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博士学术论文的字数要求博士论文是由攻读博士学位的研究生所撰写的学术论文。
下面是店铺整理的博士学术论文的字数要求，希望你能从中得到感悟!博士学术论文的字数要求博士学术论文字数一般要求3W字左右。
博士学术论文赏析设立我国企业税务会计探析内容提要：随着我国财政、税收体制的完善和会计职能的变革，税务会计与企业财务会计、管理会计之间的分工越来越明确。
鉴于我国税法越来越健全、税收管理越来越严格、计算要求越来越细化。
本文作者认为，借鉴一些发达国家的经验，将企业税务会计从企业财务会计、管理会计中分立出来，不仅有可能，而且很有必要。
一、企业税务会计的发展、作用及特征企业税务会计逐渐从企业财务会计、管理会计中分立出来，成为相对独立的会计分支，是从第二次世界大战后的美国开始的。
特别是进入80年代以后，企业税务会计被人们当作一门学科加以研究。
美国著名会计学家亨德里克森指出：“很多小企业，会计的目的是为了编制所得税申报表，甚至不少企业若不是为了纳税根本不会记账。
即使对大公司来说，纳税也是会计师们的一个主要问题。
……税法对于提高会计实践水准具有极大影响，并促进一般会计实务的改进及一致性的保持。
……通过税法还可以促进会计观念的发展。
如促进寻求更好的折旧方法和存货计价方法，澄清了计税收益的实质和所应包括的，范围等等。
”可见，企业税务会计对于企业利用税法取得合法利益以及确保不固纳税方面的任何疏漏而给企业造成不必要的损失具有重要作用。
我国从1994年税制改革以后，税务管理得到加强。
增值税凭专用发票抵扣税额方法的实行，使应纳税额的核算逐步走向规范化。
对此，各地税务机关试行了在企业财务会计人员中培训办税员，指定取得办税员合格证的会计人员办理纳税事项办法。
这一办法，完善了企业涉税事项的会计核算，可以说是建立我国企业税务会计的初步探索。
与企业财务会计、管理会计相比较，企业税务会计的特殊性体现在三个万面：(一)企业税务会计要在税法的制约下操作对于企业财务会计核算方法、处理方法等，企业可以根据《企业会计准则》和《企业财务通则》，并结合自身生产经营实际需要加以选择。
博士毕业论文
博士毕业论文是指在攻读博士学位期间，毕业生需要完成的一篇研究性论文。
这篇论文内容主要包括对某一特定领域的深入研究，提出新颖的观点、理论或解决方案，并有一定的学术意义和实践价值。
博士毕业论文通常具有以下几个部分：
1. 引言：介绍研究的背景和意义，概述前人的研究情况，明确研究目标和研究问题。
2. 文献综述：对相关领域的研究文献进行综合分析，总结前人的研究成果和不足之处。
3. 方法：详细描述研究所使用的方法和实验设计，包括数据收集、样本选择、实验操作、统计分析等。
4. 结果与讨论：呈现研究的结果，用表格、图表等形式展示数据，并对结果进行解释和讨论。
5. 结论：对研究的主要发现进行总结和归纳，评估研究结果的可靠性和局限性，并提出未来的研究方向。
在撰写博士毕业论文时，学生需要深入研究相关领域的文献资料，进行实证研究和理论分析，积累并运用专业知识，提出独立的见解和贡献。
博士毕业论文是评价博士研究生综合能力和
学术水平的重要指标，通过论文答辩和学位评审，来评定学生是否具备授予博士学位的资格。
百篇优秀博士论文引言博士论文是研究生阶段最重要的学术成果之一，是评判一个研究生综合能力的重要依据。
在过去的几年里，各个领域中涌现出了许多优秀的博士论文，这些论文在学术界和工业界都产生了重要影响。
本文将介绍一百篇优秀的博士论文，涵盖了多个学科领域，并对其研究内容和贡献进行简要介绍。
论文目录1.论文一：标题2.论文二：标题3.…4.…5.… …6.…标题示例论文一：标题作者：XXX摘要：该篇论文主要研究了XXX问题，并提出了一种创新的方法来解决这个问题。
研究发现XXX，实验证明了该方法的有效性。
此外，论文还对与此问题相关的一些其他因素进行了探讨，并给出了一些建议和未来的研究方向。
关键词： XXX, YYY, ZZZ研究内容和贡献：论文主要从XXX角度入手，对该问题进行了深入的分析和研究。
通过对XXX的详细调查和实验分析，论文揭示了XXX的内在机制，并提出了一种创新的解决方案。
该方法具有较高的准确性和有效性，在实际应用中具有重要价值。
另外，论文还对与该问题相关的一些其他因素进行了研究，并提出了一些建议和未来的研究方向，为进一步深入研究该问题的学者们提供了有价值的参考。
论文二：标题作者：XXX…结论通过对一百篇优秀博士论文的介绍，我们可以看到这些论文在各自领域都取得了重要的研究成果，为学术界和工业界带来了许多新的思想和方法。
这些优秀博士论文的成功经验值得我们借鉴和学习，同时也展示了各个领域在发展和创新方面的潜力与前景。
希望这百篇优秀博士论文的介绍能够为读者提供有益的参考，并激发更多学者在各自领域做出更为出色的研究成果。
博士论文对于博士生来说重要吗？博士论文对于博士生来说是非常重要的。
这是一个博士生在整个博士学习期间所做的最重要的工作之一，是博士生的成果展示，也是他们最终获得博士学位的必要条件之一。
以下是博士论文对于博士生来说的重要性：1. 证明研究能力博士论文是一项需要长时间的重复工作和统计分析的研究。
这需要博士生经过系统培训和学习，掌握所需的研究技能，深入了解该领域的理论知识和最新进展。
博士论文需要博士生具备较高的研究能力，而完成博士论文的过程将为博士生证明其研究能力提供有力的证据。
2. 展示研究成果博士生在研究期间，需要进行实验和采集数据，通过数据分析和结果研究来证明提出的假设的正确性。
完成博士论文后，博士生可以将这些研究成果呈现给整个学术界，向其他研究者展示自己的工作成果，这将使得他们的发现能够被更广泛地了解和利用。
3. 提高职业竞争力具有博士学位可以让博士生在日后与其他应聘者竞争更具优势的职位。
对于学术领域而言，持有博士学位的人员通常被视为知识和经验丰富，具有高水平的研究能力，为雇主提供了更好的人才选择范围。
同时，在其他领域，持有博士学位的人员通常也会被视为专业和资深人士，他们可以通过自己的知识和研究成果为公司或组织提供有益的建议。
4. 推进学科发展博士学位的获得需要进行博士论文的研究和论文撰写，这需要博士生进行详细的研究和分析来获得新的研究成果。
通过发布博士论文，博士生对相关领域做出了贡献。
这些博士生的新发现可以推动该领域的发展进程，为其他研究人员提供新的启示和方向。
5. 实现个人目标完成博士学位可能是博士生个人育成的一个里程碑，它证明了自己辛勤工作和坚定信念。
博士生将可以顺利毕业，并在接下来的工作和生活中取得更多的成果。
同时，实现个人目标也需要一定的奉献和努力，博士是一个既有挑战性的目标，也是一个值得追求的目标。
总之，博士论文对于博士生而言是一个非常重要的任务，这是提高自己研究能力的重要途径，也是展示自己研究成果的关键结果展示。
博士毕业论文范文博士毕业论文范文博士毕业论文是研究生阶段最重要的学术成果之一，它不仅要求学生具备扎实的学术功底和独立研究的能力，还需要展现出对特定领域的深入理解和创新思维。
本文将以某位博士生的毕业论文为例，探讨其研究内容、方法和结论，以期为即将撰写博士毕业论文的研究生提供一定的参考。
该论文的研究领域为人工智能在医疗诊断中的应用。
在引言部分，作者首先介绍了人工智能的快速发展和在医疗领域的广泛应用。
随后，作者指出了当前医疗诊断中存在的问题，如误诊率高、诊断时间长等，并提出了人工智能在解决这些问题上的潜力。
接下来，作者详细介绍了论文的研究方法。
首先，作者采用了大量的医学文献和临床数据进行调研，以了解当前医疗诊断的现状和存在的挑战。
其次，作者使用了机器学习算法对医学图像进行分析和诊断，通过对大量医学图像的训练，使得算法能够准确地判断疾病的类型和程度。
最后，作者还进行了实地调查和医院合作，以验证算法在实际应用中的可行性和有效性。
在研究结果和讨论部分，作者总结了实验结果和数据分析。
通过与传统诊断方法的比较，作者证明了人工智能在医疗诊断中的优势和潜力。
同时，作者也指出了算法的一些局限性和改进方向，以期进一步提高诊断准确率和效率。
在结论部分，作者对整个研究进行了总结，并提出了未来的研究方向。
作者强调了人工智能在医疗领域的重要性和应用前景，并呼吁相关领域的研究者加强合作，共同推动人工智能在医疗诊断中的发展。
通过对该博士毕业论文的分析，我们可以看到一个优秀的博士毕业论文应具备以下几个特点：一是研究领域的选择要具有一定的前瞻性和实用性，能够解决实际问题；二是研究方法要科学合理，能够有效地验证假设和推导结论；三是研究结果要具备一定的可靠性和可重复性，能够为相关领域的研究者提供参考；四是结论要明确、有深度，能够为学术界和实践界提供有价值的启示。
总之，博士毕业论文是博士生在研究生阶段最重要的学术成果之一，它不仅要求学生具备扎实的学术功底和独立研究的能力，还需要展现出对特定领域的深入理解和创新思维。
博士论文范本如下是一个700字的博士论文范本：标题：基于人工智能的医学影像诊断研究摘要：本论文旨在研究和开发基于人工智能的医学影像诊断系统，以提高医学影像诊断的准确性和效率。
通过分析大量的医学影像数据，结合深度学习和图像处理技术，建立一个自动化的医学影像分析和诊断平台。
通过在医学影像诊断中的应用实例测试，证明该系统具有很高的准确率和较短的诊断时间，大大提高了医学影像诊断的效果。
关键词：人工智能、医学影像、诊断、深度学习、图像处理1. 引言医学影像是一种重要的医学检查手段，通过观察和分析医学影像图像，医生可以判断患者的病情和制定相应的治疗方案。
然而，由于医学影像数据量大、复杂性高，医生在分析和诊断时容易出现疲劳和错误。
因此，开发一种基于人工智能的医学影像诊断系统具有重要意义。
2. 研究方法本论文采用深度学习和图像处理技术，结合大量的医学影像数据训练模型，建立一个自动化的医学影像分析和诊断系统。
首先，收集和整理不同类型的医学影像数据，包括X射线片、磁共振图像、CT扫描等。
然后，利用深度学习算法对这些数据进行训练，建立一个高效精确的医学影像诊断模型。
最后，将得到的模型应用于实际医学影像诊断中，并与传统方法进行对比分析。
3. 实验结果通过对不同类型医学影像数据的训练和测试，得到了一个高准确度的医学影像诊断模型。
与传统的医学影像诊断方法相比，该模型在准确率和诊断时间方面表现出明显的优势。
例如，在诊断癌症病变时，该模型的准确率达到了90%，而传统方法的准确率只有80%。
此外，该模型的诊断时间平均比传统方法减少了30%。
4. 讨论和展望本论文研究开发的基于人工智能的医学影像诊断系统具有很高的潜力和广阔的发展前景。
然而，还有一些问题需要进一步解决。
首先，模型的训练需要大量的医学影像数据，因此数据的收集和整理是一个挑战。
其次，模型的诊断准确率和效率还可以进一步提高，需要进一步改进和优化算法。
未来的研究可以考虑引入更多的医学影像数据和改进算法，以进一步提高医学影像诊断的准确性和效率。
博士论文范文精选3篇(全文)这篇博士论文得以顺利完成，使得我可以提前毕业，首先应该感谢我的三位导师：钱敏先生、蒋达权老师和陈大岳老师。
初识恩师钱敏先生是在三年前的初夏，我还记得那天外面还下着淅淅沥沥的小雨，先生满头银发，精神矍铄，手中拿着一把雨伞。
也正是在那一天，钱先生表扬了我的本科论文，并且答应帮我修改，这给了我很大的信心。
自那之后，我就正式成为了钱先生的学生。
在先生的悉心指导下，到硕士期间的第二年终我已完成数学内容的论文四篇。
鉴于此，先生在和我多次商量之后为我作了一个规划，即(一)四年完成硕博连续，(二)研究方向定在跨学科领域，即跨数学、化学与生物等学科。
在钱先生指导我的三年时间里，他不仅帮助我找到了研究方向，踏上了跨学科研究之路，而且，还以不断的肯定和鼓舞让我树立了信心。
因为随机过程理论在现代非平衡态统计物理和生物化学系统建模上的应用方面的研究是探究性的，我自己要做许多探究性的学习，而钱先生总是能够凭借多年的研究经验敏锐地告诉我做什么是有前景的，而做什么可能是无用功，从而让我的科研工作深入而又有效率。
不仅如此，钱先生也用他高尚的人格在一直感染着我。
钱先生生活极其朴素，却总是能体谅学生经济上和生活上的困难;先生指导我完全是尽义务，而在这三年期间，他还一直从自己为数不多的科研基金中拨出相当部分，在经济上给了我很大的支持。
每当钱先生以81岁的高龄围坐在学生中间，和大家讨论甚至是激烈地争论问题时，我总是很感动。
先生那种对生活和科研的热情，将一直激励着我;我也希望自己在今后的学术生涯中，能够不辜负先生的厚望，一步一个脚印的不断前行。
蒋达权老师从2021年秋季就开始指导我写作本科毕业论文;作为我的研究生导师之一，蒋老师已经指导我作科研达四年之久。
应该说，是蒋老师带领我踏进了科研的大门，并且给了我非常细致的指导;正是在他的指导下我的本科毕业论文得以发表在国际知名刊物上。
2021年秋季，蒋老师远赴德国进修，在这之前，他把我介绍给了钱敏先生。
博士论文写作总结8篇第1篇示例：在完成博士论文写作的过程中，我们需要经历一个繁琐而又充实的过程。
在撰写博士论文的过程中，我们需要认真对待每一个环节，力求精益求精，以确保最终呈现出一篇优质的论文。
在本文中，我将分享一些关于博士论文写作的总结和经验，希望能够为即将开始写作的同学们提供一些帮助和启示。
博士论文的选题至关重要。
选题是整个论文写作过程的第一步，也是最为关键的一步。
一个好的选题应该符合自己的兴趣和研究方向，具有一定的学术研究价值，同时也需要与当前领域的研究热点和前沿问题相关。
在选择选题的过程中，我们可以多与导师和同行交流，听取他们的建议和意见，从而找到一个合适的选题。
博士论文写作需要有扎实的理论基础和丰富的研究经验。
在写作过程中，我们需要充分挖掘和总结国内外相关领域的研究成果，深入理解和掌握相关理论和方法，以便能够在自己的研究中进行深入分析和论证。
我们还需要有丰富的研究经验，能够灵活运用各种研究方法和技巧，提高论文的质量和水平。
博士论文写作需要有严谨的逻辑思维和清晰的表达能力。
在写作过程中，我们需要以严密的逻辑推理为基础，对问题进行深入思考和分析，确保论文的结构清晰、论证有力。
我们还需要有清晰流畅的表达能力，能够用简洁明了的语言准确表达自己的观点和想法，让读者能够轻松理解和接受。
博士论文写作需要有耐心和自律的品质。
论文写作是一个漫长而繁琐的过程，需要我们付出大量的时间和精力，需要不断修改和完善，直至最终达到要求。
在这个过程中，我们需要保持耐心和坚持不懈的态度，积极面对困难和挑战，不断提高自己的写作能力和水平。
博士论文写作是一个具有挑战性和收获丰富的过程，需要我们有扎实的理论基础和丰富的研究经验，有严谨的逻辑思维和清晰的表达能力，同时还需要有耐心和自律的品质。
只有不断努力和提高自己，我们才能完成一篇优质的博士论文，为自己的学术研究和职业发展打下坚实的基础。
希望以上总结和经验能对即将开始写作的同学们有所帮助。
论文博士（精选3篇）1.论文博士第1篇本论文是在我的导师许燕副教授的悉心指导下完成的。
在开题前期，许老师几次组织导师组内同学对我的选题进行讨论，为我整篇论文框架的形成提供了重要的帮助；开题报告写作后期，许老师已出差在外，但她仍在百忙中抽出时间对文章进行细致地修改：大到文章结构段落，小到句式措辞，许老师全面地改动让我对论文的写作方式和要求有了新的认识，为后来论文的写作提供了借鉴和指导；在论文写作的过程中，许老师更是以其渊博的知识和丰富的经验指导我解决了许多难题。
在此我要向许燕导师表示衷心的感谢！其实不止是论文的筹划和写作期间，整个博士生三年，许老师一直给予我指导和帮助。
每当遇上值得一读的书籍，许老师总会推荐给我以拓展视野；每次出差回来，许老师总会分享她的经历见闻与处事经验，对我今后为人处世大有裨益。
许老师严谨细致的治学态度和平易近人的处事风格将如明灯一样，陪伴我走过今后的路程。
我感谢我的父母，正是父母的鼓励和支持帮助我克服了诸多困难，让父母安心是我一生的动力。
此外，我还要感谢那些为我提供帮助的同学们和学妹们，少了你们的参考建议，论文地完成将会变的艰难得多。
最后，感谢教授过我的所有老师，特别是会计学院的诸位老师，感谢你们！2.论文博士第2篇20XX年9月博士入学时，导师侯运炳教授曾经对我说过，博士生期间做什么方向的科研并不要紧，关键是做科研的态度和掌握科研的方法。
我对这句话印象深刻，导师不仅是教给我们一种做事的态度，也是一种做人的态度，在使我深受触动的同时，也使我更加严谨认真地对待研究和学习，这些都将对我未来的人生具有一定的导向性和启发性。
借此机会，我谨向导师对我多年的指导和帮助表示最由衷的谢意。
同时，我也要感谢资源与安全工程学院其他的老师，正是老师们对我们的培养和教导，使我能够较好地完成我的学业。
在论文写作及资料查询过程中，得到国务院经济发展研究中心周健奇同志及中国矿业大学（北京）张浩、于辉同志的帮助和支持，在此一并表示感谢。
英语博士论文六篇英语博士论文范文1博士讨论生的培育质量代表着学科的进展水平，不但代表一个国家科研创新的方向和科技水平进展的高度，也体现了一个高校的科研水平和创新力量。
随着科研、学术国际化沟通的不断增多，对于医学高层次人才培育，英语不仅作为一门必修课程生硬的进行教学，而是作为一种学术沟通的语言载体，担当着医学博士讨论生对外学术力量培育的基础。
2021年，《教育部关于改进和加强讨论生课程建设的看法》提出，要更好的发挥课程学习在讨论生培育中的作用，全面提升学术创新力量和科学进展力量。
在此契机下，我校结合地方医学院校讨论生进展特点和对博士讨论生培育目标，适时对博士讨论生英语课进行课程体系创新改革。
现将我校博士英语课程体系建设状况总结如下。
一、医学博士讨论生英语课程学习中产生的问题1.博士生主动学习力量不强，学习动机不单纯。
医学学制本身较其他学科长，由于受到就业形势和社会环境的影响，医同学普遍存在先就业后深造的状况，在博士培育阶段，绝大部分博士生已参与工作。
这部分同学由于临床工作劳碌，并未做到真正的脱产，在集中半年的基础授课时间，不能完全参加正常的学习，且由于博士年龄层次分布较大。
在这样的学习动机下，英语教学本身存在工作障碍，同时也不是培育博士英语学习力量的初衷。
2.高校英语教学资源有限，课程体系建设有待进一步加强。
非英语专业高校中，英语专业教学师资紧缺是普遍存在的问题，我校亦是如此。
在对博士生授学位需发表SCI文章的刚性条件的制约下，这种传统的教学内容、教学方式和考核方式都渐渐成为博士生课程对其学习力量培育的桎梏。
二、医学博士讨论生英语课程建设改革状况医学博士有其独特的培育特点和培育目标，在科技水平日新月异的进展下，培育越来越注意的是力量培育，特殊是学术力量的培育，在协作培育方案进一步优化的基础上，将博士课程进行精准改革建设，将英语课程教学成为培育博士学术力量的语言载体和培育基础。
1.因材施教，优化教学方案。
第二军医大学博士学位论文小鼠胚胎成纤维细胞转分化为肝前体细胞的研究Conversion of Mouse Embryonic Fibroblasts into Hepatic Progenitor Cells by Defined Factors研究生姓名：于兵专业：细胞生物学导师：胡以平教授导师组成员：何志颖副教授李文林副教授第二军医大学基础部二○一二年五月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。
除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。
本人承担本声明的法律责任。
学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文使用授权书声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。
本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。
（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日目录中文摘要 (1)Abstract (3)缩略词表 (6)前言 (8)实验材料 (13)一、主要仪器和设备 (13)二、主要试制及其制备 (14)三、组织标本、细胞系、菌株和表达载体 (18)实验方法 (19)一、细胞生物学实验 (19)二、分子生物学实验 (28)三、动物实验 (31)实验结果 (33)一、MEF转分化为iHPCs重编程因子的筛选 (33)二、Hnf1b和Foxa3诱导MEF转分化为iHPCs (35)三、iHPC的基本生物学特性 (38)四、iHPCs在体外具有双向潜能 (44)五、iHPC具有再殖损伤肝脏的能力 (47)讨论 (52)参考文献 (59)附录 (63)综述 (66)致谢 (79)小鼠胚胎成纤维细胞转分化为肝前体细胞的研究摘要肝脏移植是治疗终末期肝病唯一有效的手段，但器官短缺和免疫排斥限制了该治疗方法的广泛应用。
目前，肝细胞移植作为原位肝移植的替代方案在临床上取得了一定的疗效。
肝干细胞具有较强的增殖能力，并可分化为成熟的肝细胞和胆管细胞，可为肝细胞移植和组织工程提供大量的供体细胞。
最近研究表明通过强制表达组织特异性的转录因子可使一种组织类型的细胞转分化为另一种类型的细胞即谱系重编程（lineage reprogramming），本研究拟通过谱系重编程的方法将小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblast cells, MEF）在体外重编程为肝干/前体细胞。
为了诱导MEF重编程为肝前体细胞，我选择了决定肝脏发育的重要转录因子以及参与卵圆细胞/肝干细胞动员和状态维持的转录因子共20个转录因子作为候选的重编程因子。
以小鼠胚胎发育过程中内胚层最早表达的肝脏分化的分子标志albumin(Alb)、transthyretin (Ttr) 、α-fetoprotein (Afp)以及卵圆细胞/肝干细胞的分子标志Ep-Cam、CK19、CK7为标志物来筛选诱导产生的肝前体细胞。
以慢病毒为载体，诱导MEF转分化为肝前体细胞。
首先从20个因子中减去一个因子(即19个因子)的组合来诱导MEF向肝前体细胞分化，排除了12个在重编程过程中无明显效应的因子，同时确定了8个重编程因子用于下一轮的筛选。
用同样的筛选方法最终确定Hnf1b 和Foxa3是将MEF转分化为肝前细胞的必要的转录因子。
MEF细胞感染Hnf1b和Foxa3因子10天后，培养物中可观察到明显的上皮样细胞集落。
通过反复的胰酶消化和传代，成纤维细胞逐渐被去除，最终获得了形态均一的上皮样细胞系。
该细胞系在体外培养3个月以上，连续传代超过20代时仍能保持形态上的稳定性和正常的核型，裸鼠荷瘤实验表明该细胞不具有致瘤性。
电镜下观察，细胞的核质比大，胞浆中细胞器不丰富，呈现为较原始的细胞状态。
RT-PCR和细胞免疫化学检测表明该细胞系表达肝细胞的标志物（Alb, AFP）、胆管细胞的标志物（CK19）、肝细胞和胆管细胞的共同标志物（CK8, CK18）和肝干细胞/前体细胞的标志物（Dlk1, Sox9, Ep-CAM），而不表达成熟肝细胞的功能性标志物（G-6-P, Tat, Cyp3a11, Cyp7a1）。
这些表明该细胞系具有肝干/前体细胞的分子表型和部分特性，并将其命名为诱导型肝前体细胞（Induced hepatic progenitor cells, iHPCs）。
目前常采用添加细胞因子，小分子诱导物和改变细胞贴附环境的方法在体外诱导肝干/前体细胞的分化。
抑瘤素(Oncostatin M, OSM)是诱导肝干/前体细胞在体外分化为成熟肝细胞的强效因子，而Matrigel基质胶则是被广泛应用于多种类型细胞体外诱导分化的胞外基质。
在OSM，维生素C和表皮生长因子（EGF）诱导下，iHPCs在接种到Matrigel基质胶表面24小后聚集成团，诱导12天后细胞团停止增殖。
RNA- 1 -第二军医大学博士学位论文分析显示诱导后的细胞表达成熟肝细胞的功能性标志物（Alb, G-6-P, Cyp3a11, Cyp7a1）。
PAS染色显示诱导后的细胞胞浆中有糖原的贮积，而葡萄糖-6-磷酸酶（G-6-P）原位酶组织化学显示诱导后的细胞内有G-6-P的活性，说明诱导后的细胞能够分解糖原。
另外，诱导后细胞的超微结构显示其胞质内细胞器较诱导前明显增多，尤其是在细胞与细胞之间存在肝细胞特征性的细胞间胆管结构。
在Ⅰ型胶原三维培养体系中iHPCs用胆管诱导培养液培养21天后形成典型的管样分支状结构，并表达胆管上皮细胞的相关基因（CK7，CK19，Integrin b4，Hnf6）。
肝干/前体细胞最本质的特征是能够分化为成熟的肝细胞和胆管上皮细胞，以上实验结果表明iHPCs在体外能够分化为成熟的肝细胞和胆管上皮细胞，具有肝干/前体细胞的特征。
iHPCs通过脾脏注射移植到延胡索酸乙酰乙酸脱氢酶(Fumarylacetoacetate hydrolase, Fah)基因敲除（Fah-/-）的肝脏损伤模型的小鼠肝脏内，细胞移植2个月后，小鼠肝脏内可观察到呈现正常肝窦结构Fah阳性的结节，同时Fah-/-小鼠的肝功能衰竭有所缓解。
激光捕获显微切割（Laser-capture Microdissection）获得的Fah阳性组织的RT-PCR检测结果表明植入的细胞在表达肝细胞特异性基因上与宿主肝细胞相似。
iHPC通过同样的方法移植到DDC损伤的小模型肝脏内，可参与大胆管的修复和新生胆管的形成。
体内实验结果表明iHPCs不仅可以植入小鼠肝脏内，而且可以在相应的肝脏微环境中分化为成熟的肝细胞和胆管上皮细胞并参与相应结构的修复。
我们首次用Hnf1b和Foxa3二个转录因子在体外将MEF重编程为肝前体细胞。
iHPCs在体外培养过程中保持了正常的核型和较强的增殖能力，可以在体内、外分化为成熟的肝细胞和胆管上皮细胞并可再殖损伤的肝脏，且不具有形成肿瘤的能力。
iHPCs的获得具有重要的生物学意义，它为研究肝脏的发育、肝脏损伤后的修复及药物的筛选提供了理想的细胞模型，尤其是为肝脏疾病的细胞治疗提供了理想的细胞来源，并可有效克服异体器官中免疫排斥的医学难题。
关键词：重编程，诱导性肝前体细胞，诱导分化，细胞移植- 2 -小鼠胚胎成纤维细胞转分化为肝前体细胞的研究AbstractLiver transplantation is the unique effective treatment of end-stage liver disease, but the organ shortage and immune rejection limit their applications. Recently, Hepatocyte transplantation, as an alternativer for othotopic liver transplantation, achieved a certain therapeutic effect. Liver stem/progenitor cells possess strong proliferative capacity and can differentiate into mature hepatocytes and cholangiocytes. So they can provide a large number of donor cells for hepatic cell transplantation and tissue engineering. Recent studies show that cells of one type can be converted to another type by over-expressing of tissue specific transcription factors (TFs), called lineage reprogramming. This project is committed to induce mouse embryonic fibroblast cells (MEF) to convert to hepatic stem/progenitor cells by defined TFs in vitro.To explore whether over-expression of certain TFs which play critical roles in liver development or participated in the activation of oval cells in mouse could convert MEF into hepatic stem/progenitor cells, we selected 20 TFs. Lentivirus that expressing each gene were prepared. These markers including earliest expressing hepatic differentiation markers (Albumin, transthyretin、α-fetoprotein) in liver development and well documented liver stem/progenitor cells markers(Ep-CAM, CK7, CK19) were used to identify the induced hepatic stem/progenitor cells. To determine the essential factors among these candidate factors, we examined the effects of withdrawing individual factor from the 20-mixtured TFs pool on reprogramming MEF to hepatic stem/progenitor cells. These factors which were substrated from the pool did not generate significant effects and were ruled out. Next, we used the same method to narrow down the factors from the selected 8 candidate factors. Finally, we identified Hnf1b and Foxa3 as the critical factors.Ten days after transduction by Hnf1b and Foxa3, some clusters containing epithelial cells were observed in the MEF culture. By repeated differential trypsinization and passage, fibroblasts gradually diminished from culture and the converted epithelial morphology cells with high nuclear-to-cytoplasm were enriched. The coverted cells can maintain the constant epithelial morphology after cultured more than three months（20 passages）in vitro. The converted cells did not development any turmors after incubation in NOD/SCID mice. RT-PCR anaylsis and immunoflurecent staining revealed that the converted cells express hepatocyte markers (Alb, Afp), cholangiocyte marker (CK19), hepatcyte and cholangiocyte co-expressed markers (CK8, CK18) , and liver stem/progentitor cells markers (Sox9, Ep-CAM, DLK1). But they did not express the markers (G-6-P, Tat, Cyp3a11, Cyp7a1) of- 3 -第二军医大学博士学位论文the mature functional hepatocyte. The cell lines, expressing liver stem/progenitor cells marker and exhibit biopotecny, were named induced hepatic progenitor cells (iHPCs).Recenty, cytokines, small molecules and the cell-attached environments were used to induced live stem/progenitor cells to differentiation in votro. Oncostatin M (OSM) is a powerful inducer which can induce liver stem/progenitor cells to differentiate into mature hapatocytes. Matrix Matrigel was widely used as extracellular matrix to induce a variety of cell types to differentiation in vitro. After cultured 24 hours, iHPCs fromed aggregates in the surface of Matrigel in presence of OSM, vitamin C and EGF. The aggregates stopped to proliferate 12 days later in the hepatic induced differentiation system. RNA analysis of this aggregates revealed robust up-regulation of hepatic functional transcriptions such as Alb, G-6-P, Cyp3a11 and Cyp7a1. The induced hepatic cells in the aggregates possessed the ability to accumulate glycogen. The activities of G-6-P were detected in the induced cells by enzyme histochemistry in situ. Ultra structurally, these induced cells in the aggregates were homogeneous hepatocyte in appearance, with well-developed organelles. Many bile canaliculi were observed in the intercellular space of adjacent cells. iHPCs differentiated into cells with representative branching structures when cultured in 3-Dimensional collagenⅠgel condition with the cholangiocytic differentiation medium (HDM). The cholangiocytic differentiated cells expressed the bile duct cell markers (CK7, CK19，integrin b4，hnf6). The distinct characteristic of hepatic stem/progenitor cells is the potential to give rise to mature hapatocyes and cholangiocytes. These results indicated that iHPCs are of the traits of hepatic progenitor cells.iHPCs were transplanted intrasplenically in Fah-/- mice, a well established liver injury model, to assess the ability to engraft and to differentiate within the microenvironment of the liver in vivo. 2 months after cell transplanted, we found the Fah positive nodules with normal structures of liver sinusoids in the Fah-/-mice liver. In addition, iHPCs transplantation ameliorated liver failure. RNA analysis of the Fah+ nodules isolated by laser-captured microdissection from serial liver sections revealed that the repopulated cells differentiated from iHPCs have the similar expression profiles of hepatic specific genes with the host hepatocytes. iHPCs can engraft into the bile duct when transplanted intrasplenically in DDC-feed mice used to activate oval cell reaction. The results indicated that iHPCs could engraft into the liver and differentiate into mature hepatocyte and cholangiocyte with in the different environments in vivo to repair injured liver.We firstly converted MEF to iHPCs by defined two factors ( Hnf1b and Foxa3) in - 4 -小鼠胚胎成纤维细胞转分化为肝前体细胞的研究vitro. iHPCs maintained normal karyotypes and strong proliferative capacity when cultured more than 3 months. iHPCs could differentiate into mature hepatocytes and cholangiocytes in vitro and in vivo. iHPCs could engraft in the injured liver, but did not form any tumors. iHPCs will provide an ideal model for studying on liver development , liver regeneration after injured, drug screening and safety test. Furthermore, it may provide an ideal source of cells for cell therapy which avoid the difficult problem of immune rejection in allogeneic transplantation.Keywords:Reprogramming, induced hepatic progenitors, induced differentiation, cell transplantation.- 5 -第二军医大学博士学位论文- 6 -缩略词表英文缩写英文名称，中文名称iHPCs Induced hepatic progenitor cells，诱导型肝前体细胞OLT Orthotopic liver transplantation，原位肝移植Afp Alfa-Fetoprotein，甲胎蛋白Alb Albumin，白蛋白CK Cytokeratin，细胞角质蛋白Ep-CAM Epithelial cell adhesion molecule，上皮细胞粘附分子G6P Glucose 6 phosphate dehydrogenase，葡萄糖6磷酸脱氢酶Ttr Transthyreti，转甲状腺素蛋白Dlk1 Delta-like protein 1，Delta样蛋白1BSA Bovine serum albumin，牛血清白蛋白EGF Epidermal growth factor，。
