考染与银染讲课稿

常用的蛋白质染色试剂分为已考马斯亮蓝为代表的有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。

其中考马斯亮蓝染色法的应用较为广泛，现将其与其他的蛋白质染色方法(主要是银染法)作一比较，帮助大家更好地去选择合适的蛋白质染色方法。

蛋白质的染色常用的有4类：有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。

其中有机试剂染色以考马斯亮蓝染色法(Coomasie brilliant blue ，CBB)为代表，在蛋白质分析中常用，但对低丰度蛋白质的显现较差;银染灵敏度虽高，却常与质谱不兼容；荧光染色以SYPRO试剂为主，蛋白质检测灵敏度高，能兼容质谱，但由于需要配备特殊的检测仪器及试剂的昂贵，未被作为常规方法使用；而同位素显色则存在安全性和操作局限性等问题。

因此，筛选简便、节约、检测灵敏度高、质谱兼容的蛋白质着色法是蛋白质组研究所需。

由于考马斯亮蓝染色法的广泛运用，近年来就考马斯亮蓝染色法在提高其灵敏性方面研究者们作了许多改进，方法众多，评价不一。

我们在作双向凝胶电泳时，将常用的几种考马斯亮蓝染色法及银染进行了比较，并就其染色影响因素作岀分析。

试剂固相pH 梯度干胶条(IPG strip pH3-10NL , IPG strip pH5-8 , 17cm )、urea、CHAPS、TBP、DTT、Bio-Lyte裂解，静置30分钟，15500X g离心30分钟，取上清，进行蛋白质定量。

单向定量电泳取蛋白质分子量标准物，第一次按1 : 2稀释后，以后按1 : 3倍比例逐级稀释，经4级稀释后，取15卩l 上样液上样，性半乳糖苷酶上样量依次分别为1川、0.24 tig 0.062 tig、0.0156 0.004 心作12g/L SDS-聚丙烯酰胺凝胶单向电泳，同时电泳4份胶，显色以确定染色灵敏度。

双向电泳取3001样品液沿水化盘中槽的边缘自左向右线性加入，将17cm IPG胶条胶面朝下置于槽中，静置45分钟后覆盖矿物油，在20 C溶胀11〜16小时。

蛋白质银染原理与方法2009-04-28 16:38:24 来源:未知【大中小】评论: 条-摘要：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是2～5.0ng／蛋白条带。

原理：蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合，检测极限是2～5.0ng／蛋白条带。

①SDS-PAGE电泳。

注意：银染检测蛋白质的水平是在100ng左右，与CommassieBlue染色比较，银染加样量要少。

否则难以得到清晰的电泳分辨率。

②电泳结束后，戴手套将PAGE胶转移到干净的玻璃培养皿或TIP头盒盖中。

加入25ml FixingSolution（固定液），室温振荡保温30min。

胶需要完全淹没在固定液中。

③彻底弃去固定液，加入25mlIncubationSolution（保育液），室温振荡保温30min。

胶需要完全淹没在保育液中。

④彻底弃去IncubationSolution（保育液），用50ml去离子水洗3次，每次5min。

⑤准备：取2.5ml 10XSilvering Solution, 加入22.5mL水，混匀后使用。

⑥弃去洗涤的水，加入25mlSilvering Solution (银染液)。

室温振荡保温20min。

⑦彻底弃去银染液，加入25mLDevelopingSolution（显色液），室温振荡保温1~10min。

注意观察目的条带。

如果目的条带出现了，可以考虑终止显色。

显色时间不要过长，否则本底较深。

⑧彻底弃去显色液,加入25mLStopping Solution（终止液），室温振荡保温10min。

⑨彻底弃去StoppingSolution（终止液），用50mL去离子水洗3次，每次5min。

弃去洗涤的水，加入25mL PreservingSolution（保护液），室温振荡保温20min。

银染PAGE 胶可以拍照保存，也可以室温玻璃纸干燥。

今天第一次银染，结果出来啥也没有，凝胶就像一块海带一样。

《我学做“蜡染”》是上海教育出版社《美术》第六册第三单元“感受民间艺术”中的第二课。

本课是在学习了上节课“扎染”以后介绍的另一种民间染布工艺——蜡染。

通过学生的自身的体验，初步懂得民间蜡染的基本工艺，尝试用油画棒在生宣纸上描绘形象，加以染色的制作方法。

根据“油水分离”的原理，感受民间蜡染制作工艺的特点。

通过作品欣赏，感受民间蜡染艺术，体验蜡染制作的乐趣，培养学生对各种绘画的兴趣。

小学三年级学生对于此课，以纸蜡染的方式让学生制作尝试，大大降低了民间布艺蜡染的制作难度和节省制作时间。

简单的绘制方式，良好的视觉效果可以很大程度地提高儿童的学习兴趣。

由于前一课“扎染”作为铺垫，学生对于宣纸的使用也不再显得陌生，较容易的使学生掌握好上蜡的技巧。

同时，教学中教师要注意有意识引导学生将各种活动讨论的重点放在图形的设计、色彩的配合和蜡绘效果的协调上。

如：浅色的图案配深底色，深色的图案配浅底色或色彩略亮鲜艳的底色。

二、教学设计基于以上对教材和学生的情况分析，对本课的教学进行如下的思考和设计。

1）创设情境，激发学习热情。

在课的导入阶段，采用了教师变小魔术的方式，学生的注意力一下子集中起来了，激起他们学习的欲望，概括出蜡具有排水性的`特点。

并非常自然地过渡到民间蜡染工艺的欣赏和介绍，使学生听来饶有兴趣。

2）实践体验，引导学生思考。

由于有前面一课的的技能积累，新授部分直接放手让学生自己尝试制作。

可多让学生动手试一试，想一想，培养他们独立思考的能力。

第一次完成作品以后对制作过程中出现的上蜡、染色问题进行交流，此时教师再加以引导，将取得事半功倍的效果。

3）观察比较，促进生生交流。

此课中，我设计多处地方让学生以小组的方式进行讨论，促进学生之间的互动。

同时通过蜡染作品的观察比较，了解传统与现代蜡染图案的不同，概括出传统蜡染图案以对称型、线型纹样为主。

现代蜡染图案造型简洁、夸张，线条较为粗，用点、线、面来表现对象的特点。

最后让学生欣赏富有童趣的纸蜡染作品，使他们对自己的创作更充满信心。

人教版九年级上册初中美术《第4课蜡染与扎染》教案一、教学目标：知识与技能：1. 了解蜡染和扎染的历史渊源、制作原理和基本方法。

2. 能够描述蜡染和扎染的制作过程和方法。

过程与方法：1. 通过观察、分析和实践，使学生掌握蜡染和扎染的制作过程和方法。

2. 能够运用所学技巧制作简单的蜡染和扎染作品。

情感、态度和价值观：1. 培养学生对于传统文化的热爱和尊重。

2. 提高学生的审美能力和创造精神。

二、教学重点与难点：教学重点：1. 掌握蜡染和扎染的制作方法和基本步骤。

2. 理解蜡染和扎染的历史渊源和文化内涵。

教学难点：1. 如何引导学生通过观察和实践，掌握蜡染和扎染制作方法的要点和难点。

2. 培养学生的创造力和审美能力。

三、学情分析：学生对于手工艺制作具有较高的兴趣，他们喜欢参与实践性的活动。

同时，学生对于传统文化和手工艺品的认识和了解程度有所不同。

因此，在教学过程中，需要提供足够的实践机会，引导学生通过观察和实践，深入理解蜡染和扎染的制作过程和技巧。

此外，教师应根据学生的不同程度和兴趣，提供差异化的指导和辅导，激发他们的创造力和想象力。

四、教学过程：导入教师：大家好！今天我们要学习的是九年级上册第二单元《情趣浓郁能工巧匠》，第4课《蜡染与扎染》。

请问，你们知道蜡染和扎染是什么吗？对这两种工艺你们有什么了解？学生：（思考一会儿）蜡染和扎染应该是一种手工艺制作吧，通过染料和特殊的技法制作出漂亮的花纹。

教师：很好！蜡染和扎染确实是一种手工艺制作，它们在我们的传统文化中有着重要的地位。

接下来，我会给大家介绍一些蜡染和扎染的知识。

呈现与讨论教师：首先，我将通过图片和视频来展示一些蜡染和扎染的作品，让我们一起欣赏一下。

（教师展示蜡染和扎染的图片和视频）教师：你们看到了吗？这些作品色彩鲜艳，图案精美。

蜡染和扎染是一种将染料添加到织物上的技术，通过特定的方法使染料只渗透到某些部分，创造出独特的花纹和图案。

你们觉得它们有什么特点和区别呢？学生：蜡染和扎染都是手工制作的，但是蜡染是通过涂蜡的方式保护织物上的某些部分不被染料渗透，而扎染是通过绑扎织物的方式限制染料的渗透。

银染中每步的原理
银染是一种将金属银沉积在物体表面的染色方法，主要用于改变物体的颜色和增加其抗氧化能力。

其原理主要包括以下几个步骤：
1. 表面处理：首先需要对物体表面进行适当的处理，以去除表面的杂质和氧化物，以便银能够更好地沉积在物体表面。

常用的表面处理方法有机械打磨、电化学抛光等。

2. 银溶液制备：制备含有银离子的溶液，通常使用银盐（如硝酸银）和适当的酸性溶液配制而成。

溶液的酸性有助于提供适当的环境，使银离子可以稳定存在，同时可调节酸碱度来控制银沉积的速率和均匀性。

3. 沉积过程：将待染物体放入银溶液中，并加上适当的电压，通过电解作用将银离子还原成金属银，并沉积在物体表面，形成一层均匀的银膜。

电压的选取要根据染色效果和物体材质等因素进行调节。

4. 清洗和后处理：将染色后的物体从银溶液中取出，经过适当的清洗，以去除残留的银离子和其它杂质。

清洗后，还可以进行一些后处理步骤，如漂白、封闭等，以增加染色层的光亮度和耐久性。

总的来说，银染的原理是通过电解作用，将银离子沉积在物体表面，形成一层均匀的银膜。

这一过程的关键是控制电解条件和后处理步骤，以确保银染效果的稳
定和持久。

《蜡染与扎染》教学目标认知目标：通过欣赏蜡染扎染作品，使学生了解什么是工艺美术和工艺美术的审美特征，了解蜡染技术的应用。

情感目标：启发学生在欣赏蜡染扎染视频过程中逐步提高欣赏中国工艺美术的能力，充分发挥学生的主体作用和对祖国工艺美术的热爱。

教学的重点与难点重点：让学生了解中国美术中最有代表性的染织技术，理解工艺美术的审美特征。

难点：染织技术过程教学过程导入请同学们分析一下这几幅作品（教材）是什么艺术形式？今天我就带领同学们通过学习工艺美术中的染织——蜡染扎染来一起走进工艺美术的世界。

导入新课（一）蜡染扎染简介蜡染是用蜡把花纹点绘在麻、丝、棉、毛等织物上，然后放入染料缸中浸染，有蜡的地方染不上颜色，除去蜡即现出美丽的花纹。

这是我国古老的防染工艺，历史已很悠久。

扎染工艺分为扎结和染色两部分。

它是通过纱、线、绳等工具，对织物进行扎、缝、缚、缀、夹，等多种形式组合后进行染色。

（二）工艺过程：1、蜡染：画蜡前的处理先将自产的布用草灰漂白洗净，然后用煮熟的芋捏成糊状涂抹于布的反面，待晒干后用牛角磨平、磨光，石板即是天然的磨熨台。

2、点蜡把白布平帖在木板或桌面上，把蜂蜡放在陶瓷碗或金属罐里，用火盆里的木炭灰或糠壳火使蜡融化，便可以用铜刀蘸蜡，然后画出各种图案花纹。

3、染色侵染的方法，是把画好的蜡片放在蓝靛染缸里，一般每一件需浸泡五、六天。

第一次浸泡后取出晾干，便得浅蓝色。

再放入浸泡数次，便得深蓝色。

4、去蜡经过冲洗，然后用清水煮沸，煮去蜡质，经过漂洗后，布上就会显出蓝白分明的花纹来。

（三）蜡染的表现手法蜡染的冰纹就是它让人们为之赞美不绝的性格特征。

冰纹的形成，是蜡画胚布在不断的翻卷侵染中，蜡迹破裂，染液便随着裂缝侵透在白布上，留下了人工难以摹绘的天然花纹，象冰花，象龟纹，真是妙不可喻，同样的图案的蜡画布料，侵染之后，冰纹就似人的指纹一样决不相同，展现出清新自然的美感。

（四）扎染的表现手法扎花即在布料选好后，按花纹图案要求，在布料上分别使用撮皱、折叠、翻卷、挤揪等方法，使之成为一定形状，然后用针线一针一针地缝合或缠扎，将其扎紧缝严，让布料变成一串串"疙瘩"。

《银镜反应的改进与创新》说课稿一、使用教材 人教版，普通高中二年级《有机化学基础（选修5）》 第三章第二节 醛 二、实验器材 铁架台，酒精灯，温度计，石棉网，烧杯，胶头滴管，试管，橡胶塞，试管刷，试管架，洗瓶，2%硝酸银溶液，3%硝酸银溶液，2%氨水，20%氢氧化钠溶液，4%葡萄糖溶液，25%双氧水，6mol/L 氯化铁溶液三、实验创新要点 降低操作难度，同时不需加热就能快速取得更明显的实验效果 四、实验设计思路五、实验教学目标 （一）知识与技能1.掌握银镜反应的原理及醛基的性质。

2.学会用控制变量的方法进行实验条件的改进。

（二）过程与方法培养学生实验探究能力、创新能力、观察能力和分析推理能力。

（三）情感态度与价值观1.培养学生的绿色化学思想和进行实验基本操作的能力。

2.培养学实验创新设计意识和探究意识。

六、实验教学内容根据传统实验中学生遇到的问题，提出实验改进的目标，根据反应原理，结合影响反应速率的条件，确定改进的方向并进行实验验证，最终形成改进后的试验方案并在此基础上进行趣味性实验，提高学生兴趣。

最后采用更环保、更快捷的方法进行银镜的处理，完美的结束整个实验过程。

七、实验教学过程（一）我的设想1.传统银镜反应实验（1）在洁净的试管里加入1mL 2%的硝酸银溶液。

（2）一边摇动试管,一边逐滴滴入2%的稀氨水直到最初产生的沉淀恰好溶解。

（3）滴入3滴乙醛溶液,振荡,在热水浴中温热。

2.学生的困难（1）配制银氨溶液时氨水易过量，需重新配制；（2）水浴加热时有的学生比较好奇，水浴加热时晃动试管使实验失败。

3.设想能否不加热就能快速的取得更好的实验效果？（二）我的探究1．反应条件探究（1）实验原理：CH2OH(CHOH)4CHO+2[Ag(NH3)2]++2OH—△CH2OH(CHOH)4COO—+NH4++ Ag↓+3NH3+H2O（2）影响因素：温度、浓度（3）药品选择：经过180多组实验，思考----改进----再实验，最终确定药品选择、浓度、用量及添加顺序。

《色彩的魅力-染纸》说课稿《色彩的魅力-染纸》说课稿（一）主要内容：本课的目的是运用吸水性很强的生宣纸和透明水彩色，通过折、染等方法制作出美丽的染纸图案。

我们的祖先在长期的生产劳动中创造了灿烂的印花、染色文化，留下了丰富多彩的印染工艺品，深受人们的喜爱，并流传到世界各地。

虽说，在世界许多民族发展的历史进程中都存在过，并都各自独立的、自发的产生和发展，然而中国的印染工艺历经千年、生生不息，以其浓郁的民族特色和精湛的技艺，独树一帜。

为了使学生了解我们的民族，了解民间艺术，激发学生的民族自豪感，发展学生对美的感悟力、鉴赏力和创造力，同时也为了提高学生的综合素质，精心设计了这一课。

本课既能培养学生的绘画兴趣和能力，又能与传统教育紧密结合，使学生既把自己学到的、头脑中积累的图案图形学有所用，又培养工艺制作的严谨性，同时也对学生了解有关美术知识、民间历史也很有必要的。

（二）教学目的：知识与技能：染纸的基本方法过程与方法：学习用浸、点、染等多种方法，制作出美丽的染纸图案。

情感态度与价值观：染纸图案是民间图案的一种，通过学习，激发学生热爱我国民间艺术的情感。

（三）教学重点、难点：根据本课的特点和学生实际情况，学习不同的折纸方法，学会染纸的染色方法是重点，折纸的方法、浸染的面积和时间的把握是难点。

二、说教法在授课过程中，我主要通过直观演示法、情境陶冶法，讲解法、谈话法、示范法、练习法、巩固创新法等多种方法综合使用来解决本课的重难点的。

1、直观教学法，激发学生学习兴趣，启发学生主动学习。

使复杂的教学过程变的简单、直观，吸引了学生的注意力，激发学生兴趣，启发学生主动学习的积极性。

例如：讲解示范各种染色方法。

2、讲解法的运用，使学生开阔眼界，增长知识。

比如：讲完折纸、染纸的方法后进行演示，看老师都用了哪些方法，怎样的步骤。

学生通过观察，兴趣较高，把学生积极性调动起来，很快通过比较得出结论，进而学生也会在自己的脑子里勾画出各种自己创意的美丽图案。

赣美版美术二年级上册《第7课小扎染》说课稿1一. 教材分析《第7课小扎染》是赣美版美术二年级上册的一课。

本课主要让学生了解和掌握扎染的基本技巧，培养学生对美术的兴趣和爱好，提高学生的审美能力和创造力。

教材内容丰富，包括扎染的历史、扎染的基本技巧、扎染作品的欣赏等。

通过学习，学生可以了解到扎染是我国传统的民间艺术，具有悠久的历史和独特的魅力。

二. 学情分析二年级的学生对美术有着浓厚的兴趣，他们喜欢通过绘画、手工等方式表达自己的情感和想法。

然而，他们对扎染这一传统艺术可能还不够了解，需要在教学中逐步引导和培养。

学生的动手能力较强，但审美能力和创造力有待提高。

因此，在教学过程中，我要注重培养学生的审美意识和创新精神。

三. 说教学目标1.知识与技能目标：了解扎染的历史，掌握扎染的基本技巧，能够独立完成一幅扎染作品。

2.过程与方法目标：通过观察、实践、合作等环节，培养学生的动手能力、审美能力和创造力。

3.情感、态度和价值观目标：培养学生对传统艺术的热爱，提高学生的审美素养，培养学生的创新精神。

四. 说教学重难点1.教学重点：扎染的基本技巧和制作过程。

2.教学难点：对扎染作品的欣赏和评价，以及创新能力的培养。

五. 说教学方法与手段1.教学方法：采用启发式、示范法、合作学习等教学方法，引导学生主动探究、积极参与。

2.教学手段：利用多媒体课件、实物展示、示范操作等手段，为学生提供直观、生动的学习资源。

六. 说教学过程1.导入新课：通过展示扎染作品，引导学生欣赏和讨论，激发学生的学习兴趣。

2.讲授新课：介绍扎染的历史、基本技巧和制作过程，示范操作，让学生直观地了解扎染。

3.实践环节：学生分组合作，进行扎染实践，教师巡回指导，解答学生的疑问。

4.展示评价：学生展示自己的作品，互相评价，教师给予肯定和指导。

5.总结拓展：总结本节课的学习内容，引导学生关注传统艺术，激发学生的创新意识。

七. 说板书设计板书设计简洁明了，突出重点，主要包括扎染的历史、基本技巧和制作过程。

第4课《蜡染与扎染》说课稿说教材：蜡染与扎染都是我国优秀的，应用最广的民族民间美术工艺。

通过本单元的学习，使学生了解我国民间艺术的多元文化，意识到绘画的表现形式是多种多样的。

本课属于“造型•表现”学习领域。

本课选用蜡染、扎染这一民间艺术作为学习内容，旨在介绍蜡染、扎染技术及其优秀的作品，了解它的发展状况以及这种民间工艺蕴含的少数民族文化，了解它们对于美化生活的作用。

在感受蜡染、扎染艺术魅力的同时，运用蜡染图案特征创造装饰画，模拟扎染的材质工具及艺术特征进行染制，体验蜡染和扎染的制作乐趣，提高手脑的协调能力。

说学情：学生们对于蜡染与扎染不是很了解，本节课介绍了扎染和蜡染的基本原理，体会扎染和蜡染特有的艺术魅力，掌握其基本技法并能在生活中灵活应用扎染、蜡染工艺进行简单的艺术创作，以此传达自身的审美意识，发挥艺术创造个性。

在学习中学生表现出浓郁的学习兴趣，通过案头小摆设的设计制作练习，发现和感知生活中的美，提高动手操作能力和设计意识。

说教学目标：1、通过学习，进一步了解我国的民间艺术，增强其民族自豪感。

2、掌握扎染与蜡染的表现技法。

3、培养学生的学习情趣，激发其表现的欲望。

说教学重点：通过欣赏、讨论和材料汇总等方式认识扎染与蜡染艺术的美感体验及表现技法的掌握。

说教学难点：了解蜡染这种民间艺术形式的特点和意义，体验蜡染、扎染的创作效果。

教学准备：1、教具：ppt、范画若干幅、示范用工具材料（蜡笔、水彩颜料、毛笔、水罐、调色盘、剪刀）2、学具：蜡笔（油画棒）、水彩颜料、水罐、毛笔、剪刀、调色盘。

说教学过程：一．组织教学：二．导入新课：在上课之前老师先给同学们表演一个魔术（教师用事先准备好的帽子、白布、蜡染花布、扎染花布表演帽子变花布的魔术）吸引学生的注意力。

教师提问：同学们知道这块白布是怎么染上颜色的吗？用了什么方法？教师总结：这个布得颜色和花纹可不是老师变出来的哦，是用了蜡染和扎染的技术染的。

我们看这些花布和你们平时见到的有什么差别呢？学生自由大胆发言。

别人用的protocol.01，切带。

用手术刀切下条带，并切成2～3mm3大小。

2，超纯水涡旋振荡洗2次，10min/次3，考染条带50mM NH4HCO3/ACN 1：1 混合，超声脱色5min或37℃脱色20min，吸去液体。

重复这一步，直至溶液和胶块无色。

银染条带用30mM K3Fe(CN)6和100mM Na2S2O3 1:1 混合，银颜色褪去后水洗至无色。

4，50mM NH4HCO3/ACN 1：1 涡旋振荡洗一次。

5，加100%乙腈(ACN)振荡脱水至胶粒变白，吸去液体，真空干燥5min。

6，加10mM DTT 50ul（1M母液以25mM NH4HCO3稀释）淹没胶块，振荡混匀至胶块泡胀透明。

56℃ 1h.7，冷却至室温，吸干，快速加55mM 碘代乙酰胺（IAM）50ul（淹没胶块），振荡混匀。

（注意快速，避光！）暗处放置45min。

8，25mM NH4HCO3，50mM NH4HCO3/ACN 1：1，100% ACN各洗一次，乙腈ACN脱水至胶粒变白。

真空干燥5min。

9，配制酶反应液。

0.1ug/ul酶储液以25mMNH4HCO3稀释。

考染样品1：10稀释，银染1：20～1：40。

酶与蛋白的质量比约1/40，在1/20~1/100之间都可以。

加入酶液的量以淹没泡胀后的胶体积为宜。

稍离心，让胶块与酶液充分接触，冰上或4℃ 30min。

10，待溶液被胶块充分吸收，吸去多余酶液，加25mM NH4HCO4淹没胶块再多10～20ul，37℃消化过夜。

11，加终浓度1%甲酸（FA）终止反应，振荡混匀，离心。

吸出液相转至新的Ep pendolf管中。

12，胶块用60%ACN/0.1%FA萃取2次，每次15min，吸出液相，合并三次抽提的溶液。

14，溶液真空离心干燥。

0.1%FA水溶液20ul溶解肽段。

-20℃保存待分析。

技术原理详解第一步，脱色。

考染条带用NH4HCO3缓冲液/30%-50%有机溶剂（一般是乙腈）多次水浴超声至胶粒无色，盐离子/有机溶剂的组成同时降低染料和蛋白的盐键和疏水相互作用。

常用的蛋白质染色试剂分为已考马斯亮蓝为代表的有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。

其中考马斯亮蓝染色法的应用较为广泛，现将其与其他的蛋白质染色方法（主要是银染法）作一比较，帮助大家更好地去选择合适的蛋白质染色方法。

蛋白质的染色常用的有4类：有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。

其中有机试剂染色以考马斯亮蓝染色法（Coomasie brilliant blue，CBB）为代表，在蛋白质分析中常用，但对低丰度蛋白质的显现较差;银染灵敏度虽高，却常与质谱不兼容;荧光染色以SYPRO试剂为主，蛋白质检测灵敏度高，能兼容质谱，但由于需要配备特殊的检测仪器及试剂的昂贵，未被作为常规方法使用;而同位素显色则存在安全性和操作局限性等问题。

因此，筛选简便、节约、检测灵敏度高、质谱兼容的蛋白质着色法是蛋白质组研究所需。

由于考马斯亮蓝染色法的广泛运用，近年来就考马斯亮蓝染色法在提高其灵敏性方面研究者们作了许多改进，方法众多，评价不一。

我们在作双向凝胶电泳时，将常用的几种考马斯亮蓝染色法及银染进行了比较，并就其染色影响因素作出分析。

试剂固相pH梯度干胶条（IPG strip pH3-10NL，IPG strip pH5-8，17cm）、urea、CHAPS、TBP、DTT、Bio-Lyte 3/10 Ampholyte、IAM、SDS、Tris、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、CBB-G250均为BIO-RAD公司产品。

硫酸铵及磷酸均购自成都科龙试剂厂。

AgNO3为Sigma公司出品。

Protein molecular weight marker #SW0431为MBI公司出品。

甲醛、Na2S2O3与Na2CO3分别为成都天华科技股份有限公司、重庆北碚化学试剂厂和天津市塘沽鹏达化工厂产品。

仪器IPGphor等电聚焦仪、proTEANⅡ垂直电泳仪、Power PAC1000电泳仪、加样溶胀槽、GS-800 Calibrated Densitometer扫描仪、PDQuest凝胶图像分析软件均为BIO-RAD公司产品。

方法：质谱法原理：一、利用MALDI-TOF质谱仪根据肽质量指纹图谱(Peptide Mass Fingerprinting, PMF)与蛋白质数据库中蛋白质的理论PMF比对，就可以鉴定该蛋白质。

优点：速度快，通量高，方法简便。

缺点：灵敏度不足，可检测到的肽段少，对数据库检索是不利的。

肽段分子量精确度往往不够理想，影响鉴定结果。

肽段分子质量在2000以上时，在MALDI-TOF-MS中的分辨率会有所下降。

蛋白质数据库仍不完善。

二、利用ESI-MS质谱仪由于MS/MS具有结构分析功能，可以获得检测到的每一肽段的序列。

根据一级质谱(MS)测得的精确分子质量和串联质谱(MS/MS)所得的序列信息，通过蛋白质数据库的检索鉴定蛋白质种类。

优点：通过串联质谱大大增加了蛋白质鉴定的准确性。

对图谱的精确度和分辨率要求不如PMF高。

采用纳升喷雾提高检测的灵敏度。

缺点：通量与速度不如MALDI。

数据库检索比较费时。

仪器：BrukerAutoflex Ⅱ（MALDI-TOF-TOF-MS）；Finnigan LCQ Deca Xp / Finnigan LTQ样品要求：1、防止角蛋白污染2、样品状态：液体、固体或胶内蛋白质（接受考马斯亮兰染色和银染样品鉴定）3、含盐量：挥发性无机盐< 20 mM; 不挥发性无机盐< 5mM4、不少于200 ug /一块胶（银染）；5、胶内蛋白质鉴定，蛋白质样品量不少于1mg/一块胶（考马斯亮兰染色）蛋白质鉴定结果常见问题：1、由于角蛋白等蛋白质的污染，造成鉴定为污染蛋白。

2、由于蛋白量过少引起鉴定结果的评分低，可信度不高。

3、由于蛋白质纯度不足，造成鉴定结果为混合蛋白质。

4、由于蛋白质为未知蛋白，造成鉴定无结果。

注意事项：1、推荐采用考马斯亮兰染色。

因为该方法的成功率较高，而银染的成功率则会低很多。

2、银染的方法为快速银染法。

常规银染法不适用质谱鉴定。

3、考马斯亮蓝染色样品的上样量>1mg4、银染法得上样量>0.6mg。

赣美版美术二年级上册《第7课小扎染》说课稿2一. 教材分析《第7课小扎染》是赣美版美术二年级上册的教学内容。

本课主要是让学生了解和掌握扎染的基本技巧和制作方法，通过实践操作，培养学生的审美能力和创造力。

教材中提供了详细的制作步骤和作品示例，帮助学生更好地理解和掌握扎染技艺。

二. 学情分析二年级的学生在生活中对扎染可能有所接触，但不一定深入了解其制作过程和技巧。

学生的动手能力较强，对新鲜事物充满好奇，喜欢动手实践。

但在审美能力和创造力方面，还需要通过教学进行培养和提高。

三. 说教学目标1.知识与技能：了解扎染的基本技巧和制作方法，能够独立完成一幅小扎染作品。

2.过程与方法：通过观察、实践、交流，培养学生的审美能力和创造力。

3.情感态度与价值观：培养学生对传统手工艺的热爱，提高学生对美的感知和欣赏能力。

四. 说教学重难点1.教学重点：掌握扎染的基本技巧和制作方法，能够独立完成一幅小扎染作品。

2.教学难点：对扎染作品的审美评价，以及创新能力的培养。

五. 说教学方法与手段1.教学方法：采用讲授法、示范法、实践法、交流法等，以学生为主体，教师为主导的教学模式。

2.教学手段：利用多媒体展示扎染作品，实物展示扎染过程，以及提供相应的材料和工具，让学生亲自动手实践。

六. 说教学过程1.导入：通过展示扎染作品，引导学生对扎染产生兴趣，激发学生的学习热情。

2.讲解：讲解扎染的基本技巧和制作方法，让学生了解扎染的过程和要点。

3.示范：教师示范制作一幅小扎染作品，让学生跟随操作，掌握扎染的技巧。

4.实践：学生独立完成一幅小扎染作品，教师巡回指导，解答学生的疑问。

5.交流：学生展示自己的作品，互相评价，教师进行总结和点评。

6.拓展：引导学生思考如何创新扎染作品，提高学生的审美能力和创造力。

七. 说板书设计板书设计主要包括扎染的基本技巧、制作步骤和作品评价等内容，以简洁明了的方式呈现，方便学生理解和记忆。

八. 说教学评价教学评价主要通过学生的作品、课堂表现和作业完成情况进行综合评价。

常用的蛋白质染色试剂分为已考马斯亮蓝为代表的有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。

其中考马斯亮蓝染色法的应用较为广泛,现将其与其他的蛋白质染色方法（主要是银染法）作一比较，帮助大家更好地去选择合适的蛋白质染色方法。

蛋白质的染色常用的有4类：有机试剂染色、银染、荧光染色及同位素显色。

其中有机试剂染色以考马斯亮蓝染色法(Coomasie brilliant blue，CBB）为代表,在蛋白质分析中常用,但对低丰度蛋白质的显现较差；银染灵敏度虽高，却常与质谱不兼容;荧光染色以SYPRO试剂为主,蛋白质检测灵敏度高，能兼容质谱,但由于需要配备特殊的检测仪器及试剂的昂贵，未被作为常规方法使用;而同位素显色则存在安全性和操作局限性等问题.因此，筛选简便、节约、检测灵敏度高、质谱兼容的蛋白质着色法是蛋白质组研究所需。

由于考马斯亮蓝染色法的广泛运用,近年来就考马斯亮蓝染色法在提高其灵敏性方面研究者们作了许多改进，方法众多，评价不一。

我们在作双向凝胶电泳时，将常用的几种考马斯亮蓝染色法及银染进行了比较，并就其染色影响因素作出分析.试剂固相pH梯度干胶条(IPG strip pH3—10NL，IPG strip pH5-8,17cm)、urea、CHAPS、TBP、DTT、Bio—Lyte 3/10 Ampholyte、IAM、SDS、Tris、丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、CBB—G250均为BIO—RAD公司产品.硫酸铵及磷酸均购自成都科龙试剂厂。

AgNO3为Sigma公司出品。

Protein molecular weight marker #SW0431为MBI公司出品。

甲醛、Na2S2O3与Na2CO3分别为成都天华科技股份有限公司、重庆北碚化学试剂厂和天津市塘沽鹏达化工厂产品。

仪器IPGphor等电聚焦仪、proTEANⅡ垂直电泳仪、Power PAC1000电泳仪、加样溶胀槽、GS—800 Calibrated Densitometer扫描仪、PDQuest凝胶图像分析软件均为BIO-RAD公司产品。

沪教版美术二年级上册《第9课漂亮的染纸》说课稿2一. 教材分析《第9课漂亮的染纸》是沪教版美术二年级上册的一课，本课主要让学生了解和掌握染纸的基本技巧和创作方法，培养学生的创新意识和审美能力。

教材中提供了多种染纸的图案和样式，以及制作染纸的步骤和技巧。

通过本课的学习，学生能够掌握染纸的基本制作方法，创作出自己独特的染纸作品。

二. 学情分析二年级的学生已经具备了一定的手工制作能力和审美意识，他们对手工制作活动充满兴趣，并且喜欢通过实践活动来表达自己的思想和情感。

然而，学生在染纸制作方面可能还没有太多的经验，需要通过本课的学习来培养和提高。

三. 说教学目标1.知识与技能：学生能够了解染纸的基本制作方法和技巧，能够独立完成染纸作品的创作。

2.过程与方法：学生通过观察、实践和交流，培养自己的创新意识和审美能力。

3.情感态度与价值观：学生通过染纸制作活动，培养对美术的兴趣和爱好，提高自己的审美素养。

四. 说教学重难点1.教学重点：学生能够掌握染纸的基本制作方法和技巧，创作出自己独特的染纸作品。

2.教学难点：学生能够灵活运用染纸技巧，创作出具有个性和创意的染纸作品。

五. 说教学方法与手段本课的教学方法以实践教学为主，结合讲授法、示范法和交流法。

在教学过程中，教师会向学生讲解染纸的基本制作方法和技巧，并进行示范。

学生通过观察和实践，掌握染纸的制作方法，并能够独立创作。

同时，教师会鼓励学生之间的交流和合作，培养学生的创新意识和审美能力。

六. 说教学过程1.导入：教师通过展示一些染纸作品，引起学生的兴趣和好奇心，引出本课的主题。

2.讲解与示范：教师讲解染纸的基本制作方法和技巧，并进行示范，让学生了解和掌握染纸的制作过程。

3.实践与创作：学生根据所学的方法和技巧，进行染纸的制作，创作出自己独特的作品。

4.交流与展示：学生之间进行作品的交流和展示，分享自己的创作心得和体验。

5.总结与反思：教师对学生的作品进行评价和总结，学生进行自我反思和评价。