切割：用平衡盐溶液将取出的组织块清洗三次，然后用眼科 手术剪刀仔细将组织反复剪碎，直到成1mm3左右的小块，再 用平衡盐溶液清洗，洗到组织块发白为止。静置数分钟，使 组织块自然沉淀到管底，弃去上清
消化、接种培养：加入0.25％胰蛋白酶消化液（5-10倍量）， 与组织块混匀。置37℃水浴，观察消化情况（每隔几分钟摇 动一下试管），静止，吸去上清，加入5～10ml细胞培养液， 用吸管吹打混匀，移入二个培养瓶中，置于二氧化碳培养箱 中培养
（2）例如：滋养层细胞分离与培养：
（A）真空负压抽吸的早期绒毛组织在无菌条件下置于 冰浴PBS（含1 mM葡萄糖）中取回。
（B）在无菌条件下立即用无Ca2+和Mg2+的PBS漂洗1520次以除去血块。
（C）用解剖刀片从基膜上轻轻刮下绒毛，用剪刀剪碎 至1-2毫米左右。
（D）加入5 ％胰蛋白酶330μl(1：25)至10ml细胞悬液 中，4℃消化45min。勿动，静置，然后去上清。
第三章 细胞培养基本技术
况海斌
南昌大学医学院生理学教研室 生殖内分泌研究室
内容：
原代细胞分离、培养（酶消化法和组织块培养 法）。 细胞生长状况的观察。 培养细胞一代生长过程。 传代。 冻存与复苏。 细胞培养注意事项（如细胞污染）。
细胞培养的一些专业术语介绍（如 细胞株、系，上皮细胞型、成纤维细胞型）
（E）重新加入消化液37℃消化10min。勿动，静置，然 后去一半上清。加等体积Ham’s F12:DMEM 1:1(FD)培 养液（内含10 ％胎牛血清、1 mM丙酮酸钠和2 mM谷氨 酰胺）终止消化，吹打细胞悬液。
（F）再加入终浓度为15 IU/ml的DNA酶Ⅰ37℃消化10 min。吹打细胞呈悬浮状，经80目和150目细胞筛过滤， 1,000×rpm离心10 min收集细胞。
