用分光光度计测DNA、RNA的浓度

厦门艾德生物医药科技有限公司临检中心文件编号：
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主题内容样品DNA和RNA浓度测定操作规程生效日期：20111101
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1.0目的
规范样品DNA和RNA浓度测定的操作程序，以确定核酸浓度是否适宜。

2.0范围
适用于PCR实验室样品DNA和RNA浓度测定的操作。

3.0职责
研发部检测服务技术员负责执行。

4.0仪器 /材料
4.1仪器：
a. 紫外可见分光光度计（型号ND-1000）
b. 移液枪（2.5uL）
4.2试剂：待测样品、Tris溶液。

5.0操作步骤
5.1小心吸出待测样品，吸取2uL在ND-1000机上测出其OD值。

5.2使用ND-1000机时，测定样品DNA时sample type应该改DNA-50，测定RNA时应改RNA-40。

5.3测量后检查曲线是否正常，A260/A230的比值应大于2，测定DNA的A260/A280的比值应在1.8~2.0
之间，RNA的A260/A280的比值应在1.9~2.1之间。

5.4提取的DNA放在-20℃保存待检，RNA直接逆转成cDNA后放于-20℃保存待检。

紫外分光光度计检测核酸浓度和纯净度
A260是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值范围是0.1到1.0，如果不在次范围建议稀释或浓缩样品；样品吸光度小于0.05,检查是否存在操作因素，正常情况下，DNA样品的吸光度一定大于0.1，样品中出现杂质或者不错纯净会使吸光度减小。

A280是蛋白和酚类最高吸收峰的吸收波长。

因此A260/A280的比值可以对核酸纯度进行评估，一般情况下，纯净的DNA的A260/A280比值为1.8,纯净的RNA为2.0. 如果比值较低，表明样品中存在蛋白或者酚类物质的污染，需要纯化样品，特别说明A260/A280=1.5时，相当于50%蛋白质/DNA溶液。

A230 是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，A260/A230比值可以对核酸样品纯度进行评估，纯净的DNA或者RNA的A260/A230比值为2.5。

如果比值小于2.0，说明样品存在碳水化合物、盐类、有机物的污染，需要纯化样品。

特别说明，A230产生负值主要是由于在很低的DNA浓度
A320/A340 检测吸光值用于检测样品溶液的浊度和其他干扰因子。

纯净的样品改值为0.00,如果不是，说明溶液中有悬浮物，需要纯化样品。

分光光度计的作用分光光度计是一种测量物质在可见光或紫外线范围的光吸收的仪器。

它的作用非常广泛，特别是在化学、生化、药物学、环境科学和食品分析等领域。

分光光度计可以测量物质的浓度、反应速率、化学反应的平衡常数和动力学参数等。

下面详细介绍分光光度计的作用：1.测量物质的浓度分光光度计可以直接测量物质在特定波长下的吸光度，从而间接测量物质的浓度。

如果已知溶液的摩尔吸光系数(比如ε，摩尔透过系数)，就可以根据比尔定律计算出物质的浓度。

这种方法被广泛应用于化学、生化和制药领域，可用于测量多种物质，如蓝蛋白、DNA、RNA、核酸、蛋白质、药物等。

2.探测化学反应的动力学分光光度计可以监测和探测化学反应的动力学特性，如反应速率常数、反应中间体、反应机理和反应路径等。

通过测量正在进行的反应制量的变化，可以生成反应速率方程。

因此，分光光度计在研究化学反应机理、反应速率和反应平衡常数等方面扮演了重要角色，被广泛应用于分子生物学、化学和药学研究领域。

3.测量生物样品的质量分光光度计可以测量各种生物样品，如细胞、细胞器、蛋白质、DNA和RNA的质量。

这些样品在分光光度计上的吸收光谱与浓度或质量之间具有明显的关系，从而可以确定样品的质量和浓度。

4.检测样品中杂质的含量分光光度计可以检测样品中常见杂质的含量，提供关于样品的化学和物理性质的信息。

通过比较样品和纯净的溶液或化合物的光谱，可以确定样品中吸收或发射的频率和强度，从而分析样品的组分和杂质含量。

5.研究分子结构的变化分光光度计可以研究分子的结构，并且可以关注分子在反应过程中的变化。

通过测量分子的能量差异，可以使得分光光度计被用于研究分子的电子转移和能量转移，以及分子结构的变化。

以上是分光光度计的一些应用，还有很多其他的应用，这些应用使分光光度计成为一种十分重要的分析工具，可以广泛应用于科学研究和生产制造。

分光光度计测rna计算公式
分光光度计是用来测量物质溶液对特定波长光线的吸光度的仪器。

在测量RNA时，通常会使用260纳米的波长进行测量。

RNA的
浓度可以通过以下公式计算：
RNA浓度(μg/ml) = A260 × 40 μg/ml.
其中A260是在260纳米波长下测得的吸光度值。

这个公式的推
导涉及到质量吸光系数和Beer-Lambert定律，但在实际应用中，可
以简单地使用这个公式来计算RNA的浓度。

需要注意的是，这个公式是一个近似值，因为RNA在260纳米
波长下的吸光系数可能会有一定的变化，取决于RNA的纯度和构象。

因此，在进行RNA浓度测量时，最好使用纯度较高的RNA样品，并
在可能的情况下进行验证。

另外，分光光度计也可以用来计算RNA的纯度，通过测量在
260纳米和280纳米波长下的吸光度比值（A260/A280）。

这个比值
可以用来评估RNA样品中是否有蛋白质或其他污染物质存在。

总的来说，分光光度计是测量RNA浓度和纯度的重要工具，通过合理的使用和数据分析，可以得到准确的结果用于后续的实验和分析。

RNA浓度测定（紫外光吸收法）一、实验目的1.了解紫外吸收法测定RNA浓度的原理。

2.熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。

二、实验原理核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统(－C＝C一C＝C 一)，能够强烈吸收250~280nm 波长的紫外光。

核酸(DNA，RNA)的最大紫外吸收值在260nm 处。

遵照Lambert-Beer 定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定RNA物质的含量。

在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收光也随之表现出明显的差异，它们的摩尔消光系数也随之不同。

所以，在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行。

三、实验器材1.UV-9100型紫外可见分光光度计。

2.容量瓶100ml（*1）3.试管1.5cm*15cm（*9）4.吸管四、实验试剂1.酵母RNA2.标准RNA试剂（100微克每毫升）3.NaOH溶液五、实验步骤1.RNA粗品的制备称取8g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40ml，沸水浴加热30min，经常搅拌。

冷却，然后4000r|min离心15分钟。

取上清液，加入95%酸性乙醇40ml，边加边搅。

加毕，静置5-10min离心。

滤液先用95%乙醇洗2次，继而用无水乙醇洗2次，洗涤时可用细玻璃棒小心搅动沉淀。

乙醇滤干后，滤渣即为粗RNA。

2.样品的处理：称取0.2~0.25g粗品RNA，加2ml0.2%NaOH和1ml H2O溶解，调成糊状，再加入40~50mlH2O,溶解，调PH至7.0，后定容至100ml（再取2ml 定容至100ml 待测，此过程重复三次）3.标准曲线的绘制取六支试管，编号，按表加入试剂六、作表作图λ:260nm测得样品RNA浓度为25.3μg|ml样品RNA质量为25.3μg|ml×50×100ml=0.1265g样品RNA纯度：0.1265÷0.2133=59.3%七、误差分析1.根据理论在5~45μg|ml与吸光值成正比，而该范围的两个端点没有取到，六号试管RNA浓度已经超出了范围，不能作为曲线的参考值。

RNA浓度测定（xx吸收法）一、实验目的1.了解紫外吸收法测定RNA浓度的原理。

2.熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。

二、实验原理核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统(－C＝C一C＝C 一)，能够强烈吸收250~280nm波长的紫外光。

核酸(DNA，RNA)的最大紫外吸收值在260nm处。

遵照Lambert-Beer 定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定RNA物质的含量。

在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收光也随之表现出明显的差异，它们的摩尔消光系数也随之不同。

所以，在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行。

三、实验器材1.UV-9100型紫外可见分光光度计。

2.容量瓶100ml（*1）3.试管1.5cm*15cm（*9）4.吸管四、实验试剂1.酵母RNA2.标准RNA试剂（100微克每毫升）3.NaOH溶液五、实验步骤1.RNA粗品的制备称取8g干酵母粉于100ml烧杯中，加入0.2%NaOH溶液40ml，沸水浴加热30min，经常搅拌。

冷却，然后4000r|min离心15分钟。

取上清液，加入95%酸性乙醇40ml，边加边搅。

加毕，静置5-10min离心。

滤液先用95%乙醇洗2次，继而用无水乙醇洗2次，洗涤时可用细玻璃棒小心搅动沉淀。

乙醇滤干后，滤渣即为粗RNA。

2.样品的处理：称取0.2~0.25g粗品RNA，加2ml0.2%NaOH和1mlH2O溶解，调成糊状，再加入40~50mlH2O,溶解，调PH至7.0，后定容至100ml（再取2ml定容至100ml待测，此过程重复三次）3.标准曲线的绘制取六支试管，编号，按表加入试剂六、作表作图λ:260nmRNA m:0.2133g试管1219100.2328200.433437300.627546400.817655500.981A0.519B0.523C0.522标准0 RNA(ML)蒸馏水（ml）RNA浓度μg|ml吸光度1.210.80.60.4吸光度RNA样品线性(吸光度) 1000.0000.测得样品RNA浓度为25.3μg|ml样品RNA质量为25.3μg|ml×50×100ml=0.1265g样品RNA纯度：0.1265÷0.2133=59.3%七、误差分析1.根据理论在5~45μg|ml与吸光值成正比，而该范围的两个端点没有取到，六号试管RNA浓度已经超出了范围，不能作为曲线的参考值。

DNA及RNA含量测定方法一、光密度测定法[原理] DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰，利用这个原理我们测其OD260，再推算出其浓度。

一、光密度测定法[原理]，再DNA和RNA在260nm处有一很高的吸收峰，利用这个原理我们测其OD260推算出其浓度。

[仪器]分光光度计(紫外可见光两用)。

[试剂]水，DNA或RNA溶液。

[操作](1)取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到lml。

(2)用lml水做空白。

(3)把样品杯放在分光光度计比色槽上。

(4)每ul中DNA或RNA浓度(ug)将是OD值的10倍，例如稀释后样品在260nm 处OD值为0.2，则原DNA或RNA样品浓度为2ug／ul。

(5)如果想要检测样品的纯度，那么还要再测一次280nm处OD值，计算二者的比率，若比率接近2，则说明样品中核酸比较纯。

若比率小于1.6，则说明蛋白或其它吸收此波长的杂质在其中，建议再用酚／氯仿抽提继以乙醇沉淀以除去杂质。

(6)如果想检测样品中是否残存酚等有机杂质，那么还要测定一次230nm处OD值。

二、琼脂糖电泳测量法[原理]质粒DNA及微量DNA片段的浓度可与已知浓度的DNA同时进行电泳，根据结合的溴化乙锭荧光强度，估计其含量。

[仪器]紫外透射反射分析仪(上海康华生化仪器制造厂)；电泳槽；电泳梳；电泳仪。

[试剂]6×上样缓冲液：0.25％溴酚蓝；40％(W／V)糖。

pH8.3。

10×TBE电泳缓冲液：0.89mol/LTris-硼酸；0.02mol／LEDTANa20.8％琼脂糖：0.8％琼脂糖；100mi 1×TBE5mg／mlEB：0.5gEB；100ml三蒸水[操作](1)用1×TBE电泳缓冲液0.8％琼脂糖凝胶，加溴化乙锭其终浓度为0.5ug ／m1。

(2)加热使琼脂糖熔化均匀，取出室温冷却至50-60℃。

(3)取一块5×7cm玻璃板，置水平台上，放一微型点样梳，点样梳底部离玻璃平板的距离为0.5-1. 0mm。

紫外分光光度计用途
紫外分光光度计（Ultraviolet Visible Spectrophotometer）是一种用于定量分析物质的仪器，它能够测定样品在紫外及可见光区域的吸收光谱，并利用比较样品与标准物质的吸收差异来确定其成分的浓度。

紫外分光光度计可以广泛应用于物质的定量分析、质量检测及药物生产等领域。

下面将介绍紫外分光光度计的具体用途：
1. 分析生命科学领域中各种细胞、蛋白质、核酸等的浓度和纯度，如DNA、RNA的定量、蛋白质浓度检测等。

2. 分析药物化学领域中各种药物的浓度和纯度，如氨基酸类药物、生物合成药物等。

3. 分析食品、饮料、化妆品等行业中各种成分的浓度。

4. 紫外分光光度计还可以应用于环境科学领域中重金属、有机物质、水质检测及污染源分析等领域。

5. 在工业生产和科学研究中，紫外分光光度计可用于分析有机合成反应中的反应物和产物，还可以应用于质谱联用技术，以确定样品中含有的化合物的性质和浓度等相关参数。

总之，紫外分光光度计是一种重要的分析仪器，它广泛应用于生命科学、药物化学、环境科学、化学合成等相关领域。

它的
快速、高灵敏度和精确性赢得了广泛的赞誉，成为科学研究和商业实践的基石。

实验报告DNA浓度的测定实验报告：DNA 浓度的测定一、实验目的本次实验的主要目的是准确测定 DNA 样本的浓度，为后续的分子生物学实验提供可靠的数据支持。

通过不同的测定方法，比较其准确性和适用性，以便在实际研究中选择最合适的方法。

二、实验原理DNA 浓度的测定方法有多种，常见的包括紫外分光光度法、荧光定量法和琼脂糖凝胶电泳法等。

1、紫外分光光度法DNA 分子在 260nm 波长处有特征性的吸收峰，其吸光度（A）与DNA 浓度成正比。

根据 BeerLambert 定律，A ＝ε×l×c，其中ε 为摩尔吸光系数，l 为光程，c 为物质的量浓度。

通常认为 1 个 OD260 值相当于50μg/ml 双链 DNA 或40μg/ml 单链 DNA。

然而，由于存在 RNA、蛋白质等杂质的干扰，可能会导致测量结果不准确。

2、荧光定量法利用荧光染料与 DNA 结合后发出的荧光强度与 DNA 浓度成正比的关系来测定 DNA 浓度。

常用的荧光染料如 PicoGreen 具有高度特异性和灵敏度，能够有效区分 DNA 和 RNA 以及其他杂质。

3、琼脂糖凝胶电泳法通过将不同浓度的 DNA 标准品与待测 DNA 样本同时进行琼脂糖凝胶电泳，然后用溴化乙锭（EB）染色，在紫外灯下观察并比较条带的亮度，从而估算出待测 DNA 样本的浓度。

三、实验材料与仪器1、材料待测 DNA 样本、DNA 标准品、TE 缓冲液、RNA 酶 A、琼脂糖、PicoGreen 荧光染料、上样缓冲液等。

2、仪器紫外分光光度计、荧光分光光度计、琼脂糖凝胶电泳仪、凝胶成像系统等。

四、实验步骤1、紫外分光光度法（1）取适量待测 DNA 样本，用 TE 缓冲液稀释至一定倍数，使OD260 值在 01 10 之间。

（2）以 TE 缓冲液作为空白对照，在紫外分光光度计上分别测定260nm 和 280nm 处的吸光度值。

（3）计算 DNA 浓度和纯度。

DNA与RNA提取的区别及注意事项DNA与RNA提取的区别及注意事项引言：DNA和RNA是生物体内两种重要的核酸分子，它们在遗传信息的传递和蛋白质合成中起着关键作用。

DNA提取和RNA提取是生物学研究和分子诊断中常用的实验技术。

本文将探讨DNA与RNA提取的区别，包括提取方法、提取的样本类型及注意事项，以帮助我们更好地理解和应用这两种技术。

一、DNA提取与RNA提取的方法1. DNA提取方法：DNA提取技术旨在从细胞或组织样本中分离出DNA分子。

DNA提取方法一般包括以下几个步骤：1) 细胞破碎：将样本中的细胞破碎，使DNA被释放出来；2) 蛋白质去除：利用蛋白酶等方法去除样本中的蛋白质污染；3) DNA纯化：通过溶液浓缩、离心等步骤，去除样本中的杂质，使DNA得到纯化。

2. RNA提取方法：RNA提取技术旨在从细胞或组织样本中分离出RNA分子。

RNA提取方法一般包括以下几个步骤：1) 细胞破碎：将样本中的细胞破碎，使RNA被释放出来；2) RNA保护：由于RNA容易被外界核酸酶降解，需使用RNA保护试剂保护RNA的完整性；3) 蛋白质去除：利用蛋白酶等方法去除样本中的蛋白质污染；4) RNA纯化：通过溶液浓缩、离心等步骤，去除样本中的杂质，使RNA得到纯化。

二、DNA提取与RNA提取的样本类型1. DNA提取的样本类型：DNA提取适用于多种生物样本，包括：1) 细胞：体液中的白细胞、培养细胞等；2) 组织：肌肉组织、肿瘤组织等；3) 体液：血液、唾液、尿液等。

2. RNA提取的样本类型：RNA提取也适用于多种生物样本，但需要更加谨慎处理，以保持RNA 的完整性。

常见的样本包括：1) 细胞：培养细胞、血液中的白细胞等；2) 组织：肝脏、心脏、肺等；3) 体液：血液、唾液、尿液等。

三、DNA提取与RNA提取的注意事项1. 样本采集：1) 注意采集样本时的卫生防护，避免外界污染；2) RNA提取时需快速处理，以防RNA被降解。

UV分光光度计的原理1. 简介UV分光光度计是一种分析仪器，用于测量液体或气体溶液中的吸光度。

它的工作原理是通过紫外线光源照射进入样品池中，事先确定的波长范围内的光异物质分子的在光束中的吸收，得到样品的吸收光谱，进而定量分析样品。

UV分光光度计通常用于纯化合物或化学分析中。

2. 原理UV分光光度计的原理是基于光吸收定律的，即光在穿过某种物质时，被吸收的光量与物质的浓度成正比例关系。

因此，在所选的波长范围内测得的吸光度可用来确定样品中溶解物的浓度。

在实际应用中，利用一个单色光源通过一组具有可调节波长的色散元件（如棱镜或光栅）来选择所需的波长。

选择的波长以一个待校准的标准样品来确认，这时产生的光束就可以通过一个参比光电池（如硅、铟镓化合物或硒）与参比样品进行比较。

3. 组成部分UV分光光度计由以下部分组成：3.1 光源光源是发出特定波长范围内的光线。

通常情况下，氘灯作为光源，它能够提供高强度的光，满足吸收光谱中的敏感度。

3.2 光学系统光学系统包括选择波长和调节范围的色散元件（光栅或棱镜）和准确放置的样品池。

利用这种方法，光线可以聚焦到样品上，以便准确测量吸光度。

3.3 探测器探测器是测量样品吸收的光量的部分。

常用的探测器是光电池。

3.4 数据处理数据处理系统包括一个用于记录和分析吸收光谱的计算机程序。

4. 应用UV分光光度计广泛应用于生命科学、医学和环境科学中.对于光谱分析方面，其主要应用包括细胞生物学、药理学和分子生物学等领域。

具体的应用包括：4.1 DNA/RNA 分析在分子生物学方面，UV分光光度计用于DNA和RNA的定量。

由于DNA/RNA 中含有大量的碱基分子，这些分子具有吸收紫外光的能力。

因此，用UV分光光度计检测溶液的吸收光谱，可以确定DNA/RNA的浓度。

4.2 蛋白质和酶测定在药物化学和生物技术中，UV分光光度计用于测定蛋白质和酶的浓度。

这些生物大分子中含有大量的吸收光的基团（如芳香族氨基酸和三硫联磺酸等），因此可以用UV分光光度计测定其浓度。

一、实验目的1. 熟悉核酸提取的基本原理和实验操作步骤。

2. 掌握从动物组织中提取核酸的方法。

3. 了解核酸提取过程中需要注意的问题。

二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。

DNA主要存在于细胞核中，RNA主要存在于细胞质中。

本实验采用动物组织作为材料，通过破碎细胞膜和核膜，提取其中的核酸。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：动物肝脏、生理盐水、无水乙醇、氯仿、异丙醇、氯化钠、EDTA、Tris-HCl缓冲液、DNA酶、RNA酶等。

2. 实验仪器：研钵、研杵、移液枪、离心机、电热炉、紫外分光光度计、恒温水浴锅、玻璃棒等。

四、实验步骤1. 取新鲜动物肝脏，用生理盐水清洗，去尽血液，切成小块。

2. 将肝脏块放入研钵中，加入适量EDTA和Tris-HCl缓冲液，用研杵充分研磨，制成匀浆。

3. 将匀浆转移到离心管中，加入氯仿，剧烈振荡，使蛋白质和脂质与核酸分离。

4. 4℃、12,000 rpm离心15分钟，取上清液。

5. 将上清液加入等体积的异丙醇，静置2小时，使DNA沉淀。

6. 4℃、12,000 rpm离心10分钟，弃去上清液，用75%乙醇洗涤DNA沉淀。

7. 将DNA沉淀干燥，用适量Tris-HCl缓冲液溶解。

8. 通过紫外分光光度计测定DNA浓度。

9. 重复步骤2-8，提取RNA。

五、实验结果与分析1. 通过紫外分光光度计测定，DNA浓度为2.0 μg/μl，RNA浓度为1.5 μg/μl。

2. 从实验结果可以看出，DNA和RNA的提取成功，且提取效率较高。

六、实验讨论1. 在实验过程中，选择合适的动物组织是保证实验成功的关键。

本实验选用动物肝脏作为材料，因为肝脏中DNA和RNA含量较高，易于提取。

2. 在提取过程中，要尽量减少蛋白质和脂质的干扰。

本实验通过加入氯仿和异丙醇，使蛋白质和脂质与核酸分离。

3. 在实验过程中，要注意温度、pH值和离心速度等条件，以保证核酸的稳定性和提取效率。

分光光度计测rna计算公式全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：分光光度计是一种常用于测定溶液中物质浓度的仪器，利用物质在特定波长下对光的吸收来测定其浓度。

在生物学领域中，分光光度计常被用于测定核酸分子（如RNA）的浓度。

而测定RNA浓度的计算公式则是非常重要的一部分。

本文将介绍分光光度计测定RNA浓度的原理和计算公式。

一、分光光度计测定RNA浓度的原理在分光光度计中，通过设置适当的波长，使得待测样品中的RNA 分子对特定波长的光具有较强的吸收。

光通过样品时，被RNA分子吸收的光强度与RNA分子的浓度成正比。

通过测量入射光和出射光的光强度差，可以计算出样品中RNA的浓度。

在进行测量时，通常会使用一个叫做吸光度（Absorbance）的参数来表示样品对光的吸收程度。

吸光度与样品中RNA的浓度成正比，可以通过下面的公式来表示：Absorbance = ε × c × l二、计算公式的具体应用在实际操作中，我们通常会先制备一系列不同浓度的RNA标准溶液。

通过测定这些标准溶液的吸光度，可以建立起一条吸光度与RNA 浓度之间的标准曲线。

利用这条曲线，我们就可以通过测定待测样品的吸光度来计算出其RNA的浓度。

以测定RNA浓度为例，我们首先要根据实验条件选择适当的波长和摩尔吸光系数。

通常以260nm的波长为例，对于RNA而言，摩尔吸光系数ε约为40 ng/ml^-1·cm^-1。

c为RNA浓度，Absorbance为待测样品的吸光度，ε为摩尔吸光系数，l为光程。

通过这个公式，我们可以很方便地计算出样品中RNA 的浓度。

三、实验操作的注意事项在进行测定RNA浓度的实验时，有一些注意事项需要注意。

要小心操作，避免污染样品，以免影响测量结果。

要注意保持仪器的稳定性和精准度，尽量避免仪器的误差。

要注意选择适当的波长和摩尔吸光系数，以保证测量结果的准确性。

要注意样品的光程要一致，以保证吸光度的准确性。

超微量分光光度计的使用指南相比于传统的紫外可见分光光度计产品，超微量紫外分光光度计不仅可以大大减少检测样品的损耗，还因为检测光径减小而降低了对核酸或蛋白浓度稀释的要求，实在是太方便了。

超微量分光光度计可对微量样品进行测定，可对病原微生物，单克隆抗体等进行测定。

该设备不需要比色皿，用移液枪直接将样品滴加到检测平台上，测量时样品自动形成液柱，检测完成后只需用干净的吸水纸将样品从检测平台上擦拭干净即可。

适用于更宽浓度范围的样品检测，操作简便，不仅可用于测量DNA，RNA纯度、浓度，测量蛋白质浓度，也可用于一般物质分析中的吸光度检测。

超微量分光光度计的操作步骤：
1、将光度计接入电源，并确保仪器正常启动。

检查样品池的清洁程度，如有污染应先进行清洗。

2、根据实验要求，选择适当的测量波长和光程，以确保获得准确的测量结果。

3、将待测样品转移至样品池中。

注意避免气泡产生，同时确保样品填满整个池。

4、在一个相同的样品池中放置纯溶剂作为参比。

这样可以消除光源强度和仪器偏差对测量结果的影响。

5、选择测量模式，启动测量过程。

仪器将自动记录并显示样品和参比的吸光度值。

6、根据测量结果和标准曲线等，计算出样品中化合物的浓度。

可以。

DNA的碱基在260nm处有吸收。

用紫外分光光度计测260nm处DNA 分子的OD值，就能通过朗伯-比尔定律OD=εlc换算出浓度。

式子里l是吸收光路的长度；c是浓度，单位一般用μg/ml；ε是吸光系数，双链DNA一般取0.02ml/(μg·cm)，单链DNA因为增色效应，ε要大一些，取0.05ml/(μg·cm)。

如果知道一个DNA片段的碱基数，还可以换算出DNA片段的物质的量浓度。

取1μDNA，用ddH2O水稀释到1ml，以1ml ddH2O为对照，紫外分光光度计测定OD260，OD280，OD260/OD280(都在1.8左右之间，说明DNA样品纯度较高),concentration。

另，基因组DNA1％的琼脂糖凝胶电泳检测均呈现完整清晰条带没有拖尾，说明DNA 样品的完整性好，也可通过DNA marker 推算出DNA浓度。

目的：了解紫外吸收检测DNA浓度与纯度的原理，掌握测定方法。

原理：核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，单链寡核苷酸的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280），估计核酸的纯度。

纯净DNA的比值为1.8, RNA 为2.0。

若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低。

270nm存在高吸收表明有酚的干扰。

紫外分光光度法只能用于测定浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法。

试剂与仪器：提取的质粒DNA，紫外分光光度仪。

操作步骤：1) 分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零。

2) 取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入分光光度计的石英比色杯中。

3) 在260nm和280nm分别读出样品光密度值。

一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
实验仪器
微波炉
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
实验仪器
凝胶电泳槽
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
实验仪器
凝胶成像系统
一、DNA含量的测定方法 2.琼脂糖电泳凝胶检测法
实验方法
（1）制备琼脂糖溶液 （2）将琼脂糖溶液倒入电泳支架上，放上梳子，梳子须离开电泳 支架底部1mm左右。待凝胶凝聚后，小心拔去梳子，将支架放入 装有电极缓冲液的
DNA%＝
X 100
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
应用范围
仅限于对于提取的DNA不含有其他糖及糖的衍生物、芳香醛、蛋白质等杂质且浓 度大于50mg/l的情况下适用
一、DNA含量的测定方法 3.二苯胺法
优点： 缺点：
操作简便，有一定精确性，常用作教学性实验
对DNA样品纯度有一定要求，实验试剂非实验室常用试剂
2.琼脂糖电泳凝胶检测法
一、DNA含量的测定方法
实验原理
DNA分子在高于其等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。DNA分 子在电场中通过介质而泳动。对于线形DNA分子，其电场中的迁移率与其分子量、 电荷量、分子大小及构象有关。因此通过电泳可大致将分子量不同的DNA分离开。 之后通过在凝胶中加入少量EB（其分子可插入DNA的碱基之间，形成一种光络合 物，在254~365nm波长紫外光照射下呈现荧光）来对DNA进行检测和分析。而 相同分子量DNA浓度与其荧光亮度呈正比。因此DNA片段的浓度可与已知浓度的 DNA同时进行电泳，通过结合的EB荧光强度，来估计其含量。
2
4
1.6
4
1.2

用分光光度计测DNA、RNA的浓度用分光光度计测定质粒DNA的浓度一、目的熟练掌握分光光度法检测DNA纯度和浓度的方法。

二、原理DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm 处。

波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。

对标准样品来说，浓度为1μg / ml时，DNA钠盐的OD260＝0.02当OD260＝1时，dsDNA 浓度约为50μg / ml ssDNA浓度约为37μg / ml RNA浓度约为40μg / ml寡核苷酸浓度约为30μg / ml（youyu底物不同有差异）当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA吸光度的准确测定。

一般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230，计算其比值来衡量样品的纯度。

经验值：纯DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9,表明有RNA污染；＜1。

6，表明有蛋白质、酚等污染）纯RNA：1.7 ＜OD260/OD280＜2.0（＜1.7时表明有蛋白质或酚污染；＞2.0时表明可能有异硫氰酸残存）若样品不纯，则比值发生变化，此时无法用分光光度法对核酸进行定量，可使用方案二的方法或其他方法进行估算。

三、材料、试剂及器具1、材料提取的PUC19样品、PUC19标准样品2、试剂灭菌重蒸水，TE缓冲液四、操作步骤1、UV-240紫外分光光度计开机预热10min.2、用重蒸水洗涤比色皿，吸水纸吸干，加入TE缓冲液后，放入样品室的S池架上，关上盖板。

3、设定狭缝后校零。

4、将标准样品和待测样品适当稀释（DNA5μl或RNA4μl用TE 缓冲液稀释至1000μl）后，记录编号和稀释度。

5、把装有标准样品或待测样品的比色皿放进样品室的S架上，关闭盖板。

6、设定紫外光波长，分别测定230nm、260nm、280nm波长时的OD值。

7、计算待测样品的浓度与纯度。