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分离划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。
涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。
（一）制备LB培养基（通用的细菌培养基）1、配方：蛋白胨10.0克，牛肉膏5.0g，氯化钠10.0克，水1000ml（配固体培养基再加琼脂20克）2、流程计算称量溶解调pH分装加塞，包扎灭菌倒平板培养基配制(特)培养基应现配现用，每次配置350ml，一次性使用完毕。
1、按下表称取物资配置LB培养基到500ml锥形瓶中：2、用双层铝箔和棉绳对锥形瓶进行封口，摇晃锥形瓶以使各物质迅速、均匀、完全、溶解。
待灭菌。
①分装：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用___三角漏斗 _。
②加塞：试管用塑料盖或__棉花塞___；三角瓶口用_封口膜__或_6层纱布封口,再用__牛皮纸__或报纸封口。
③包扎：用_牛皮纸__或报纸④灭菌：高压蒸气灭菌法 1）加水：向外层锅内加入适量的水，加水的要求是不触及内胆 _.2）装锅：物品放置的要求__整齐、稳定、留出空隙：加盖：将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的_排气槽__内。
再以__两两对称方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。
3）加热排气：打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。
待冷空气完全排尽后，关上排气阀。
4）保温保压：当锅内压力升到1_kg/cm2时，控制热源，维持压力至15 _min。
5）出锅：切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力降至_0_时，打开_排气阀__，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。
否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至使容器爆炸。
灭菌后，通常将实验用具放入60℃~80 ℃_烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分，避免引起_污染_。
⑤倒平板、制斜面操作平台：超净台灭菌好的培养基和实验器具置于超净台上打开__紫外线 _和_过滤风，灭菌30min.倒平板：待培养基冷却至__60_ ℃时，将每只培养皿倒入_10~12_ml未凝固的固体培养基，置于_水平_位置上，轻轻晃动使其均匀铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。
一、实验目的1. 学习大肠杆菌的培养方法，掌握其生长规律。
2. 掌握无菌操作技术，培养纯化大肠杆菌。
3. 了解大肠杆菌在食品、环境及医学等领域中的应用。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性杆菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
在实验室条件下，大肠杆菌可以通过人工培养获得纯化菌株。
本实验采用LB培养基培养大肠杆菌，通过观察菌落形态、显微镜观察等方法，了解大肠杆菌的生长特点。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）大肠杆菌菌种；（2）LB培养基；（3）无菌水；（4）无菌试管、培养皿、移液管、镊子、酒精灯等。
2. 实验仪器：（1）恒温培养箱；（2）显微镜；（3）酒精灯；（4）高压蒸汽灭菌器。
四、实验步骤1. 菌种复苏（1）将大肠杆菌菌种接种于LB培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
（2）待菌液生长旺盛后，取适量菌液，用无菌水进行稀释。
2. 培养基制备（1）按照LB培养基配方，称取相应的成分，加入去离子水溶解。
（2）将溶液煮沸，去除其中的氧气。
（3）将溶液冷却至50-55℃，加入适量的无菌水。
（4）用无菌滤膜过滤除菌。
3. 接种与培养（1）将制备好的LB培养基倒入培养皿中，待凝固后，用无菌移液管吸取菌液，均匀涂布于培养基表面。
（2）将培养皿倒置，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
4. 观察与鉴定（1）观察菌落形态，记录菌落颜色、大小、边缘等特征。
（2）用无菌镊子挑取菌落，制成涂片。
（3）将涂片置于显微镜下观察，观察细菌的形态、排列等特征。
5. 结果与分析（1）菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为乳白色。
（2）显微镜观察：大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短粗，两端钝圆，呈杆状。
五、实验结果1. 菌落形态：大肠杆菌菌落呈圆形、光滑、湿润，颜色为乳白色。
2. 显微镜观察：大肠杆菌为革兰氏阴性杆菌，菌体短粗，两端钝圆，呈杆状。
六、实验讨论1. 在实验过程中，无菌操作非常重要，以免污染菌种。
大肠杆菌培养实验报告大肠杆菌培养实验报告实验目的：本次实验旨在通过培养大肠杆菌的方法，观察其生长特性以及对不同环境条件的适应能力，进一步了解大肠杆菌的生物学特性。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 大肠杆菌培养基- 培养皿- 无菌纱布- 灭菌的玻璃棒- 灭菌的移液器- 灭菌的试管- 灭菌的培养皿- 灭菌的培养瓶- 灭菌的显微镜玻片2. 实验步骤：a. 准备工作：- 将培养皿、试管、移液器等实验器材进行高温高压灭菌处理，确保实验环境的无菌性。
- 准备好大肠杆菌培养基，并将其分装到培养瓶中。
b. 大肠杆菌的采集与接种：- 用灭菌的玻璃棒在无菌纱布上擦拭待采集样品（如水龙头、土壤等），将擦拭得到的微生物转移到灭菌的试管中。
- 取适量的培养基，用灭菌的移液器将待采集样品中的微生物接种到培养基中。
c. 培养条件的控制：- 将接种好的培养基放入恒温培养箱中，控制温度在37℃左右。
- 观察培养基的酸碱度，保持在适宜的范围。
d. 观察与记录：- 在培养过程中，每隔一定时间观察培养基上的菌落形态和数量，并记录下来。
- 利用灭菌的显微镜玻片，取适量的培养基样品进行菌落形态的观察。
实验结果与讨论：通过实验观察与记录，我们得到了以下结果：1. 大肠杆菌的生长特性：- 大肠杆菌在37℃的恒温培养箱中，呈现出较快的生长速度。
- 菌落的形态呈灰白色，边缘整齐，表面光滑。
2. 大肠杆菌对不同环境条件的适应能力：- 在不同酸碱度的培养基中，大肠杆菌仍能生长繁殖，但在极端酸性或碱性条件下，生长速度明显减缓。
- 大肠杆菌对温度的适应能力较强，尤其在适宜的37℃下生长最为迅速。
3. 菌落形态的观察：- 大肠杆菌在培养基上形成的菌落呈圆形或不规则形状，直径约为1-2毫米。
- 菌落表面光滑，质地较软，有时会呈现出微小的凹陷。
通过以上实验结果，我们可以初步了解到大肠杆菌的生长特性和对环境的适应能力。
大肠杆菌作为一种常见的细菌，在人体肠道中起着重要的生理功能，但也可能引发一些疾病。
大肠杆菌的接种培养及抗菌实验大肠杆菌的接种培养及抗菌实验一、培养基的制备本次实验的主要抗菌是采用抗大肠杆菌，那么首先是做培养基。
我们团队使用的培养基是牛肉膏蛋白胨固体培养基，其成分为：牛肉膏3g，蛋白胨 10g，Nacl5g，琼脂18g，水1000mL,PH7.4～7.6。
具体配置步骤：1、称药品首先称取氯化钠15g，将其倒入1000ml的大烧杯中。
然后称取牛肉膏，牛肉膏是种粘附性很高的膏状物，所以放在表面皿中称取，称取后用事先准备好的10g的热水溶解后倒入盛有氯化钠的大烧杯中。
蛋白胨是泛有淡黄色的肉粉，它极易吸潮，称量时需要很迅速，然后将其倒入上述的大烧杯中。
称量琼脂18g，将其放在小烧杯中以待用。
准备工作已经完成。
2、加热溶解在上述准备的烧杯倒入少量的水，放在石棉网上，小火加热，并用玻璃棒搅拌，待药品完全溶解后，先将水补充到1000ml,再将已经准备好的琼脂放入大烧杯中，再继续加热融化，期间要用玻璃棒不停的搅拌，防止琼脂糊底或者溢出，最后补足缺失的水分。
3、调解PH值检测培养基的PH值，我们团队制作的培养基PH在6.7，需要加1mol/l NaOH，共加10滴，又滴加1mol/l HCl 3滴，使PH到7.4。
4、制作棉塞试管用普通棉花，制作的棉塞。
棉塞的形状,大小和松紧度要合适,四周紧贴管壁,不留缝隙,才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。
要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内,以防棉塞脱落。
5、分装根据本次实验要求,将配制的培养基分装入5支试管。
分装时可用漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。
分装量:牛肉蛋白胨培养基约为试管高度的l/5。
6、加棉塞将已经制作好的棉塞分别将已装好培养基的试管上。
7、包扎由于培养基分装于试管中，将5支试管放在一起,再于棉塞外包一层牛皮纸,用绳扎好。
然后用记号笔注明,培养基名称,组别,日期。
8、灭菌将标记捆绑好的试管，放入蒸汽式高压锅中灭菌，温度一般可以达到160度左右，灭菌时间为2小时。
一．菌种的保存重组DNA 分子(质粒、噬菌体、粘性质粒)必须导入宿主菌中，通过细菌培养来扩增所需的重组DNA。
通常采用宿主菌是大肠杆菌，根据不同载体需求，选用不同品系大肠杆菌1. 概述：大肠杆菌其它微生物一样，都具有稳定遗传性和变异性、遗传性，保证微生物本身特征的相对稳定，即无性繁殖过程中能够保持原有的性状，为菌种保藏提供了有利因此，而变异性，使微生物的性状在繁殖过程中出现某些改变，给菌种保藏带来了困难。
由于存在变异，即菌种常出现所谓的退化，主要指理想性状的丧失，从而导致发育缓慢，存活率和产质量降低等现象，菌种保藏工作就是使菌种的变异降低至最小水平，使菌种在较长期的保藏之后仍然保持着原有的生命力、优良生产性能、形态特征以及不污染杂菌。
能够长期在研究上应用。
2. 微生物的变异速度，通常情况下，与其新陈代谢速度有关，微生物代谢活力旺盛，它的变异速度快，代谢活动微弱，变异速度就慢。
并且在多次的无性繁殖过程中可能会有突变的积累。
人们利用这一规律，可以创造各种条件，使微生物活动处于微弱活动或不活动状态，以减少变异的发生。
3. 菌种保藏的原理是：通过低温、干燥、隔绝空气和断绝营养等手段，以达最大限度地降低菌种的代谢强度，抑制细菌的生长和繁殖。
由于菌种的代谢相对静止，生命活动将处休眠状态，从而可以保藏较长时间。
要求保存的菌种在复苏后除保持以前的生活与繁殖能力、不发生形态特征、生理状态及遗传性状的改变外，还不允许污染任何杂菌。
此外，在保存前应确保菌种的单纯性，先分离单菌落后进行鉴定，然后再繁殖保存。
4. 常用的长期保存法有：液体石蜡法、硅胶保存法、加入甘油或二甲基亚砜（DMSD）等保护剂。
5. 甘油低温保存法(－70℃—－196℃)的特点i.甘油菌低温保存的基本原理是：在-70℃或液氮中冻存，细菌内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。
在0℃—-70℃温度范围内，水晶呈针状，极易招致细菌的严重损伤。
细菌的接种与培养实验报告一、实验目的1、掌握细菌接种的基本操作技术，包括平板划线法、斜面接种法和液体接种法。
2、学习细菌培养的条件和方法，了解不同培养基对细菌生长的影响。
3、观察细菌在不同培养条件下的生长情况，培养对微生物实验的兴趣和动手能力。
二、实验原理细菌接种是将细菌从一个培养基转移到另一个培养基的过程，通过接种可以使细菌在新的环境中生长繁殖。
常见的接种方法有平板划线法、斜面接种法和液体接种法。
平板划线法是通过在平板表面多次划线，将细菌逐步稀释，从而得到单个菌落；斜面接种法是将细菌接种在斜面培养基上，以获得大量的菌体用于保存或进一步实验；液体接种法是将细菌接种到液体培养基中，进行液体培养。
细菌培养需要提供适宜的营养物质、温度、酸碱度和氧气等条件。
不同的细菌对培养条件有不同的要求，因此需要根据所培养细菌的特性选择合适的培养基和培养条件。
三、实验材料1、菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌。
2、培养基：营养琼脂平板、营养肉汤培养基、斜面培养基。
3、器材：接种环、酒精灯、培养箱、显微镜等。
四、实验步骤（一）平板划线法接种1、点燃酒精灯，将接种环在火焰上灼烧灭菌，冷却后蘸取少量菌液。
2、在营养琼脂平板上进行划线，第一次划线从平板的一端划至另一端，然后将接种环灭菌冷却，从第一次划线的末端开始第二次划线，依此类推，共进行 3 5 次划线。
3、划线完成后，盖上平板盖，倒置放入 37℃培养箱中培养 24 小时。
（二）斜面接种法1、点燃酒精灯，将接种环灭菌冷却。
2、用接种环从平板上挑取单个菌落，在斜面培养基的顶端自上而下轻轻划线。
3、接种完成后，将斜面放入 37℃培养箱中培养 24 小时。
（三）液体接种法1、点燃酒精灯，将接种环灭菌冷却。
2、用接种环挑取少量菌苔，伸入液体培养基中，轻轻搅拌。
3、接种完成后，将液体培养基放入 37℃摇床中培养 24 小时。
五、实验结果（一）平板划线法经过 24 小时的培养，在平板上可以观察到单个的菌落。
质粒的保存实验一、实验基本流程：制备大肠杆菌感受态细胞质粒转化感受态细胞转化子的鉴定与筛选重组子的菌种保藏二、材料与方法1、材料1.1 培养基的配置（1）LB培养基：0.5%酵母抽提物；1%蛋白胨；1%NaCl；pH 7.0-7.5(固体培养基加入2%琼脂粉) （2）LB Amp平板：LB固体培养基高压灭菌后冷却至60℃左右,加入Amp储存液,使终浓度为100ug/mL,摇匀后铺板。
（3）LB Kan平板：LB固体培养基高压灭菌后冷却至60℃左右,加入Kan储存液,使终浓度为50ug/mL,摇匀后铺板。
1.2 缓冲液的配置（1）电泳缓冲液（每升）：5×TBE：Tris base 54g；硼酸27.5g；0.5M EDTA（pH 8.0）1.3 药品的配置（1）50%甘油：50mL甘油用重蒸水定容至100mL,高压灭菌。
（2）75mM CaCl2：称取1.1g CaCl2.2H2O(分析纯),溶于50mL重蒸水中,定容至100mL,高压灭菌。
（3）75mM CaCl2（15%甘油）：称取1.1 g CaCl2(无水,分析纯),溶于50ml重蒸水中,加入15ml甘油,定容至100ml,高压灭菌。
（4）100mg/mL Amp母液：称取Amp粉末1g，用10mL灭过菌的重蒸水溶解定容后，分装，于-20℃保存即可。
（5）50mg/mL Kan母液：称取Amp粉末0.5g，用10mL灭过菌的重蒸水溶解定容后，分装，于-20℃保存即可。
2、方法2.1 DH5α大肠杆菌感受态细胞的制备⑴接30uL DH5α甘油菌于3mL LB中，37℃，250rpm，培养过夜⑵接3mL LB培养的DH5α大肠杆菌500L于100mL LB培养基中，37℃，250rpm，1h（左右，云雾状，OD600=0.3-0.4）⑶分装3个50 mL离心管，冰浴10min⑷4℃,4000 rpm,7min离心后，弃上清⑸三管沉淀合于一管，加入30 mL（大概量）冰预冷75mM CaCl2，重悬沉淀，冰浴30min⑹4℃,4000 rpm,5min离心后，弃上清（沉淀要呈条带状）⑺加入3-6mL冰预冷75mM（含15%甘油）CaCl2，重悬沉淀⑻分装，每个ep管加200L菌悬液⑼冰上放置2-4h，-20℃冰浴，再放入-80℃冰箱保存2.2质粒的转化⑴取0.5uL质粒加入到制备好的200L感受态细胞中⑵混匀，冰浴30min⑶37℃热休克5-7min⑷冰浴3min⑸加800L LB培养基，混匀，37℃温育45-60min⑹4000rpm离心5min，去部分上清，菌体重悬，涂布含Amp/Kan的LB平板，37℃倒置培养过夜。
