DNA定量分析系统项目介绍(新版ZYJ)

全自动细胞DNA定量分析系统在诊断恶性胸腹水中的研究进展摘要当前细胞病理学面临的主要问题及临床上的关键是及时准确诊断恶性胸腹水。

由于传统细胞学检查等方法的敏感度较低及漏诊率较高，而全自动细胞DNA 定量分析倍体分析对恶性肿瘤的诊断有重要意义。

本文将对全自动细胞DNA定量分析系统在诊断恶性胸腹水中的研究现状作一综述。

关键词全自动细胞DNA定量分析；胸腹水；DNA非整倍体胸腹腔脏器病变常见胸腹水等临床症状,甚至为某些疾病的首发症状,其发病机制比较复杂。

及时准确诊断恶性胸腹水是当前细胞病理学面临的主要问题,并且是临床上的关键。

脱落细胞学检查等传统方法是常规进行对胸腹水的细胞学评价以检测恶性肿瘤。

其创伤小、操作简单,然而单独的细胞学评估不能总是做出明确的诊断,对于增生性间皮细胞,肿瘤的间皮细胞和转移性腺癌细胞的鉴别诊断较为困难[1]。

全自动细胞DNA定量分析系统(DNA imagecytometry,DNA-ICM)通过图像细胞计数法对胸腹水中沉渣细胞的DNA非整倍体进行自动定量, 妇科细胞学标本和非妇科细胞学标本均可用以检测,并且已被欧美等发达国家的临床诊断广泛应用。

本文将对全自动细胞DNA定量分析系统在诊断恶性胸腹水中的研究现状作如下综述。

1细胞DNA定量分析基本原理DNA-ICM是由显微分光光度术和图像分析系统(IAS)发展而来的重要细胞分析技术。

该系统由计算机控制的电动显微镜和用于图像扫描和捕获的高分辨率数码相机,以及用于控制图像扫描,处理和分析的软件组成,用于自动分类细胞,测量DNA 倍体和非整倍体分析。

使用Feulgenmethod在温度控制条件下用DNA特异性结合的染料染色后,对于每个载玻片,扫描载玻片上的1000个细胞核或细胞核的全部,并将核图像收集到核DNA图像库中。

通过对其吸光度的测量,根据核参数,包括核形态,核纹理特征和核DNA含量,细胞核自动分类为正常上皮/间皮细胞核,淋巴细胞,嗜中性粒细胞和异常细胞核。

DNA 大片段质谱分析技术DNA大片段质谱分析技术DNA大片段质谱分析技术是一种高通量定量测序技术，它可以对DNA样本进行快速定量。

相比传统的序列分析方法，DNA大片段质谱分析技术具有更快的芯片运行速度和更高的基因组容量，可以在快速分析上千万个DNA序列中，筛选出目标基因。

DNA大片段质谱分析技术的原理DNA大片段质谱分析技术是围绕构建DNA文库，对DNA中的大片段进行测序的一种新的技术。

DNA序列信息是以“碱基”为基本单位的，而DNA大片段质谱分析技术则是通过测序建立质谱分析数据集合，利用质谱峰的信息来解构整个DNA序列，从而得到基因组等级上的信息。

具体来说，DNA大片段质谱分析技术先将原始DNA样本进行纯化，随后将纯化后的DNA进行裂解和分离处理。

接着，对DNA样本进行文库构建，这个过程是根据文库中DNA的长度和长度分布特性生成的，并加入一定程度的杂交嵌合，从而模拟出整个基因组上不同长度的DNA片段。

在样品处理过程中，每个文库片段可以被打上一个barcode，以此来确认不同文库中的片段是否整合。

文库构建完成后，将文库样品进行高通量的质谱分析，通过该过程可以得到每个文库片段的长度和数量信息，自此进入下一个步骤。

将每个片段的质谱信息与文库进行比对，并对文库中每个DNA片段的序列信息进行翻译和组合，我们就可以重构出按照基因组顺序整合的整段DNA序列。

DNA大片段质谱分析技术的优势DNA大片段质谱分析技术作为一种新的DNA文库构建及测序技术，具有以下优势:一、构建的文库范围更广。

相对于传统测序技术，DNA大片段质谱分析技术的文库可以覆盖更广泛的DNA片段，包括非编码区域、调控元件以及基因等。

这意味着，在被测样本中不管是有些少见的突变或者是隐匿在某个区域的有效基因，都能被全面扫描。

二、对于染色体水平的结构变异有更高的分析鉴定效率。

传统的测序技术无法进行大段基因的分析，然而DNA大片段质谱分析技术可以通过构建DNA文库等方法将大段DNA进行分割，这样可以解决传统测序技术在区分基因的结果上存在的局限。

Li-Cor 4300 DNA遗传分析系统及主要应用方向Li-Cor 4300 DNA遗传分析系统采用双色红外荧光检测技术进行核酸研究，通过固态激发器和检测装置激发红外荧光染料信号，实时检测标上红外荧光染料的DNA片段在聚丙烯酰胺凝胶中的电泳过程，得到清晰的图象，由专业针对各种应用的分析软件分析得到实验结果。

主要应用在Tilling、Ecotilling、AFLP、STR、测序等领域。

一、Tilling随着基因序列数据库的不断扩充，反向遗传学方法正逐步替代以表型筛选为主的正向遗传学方法成为功能基因组学研究的主要方法。

反向遗传学是在已知基因序列的基础上去分析研究基因的功能，反义RNA抑制、RNAi和插入突变是植物中常用的用于反向遗传学的研究方法，但这三种技术均需复杂繁琐的植物转基因表达载体构建过程以及组织培养、基因转化和周期极长的转基因植物筛选过程，作为常规方法仅限于应用于极少数物种。

为了更好的进行植物功能基因组学研究，美国华盛顿Fred Hutchinson 癌症研究中心的研究者们建立了一种全新的反向遗传学方法——定向诱导基因组局部突变（Targeting Induced Local Lesions In Genomes，TILLING），它将诱发产生高频率点突变的化学诱变方法与PCR筛选技术和Li-Cor 公司生产的4300 DNA遗传分析系统的双色红外荧光高通量检测技术有效结合，快速有效地从化学诱变剂（EMS）诱变产生的突变群体中鉴定出点突变，这一全新的、高通量、低成本的反向遗传学研究方法大大地方便了植物基因组学的研究。

1．TILLING 技术路线TILLING技术先用化学诱变剂诱发产生一系列的点突变，提取突变体M2代的DNA，把多个待测样品的DNA混合在一起进行PCR，PCR产物通过先变性再复性过程得到异源双链。

如果样品发生点突变，则形成的异源双链中必定含有错配碱基，利用特异性的内切核酸酶识别携带了错配碱基的异源双链并在错配处切开双链，最后进行电泳检测试验结果。

细胞DNA定量分析一、原理细胞DNA定量分析是对细胞核内遗传物质（DNA）倍体定量检测，判断细胞的生理状态和病理改变。

每一个正常的体细胞核内均有23对染色体，只有增殖期的细胞才会有染色体的复制和加倍。

但在生理状态下，人体绝大多数的细胞处于静止期，DNA含量相当恒定。

当致癌因素早期作用于细胞时，细胞核内DNA 结构和含量发生改变，最终发展为细胞形态异常和恶性增殖。

因此，采用细胞DNA肿瘤早期诊断技术可通过测量细胞核内DNA含量的变化，在形态改变不明显前即检测出那些病变细胞，实现癌及癌前病变的早期诊断。

该技术在北美及欧洲已作为一种常规临床检测方法之一。

二、临床应用价值1.早期检测出癌及癌前病变：80~90%的恶性实体肿瘤内存在非整倍体细胞。

这种细胞的出现是提示早期恶性病变的重要标志。

因此，通过细胞DNA肿瘤早期诊断技术，发现早期恶性病变。

2.肿瘤的恶性程度及预后评估：整倍体肿瘤其预后通常较非整倍体肿瘤好。

3.指导肿瘤的治疗：经放、化疗治疗后，非整倍细胞是否消失直接反映治疗的效果好坏。

4.提高细胞学检测工作效率：仅需对约10%的可疑或阳性病例进行复核，减轻医生劳动强度。

三、临床应用1.检测标本类型1.1脱落细胞：（1）子宫颈黏膜、口腔黏膜、食道黏膜、痰液、尿液等；（2）浆膜腔积液：胸腔积液、腹腔积液、心包积液等；（3）纤维内镜刷检标本：如支气管镜刷取物、胃镜刷取物、食道镜刷取物、结肠镜刷取物、膀胱镜刷取物、经皮胸膜刷检物等；（4）灌洗液：如支气管肺泡灌洗液、膀胱灌洗液、胸膜腔灌洗液、腹腔灌洗液、盆腔灌洗液等；1.2 细针穿刺（FNA）标本：淋巴结、乳腺、甲状腺、唾液腺、胰腺、肝脏、肺及肺间隙（纵膈）、体表肿块等；1.3. 组织印片：如胃、结肠、淋巴结等活检组织印片。

2.临床运用范围2.1主要用于妇科宫颈癌筛查；2.2非妇科的其他脱落细胞学的癌及癌前病变检测。

四、与传统细胞学检查对比1.巴氏涂片检查因受到取材方法、涂片质量、染色技巧、读片水平等因素的影响，存在较高的假阴性。

D N A细胞定量检测分析技术Revised by Petrel at 2021临床新项目开展申报表项目名称：全自动DNA细胞定量检测分析技术申报科别：协助科室：申报人签名：申请日期：申请报告申请项目：全自动细胞DNA倍体定量分析技术申请原因：1.技术优势：这是国内领先的肿瘤早期筛查技术。

手工涂片的制片效果不好，对细胞学医生的诊断准确性有很大的影响和制约；液基薄片制片技术改进了取材和制片，但是在诊断方面没有改进，在癌变前期细胞形态还没有发生改变时容易漏诊；细胞DNA倍体定量分析技术在液基薄层制片的基础上改进了诊断技术，可以通过全自动分析系统直接检测细胞DNA含量的变化，在细胞DNA含量的变化还不足以引起细胞形态变化时就能检测出早期癌变，结合人工阅片后能最大程度较少漏诊率。

2.经济效益：细胞DNA倍体定量分析技术能够检测出更多的癌前病变，后继的阴道镜检查、病理活检、物理治疗、药物治疗、手术治疗等将给医院带来的利润增长点。

分析技术本身采用免费提供设备，供应耗材的方式，对医院来说成本极低，每月病例检测数大概在1000例左右，将为医院带来较高纯利润收入。

3.社会效应：目前已经有北京妇产医院、北京海妇医院、上海同济医院、上海第五人民医院、上海第七人民医院、上海奉贤中心医院、江苏省中医院、江苏省肿瘤医院、南京军区总医院、南京市妇幼医院、湖北省妇幼医院、武汉市中南医院等多家医院使用此技术，使用效果非常良好，已发现多例经确诊的早期癌变，挽救了病人的健康和家庭，给医院带来了良好的口碑和社会效应。

一、申请项目内容、国内外开展现状以及开展该项目的目的、意义及可行性分析（如果是替代已开展的技术则应说明新技术的优势所在）该项目的现状：目前世界先进水平的全自动细胞图像分析技术借助计算机辅助，做到自动检测，即全自动细胞分析。

从细胞标本自动扫描，自动调焦，自动搜索视野，逐个细胞分类、DNA含量测定、分析诊断到打印出有被检测细胞图像的诊断报告均实现自动化操作，在2钟时间内，可对上万个细胞逐个进行定量检测，其参数达125个。

论著·临床辅助检查CHINESE COMMUNITY DOCTORS在细胞DNA图像定量分析系统中，对非整倍体细胞进行检测，已被部分临床医生用于检测宫颈癌或癌前病变[1-3]，其中，对DNA定量分析技术的关注度较高。

本次研究对其诊断效果及应用价值进行了评价，现报告如下。

资料与方法选取2014年6月-2016年5月行宫颈癌筛查的体检者2102例作为研究对象，年龄16～78岁，中位年龄(40±2.5)岁，其中62例在阴道镜下进行活组织病理检查。

宫颈脱落细胞采集：所有宫颈细胞标本均由妇科医师采用宫颈刷在被检者的宫颈处沿宫颈口旋转刷取3～5周(此时需注意，应刷取鳞状上皮细胞和柱状上皮细胞交界的位置)，取出宫颈刷，并刷尖向下浸泡于宫颈液基标本瓶中，贴标签后送至细胞室。

制片：将每例被检者的标本同时制作成两张玻片，其中一张采用巴氏染色法染色，另一张采用Feulgen方式染色；染色完成后，采用细胞DNA定量分析仪检测DNA数量。

所有操作需严格遵守相关操作流程。

相关诊断：细胞DNA定量分析检测：采用Feulgen方式染色后的标本，采用全自动细胞图像分析系统进行标本的扫描和分析，每个标本需收集细胞核8000个左右。

根据细胞学的参数特征值，为所收集的细胞核分类，将结果分为阴性、疑似改变、阳性3个类型。

①阴性：DNA指数(DI值)＜2.5，且增生细胞占总收集细胞的比例＜5%，建议其定期筛查；②疑似改变：DNA指数(DI值)≥2.5的细胞1～2个，或增生细胞约占总收集细胞的比例≥5%但＜10%，建议其4～6个月复查[4]；③阳性：DNA指数(DI值)≥2.5的细胞3个或以上，或增生细胞约占总收集细胞的比例≥10%，或出现异倍体细胞峰，建议行阴道镜检查或必要时活检。

有些患者的样本单纯通过图像难以进行确认，DNA指数(DI值)≥2.5的细胞核不清晰，需在显微镜下核实。

本次研究中，DNA定量检测的阳性指标例数=疑似改变例数+阳性例数。

世界最新医学信息文摘 2019年 第19卷 第73期187投稿邮箱：sjzxyx88@·医学检验·细胞DNA 定量分析系统在胸腔积液诊断中的应用李礼1，王显河2，李鑫1，邓姗姗1，吴育禄1，徐枝磊1（1.贵州医科大学第二附属医院 呼吸内科，贵州 凯里 556000；2.贵州医科大学第二附属医院 检验科，贵州 凯里 556000）0　引言胸腔积液（即胸水）性质鉴别在临床中十分常见，其中恶性肿瘤导致的胸水约占10%-30%，预后较差，早期识别和准确诊断对改善临床预后有重要意义[1]。

胸水中找到肿瘤细胞是确诊恶性胸水最常用方法，简便易行，但现有细胞学诊断主要根据细胞形态变化，主观性强，鉴别诊断难，实际确诊率仅约12%-45%[2]。

胸水生化性质如比重、细胞计数、癌胚抗原（CEA ）等有助于提高诊断准确性[3]。

免疫细胞学也可辅助胸水良恶性诊断，但敏感性不高而易误诊[4]。

研究发现[5-6]，通过细胞DNA 定量分析可早期发现细胞是否癌变，尤其是非整倍体细胞存在诊断敏感性和特异性较高。

该技术已逐步应用于宫颈细胞病理学辅助诊断，实现自动化检测，克服人工观察主观性强、可重复性差的缺点，大大提高病变检出率，是宫颈癌及癌前病变筛查的有效工具[7]。

但该技术在胸腔积液鉴别诊断中的应用文献少见报道。

1　对象与方法1.1　对象资料。

连续选择2015年9月至2016年7月于我院就诊的胸腔积液患者共166例，纳入标准：①首次发病，性质未定，最终可明确诊断；②临床资料完善，可分析，取得知情同意权。

排除标准：①胸水量较少，无法获得足够标本，或易出现穿刺并发症如气胸；②标本污染。

所有患者经组织病理学、影像学、实验室检查或结合临床明确诊断。

根据胸水性质分为恶性组60例（36.14%）和良性组106例，其中恶性组男性38例，女性22例，年龄平均（56.6±12.3）岁，胸水量平均（345.6±78.9） mL ，右侧胸水32例，左侧18例，双侧10例，肺癌46例，肝癌9例，乳腺癌5例。

细胞DNA定量联合液基细胞学检查项目简介
细胞DNA定量联合液基细胞学检查项目简介
细胞DNA定量分析方法是一种根据细胞核DNA含量改变所致的客观判断。

常规细胞学是医生根据形态的改变所做的判断，带有一定的主观性。

而且病理医生无法在显微镜下观察到细胞癌变早期核内DNA含量及其结构的改变，另一种原因可能是取材不满意，标本中异形细胞数量过少，镜下容易漏诊。

联合检查可大大提高检出率。

实现优势互补，灵敏度更高、特异性更强。

“细胞DNA定量分析检查”不可单项检测
临床意义
1、早期检测出癌及癌前病变
80~90%的恶性实体肿瘤内存在非整倍体细胞。

这种细胞的出现是提示早期恶性病变的重要标志。

因此，可通过细胞DNA定量分析系统检测，
发现早期恶性病变。

2、肿瘤的恶性程度及预后评估
整倍体肿瘤其预后通常较非整倍体肿瘤好。

3、指导肿瘤的治疗
经放、化疗治疗后，非整倍细胞是否消失直接反映治疗的效果好坏。

4、提高细胞学检测工作效率
适检人群
1.宫颈癌筛查
2.妇科宫颈疾病（宫颈炎症、肿块、糜烂、出血等）
3.妇科健康检查
标本采集要求
按照一般TCT取样。

需要注意的是须用DNA定量分析专用的“Motic细胞保存液，其它取材要求同一般的液基细胞学检查。

一份标本，两份报告。

临床项目收费标准。