血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及定量实验报告

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血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验影响因素分析及改进

作者：于乐军 刘晨光

来源：《中国教育技术装备》2013年第12期

摘 要 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验是高校生物化学实验必开实验项目之一，但实验影响因素较多。针对影响实验的各种可能因素进行分析并提出相应改进对策，以期为提高本实验的成功率提供一些可供借鉴的经验。

关键词 血清蛋白；醋酸纤维薄膜；实验仪器

中图分类号：Q5-33 G642.423 文献标识码：B 文章编号：1671-489X（2013）12-0132-03

血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳法是以醋酸纤维薄膜为支持物，利用血清中含有白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白等各种蛋白质的氨基酸组分、立体构象、相对分子质量和等电点不同，在电场中的移动速率不同，通过电泳分离的一种方法[1]。因为其具有微量、快速、简便、分离清晰、对样品无吸附现象等优点，成为生物化学实验课必开的实验项目之一。但在实际的操作中，影响实验的因素较多，除了电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度、电渗现象等因素外，实验课课前准备工作是否到位以及实验过程中学生的实验操作水平也直接影响实验结果的准确性和完整性。笔者结合多年实验教学经验和他人研究工作，对整个实验操作过程中需要注意和改进的地方进行阐明，期望为提高实验的成功率提供一些可供借鉴的经验。

1 实验课课前准备

1.1 实验材料

1）血清。本实验室一直以小牛血清代替人血清用于实验课程的教学，取得较好的实验效果。且有研究证实[2]，牛血清代替人血清进行醋酸纤维素薄膜电泳，其结果与人血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳结果相近，实验稳定，重复性好。小牛血清相较于宝贵的人血清，较易获得且储存稳定，组分纯净，没有其他杂质干扰，为实验结果的准确性提供了很好的保证，用于实验课教学完全可以达到预期的实验目的和要求。

生物化学实验报告

姓 名：

学 号：

专业年级：

组 别：

生物化学与分子生物学实验教学中心

实验名称 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量

实验日期 实验地点

合作者 指导老师

评分 教师签名 批改日期

一、实验目的

1.1.学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法；

1.2.了解电泳技术的一般原理；

1.3.掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。

二、实验原理

2.1.血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。

2.2.血清中不同蛋白质的等电点、分子量及含量

血清蛋白质 等电点 分子量 占总蛋白的％

清蛋白 4.64 69,000 57～72

α1－球蛋白 5.06 200,000 2～5

α2－球蛋白 5.06 300,000 4～9

β－球蛋白 5.12 90,000～150,000 6.5～12

γ－球蛋白 6.85～7.3 156,000～950,000 12～20

缓冲液pH=8.6，pI＜pH。

血清蛋白带负电荷，在电场中向正极移动。

预测血清蛋白电泳区带图

血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白的α1、α2、β、γ五个区带

第２５卷第２期　２００８年４月　生物学杂志　

ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＢＩＯＬＯＧＹ　Ｖ０１．２５　Ｎｏ．２　Ａｐｒ，２００８　

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验的改进　

周丽亚，高静，吴兆亮，李英杰　

（河北工业大学化工学院，天津３００１３０）　

摘要：《血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳》实验采用宽膜条很好的解释了由窄膜条造成的区带弯曲问题。实验用到　

的一些试剂较昂贵，在保证和提高生物化学实验教学质量的前提下，以降低实验成本、减少对环境污染角度出发，　采用牛血清代替人血清、改变实验条件、回收缓冲液和漂洗液等方法对实验进行了改进，改进的结果是实验稳定，　

重复性好，用于实验课教学可以达到预期的实验目的和要求。　

关键词：醋酸纤维素薄膜；电泳；人血清；牛血清　中图分类号：Ｇ６４２．０　文献标识码：ｃ　文章编号：１００８—９６３２（２００８）Ｏ２—００６７一Ｏ２　

生物化学是生物工程本科专业教学中的一门实践　

性很强的专业基础课，生物化学实验课是教学过程的　

重要环节，其目的是使学生理论联系实际，巩固课堂上　

所学的理论知识，培养学生的动手能力和科研基础能　

力，培养学生严谨的科学态度　。但加强生物化学实　

验教学和教学经费紧张始终是一对矛盾，特别是随着　

招生规模的扩大，矛盾更加突出，其中也涉及到随着生　

物化学实验教学的增加，对环境的污染也加大。同时　

有些实验按实验讲义设计不是很合理，造成一些实验　

结果不是很理想或者一些现象难以解释。因此在保证　

和提高生物化学实验教学质量的前提下，以降低实验　

成本、减少对环境污染和更好解释实验过程中出现的　

难以解释现象为目的，对《血清蛋白的醋酸纤维薄膜电　

泳》实验进行深入研究。　

ｌ　醋酸纤维素薄膜的选择　

实验室对人的血清蛋白进行醋酸纤维薄膜电泳实　

验，通用的醋酸纤维素薄膜是２×８ｃｍ，结果如图ｌ，从　

图中可以看到人血清中的白蛋白区带较其它区带颜色　

深且粗，这是因为人血清中白蛋白浓度最大（５７％～　

７２％）。从图中也可以看出白蛋白区带是弯曲的，而　

血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验报告结果

1. 实验背景

说起血清蛋白，大家可能觉得这听起来像是医生的专业术语，其实它和我们的日常生活有着密切的关系。血清蛋白就像是我们身体里的“搬运工”，负责运输各种营养物质、激素和废物。想象一下，它们就像是一个个小快递员，在血液这条大街上忙忙碌碌，辛勤工作，保持我们的身体正常运转。哎，真是个不容易的职业！为了更好地了解血清蛋白，我们常常用到醋酸纤维薄膜电泳这项技术。虽然听起来复杂，但其实就是把血清蛋白“分门别类”，让它们各自展现自己的风采。

2. 实验过程

2.1 准备工作

实验开始前，咱们得先准备好材料。这可不是随便拉拉家里的东西就能搞定的。我们需要高质量的血清样本，还有醋酸纤维膜、缓冲液等等，听起来就像是在准备一场盛大的宴会。每一个小细节都不能马虎，毕竟“千里之行，始于足下”。做好准备，咱们就可以开始了。

2.2 实验步骤

先把血清样本滴在醋酸纤维膜上，嘿，就像给它们来个小小的“泡泡浴”。然后，我们把膜放进电泳槽，电流一打开，哇！就像给这场聚会打上了光速，血清蛋白们开始“分开舞动”，每种蛋白根据大小和电荷的不同，表现出不同的迁移速度，简直是一场精彩的“舞蹈比赛”。最后，咱们用染料将它们染色，瞬间，整个膜上就像开满了五彩缤纷的花朵，各种颜色交织在一起，真是美丽得让人心醉！

3. 实验结果

3.1 观察到的现象

看着膜上那些不同颜色的条带，心里不禁感慨万千。这些条带就像是一幅复杂的画卷，每一条都代表着一种不同的血清蛋白，真是让人忍不住想一探究竟。我们能够清楚地看到每种蛋白的相对浓度，甚至还可以发现一些隐藏的“明星蛋白”。这些小家伙可是咱们健康的重要守护者，它们的数量和状态直接影响着我们的身体。

3.2 数据分析

接下来就是分析数据了。通过定量分析，我们可以得出不同蛋白的浓度比。这就像是在选拔赛中，评委们仔细打分，谁是冠军，谁又是陪跑的，都一目了然。根据不同的情况，比如炎症、营养不良等，咱们也能从这些数据中找到线索。是不是觉得这就像破案，找到罪犯的蛛丝马迹，特别刺激！