YMC正相色谱柱 PackSIL,SIL-06,Diol-NP使用说明书
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日本 YMC 公司液相色谱柱及其产品YMC HPLC Columns and Products反相液相色谱柱,C18 (Reversed phase C18 columns, ODS)Hydrosphere C18 YMC-Pack Pro C18 RS YMC-Pack Pro C18 YMC-Pack ODS-A YMC-Pack ODS-AM YMC-Pack ODS-AQ YMC-Pack ODS-AL YMC-Pack PolymerC18 J'sphere ODS H-80 M-80 L80反相液相色谱柱,非C18 (Reversed phase columns, other than ODS)YMC-Pack Pro C8&C4 YMC-Pack C8 YMC-Pack C4 YMC-Pack TMS YMC-Pack Ph YMC-Pack CN YMC-Basic YMC carotenoid Wide-Pore columns正相液相色谱柱 (Normal phase columns)YMC-Pack SIL, SIL-06 YMC-Pack CN YMC-Pack Diol-NP YMC-Pack Polyamine II YMC-Pack PA YMC-Pack PVAYMC-Pack NH2高通量和液相色谱/质谱分析用液相色谱柱 (Columns for HTS and LC/MS analysis)液相色谱/质谱分析用卡套液相色谱柱 - LC/MS cartridge column 液相色谱/质谱分析用半微量液相色谱柱 - Semi-micro column for LC/MS YMC CombiChrom液相色谱柱 - YMC ComibiChrom columns生物大分子分离液相色谱柱 (Columns for BIO-MACRO molecular separation)水性凝胶色谱柱 - YMC-Pack Diol-SEC 蛋白/多肽分离液相色谱柱 - YMC-Pack PROTEIN-RP 大孔径液相色谱柱 - YMC Wide-Pore columns光学异构分离液相色谱柱 (Optical isomer separation columns)手性异构分离柱(光学异构/结构异构) - YMC CHIRAL CD BR Series 手性异构分离柱(光学异构) - YMC CHIRAL NEA 手性异构分离柱(光学异构) - YMC CHIRAL K 手性异构分离制备柱(光学异构) - YMC CHIRAL PREP CD ST/PM制备型液相色谱柱 (Preparative columns)分离/纯化方法的优化和回顾 高效制备分离柱 - YMC-Pack ProC18 研究开发系列套柱 - YMC-Pack R&D series 系列制备柱 - YMC-Pack preparative columns 大孔径制备柱 - YMC Wide-Pore Preparative Columns液相色谱柱填料 (Packing materials)YMC • GEL-制备色谱球形填料 - Spherical packing materials for preparative isolationYMC • GEL-制备色谱不规则形填料 - Irregular packing materials for preparative isolation动态轴向压缩柱 - Dynamic axial compression column液相色谱分析样品预处理附件 (Sample pretreatment Accessories)色谱产品的各种参数 (Material properties of products) 样品预处理 (Sample pretreatment) 液相色谱柱的保护 (Column protection) 液相色谱管道连接部件 (Tubing parts) 液相色谱柱空柱管 (Empty columns) 耐压性玻璃空柱管 (Pressure resistant empty glass column)YMC 液相色谱柱及其应用 YMC-ODS反相柱 YMC-非ODS反相柱 YMC-正相柱 YMC-手性柱 YMC-HTS和LC/MS用分析及分离柱 YMC-生物大分子分析和分离柱 YMC产品列表 YMC-液相色谱制备柱 YMC-色谱柱担体和填料 液相色谱样品预处理和色谱柱附件 YMC液相色谱柱的应用 液相色谱相关信息 --- 独立的质量检测体系,通过国际 ISO9001 质量认证 YMC公司所有生产过程都受到严格的质量控制,因此保证了产品质量的稳定性。
正相、反相和极性胶联柱使用手册分类:质量检验 2007.3.22 22:20 作者:LAI | 评论:0 | 阅读:146正相、反相和极性胶联柱使用手册Chrompack HPLC Normal-,Reversed phase and Polar bonded columns 注意:此色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂(pH>7.0)或酸性溶剂(pH<2.0)会导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前,你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
未正确地使用不能享受保修待遇。
1.简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。
硅胶形态的柱子用于正相(非水)条件。
反相(C8,C18,ODS,RP-8和RP-18)通常用于反相条件(水相)。
极性胶联型(APS,diol,CN和NH2)依照应用目的,可以用于正相和反相条件。
建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下,这是因为柱子在特定的条件下,固定相的性质会发生变化,所以在其他的条件下,会影响柱效。
也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下,这是因为这种过程会发生重复性差的问题(每一次注射之间和柱与柱之间的比较)。
2.色谱柱老化在开始分析工作以前,柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题,诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
A.在反相条件下老化要老化这类柱子,首先要使用乙腈或者甲醇淋洗,然后你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前,每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗)。
如果流动相中使用了添加物(例如缓冲液或离子对试剂),建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。
缓冲冲洗应当首先以低流速进行,最后再使用正常流速。
B.在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。
柱子的干燥(激活)或润湿(失活)可能是需要的。
使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。
干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。
YMC 中低压、高压兼容循环制备液相色谱仪 LC-Forte/RYMC 能提供以硅胶、0DS 为首的各种填料的从分析型到制备型的各类尺寸的色谱柱。
此次在高压制备液相色谱功能的基础上,为满足可充分使用中低压色谱柱、玻璃管柱等进行 了崭新的设计和软件开发,从而诞生了世界上首台中低压和高压兼容的产品LC-Forte/R 。
其最高流速为50ml/min ,不仅可以进行循环制备,还具备二元低压梯度混合功能。
从样品的粗分到高 纯化分离,一台设备可以完全覆盖。
循环制备色谱流程图产品特点:1 •触摸屏控制/谱图表示搭载了 10・4英寸大画面的彩色液晶触摸屏,在设备操作上直观灵活方便。
标配谱图显示软 件,无需另配记录仪,同时也可以保存大量数据。
采用了 YMC 独自研发的侧电动驱动式泵。
实现了稳定的送液和高耐压性能。
最大流量为2・输液泵50ml/min,最大耐压为30MPa °可以使用较大内径的色谱柱。
3 •可变3波长检测器LC-Forte/R搭载了新开发的可变3波长UV检测器(YUV-3400 )。
增大了液相的使用范围和色谱柱的选择性。
因而无需在意波长的选择,可直接进样,所以非常适合于天然产物的分离制备用。
另外,通过和示差折光检测器的共同使用,不会遗漏重要样品的检出。
* YUV-3400可减配。
客户可只选择RI检测器或YUR-2540作为配置。
嚼固定波长紫外检测器和示差折光检测器一体化的丫UR・2540,具有非常高的性价比,很受大学和研究机构的好评。
4.进样器手动(注射器注入)和自动(抽吸进样)两种进样方法均为标准配置。
微量样品时可通过手动注入,大量连续进样时可使用连续抽吸式注入。
对于同一样品的大量处理,精确的连续反复抽吸式注入是非常有效和省力的。
5.MPLC功能应用抽吸进样的功能,通过新开发的软件进行控制,并通过高性能的切换阀,可进行二元混合的梯度洗脫。
HPLC和MPLC的组合是目前业界内的首次尝试。
如色谱柱要长时间保存,必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中,正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中,离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中,并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3 、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品,随着使用时间或进样次数的增加,会出现色谱峰高降低,峰宽加大或出现肩峰的现象,一般来说可能是柱效下降。
(1 )、反相柱的再生:依次采用20-30 倍的色谱柱体积的甲醇:水=10 :90 (V/V),乙腈,异丙醇作为流动相冲洗色谱柱,完成后再以相反顺序冲洗色谱柱。
(2 )、正相柱的再生:依次以20-30倍色谱柱的体积的正己烷、异丙醇、二氯甲烷、甲醇作为流动相冲洗色谱柱,然后再以相反的顺序冲洗色谱柱。
要注意上述溶剂必须严格脱水。
4 、色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决办法色谱柱在使用中最常见的问题就是柱压升高,如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加,属于正常现象。
但柱压在使用过程中突然升高(系统管路堵塞及压力传感器故障除外),可能的原因有如下几点:(1 )、色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染;(2 )、色谱柱头的填料被样品污染;(3 )、色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂,形成结晶析出;(4 )、流动相PH 值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。
解决办法如下:(1 )、如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染,可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力,或者卸下色谱柱头,将其放在10%的稀硝酸内超声清洗10 分钟,后再用纯水超声10 分钟,重新装入色谱柱。
(2)、如确定色谱柱头的填料被污染,将柱头螺丝卸下,挖出柱内前段被污染的填料,用相同的柱填料重新填入,仔细修复后,重新安装上柱头螺丝。
(3 )、如确定定是盐结晶,用10% 的甲醇/ 水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解,再换高浓度甲醇。
(4 )、如果因PH 值使用不当,很难恢复。
前言液相色谱的分离原理是,在色谱柱流动相中样品的不同组分与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等作用,由于作用力的大小、强弱不同,各种组分在固定相中滞留的时间也不同,因而先后从以固定相中流出而得到分离。
因此液相色谱分离的关键之一是色谱柱中的固定相。
柱效的好坏直接影响目标化合物的分析和检测。
但在液相色谱运行过程中,色谱柱极易发生问题,因此掌握正确使用和维护色谱柱的知识非常必要。
色谱柱使用过程中容易发生柱堵塞引起系统压力过高;柱效低引起峰拖尾、变宽;柱污染、损坏导致鬼峰等问题。
引起这些问题的内在原因有:(1) 硅羟基的死吸附。
色谱柱的基材硅胶粒子表面存在硅胶羟基。
任何物质在色谱柱中都存在双分配效应,即在流动相与固定相之间进行分配,又在流动相与硅羟基之间进行分配。
被分析物质被硅羟基吸附称为非特异性吸附,或称死吸附。
当硅羟基对被分析物质的吸附趋近于饱和状态时,色谱柱柱效下降,峰形出现拖尾、变宽。
(2) 重金属。
色谱柱的基材硅胶粒子无论纯度多高,无论怎样处理,都会有不少于5 ×10- 6 的重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,产生不对称峰或拖尾峰。
例如儿茶素和大多数中药,因含有多酚结构,极易被金属氧化物氧化,影响其分离效果。
(3) 碳流失。
固定相经长期使用,会有部分碳链被流动相洗脱下来,随流动相一起流出色谱柱外, 造成碳流失。
(4) 缓冲液中盐的析出。
在做色谱分析时,有时流动相中会含有缓冲盐溶液。
分析结束后,如果没有先用含一定配比的水相流动相冲洗,而直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子中的微环境是高有机相、低水相。
这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐,将柱子堵塞,使柱压升高,柱效下降。
(5) 色谱柱变干。
如果对色谱柱保存不当,使色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干,造成色谱柱的损伤,影响分离效果。
2 色谱柱的使用新柱使用前应先检查产品包装、外观是否完好。
色谱柱的使用说明:(1)色谱柱使用前注意事项:色谱柱的储存液无特殊说明, 均为评价报告所示的流动相。
在使用前, 一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中, 如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂,应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下, 否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出, 堵塞色谱柱。
(2)流动相:流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯, 配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好, 尤其是含盐的流动相。
另外, 装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0, BDS C18适合于碱性化合物, PH值适用范围为2.0-10.0。
当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时, 每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗, 并完全置换掉原来所使用的流动相。
(3)样品:样品也要尽可能清洁, 可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE)对样品进行预处理;若样品不便处理, 要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时, 所有的溶剂和样品应严格脱水。
2.色谱柱的保存(1)反相色谱柱每天实验后的保养:使用缓冲液或含盐的流动相, 实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟, 洗掉色谱柱中的盐, 再用甲醇冲洗30分钟。
注意: 不能用纯水冲洗柱子, 应该在水中加入10%的甲醇, 防止将填料冲塌陷。
(2)长期保存色谱柱:如色谱柱要长时间保存, 必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中, 正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中, 离子交换柱可以储存于水(含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞)中, 并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3.色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品, 随着使用时间或进样次数的增加, 会出现色谱峰高降低, 峰宽加大或出现肩峰的现象, 一般来说可能是柱效下降。
(UM220901BC) 1/2YMC USER'S MANUAL使用说明书YMC-Triart Diol-HILIC, Accura Triart Diol-HILIC( HPLC :5 μm, 3 μm /UHPLC :1.9 μm )① 前言非常感谢您选用高效液相色谱柱YMC-Triart Diol-HILIC 与Accura Triart Diol-HILIC 系列产品。
YMC-Triart Diol-HILIC 系列是一款在杂化硅胶基质上键合二羟丙基的亲水性相互作用色谱(Hydrophilic Interaction Chromatography: HILIC )。
对于那些在反相色谱柱上保留能力差的强极性化合物,在高比例有机溶剂的洗脱液条件下可获得良好的保留。
我司在YMC-Triart Diol-HILIC 及Accura Triart Diol-HILIC 系列的制造过程中进行了严格的质量管理,保障了为客户提供稳定性能的产品(性能指标请参见色谱柱盒内的COLUMN INSPECTION REPORT )。
为了使提供给您的色谱柱最大限度发挥其性能并能够长时间使用,敬请仔细阅读使用说明书后正确使用本产品。
② 色谱柱的连接及系统设定中的注意点・ 色谱柱连接类型型号末尾为「PT 」、「PTH 」及「PTP 」的色谱柱的连接规格为Parker 型;「WT 」为Waters 型。
※ 「PTP 」型为柱内壁(接液部)采用PEEK 材质,外壁采用不锈钢的双重构造。
因其特殊性在进行色谱柱连接时存在若干注意的事项,详情参见使用说明书【色谱柱的柱连接注意事项 YMC-Triart Metal-free 】。
色谱柱连接规格产品名称 产品型号尾号硬件材质(柱管)※ 规格(法兰前端长度)连接部位规格 YMC-TriartWT 不锈钢 约 3 mmWaters 型PT/PTH 不锈钢约 2 mmParker 型YMC-Triart Metal-free PTP PEEK (内壁)与不锈钢(外壁)的双重构造Accura TriartPTC生物惰性涂敷处理的不锈钢・ 配管的连接部位如有空隙,可能会造成漏液或色谱柱性能(理论塔板、峰形对称性)降低。
正相色谱柱的使用方法正相色谱柱是化学分析领域中常用的分离技术之一,常用于化学试剂、生化制剂、化妆品等领域的研究工作中。
正因为其分离效果好、分离速度快、易于操作等特点,所以被广泛应用于科研、生产以及质量控制等方面。
在正相色谱柱的使用方面,有以下注意事项和使用方法。
注意事项选择柱子的密度首先,在购买正相色谱柱的时候,应该注意柱子的密度,密度高的柱子用于分离效果好的样品,密度低的柱子用于分离效果较差的样品。
同时,需要根据待分离的样品选择柱子的尺寸,以确保样品能完全覆盖柱子,从而获得更好的分离效果。
洗涤和保护正相色谱柱在使用之前和之后需要进行洗涤和保护工作,以保证柱子的稳定性和使用寿命。
洗涤方法基本都是相同的,主要采用纯水、乙醇、乙醚等有机溶剂进行清洗,在保证安全的情况下可以适当增加清洗强度,如采用强酸和强碱进行清洗。
在使用过程中,应该尽量避免高温和酸碱性物质的接触,这样可以有效地延长柱子的使用寿命。
储存方法正相色谱柱在存储过程中需要注意防潮、防晒,同时避免跌落和挤压等情况的发生。
储存的环境应该稳定,通风良好,温度在4-30℃之间,相对湿度不超过60%。
使用方法样品制备在使用正相色谱柱进行分离操作之前,需要对待分离的样品进行制备。
首先应该将样品溶解于合适的溶剂中,然后进行过滤和净化工作,以保证样品的纯度和稳定性。
实验条件设置在对样品进行分离的过程中,需要根据不同的实验目的和样品特性,分别设计不同的实验条件。
这些条件包括上样量、流速、温度、溶剂性质和比例等方面。
柱色调节在正相色谱柱使用的过程中,柱色的调节也是非常重要的一环。
根据柱子的类型和实验需要,可以通过调整柱子的机械位置或者采用外接装置,对流速、温度和压力等进行控制和调整。
数据分析在实验完成之后,需要对得到的数据进行分析和处理,评价分离的效果和柱子的稳定性。
数据处理方面需要恰当地选择评价指标和数据处理方法,以减少实验误差,提高分析的准确性和可靠性。
总结正相色谱柱在使用前和使用后需要进行洗涤和保护工作,在存储过程中需要注意防潮、防晒,同时避免跌落和挤压等情况的发生。
色谱柱的使用说明液相色谱柱是昂贵的色谱耗材,是液相色谱仪的心脏,有着严格的生产标准和测试程序,为了充分发挥色谱柱的性能,最大程度延长色谱柱的使用寿命,请仔细阅读此部分。
色谱柱的身份确认:为了保证每一支色谱柱的质量,月旭公司出品的每一支色谱柱都有唯一的身份编码,根据此编码,我公司可以将质量问题确定到个人,为了保障你的利益,收到色谱柱时,请完成以下程序:1、仔细查看包装盒是否完好,与自己请购的色谱柱是否一致;2、盒内是否有质量检验报告及检验人员签名;3、色谱柱表面有无碰撞伤痕,柱两端保护色谱柱的塑料堵头是否完整;4、色谱柱柱体是否贴有月旭公司色谱柱的身份标牌,并仔细对照包装盒与色谱柱标签上的型号和编号是否一致。
结构和安装:结构:月旭公司出品的高效液相色谱柱柱管材质均为316L不锈钢,两端结构完全一致,其结构如图一:图一 Ultimate○R系列液相色谱柱结构安装:为了保证色谱柱使用时有最高柱效,连接管路尽量使用适合的细径管路,色谱柱进出口的连接必须非常适配,连接管端口部分必须平整,不能有毛刺和切口斜面等现象,各种连接管路请使用专业工具切割修整;1、取出色谱柱,仔细查看柱身洗脱液流向箭头标识,用手旋下柱两端的塑料堵头,放好色谱柱,使洗脱液流向和柱身所示流向一致,如图二所示:图二色谱柱的正确连接2、用手将“连接管路的不锈钢或者其它材质的接头”旋入色谱柱两端,管路接头要和色谱柱接口连接紧密,确保零死体积连接,在色谱仪正常运行时没有漏液。
色谱柱的正确使用:色谱柱是昂贵的色谱耗材,正确的使用和维护对保证色谱柱的正常使用和延长寿命至关重要。
1、色谱柱使用前注意事项:1)、色谱柱内的存储液:月旭公司色谱柱的存储液,如没有特殊说明均为质检报告中所述流动相,氨基(NH2)、氰基(CN)、硅胶柱(SiO2)均为正相条件–正己烷/异丙醇体系,反相柱(C1、C4、C8、C18、苯基Phenyl)均为甲醇/水体系,检测前,请用相互溶的试剂将其替换;2)、新色谱柱的平衡:新反相色谱柱:用纯甲醇冲洗色谱柱30个柱体积,再更换成能与检测流动相互溶的流动相冲洗30个柱体积,最后用流动相稳定系统至基线平稳;新的正相色谱柱:用异丙醇0.5ml/min冲洗30个柱体积,再更换成检测流动相稳定系统至基线平稳;2、色谱柱的使用方向:月旭公司出品的高效液相色谱柱标签上的箭头方向为流动相流向,使用过程时也按此方向,避免双向混用,导致两端填料同时污染,不利于色谱柱的再生和维护;3、流动相和样品保持洁净:由于悬浮在样品或流动相中的细小颗粒会堵塞色谱柱两端的筛板,各种试剂尽量使用色谱纯级的,用量少的试剂纯度至少是分析纯,水最好是超纯水和全玻璃器皿双蒸水,使用前建议用0.45μm的滤膜过滤;样品溶液使用针筒过滤;样品中的杂质是造成色谱柱污染、柱效下降的最主要原因之一,复杂样品可选样品预处理柱(SPE柱)进行样品处理,如果不方便处理,最好使用相匹配的保护柱,样品溶剂与流动相要相匹配,不能出现样品不互溶,极性相差太大等想象,否则会造成色谱峰形变差,鬼峰等现象,使用流动相溶解样品能有效的避免上述情况发生;4、色谱柱允许使用的pH范围:每款色谱柱都有自己特定允许使用的pH范围,请仔细对照你的色谱柱的使用pH范围(表一),在pH范围以外使用,会使硅胶基质溶解或键合相水解,对色谱柱造成不可恢复的损伤,如果在临界pH处使用,分析结束后立即用适合于色谱柱保存并与当前使用的流动相互溶的淋洗液置换掉。
液相色谱柱安装与使用说明液相色谱柱安装与使用说明液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成,其中液相色谱柱的正确安装和使用,是液相色谱工作的关键;也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。
一、液相色谱柱的安装:1、液相色谱柱的结构:a、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。
柱接头采用低死体积结构,柱接头是两端螺纹组件,一端是为7/16英寸外螺纹,另一端是3/16英寸的内螺纹(国内外已规范化)。
7/16英寸外螺纹与1/4英寸柱管(Φ6.35mm)连接,中间放置压坏用于密封。
3/16英寸的内螺纹与1/16英寸(Φ1.57mm)的连接管连接,中间也放置压环用于柱接头的密封。
为了尽量减少柱外死体积,在安装色谱柱时,用Φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环后要尽量插到底,然后再拧紧空心螺钉。
压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上(连接管通过压环后露出的管长度应严格控制在2.5mm 长或其他固定尺寸)。
在两端柱接头内,柱管两端各放置一片不锈钢滤片(或滤网),用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。
空柱各组件均为316#不锈钢材质,能耐受一般的溶剂作用。
但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。
b、柱填料:液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的,柱子的分类是依据填料类型而定。
正相柱:多以硅胶为柱填料。
根据外型可分为无定型和球型两种,其颗粒直径在3—10 µm的范围内。
另一类正相填料是硅胶表面键合—CN,-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。
反相柱:主要是以硅胶为基质,在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。
也有无定型和球型之分。
常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等,其颗粒粒径在3—10 µm之间。
2,色谱柱的安装:a、拆开柱包装盒,确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。
USP 色谱柱Chromatographic ReagentsThe following list of packings (L), phases (G), and supports (S) is intended to be a convenient reference for the chromatographer. [note—Particle sizes given in this listing are those generally provided. Where other, usually finer, sizes are required, the individual monograph specifies the desired particle size. Within any category of packings or phases listed below, there may be a wide range of columns available. Where it is necessary to define more specifically the chromatographic conditions, the individual monograph so indicates.]Change to read:PackingsL1—Octadecyl silane chemically bonded to porous silica or ceramic micro-particles, 1.5 to 10 µm in diameter, or a monolithic silica rod.L2—Octadecyl silane chemically bonded to silica gel of a controlled surface porosity that has been bonded to a solid spherical core, 30 to 50 µm in diameter.L3—Porous silica particles, 3 USP31 to 10 µm in diameter, or a monolithic silica rod. USP31L4—Silica gel of controlled surface porosity bonded to a solid spherical core, 30 to 50µm in diameter.L5—Alumina of controlled surface porosity bonded to a solid spherical core, 30 to 50µm in diameter.L6—Strong cation-exchange packing–sulfonated fluorocarbon polymer coated on a solid spherical core, 30 to 50 µm in diameter.L7—Octylsilane chemically bonded to totally porous silica particles, 1.5 to 10 µm in diameter, or a monolithic silica rod. USP31L8—An essentially monomolecular layer of aminopropylsilane chemically bonded to totally porous silica gel support, 3 to 10 µm in diameter.L9—Irregular or spherical, totally porous silica gel having a chemically bonded, strongly acidiccation-exchange coating, 3 to 10 µm in diameter.L10—Nitrile groups chemically bonded to porous silica particles, 3 to 10 µm in diameter.L11—Phenyl groups chemically bonded to porous silica particles, 1.5 to 10 µm in diameter.L12—A strong anion-exchange packing made by chemically bonding a quaternary amine to a solid silica spherical core, 30 to 50 µm in diameter.L13—Trimethylsilane chemically bonded to porous silica particles, 3 to 10 µm in diameter.L14—Silica gel having a chemically bonded, strongly basic quaternary ammoniumanion-exchange coating, 5 to 10 µm in diameter.L15—Hexylsilane chemically bonded to totally porous silica particles, 3 to 10 µm in diameter.L16—Dimethylsilane chemically bonded to porous silica particles, 5 to 10 µm in diameter.L17—Strong cation-exchange resin consisting of sulfonated cross-linkedstyrene-divinylbenzene copolymer in the hydrogen form, 7 to 11 µm in diameter.L18—Amino and cyano groups chemically bonded to porous silica particles, 3 to 10 µm in diameter.L19—Strong cation-exchange resin consisting of sulfonated cross-linkedstyrene-divinylbenzene copolymer in the calcium form, about 9 µm in diameter.L20—Dihydroxypropane groups chemically bonded to porous silica particles, 5 to 10 µm in diameter.L21—A rigid, spherical styrene-divinylbenzene copolymer, 5 to 10 µm in diameter.L22—A cation-exchange resin made of porous polystyrene gel with sulfonic acid groups, about 10 µm in size.L23—An anion-exchange resin made of porous polymethacrylate or polyacrylate gel withquaternary ammonium groups, about 10 µm in size.L24—A semi-rigid hydrophilic gel consisting of vinyl polymers with numerous hydroxyl groups on the matrix surface, 32 to 63 µm in diameter.[note—Available as YMC-Pack PVA-SIL manufactured by YMC Co., Ltd. and distributed by Waters Corp.([url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm][/url]).]L25—Packing having the capacity to separate compounds with a molecular weight range from 100–5000 (as determined by polyethylene oxide), applied to neutral, anionic, and cationic water-soluble polymers. A polymethacrylate resin base, cross-linked with polyhydroxylated ether (surface contained some residual carboxyl functional groups) was found suitable.L26—Butyl silane chemically bonded to totally porous silica particles, 3 to 10 µm in diameter.L27—Porous silica particles, 30 to 50 µm in diameter.L28—A multifunctional support, which consists of a high purity, 100 , spherical silica substrate that has been bonded with anionic exchanger, amine functionality in addition to a conventional reversed phase C8 functionality.L29—Gamma alumina, reverse-phase, low carbon percentage by weight, alumina-based polybutadiene spherical particles, 5 µm in diameter with a pore volume of 80 .L30—Ethyl silane chemically bonded to totally porous silica particles, 3 to 10 µm in diameter.L31—A hydroxide-selective, strong anion-exchange resin-quaternary amine bonded on latex particles attached to a core of 8.5-µm macroporous particles having a pore size of 2000 and consisting of ethylvinylbenzene cross-linked with 55% divinylbenzene.L32—A chiral ligand-exchange packing–l-proline copper complex covalently bonded to irregularly shaped silica particles, 5 to 10 µm in diameter.L33—Packing having the capacity to separate dextrans by molecular size over a range of4,000 to 500,000 Da. It is spherical, silica-based, and processed to provide pH stability.[note—Available as TSKgel G4000 SW XL from Tosoh Biosep([url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm][/url]). ]L34—Strong cation-exchange resin consisting of sulfonated cross-linkedstyrene-divinylbenzene copolymer in the lead form, about 9 µm in diameter.L35—A zirconium-stabilized spherical silica packing with a hydrophilic (diol-type) molecular monolayer bonded phase having a pore size of 150 .L36—A 3,5-dinitrobenzoyl derivative of l-phenylglycine covalently bonded to 5-µm aminopropyl silica.L37—Packing having the capacity to separate proteins by molecular size over a range of2,000 to 40,000 Da. It is a polymethacrylate gel.L38—A methacrylate-based size-exclusion packing for water-soluble samples.L39—A hydrophilic polyhydroxymethacrylate gel of totally porous spherical resin.L40—Cellulose tris-3,5-dimethylphenylcarbamate coated porous silica particles, 5 to 20µm in diameter.L41—Immobilized 1-acid glycoprotein on spherical silica particles, 5 µm in diameter.L42—Octylsilane and octadecylsilane groups chemically bonded to porous silica particles, 5 µm in diameter.L43—Pentafluorophenyl groups chemically bonded to silica particles by a propyl spacer, 5 to 10 µm in diameter.L44—A multifunctional support, which consists of a high purity, 60 , spherical silica substrate that has been bonded with a cationic exchanger, sulfonic acid functionality in addition to a conventional reversed phase C8 functionality.L45—Beta cyclodextrin bonded to porous silica particles, 5 to 10 µm in diameter.L46—Polystyrene/divinylbenzene substrate agglomerated with quaternary amine functionalized latex beads, about 10 µm in diameter.L47—High-capacity anion-exchange microporous substrate, fully functionalized with trimethlyamine groups, 8 µm in diameter.[note—Available as CarboPac MA1 and distributed by Dionex Corp.([url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm][/url]).]L48—Sulfonated, cross-linked polystyrene with an outer layer of submicron, porous,anion-exchange microbeads, 15 µm in diameter.L49—A reversed-phase packing made by coating a thin layer of polybutadiene onto spherical porous zirconia particles, 3 to 10 µm in diameter.[note—Available as Zirchrom PBD, manufactured by ZirChrom Separations, Inc., distributed by Alltech,[url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm][/url].]L50—Multifunction resin with reversed-phase retention and strong anion-exchange functionalities. The resin consists of ethylvinylbenzene, 55% cross-linked with divinylbenzene copolymer, 3 to 15 µm in diameter, and a surface area not less than 350 m2 per g. Substrate is coated with quaternary ammonium functionalized latex particles consisting of styrene cross-linked with divinylbenzene.[note—Available as OmniPac PAX-500 and distributed by Dionex Corp.([url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm][/url]).]L51—Amylose tris-3,5-dimethylphenylcarbamate-coated, porous, spherical, silica particles, 5 to 10 µm in diameter.[note—Available as Chiralpak AD from Chiral Technologies, Inc.,([url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm][/url]).]L52—A strong cation-exchange resin made of porous silica with sulfopropyl groups, 5 to 10 µm in diameter.[note—Available as TSK IC SW Cation from Tosoh Biosep([url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm][/url]). ]L53—Weak cation-exchange resin consisting of ethylvinylbenzene, 55% cross-linked withdivinylbenzene copolymer, 3 to 15 µm diameter. Substrate is surface grafted with carboxylic acid and/or phosphoric acid functionalized monomers. Capacity not less than 500 µEq/column.[note—Available as IonPac CS14 distributed by Dionex Corp.([url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm][/url]).]L54—A size exclusion medium made of covalent bonding of dextran to highly cross-linked porous agarose beads, about 13 µm in diameter.[note—Available as Superdex Peptide HR 10/30 from Amersham Pharmacia Biotech([url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm]www.amershambi [/url]).]L55—A strong cation-exchange resin made of porous silica coated with polybutadiene–maleic acid copolymer, about 5 µm in diameter.[note—Available as IC-Pak C M/D from Waters Corp.([url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm][/url]).]L56—Propyl silane chemically bonded to totally porous silica particles, 3 to 10 µm in diameter.[note—Available as Zorbax SB-C3 from Agilent Technologies([url=file:///D:/pharmacopoeia//chem]/chem[/url]).]L57—A chiral-recognition protein, ovomucoid, chemically bonded to silica particles, about 5µm in diameter, with a pore size of 120 .[note—Available as Ultron ES-OVM from Agilent Technologies([url=file:///D:/pharmacopoeia//chem]/chem[/url]).]L58—Strong cation-exchange resin consisting of sulfonated cross-linkedstyrene-divinylbenzene copolymer in the sodium form, about 6 to 30 µm 1S (USP31) in diameter.[note—Available as Aminex HPX-87N from Bio-Rad Laboratories, (2000/01 catalog,#125-0143)[url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm][/url].]L59—Packing having the capacity to separate proteins by molecular weight over the range of 10 to 500 kDa. It is spherical (10 µm), silica-based, and processed to provide hydrophilic characteristics and pH stability.[note—Available as TSKgel G3000SW Column (analytical column) and TSKgel Guard (guard column) from Tosoh Biosep (part numbers 05789 and 05371, respectively)([url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm][/url]). ]L60—Spherical, porous silica gel, 10 µm or less in diameter, the surface of which has been covalently modified with alkyl amide groups and endcapped.[note—Available as Supelcosil ABZ from Supelco([url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm]/sup elco[/url]).]L61—A hydroxide selective strong anion-exchange resin consisting of a highly cross-linked core of 13 µm microporous particles having a pore size less than 10 units and consisting of ethylvinylbenzene cross-linked with 55% divinylbenzene with a latex coating composed of 85 nm diameter microbeads bonded with alkanol quaternary ammonium ions (6%).[note—Available as Ion Pac AS-11 and AG-11 from Dionex([url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm][/url]).]L62—C30 silane bonded phase on a fully porous spherical silica, 3 to 15 µm in diameter.L63— Glycopeptide teicoplanin linked through multiple covalent bonds to a 100- units spherical silica.[Note—Available as Chirobiotic T from Astec([url=file:///D:/pharmacopoeia//default.htm][/url]).] 1S (USP31)美国药典(USP)规定的色谱柱编号见下面,是对应的色谱柱类型。
液相色谱柱操作技术杨征敏液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。
正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合CN,NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团(ODS)称为C18 柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2 和苯基柱等。
另外还有离子交换柱,GPC 柱,聚合物填料柱等。
反相色谱柱的选择1.柱子的PH 值使用范围反相柱优点是固定相稳定,应用广泛,可使用多种溶剂。
但硅胶为基质的填料,使用时一定要注意流动相的PH 范围。
一般的C18 柱PH 值范围都在28,流动相的PH 值小于2 时,会导致键合相的水解;当PH 值大于7 时硅胶易溶解;经常使用缓冲液固定相要降解。
一旦发生上述情况,色谱柱入口处会塌陷。
同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。
如果流动相PH 较高或经常使用缓冲液时,建议选择PH 范围大的柱子。
2.戴安公司Acclaim 柱子介绍—极性封尾C16 固定相柱戴安公司有28 种柱子,Acclaim 反相柱填料高纯,金属含量极低,完全封尾。
PH 29范围内兼容,低流失,高柱效。
尤其是推出的Acclaim 极性封尾C16 柱,是最先商品化的磺酰氨O链接键的色谱柱,具极低的硅羟基活性,能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用。
对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形,与现有的一流色谱柱相比有更好的立体选择性。
液相色谱柱的使用色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。
在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。
但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
1、样品的前处理a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45μm 的过滤膜过滤除去微粒杂质(固体不溶物、无机盐和细菌)。
成功应用于高水相流动相中,可用100%水为流动相YMC-Pack ODS-AQ是一种独特的反相填料,具有疏水性的高碳含量和相对亲水的表面,由于亲水性表面,其可以被极性流动相“湿润”, 可在高水相甚至100%水的流动相中,提供非常好的色谱保留时间再现性和优良的色谱峰,这是在普通ODS柱上非常困难的。
对极性化合物有较强的保留在高水相流动相中,YMC-Pack ODS-AQ能给出比普通ODS柱更长的保留时间,这是由于其上面的C18配基提高了流动相从表面向硅胶孔的渗透作用,由于其与极性流动相的排斥使C18链上的缠绕减少,形成比普通ODS更多相互作用的配基。
与普通的ODS相比具有不同的选择性在使用典型的反相流动相时,YMC-Pack ODS-AQ与普通的ODS相比,显示出不同的选择性,在分析极性化合物时差异更加明显,其具有更长的保留时间和更好的分辨能力。
良好的水解稳定性,保证了色谱柱的长寿命YMC-Pack ODS-AQ填料表面的疏水的封端,使其在接触极性流动相,避免烷基键合相水解,保证了在酸性环境下比普通ODS柱具有更长的使用寿命。
疏水的封端可以使YMC-Pack ODS-AQ表面接触极性触媒。
避免键合烷基水解,保证了在酸环境下的比传统C18柱更常的使用寿命。
适合应用在生物化学领域YMC-Pack ODS-AQ非常适合分析和纯化肽类和生物分子。
120Å和200Å两种孔径都可应用,其对所有类型的肽类的分离都有效。
碱性非常强的肽类(6-16残基是碱性的)在孔径200Å的填料上纯化时,具有良好的对称性。
技术参数粒径(um) 3μm, 5μm,10μm孔径(Å)120Å,200Å含碳量(%) 14%, 10%pH范围 2.0-7.5特点:∙非常适用于水剂洗脱液和对高极性化合物的分析∙可以不用离子对试剂简化分离过程∙对水洗提液的高保持力∙对酸洗提液的良好稳定性∙对如多肽,蛋白,核酸类生物分子的良好分离∙与传统ODS不同的选择性。
YMC HPLC COLUMN USER'S MANUAL YMC-Pack SILYMC-Pack SIL-06使用说明书YMC-Pack Diol-NP1.前言非常感谢您这次选用YMC公司的高效液相色谱柱YMC-Pack SIL系列。
本公司在YMC-Pack SIL系列的制造过程中进行了严格的质量管理,保证能为客户提供最高品质的产品。
为了使供给您的色谱柱最大地发挥其性能并能够长时间地被正确使用,请认真阅读本产品的使用说明书。
2.色谱柱的连接型号在色谱柱标签上所记载的号码后面的()内有标记符号表示。
W:waters 的互换连接样式3.出厂时柱内的保存溶剂在产品盒内的附件COLUMN INSPECTION REPORT(检测报告)中有标示。
在进行流动相的置换时请注意溶剂的混合性。
如果色谱柱需要长期保存的话请置换为此溶剂。
4.流动相(洗脱液)・一般来说使用非水性溶剂,正己烷,氯仿等是基本的溶剂。
如需缩短极性成分的洗脱时间,请添加适量的异丙醇,乙酸乙脂等。
・在流动相中可添加使用水、醋酸、蚁酸等,但考虑到分离的重现性,我们推荐每个样品最好有其专用柱。
・使用时请按照色谱柱标签上的箭头方向来进行通液操作。
・流动相的pH值通常请调在2.0到7.5之间。
5.色谱柱的清洗及保存(一般方法)・如推断色谱柱有极性物质吸附时,请使用异丙醇进行充分的清洗。
・如使用的流动相中含有酸或碱时,请把流动相置换成不含酸碱的溶剂后,再封入有机溶剂或正己烷/异丙醇等来进行保存。
6. 其他的使用环境・柱压在柱长150mm以下为20MPa左右,250mm是25MPa左右是为其上限基准值。
但内径为10mm以上的色谱柱的压力以10MPa左右为其压力上限基准。
・反复进行样品注入后,柱压可能会升高。
如果发生这种情况,请使用YMC Duo-filter对样品进行预处理过滤。
另外对于易造成筛板堵塞的样品请使用预柱过滤网(XRPRCS02)来进行处理。
YMC HPLC COLUMN USER'S MANUAL YMC-Pack SIL
YMC-Pack SIL-06使用说明书
YMC-Pack Diol-NP
1.前言
非常感谢您这次选用YMC公司的高效液相色谱柱YMC-Pack SIL系列。
本公司在YMC-Pack SIL系列的制造过程中进行了严格的质量管理,保证能为客户提供最高品质的产品。
为了使供给您的色谱柱最大地发挥其性能并能够长时间地被正确使用,请认真阅读本产品的使用说明书。
2.色谱柱的连接型号
在色谱柱标签上所记载的号码后面的()内有标记符号表示。
W:waters 的互换连接样式
3.出厂时柱内的保存溶剂
在产品盒内的附件COLUMN INSPECTION REPORT(检测报告)中有标示。
在进行流动相的置换时请注意溶剂的混合性。
如果色谱柱需要长期保存的话请置换为此溶剂。
4.流动相(洗脱液)
・一般来说使用非水性溶剂,正己烷,氯仿等是基本的溶剂。
如需缩短极性成分的洗脱时间,请添加适量的异丙醇,乙酸乙脂等。
・在流动相中可添加使用水、醋酸、蚁酸等,但考虑到分离的重现性,我们推荐每个样品最好有其专用柱。
・使用时请按照色谱柱标签上的箭头方向来进行通液操作。
・流动相的pH值通常请调在2.0到7.5之间。
5.色谱柱的清洗及保存(一般方法)
・如推断色谱柱有极性物质吸附时,请使用异丙醇进行充分的清洗。
・如使用的流动相中含有酸或碱时,请把流动相置换成不含酸碱的溶剂后,再封入有机溶剂或正己烷/异丙醇等来进行保存。
6. 其他的使用环境
・柱压在柱长150mm以下为20MPa左右,250mm是25MPa左右是为其上限基准值。
但内径为10mm以上的色谱柱的压力以10MPa左右为其压力上限基准。
・反复进行样品注入后,柱压可能会升高。
如果发生这种情况,请使用YMC Duo-filter对样品进行预处理过滤。
另外对于易造成筛板堵塞的样品请使用预柱过滤网(XRPRCS02)来进行处理。
・色谱柱的使用温度上限为50℃,但是,由于流动相的pH值等因素会影响到色谱柱的寿命,所以通常情况下请在20℃~ 40℃范围内使用。
●如果产品出现破损,或与所订购产品不符时,请立即联系经销商。
YMC上海代表处:上海市长宁区仙霞路319号
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(UM070625AC)。