而带动全校的教科研工作,并逐渐形成澧溪中学的教科研特色。
4、主动配合和支持学校特色项目(包括健美操、竹文化、英语口语能力、钢笔字书写能力等)的研究和向纵深的发展,努力探索适合学校自主发展特点的拓展性课程和探究性课程,促进相关校本教材的研究、编写和开发,以科研推动学校的素质教育。
不断总结学校成功办学经验,形成相关理论,指导学校今后的工作。
5、积极从不同途径收集最新的教育教学理论动态,吸取先进的教育教学理念,积极营造科研氛围,为教师的科研提供服务和理论支持。
收集教师优秀科研论文、教学随笔、札记等,在学校层面进行评选、奖励,并积极向有关教育报刊杂志推荐,汇编澧溪中学教师科研论文集。
6、主动、积极配合区教研室工作,确保完成有关任务,接受教研室的工作指导,争创优秀教科研室。
科研相关工作的想法和思路随着时代的发展,科学技术的进步以及需求的不断变化,科研工作的重要性越来越突显。
要想做好科研工作,除了对于学科知识的深入掌握外,还需要具备创新意识和出色的思考能力。
因此,在科研工作中,我认为以下几点至关重要:一、研究问题的选择及建议研究问题是科研工作的首要步骤,而问题的选择及建议显得尤为关键。
一般来说,科研工作需要解决的问题应该是具有独特性、具有现实意义并且具有实现可能的。
在选择研究问题时,可以从以下几个方面入手:1.关注社会热点话题:社会热点话题高度关注,为科研工作奠定坚实的基础。
可以通过阅读新闻、观看电视、听取政府的决策等途径了解到当前比较热门的话题。
2.参考前人研究成果:前人的研究成果不仅是现有学术研究的基础,同时也能为我们提供宝贵的思路和经验。
3.关注自然科学发展动态:自然科学的发展非常迅速,每天都有新的成果、新的发现,我们应该及时关注这些新情况。
在研究问题的选择方面,还需要注意具体环境的影响因素,包括可行性、资源限制、专业知识等。
二、建立科学的研究框架建立科学的研究框架是保证研究工作顺利进行的重要保障。
研究框架应该以问题为中心,包括以下几个方面:1.研究目的:明确研究的目的和意义,阐述研究的价值;2.研究内容或研究内容的分支:研究内容的明确,以及不同内容之间的逻辑关系;3.研究方法:针对不同研究目的和内容,选择适合的研究方法;4.研究程序:按照科学研究规律,确定研究的步骤、方法、时间等。
三、合理制定研究计划在具体的科研工作中,制订合理的研究计划十分必要,研究计划应经过充分讨论和协商,确保研究任务能够按期完成。
研究计划应该包含以下几个方面:1.研究任务目标的具体化:通过详细地阐述研究目标来激发研究工作的内在动力;2.研究任务的分解:将研究目标划分成具体的分支任务,分析任务之间的依赖关系;3.研究时间的安排:制定合理的研究时间进度,避免研究工作进展缓慢或者主观性太强的问题;4.资源的分配:制订合理的研究资源分配计划,合理利用研究资源。
科研思路与方法范文
可持续性发展的科研思路与方法
可持续性发展指的是占领不同层次政治、经济、社会和文化空间,在不影响人类及自然生态系统的前提下,实现社会进步和生态安全、改善人类生活福祉的综合发展过程。
科研思路:
1、首先,要明确持续性发展的目标,明确不同层次的维度,它们是要实现政治、经济、社会和文化的协调发展,满足人类的发展需求,实现自然资源的可持续利用;
2、结合实际,从科学角度对可持续发展提出相关的研究主题和研究问题,从理论、实验和现实应用的角度分析可持续发展的研究内容,建立可持续性发展的科学理论体系;
3、通过实证研究,将可持续发展理论应用于现实情况,探索可持续发展的实施机制,规范可持续发展模式的建立;
4、通过在实践中总结可持续发展的成功经验和失败案例,以此修正理论体系,为可持续发展提供一套有效的实践方法和技术手段。
科研方法:
1、定量分析法:采用统计学、计量经济学和成本效益分析等数量分析方法,从定量的角度探索可持续发展的实施模式和评价机制;
2、实证研究法:通过实地调研、参与观察、问。
中医科研思路与方法中医是中国传统医学的重要组成部分,其独特的理论体系和治疗方法在世界范围内得到了广泛应用和认可。
中医科研是推动中医学科发展的重要途径,本文将从中医科研思路与方法两方面进行详细阐述。
一、中医科研思路1. 理论联系实际在中医科研过程中,理论联系实际是非常重要的一个环节。
具体来说,就是要将传统经典理论与现代临床实践相结合,探究中西医结合的新途径。
例如,在针灸治疗方面,可以通过观察患者反应、测量生物电流等方式验证经络理论;在药物治疗方面,则可以通过现代药理学手段对草药进行分析和筛选。
2. 综合运用多种方法在中医科研过程中,需要综合运用多种方法进行探究。
例如,在临床试验方面,可以采用随机对照试验、单盲试验、双盲试验等方式进行验证;在基础研究方面,则可以采用分子生物学、生化学等现代科技手段进行探究。
3. 重视实践经验中医学是一门实践性很强的学科,因此在中医科研过程中,实践经验是非常重要的。
通过临床实践,可以不断总结和积累经验,完善治疗方案,并为后续研究提供参考。
4. 借鉴外部经验中医学虽然源远流长,但是与现代医学相比还存在很大差距。
因此,在中医科研过程中,需要借鉴外部经验。
例如,在针灸治疗方面,可以借鉴日本、韩国等国家的针灸技术;在药物治疗方面,则可以借鉴欧美等国家的药物筛选技术。
二、中医科研方法1. 临床试验法临床试验法是评价中医药治疗效果的主要方法之一。
其基本原则是以患者为中心,采用随机对照试验、单盲试验、双盲试验等方式进行验证。
通过对患者进行观察和记录,以及统计分析数据得出结论。
2. 经典文献研究法经典文献研究法是中医科研的重要方法之一。
其基本原则是通过对中医经典文献的深入研究和分析,探索传统理论的内涵和外延。
例如,在针灸治疗方面,可以通过对《黄帝内经》、《伤寒论》等经典文献的分析,探讨经络理论和针刺技术的应用。
3. 基础实验法基础实验法是中医科研的重要方法之一。
其基本原则是通过现代科技手段,对中草药、针灸等进行分子生物学、生化学等方面的分析和验证。
科研思路和⽅法作业科研思路和⽅法作业(⼀)研究内容、研究⽬标、以及拟解决的关键问题1.研究内容课题以VZV免疫逃避机制中发挥着重要作⽤的感染病毒细胞免疫识别的MHCⅠ/Ⅱ类基因抑制为切⼊点,围绕IFN-γ和参与免疫逃避的的两条主要途径,有⽬的地观察IFN-γ和相关基因CⅡTa、Stat1α、Jak1、Jak2、MHCⅠ、MHCⅡ的表达量、分布及变化规律,进⼀步检测C ⅡTamRNA、MHCⅠmRNA 、MHCⅡmRNA的表达变化以及外周⾎CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群、NK细胞活性的动态变化,并对上述指标的相关性及变化规律进⾏分析,说明调节VZV病毒感染的免疫逃避机制是针灸治疗带状疱疹、减轻疼痛和后遗症的关键。
且明确针刺与放⾎作⽤机制的差异所在。
主要开展以下⼯作:研究内容:(1)⽪损组织病理学观察。
(2)镜检:外周⾎有核细胞计数、⽩细胞、淋巴细胞分类计数、巨噬细胞吞噬功能。
(3)流式细胞仪检测:外周⾎CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群、NK细胞活性。
(4)免疫组化法ABC染⾊法检测:⽪损组织IFN-γ、CⅡTa、Stat1α、Jak1、Jak2、MHC Ⅰ、MHCⅡ、蛋⽩的表达及分布规律。
(5)western blot检测:⽪损组织IFN-γ、CⅡTa、Stat1α、Jak1、Jak2、MHCⅠ、MHCⅡ蛋⽩量的表达。
(6)RT-PCR法检测:⽪损组织CⅡTamRNA、MHCⅠmRNA 、MHCⅡmRNA。
2.研究⽬标:2.2.1旨在明确针灸治疗带状疱疹,减轻疼痛和后遗神经痛,与调节MHCⅠ/Ⅱ类相关基因、蛋⽩的分布及表达关系,为针灸治疗免疫逃避类疾病提供科学依据。
2.2.2通过⽐较针灸与传统抗病毒药物的作⽤差异,为解决带状疱疹病毒耐药性问题提供理论依据。
2.2.3旨在明确针刺与放⾎在治疗疱疹作⽤机制中的差异。
3.拟解决的关键性问题:针刺放⾎对MHCⅠ/Ⅱ类相关基因、蛋⽩的调节与其有效⼲预VZV病毒免疫逃避机制的关系。
科研工作下一步的工作思路和重点科研工作是个大挑战,大家都有这个感觉吧?就像你一开始拿到一个课题时,脑袋里满是疑问,眼前的路看不清,仿佛迷雾重重。
不过,随着深入研究,你会发现,原来这些迷雾背后藏着很多值得去探索的宝藏。
科研,啊,说白了就是解决问题的过程。
问题一旦有了,答案就像是藏在一个个魔盒里,得花点时间去摸索,去思考,去动手实验。
下一步的工作,老实说,我认为最重要的就是集中精力找出当前瓶颈,并把它拆开。
你说,是不是?不解决瓶颈,问题就像个雪球越滚越大,最后会让你喘不过气来。
所以,首要任务,搞清楚问题卡在哪儿,找到根源。
至于怎么做嘛,那就是得多点心思,做点实际的工作了,不能光嘴巴上说说,实践才能真正让你看到效果。
现在科研不单单是拿个项目,做个实验那么简单,越往后走,越会发现它像个大拼图,你一个小小的拼块就能影响整个图案的形成。
比如,你如果在数据分析这块没搞明白,就可能导致结论偏差,浪费大把时间。
所以呢,这时候要提高的是自己的综合能力,不光是技术层面的操作,更重要的是得站在更高的角度去看待这个问题,不能光盯着眼前那点小目标。
像我们研究的这个方向,其实就可以从大处着眼,看看这个领域的发展趋势,甚至思考一下我们这个项目的最终意义和价值——你觉得呢?如果不从这个角度出发,最后做出来的成果,谁来用,怎么用,都成了空谈。
团队合作也是一个重头戏。
你说,科研离得开团队合作吗?想清楚了没有?如果一个人单打独斗,搞不好就会陷入细节的泥潭里,走不出来。
好的团队是一个大家共同努力的地方,每个人都可以贡献自己的特长,能互相补充,互相支持。
就像做菜一样,你切菜,我炒菜,最后一道菜才好吃。
不信?你看那些顶尖的科研项目,背后不都是由一群默默奉献的研究人员一起搞定的?一个人再厉害,也没办法包揽所有任务,必须得依靠团队协作,大家分工明确,才有可能达到最佳效果。
科研工作不可能一帆风顺。
难免会遇到一些瓶颈,卡住了思路,或者实验不成功。
说实话,这种时候,心情难免会有点沮丧,甚至有时候会怀疑自己是不是走错了路。
科研思路与方法
科研思路与方法是指在进行科学研究时,所采用的思维方式和研究方法。
以下是一些常见的科研思路与方法:
1. 归纳法:通过收集和总结大量的具体事实和观察结果,从中归纳出一般规律或原理。
这种方法常用于从具体案例或实验结果中发现普遍规律的科学领域。
2. 演绎法:从已知的一般规律或原理出发,通过逻辑推理和推断,得出具体的结论。
这种方法常用于从理论出发,预测和解释具体现象的科学领域。
3. 实证研究:基于实际观察和实验数据,通过收集、记录和分析数据,得出科学结论。
实证研究通常采用定量或定性的研究方法,以验证或证伪研究假设。
4. 理论研究:基于已有的理论框架和知识,进行理论分析、概念构建和模型建立,推导和预测新的理论结果。
理论研究通常依赖于逻辑推理和数学推导,以扩展和深化现有的理论体系。
5. 实践研究:基于实际问题和需求,通过实践探索和实施解决方案,获得新的经验和知识。
实践研究强调实际
应用和解决问题的能力,注重实际操作和实地调查。
6. 模拟和建模:利用计算机模拟和建模技术,对复杂系统进行模拟和分析。
这种方法可以模拟现实情况,并进行预测、优化和验证,以获得新的科学认识。
科研思路和方法的选择取决于研究领域、研究问题的性质以及研究者的背景和目标。
在进行科学研究时,需要综合考虑多种方法,并根据具体情况进行选择和应用。
同时,不同的方法也可以相互结合和补充,以提高研究的准确性和可靠性。
课题的研究思路和方法,研究工作方案第一篇:课题的研究思路和方法,研究工作方案1.研究思路坚持以人为本,立足于新形势下高校的实际情况,总结工作经验,采取理论与实际相结合的方法,注重实践,把拔尖创新人才核心价值观的塑造工作融入到大学生日常工作中来。
把握社会主义核心价值观的内涵,深入调研创新型大学生中核心价值观中存在的问题,通过系统的统计分析,借鉴国际先进的价值观塑造理论,对部分具备拔尖创新素质的大学生进行核心价值观的塑造,根据学生的实际思想动态,不断进行阶段性考察,及时调整培养工作中存在的问题,以期建立一个符合当代优秀大学生实际的核心价值观塑造体系。
2.研究方法2.1文献资料法:通过文献资料研究,了解国内外有关核心价值观塑造的有关文献,以及我国高等教育改革对拔尖创新人才培养的评价与实施的要求。
2.2调查访问法:对课题组、当地教育知名专家、教授、学者进行访问或书面调查,了解对构建综合实践活动有效评价策略的看法,并对本课题改革方案提出建设性意见。
2.3实践教学法:对综合实践活动有效评价策略进行实验,并及时总结经验。
2.4理论分析法:以基础教育课程理论和综合实践活动指导纲要为指导,运用辩证唯物主义的认识论与方法,从整体上综合研究综合实践活动的常态适时与有效评价。
2.研究工作方案和进度计划(1)准备阶段(2003年6月至2003年9月):根据学校总课题的思路,进行必要的理论学习,确立子课题,并开展前期的准备工作。
主要是:总结前一阶段指导研究性学习活动的经验;学习有关文章;制定课题计划,填写申报表。
(2)行动阶段(2003年9月至2004年7月):A 根据课程计划和课题计划,在高一(5)~(8)班的教学过程中,努力把研究性学习引入高一政治教学中,开展教学实践活动。
B 根据教师指导和学生申报,在所教各班中各指导若干小组学生开展关于高一政治的研究性学习课题研究。
C 在教学和指导的整个过程中,始终注意收集多方面的资料,最终形成相关课题的比较丰富的研究素材和资源。
从MHCⅠ/Ⅱ类相关因子探讨针灸对带状疱疹的免疫逃避作用学号:12007076 姓名:李建伟专业:中医外科学(一)研究内容、研究目标、以及拟解决的关键问题1.研究内容课题以VZV免疫逃避机制中发挥着重要作用的感染病毒细胞免疫识别的MHCⅠ/Ⅱ类基因抑制为切入点,围绕IFN-γ和参与免疫逃避的的两条主要途径,有目的地观察IFN-γ和相关基因CⅡTa、Stat1α、Jak1、Jak2、MHCⅠ、MHCⅡ的表达量、分布及变化规律,进一步检测CⅡTamRNA、MHCⅠmRNA 、MHCⅡmRNA的表达变化以及外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群、NK细胞活性的动态变化,并对上述指标的相关性及变化规律进行分析,说明调节VZV病毒感染的免疫逃避机制是针灸治疗带状疱疹、减轻疼痛和后遗症的关键。
且明确针刺与放血作用机制的差异所在。
主要开展以下工作:研究内容:(1)皮损组织病理学观察。
(2)镜检:外周血有核细胞计数、白细胞、淋巴细胞分类计数、巨噬细胞吞噬功能。
(3)流式细胞仪检测:外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群、NK细胞活性。
(4)免疫组化法ABC染色法检测:皮损组织IFN-γ、CⅡTa、Stat1α、Jak1、Jak2、MHCⅠ、MHCⅡ、蛋白的表达及分布规律。
(5)western blot检测:皮损组织IFN-γ、CⅡTa、Stat1α、Jak1、Jak2、MHC Ⅰ、MHCⅡ蛋白量的表达。
(6)RT-PCR法检测:皮损组织CⅡTamRNA、MHCⅠmRNA 、MHCⅡmRNA。
2.研究目标:2.2.1旨在明确针灸治疗带状疱疹,减轻疼痛和后遗神经痛,与调节MHCⅠ/Ⅱ类相关基因、蛋白的分布及表达关系,为针灸治疗免疫逃避类疾病提供科学依据。
2.2.2通过比较针灸与传统抗病毒药物的作用差异,为解决带状疱疹病毒耐药性问题提供理论依据。
2.2.3旨在明确针刺与放血在治疗疱疹作用机制中的差异。
3.拟解决的关键性问题:针刺放血对MHCⅠ/Ⅱ类相关基因、蛋白的调节与其有效干预VZV病毒免疫逃避机制的关系。
(二)拟采用的方案及可行性分析1.拟采用的方案实验环境:实验室相对封闭,自然采光,环境温度控制在20℃~25℃之间,湿度控制在60%左右。
实验动物:清洁级昆明种小鼠,体重22~24g,笼养,自由饮食,由上海市实验动物中心提供全价动物颗粒饲料。
1.1分组及造模:第一次实验采用大鼠192只,按照体重分层随机,分为6组,每组8只,在造模完成后开始治疗,连续7天,隔日(第1、3、5、7天)处死一批,动态观察针刺放血对大鼠VZV病毒初感染的影响;第二次实验在造模后30天开始治疗,观察针刺放血对大鼠VZV病毒潜伏、复发的影响,其他处理同上,第7天处死取材观察;造模:腹腔注射VZV8805株系病毒,按照100TCID50/0.1ml病毒量接种细胞,感染后48小时,模型即成。
模型组:造模方法同上,每天陪同正常组、针刺组、放血组、针刺放血组固定,连续7天。
药物组:造模方法同上。
左侧腹腔注射ACV0.1g/kg/d,连续三天,每天陪同正常组、针刺组、放血组、针刺放血组固定,连续7天。
针刺组:造模方法同上。
按照造模时间的先后顺序,在造模完成后,开始针刺,进针0.2~0.3mm,平补平泻,留针10min,每日1次,连续7天。
放血组:造模方法同上。
按照造模时间的先后顺序,使用皮肤针沿皮损和脊神经叩刺,连续7天。
针刺加放血组:方法同针刺组和放血组,治疗连续7天。
正常组:腹腔注射同体积生理盐水。
每天陪同模型组、针刺组、艾灸组固定,连续7天。
1.2 取材方法:造模结束后,在模型组40只中随机处死8只,取材检测VZV对对小鼠相关指标的影响。
针刺组、放血组、针刺加放血组、药物组、正常组在治疗后的第1、3、5、7天随机处死8只小鼠取材。
取材放入-80o C低温冰箱保存、备检。
1.3穴位选取:固定小鼠方法:根据小鼠的形体,在木板上钉上四个适当距离的铁钉,将夹子套在铁钉上,用夹子夹住小鼠的四肢以做固定。
小鼠穴位定位参考《实验针灸学》,模拟小鼠的定位方法:“大椎”在第七颈椎与第一胸椎间;“膈俞”在第七胸椎下两旁肋间,左右侧各一穴;“合谷”在在手背,当第二掌骨桡侧的中点处,“曲池”在在肘横纹外侧端,当尺泽与肱骨外上髁连线中点,“委中”在在腘横纹中点,当股二头肌腱与半腱肌腱的中间,“尺泽”在在肘横纹中,肱二头肌腱桡侧凹陷处。
1.4 观察指标及方法:1.4.1皮肤组织病理切片1.4.2镜检:外周血有核细胞计数、白细胞、淋巴细胞、巨噬细胞分类计数各组小鼠每天定时,专人割尾静脉采血10μl,加入0.38ml的白细胞稀释液中,摇匀,静置3分钟,光镜查外周血有核细胞、白细胞数和淋巴细胞、巨噬细胞分类计数;1.4.3流式细胞仪检测:外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群、NK细胞活性。
①制备样品:处死动物,离心,收集细胞悬液,滴加特异性免疫荧光抗体,用流式细胞仪上机检测并进行分选。
②流式细胞仪检测:将分选细胞清洗、离心(1500RPM,10min),清洗两次,弃上清;加入PI荧光标记抗体;用流氏细胞仪分别检测CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群、NK细胞活性。
③分析方法:测出的数据经PHOENIX公司分析软件Multicycle处理,得出细胞各周期的CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群、NK细胞相对含量和百分数,并绘出DNA分布的直方图。
1.4.4免疫组化法ABC染色法检测:皮损组织IFN-γ、CⅡTa、Stat1α、Jak1、Jak2、MHCⅠ、MHCⅡ、蛋白的表达及分布规律。
①制备样品:处死动物,取股骨骨髓,10%福尔马林固定标本,石蜡包埋,4μm厚切片。
②免疫组化染色检测方法:鼠抗人IFN-γ单克隆抗体(DO-27)(武汉博士德(NeoMarker 生物有限责任公司,浓度1:50);鼠抗人cyclinD1单克隆抗体(DCS/6)福州迈新公司,浓度1:100);鼠抗人单克隆抗体CⅡTa 、Jak1、Jak2、MHCⅠ、MHCⅡ(晶美公司);S-P免疫组化试剂盒(北京中山公司)。
ABC法:用0.1 mol/L PBST洗,切片与0.1mol/L PBST(含0.5%H2O2)作用30 min,用0.1mol/L PBST 洗,10 min×3次,与一抗4℃温育,用0.1 mol/L PBST洗,10 min×3次,与二抗(1:1000稀释)室温作用2 h,用0.1 mol/L PBST洗,10 min×3次,与ABC(1:2000稀释)室温作用1 h.用0.1mol/L PBST洗,10 min×3次.在DAB溶液中反应,用0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液终止反应,用包被有明胶的玻片固定、水洗,用系列浓度乙醇(70%1次,80%1次,90%2次,95%2次,100%3次,每次5 min)脱水,二甲苯中透明,封边。
③分析方法:IFN-γ、CⅡTa、Stat1α、Jak1、Jak2、MHCⅠ、MHCⅡ免疫组化阳性信号均为棕黄色细颗粒状,染色结果按阳性细胞百分比及染色强度综合记分作半定量分析。
1.4.5 western blot检测:皮损组织IFN-γ、CⅡTa、Stat1α、Jak1、Jak2、MHC Ⅰ、MHCⅡ蛋白量的表达。
①制备样品:取样品1×106~1×107细胞,PBS清洗,去PBS加0.1~1ml 总蛋白抽提试剂抽提总蛋白;使用KCTMBCA蛋白质定量试剂盒,测定样品浓度。
②方法:变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE);蛋白质转移到硝酸纤维膜,30mA恒流,4°C转移,过夜;膜在5%BSA溶液中室温孵育1小时,加入一级抗体室温孵育1.5小时;加入HRP标记的二级抗体,室温孵育1小时;化学发光法检测,X胶片曝光显影。
③分析方法:扫描图片,用ImageJ分析软件将图片上每个特异条带灰度值数字化;将目的蛋白灰度值除以内参GAPDF的灰度值,校正误差,所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。
1.4.6 RT-PCR法检测:皮损组织CⅡTamRNA、MHCⅠmRNA 、MHCⅡmRNA。
①提取总RNA:取标本,用试剂(GIB-CO公司,美国)提取总RNA,溶于无RNA酶的灭菌超纯水中,用紫外分光分度计测定总RNA的浓度和纯度,同时琼脂糖电泳观察其完整性。
将RNA稀释成1mg/L,-80°C保存。
② MHCⅠ、MHCⅡ和β-actin引物序列CⅡTa: 5′-ACTCGATATCATTCCGGCAGACCTGAAGCAT-3′5′-GCTCACTGCC-CCAGCCCAATA-3′MHCⅠ: 5’- TGTCCCGGCCCGGCCTCGGG-3’5’-TCTCAGCAGGGTAGAAGCTA- 3’MHCⅡ: 5’-ACCAACGGGACGAGCGCAT-3’5’-CAAGCCGCCGCAGGGAGGTG-3’β-actin: 5’- AACGGCTCCGGCATGTGCAA - 3’5’-CTTCTGACCCATGCCCACCA-3’PCR反应体系30μl,转录产物3μl,2U Taq DNA聚合酶,10mmol/L 4×dNTP 2μlPOLβ和β-actin引物。
反应条件:94°C预变性;94°C 50s,55°C 55s,72°C 60s,72°C 10min共30个循环。
③分析方法:产物经SYNGENE凝胶成像系统分析,以目的基因和β-actin 积分灰度值的比值,作为目的基因mRNA的相对表达量。
研究路线3.可行性分析:1、本人针灸专业硕士、中医外科皮肤病方向在读博士,多学科背景保证实验研究按计划进展并不断推向深入。
2、前期大量的临床实践和文献回顾性研究显示出针刺放血可改善VZV感染机体免疫功能;3、研究思路清晰,目的明确,有成熟的理论指导,所选指标针对性强,研究方案可行,研究方法及技术路线成熟;4、实验室的软件、硬件设备完全具备科研条件。
上海中医药大学实验室条件先进,课题所需仪器设备均已具有,所需试剂、抗体均可购买。
5、课题组成员层次结构、知识结构合理,有较强的科研能力和团结协作精神。
4.本项目的特色与创新之处1、首次开展针灸对VZV免疫逃避机制的研究,进一步揭示针灸改善调节VZV感染机体免疫功能的的分子生物学机制,也为针灸治疗病毒感染的相关疾病提供了理论依据。
2、通过研究针灸对带状疱疹后遗神经痛的调节机制,促进临床药物、针刺放血等多种疗法相结合,提高临床疗效,更具实际意义。
3、首次探讨针刺与放血疗法在改善VZV感染机体免疫功能中的差异,为两种疗法治疗不同病理的相关疾病提供实验依据。