核移植
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核移植去核方法
核移植去核方法是指在进行核移植时,首先需要将受体细胞的细胞核去除,然后再将供体细胞的细胞核移植到受体细胞内。
这一步骤是核移植技术中至关重要的一环,其成功与否直接影响着核移植的效果和结果。
在进行核移植去核方法时,需要注意以下几点:
1. 选择合适的细胞,在进行核移植去核方法时,首先需要选择合适的供体细胞和受体细胞。
供体细胞的细胞核应该具有所需的遗传信息,而受体细胞则需要具有良好的细胞活力和生长状态。
2. 去除细胞核,去除受体细胞的细胞核是核移植去核方法中的关键步骤之一。
通常可以利用显微操作技术,通过细胞抽吸或化学方法来去除细胞核。
3. 移植供体细胞核,在成功去除受体细胞的细胞核后,需要将供体细胞的细胞核移植到受体细胞内。
这一步骤需要精准的操作技巧和准确的时间控制,以确保细胞核移植的成功率。
4. 促进融合,在完成细胞核移植后,需要促进供体细胞核和受体细胞的融合,以实现新细胞的形成。
通常可以利用细胞融合剂或电脉冲等方法来促进细胞核的融合。
核移植去核方法的成功与否直接关系到核移植技术的效果和结果。
因此,在进行核移植去核方法时,需要严格控制操作步骤,确保每一个环节都能够顺利进行。
同时,还需要注意细胞的状态和环境条件,以提高核移植的成功率和效果。
总之,核移植去核方法是核移植技术中的重要步骤,其成功与否直接关系到核移植的效果和结果。
在进行核移植去核方法时,需要选择合适的细胞、精准的操作技巧和准确的时间控制,以确保核移植的成功率和效果。
希望本文所述内容能够对核移植去核方法有所帮助。
核移植去核方法核移植是一种重要的生物技术手段,它可以用来研究细胞的功能、基因的表达以及生物发育等问题。
而在进行核移植过程中,去除细胞核是一个必不可少的步骤。
本文将介绍一种常用的核移植去核方法,以帮助读者更好地理解和掌握这一技术。
首先,进行核移植去核的准备工作非常重要。
在操作之前,需要准备好显微镜、细胞培养皿、细胞培养基、细胞分离酶等实验器材和试剂。
另外,还需要提前将需要进行核移植的细胞培养好,以确保细胞的状态良好。
接下来,我们将介绍一种常用的核移植去核方法——玻璃针法。
首先,将需要进行核移植的细胞放置在显微镜下,通过调节显微镜的放大倍数,找到细胞核的位置。
然后,使用一根细长而尖锐的玻璃针,轻轻地刺破细胞核的边缘,使其裂开。
接着,将玻璃针插入细胞核内部,轻轻地搅动,使细胞核与胞质分离。
最后,用吸管轻轻地吸走细胞核,完成去核的过程。
除了玻璃针法外,还有一种常用的核移植去核方法是化学溶解法。
这种方法利用化学试剂来溶解细胞核,从而实现去核的目的。
常用的化学溶解剂包括牛血清白蛋白、十六烷基三甲基溴化铵等。
这些试剂可以破坏细胞核的结构,使其溶解在细胞质中,从而达到去核的效果。
在进行核移植去核的过程中,需要注意一些操作细节。
首先,操作时要保持器械和试剂的无菌,以避免细胞的污染。
其次,去核的过程要轻柔,避免对细胞造成损伤。
最后,需要在培养基中加入适当的生长因子和营养物质,以促进细胞的再生和生长。
总之,核移植去核是核移植技术中的关键步骤,掌握好去核的方法对于成功进行核移植实验至关重要。
通过本文的介绍,相信读者对核移植去核方法有了更清晰的认识,希望能对大家的实验工作有所帮助。
《动物细胞核移植技术及其应用》讲义一、动物细胞核移植技术的基本概念动物细胞核移植技术,简单来说,就是将一个动物细胞的细胞核,移植到另一个去掉细胞核的卵细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,最终发育成一个新的个体。
这个过程就像是给一个失去核心的“房子”重新安装一个“指挥中心”,让它能够重新运作起来。
细胞核是细胞的控制中心,包含了生物体的遗传信息。
通过细胞核移植,我们可以将优良的遗传物质传递下去,创造出具有特定性状的动物个体。
二、动物细胞核移植技术的操作步骤1、供体细胞的准备首先,需要选择合适的供体细胞。
这些细胞可以来自已经分化的体细胞,比如皮肤细胞、肌肉细胞等,也可以是未分化的胚胎干细胞。
选取的细胞要处于良好的生理状态,以确保细胞核的完整性和功能正常。
2、受体细胞的准备受体细胞通常是去核的卵细胞。
去除卵细胞的细胞核是一个精细的操作,需要借助显微镜和微操作工具,以保证去核的准确性,同时又不损伤卵细胞的其他结构和功能。
3、细胞核的移植将准备好的供体细胞的细胞核,小心地注入到去核的卵细胞中。
这一步骤要求非常高的操作精度,以确保细胞核能够完整地进入卵细胞,并与卵细胞的细胞质相互融合。
4、重组细胞的激活和培养细胞核移植完成后,需要对重组细胞进行激活,使其开始发育。
这可以通过化学物质或者电刺激等方法来实现。
激活后的重组细胞会被放入适宜的培养环境中,让其继续发育。
5、胚胎移植当重组胚胎发育到一定阶段后,将其移植到代孕母体的子宫内,让其继续发育直至出生。
三、动物细胞核移植技术的应用领域1、畜牧业在畜牧业中,动物细胞核移植技术可以用于快速繁殖优良品种。
比如,对于产奶量高、肉质好的奶牛或肉猪,可以通过细胞核移植技术大量复制具有这些优良性状的个体,从而提高畜牧业的生产效率和经济效益。
想象一下,如果有一头奶牛产奶量特别高,通过细胞核移植,我们可以让更多的奶牛拥有这样的高产奶基因,是不是就能为奶制品行业提供更多的优质奶源呢?2、医学领域(1)器官移植利用动物细胞核移植技术,可以培育出具有人类基因的动物器官,用于人类的器官移植。
核移植名词解释细胞生物学
核移植是指将一个细胞的细胞核移植到另一个细胞中,从而创建一个克隆体的过程。
在细胞生物学领域中,核移植被广泛应用于研究细胞分化以及特定基因的功能。
在核移植过程中,细胞核被提取并注入到一个去除了自身细胞核的受体细胞中。
这个受体细胞可以是一个受精卵,也可以是一个早期胚胎的细胞。
在注入后,细胞核开始重构,并开始分裂形成新的细胞,这就是克隆体。
核移植技术被广泛应用于基因工程领域。
科学家可以使用核移植技术来克隆动物,如羊、猴子和牛。
此外,核移植技术可以用于治疗某些疾病,如癌症和糖尿病。
尽管核移植技术非常有前途,但其应用还存在一些潜在风险。
例如,克隆动物可能存在某些健康问题,如生长缓慢和免疫系统问题。
此外,核移植技术在伦理和道德层面上也存在争议,因为它可以被用于人类克隆和改变人类基因。
总之,核移植是一个重要的细胞生物学技术,它在医学、农业和科学研究等领域都有广泛的应用。
但是,我们也需要认识到核移植技术的潜在风险和伦理问题,以便更好地管理和控制这个技术的应用。
人类细胞核移植技术的应用前景人类细胞核移植技术是一项展望巨大的医学技术,能够实现细胞核的移植、重组和再生,其重要性和应用前景引起了广泛的关注和研究。
本文将对此技术的应用前景进行探讨。
一、细胞核移植技术的基础人类细胞核移植技术是基于细胞核对生长的控制作用开展的一项技术。
其步骤包括从生物体内提取细胞核、将其移植到细胞空胞中,再通过调节细胞生长环境,实现重组和再生。
这一技术的完成,需要在细胞呈现一定程度的染色体解耦和染色体复制。
目前应用广泛的是手术拿取人体卵细胞,将其质体去除得到孟德尔遗传核或与之等效的细胞体,然后将自愿提供的某个成体生物的某个细胞核植入孟德尔遗传核内,形成克隆胚或胚胎干细胞,从而实现细胞增殖控制技术的应用。
二、细胞核移植技术的应用前景1.替代器官的研究随着人口老龄化程度的加深,取代器官的研究也变得日益重要。
人类细胞核移植技术能够从某一经线细胞中提取核,然后将它植入到干细胞中辅以助长,从而终究实现器官的产生和重组。
这种技术对解决移植手术需求、改善生命质量毫无疑问将起到一定的帮助作用。
2.医学用途医学上,细胞核移植技术可以用来去除细胞质基因 (mtDNA)以消除遗传病遗传风险,因为mtDNA对于转座酶的激活、重编码和染色质的染色方面都具有功用。
利用这种技术,科学家能够起到改善遗传病的目的,但事关伦理道德的问题亟须重视。
3.改良寿命随着医学技术和科学的不断进步,人类已经能够较长时间地拥有健康和较高的生命质量。
细胞核移植技术可以在某种程度上为人类更长久地保持健康生活提供可能性。
4.提升生殖外科技术人类细胞核移植技术能够大大提升生殖外科技术。
举例而言,男性不育是当今男性生殖医学界的一大难题。
细胞核移植技术可以将感觉更佳或更加健康的细胞核移植到已分裂的精子前体细胞内,开展“基因干预”,使精子更加健康,减少发生不育症的概率。
三、结语尽管人类细胞核移植技术的应用前景非常广阔,但是它仍存在许多伦理道德的不确定性。
核移植中卵母细胞激活方法汇报人:日期:•核移植技术概述•核移植中卵母细胞的准备•核移植中的卵母细胞激活方法•激活方法的评估和优化•展望未来研究方向01核移植技术概述核移植技术的发展历程1963年,中国科学家朱洗利用核移植技术成功培育出世界上第一只“没有外祖父的癞蛤蟆”。
1981年,英国科学家维尔穆特(Wilmut)等人利用核移植技术成功培育出第一只克隆羊“多利”。
1952年,Briggs和King首次利用核移植技术成功进行鱼类核移植实验。
核移植技术的定义和基本原理核移植技术的应用场景02核移植中卵母细胞的准备卵母细胞的采集卵母细胞的选择卵母细胞的采集和选择卵母细胞的成熟通过专用的促成熟药物或激素处理,使卵母细胞成熟,以具备受精和发育能力。
卵母细胞的培养在特定培养液中培养成熟的卵母细胞,以保持其活力和受精潜力。
卵母细胞的成熟和培养卵母细胞的去核方法03020103核移植中的卵母细胞激活方法通过直接电流刺激卵母细胞,使其内部发生电生理变化,触发细胞代谢和分裂。
间接电激活通过将卵母细胞浸泡在电激活溶液中,利用溶液中的离子导入电流,实现细胞的电激活。
直接电激活电激活法VS钙离子载体激活使用钙离子载体药物,如A23187或EGTA,增加卵母细胞内钙离子浓度,触发细胞代谢和分裂。
乙醇激活将卵母细胞浸泡在一定浓度的乙醇溶液中,通过乙醇对细胞膜的刺激作用,引发细胞内钙离子释放和激活。
物理机械刺激微针刺破法04激活方法的评估和优化ABCD钙离子载体激活方法蛋白酶激活方法电脉冲激活方法乙醇激活方法激活方法的效果评估激活方法的优化建议综合使用多种激活方法优化电脉冲参数使用保护剂选择适宜的卵母细胞来源05展望未来研究方向提高核移植效率的研究方向寻找更优的核移植方法01优化培养条件02建立高效的细胞系03研究其他可能的卵母细胞激活方法探索新的激活方法对比不同激活方法的优劣核移植技术的应用拓展扩大应用范围提高安全性THANK YOU。
核移植的原理核移植是一种重要的生物技术手段,可以用来研究细胞的发育和分化、动物的克隆等。
核移植的原理是将一个细胞的细胞核移植到另一个细胞内,使得受体细胞表现出供体细胞的特性。
这项技术在植物和动物的研究中有着广泛的应用,也为生物医学研究和临床治疗提供了重要的手段。
核移植的原理可以分为三个步骤,细胞核提取、受体细胞准备和核移植。
首先,需要从供体细胞中提取细胞核,这通常是通过离心、超声波或化学方法来实现的。
接下来,需要准备一个受体细胞,这个细胞可以是受精卵、胚胎细胞或体细胞。
最后,将提取的细胞核移植到受体细胞内,通常是通过微注射或电融合的方法进行。
核移植的原理涉及到细胞的特性和功能。
细胞核内含有遗传物质DNA,它携带了细胞的遗传信息,控制着细胞的生长、分化和功能。
当一个细胞核被移植到另一个细胞内时,它可以重新编程受体细胞的功能,使得受体细胞表现出供体细胞的特性。
这种重新编程的过程涉及到基因的表达和调控,对于细胞的发育和分化有着重要的影响。
核移植的原理不仅在生物学研究中有着重要的应用,还在临床医学和农业生产中发挥着重要的作用。
在临床医学中,核移植技术可以用来治疗一些遗传性疾病,也可以用来培育器官移植的供体。
在农业生产中,核移植技术可以用来培育优良的植物和动物品种,提高农作物的产量和质量。
总之,核移植是一种重要的生物技术手段,它的原理涉及到细胞核的提取、受体细胞的准备和核移植。
这项技术在生物学研究、临床医学和农业生产中有着广泛的应用前景,对于推动科学技术的发展和人类福祉有着重要的意义。
希望通过对核移植原理的深入研究,可以更好地发挥这项技术的潜力,为人类社会的发展做出更大的贡献。
细胞核移植的历史记录
细胞核移植,也被称为克隆技术,是一种重要的生物技术手段,它可以用来复制动植物的基因型。
细胞核移植的历史可以追溯到20
世纪50年代,以下是一些重要的历史记录。
1952年,英国科学家罗伯特·布鲁克斯在一项实验中首次成功
地将青蛙的细胞核移植到另一只青蛙的卵细胞中。
这项实验展示了
细胞核移植技术的潜力,为后来的研究奠定了基础。
1962年,美国科学家约翰·格丁斯在实验中成功地将细胞核从
一只青蛙的卵细胞中移植到另一只青蛙的卵细胞中,这标志着细胞
核移植技术在动物研究领域取得了重大突破。
1996年,苏格兰罗斯林研究所的伊恩·威尔穆特团队成功克隆
了一只名为多利的羊,这是细胞核移植技术在哺乳动物身上的重大
突破。
多利成为了世界上第一只通过细胞核移植克隆出来的哺乳动物。
细胞核移植的历史记录显示,这项技术经历了多年的研究和实验,才取得了突破性的进展。
如今,细胞核移植技术已经被广泛应
用于动植物的研究和生殖医学领域,为人类社会带来了许多益处。
随着科学技术的不断发展,相信细胞核移植技术将会有更广阔的应用前景。
哺乳动物体细胞核移植中供体细胞的研究进展摘要: 本文对哺乳动物核移植供体细胞的研究进展进行了综述。
主要涉及细胞类型、细胞年龄和细胞所处的周期时相对核移植胚胎发育的影响, 以及目前核移植技术存在的问题等。
关键词: 体细胞核移植; 供体细胞; 哺乳动物用动物体细胞进行核移植成功的历史虽然只有 6 年的时间, 却充满了激动人心的重大技术发明和新发现, 但随着研究的深入, 仍然有许多困扰人们思想的问题得不到很好的解决或者提出具有权威性的解决方案。
主要决定供体细胞核能在受体卵母细胞中被重新程序化的因素至今仍是个谜, 因此, 进一步研究核移植过程中所涉及的每一个细节不但必要,而且对于工厂化生产具有正常生理功能的克隆动物是非常重要的。
1核移植供体细胞的细胞类型2核移植所用细胞包括动物干细胞、胎儿体细胞和成年体细胞等, 由于建立大动物和人的干细胞系比较困难, 因此目前的核移植研究多用后两种细胞。
大部分体细胞克隆动物的供核细胞主要来源于与生殖系统相关的体细胞, 如乳腺上皮细胞、卵巢颗粒细胞和输卵管上皮细胞。
这些与生殖有关的体细胞克隆的成功率明显高于其它类型的体细胞。
近两年用非生殖细胞系细胞(尤其是胎儿成纤维细胞)做供体也得到了大量的克隆试验结果, 成年动物体细胞不但可以在体外长期培养, 而且可以经过长时间的体外转基因阳性克隆选择, 最终发育为转基因核移植胚胎。
1 . 1胎儿成纤维细胞发育过程中的胎儿成纤维细胞具有很多优点:①来源广泛, 整个胎儿组织和器官均可以作为胎儿成纤维细胞的来源; ②在老化前可以增殖很多代, 细胞增殖很快而且G1 期长。
胎儿成纤维细胞体外群体倍增时间平均为17~24 h, 牛前8 代细胞为27 . 4h[1 ], 并且在衰老之前可以达到60 次群体倍增[2, 3 ]。
根据报道, 猪胎儿成纤维细胞体外传代8 次, 经过200 d 以上仍未见有衰老迹象[4 ]; 牛胎儿在体外经过120 d, 传18 代, 细胞经历了96 次群体倍增所得到的核移植胚胎的发育率与第 3 代细胞的核移植胚发育率相似[5 ]; ③可以利用再克隆胎儿成纤维细胞来延长细胞的体外生存时间[6 ]。
研究证明, 第一和第二代克隆胚胎之间发育率无显著差异[7 ], 而且第三代克隆胚胎的发育率比前两代要高[8 ] ; ④胎儿细胞通过电融合或者脂质转染基因的可操作性强, 有利于转基因工作的开展, 将转基因技术与核移植技术结合, 可以生产用于治疗人类疾病的动物模型、提供药用蛋白和营养蛋白的动物乳腺生物反应器以及用于异种器官移植动物, 为人类彻底改变动物育种模式、迅速扩大优良动物种群和解决人类医学重大难题展现了十分诱人的前景, 因此转基因所用细胞已将胎儿成纤维细胞作为首选[6~11 ]。
用胎儿细胞作核供体获得了一批核移植动物,而且获得了表达目的基因的绵羊、牛、山羊和猪的转基因核移植动物, 所用的细胞以胎儿成纤维细胞为主。
1 . 2成年动物体细胞1997 年, 世界上第一只成年绵羊乳腺上皮细胞核移植后代Do lly 的诞生[12 ], 标志着核移植技术进入了一个崭新的发展阶段。
这一成就具有划时代的意义, 而且进一步证实了基因活性学说的正确性, 证明高度分化的体细胞仍然具有基因组的等同性, 其细胞核仍然具有支持哺乳动物全程发育的全能性。
此后, 以不同动物不同组织来源的体细胞进行核移植均得到了后代, 这些细胞包括颗粒ö卵丘细胞、鼠尾尖细胞、乳腺细胞、皮肤成纤维细胞、输卵管和子宫上皮细胞、转染或未转染的牛生殖嵴细胞、牛肌肉细胞、牛初乳乳腺上皮细胞、肺组织细胞、兔子成纤维细胞等。
成勇[13 ]认为重构胚的发育率与供核细胞的细胞类型有关, 由颗粒细胞构建的重构胚的发育率( 25 . 0% ) 高于成纤维细胞构建的重构胚(12 . 9% )。
2供体细胞年龄和细胞周期时相对核移植胚发育的影响供体细胞核和受体卵母细胞质之间的相互作用是核移植成功的关键因素之一。
目前所用的受体细胞质一般是M Ê期卵母细胞, 供体细胞所用细胞种类极其广泛, 但是究竟使用处于哪种细胞时相的细胞用于核移植才最佳至今没有定论。
①供体细胞来源: 目前已经从各种年龄段的成年动物的体细胞获得了出生的克隆动物, 甚至在细胞表达衰老基因EPC- 1, 端粒变短并伴有形态衰老的情况下也能克隆出后代[14 ]。
②细胞体外传代数: 多数核移植采用传代早期的细胞, 这样似乎更有利于核移胚的发育, 不过应用传代晚期的细胞也支持重构胚的发育[5, 15 ]。
Kasi2nathan[16 ]采用一头15 岁成年牛体细胞传10~15代, 甚至18 代细胞用于核移植, 并不影响核移植胚的发育潜力; 2002 年Sezen 用13 岁牛的耳尖成纤维细胞和胎儿成纤维细胞作转基因对比研究, 发现成年体细胞不仅在长达54 d 的体外转基因选择结束后染色体正常, 而且所获得的核移植胚胎的形态、细胞数和染色体核型均很相似[17 ]。
目前的报道说明, 动物体细胞的年龄并不是影响供体细胞转基因核移植的主要因素, 不过还没有见到成年动物体细胞转基因核移植后出生动物的报道, 而且成年动物的体细胞比幼年或胎儿的体细胞的克隆效率要低[18, 19 ], 造成这种状况的原因还不清楚。
③细胞周期时相的选择: G0 和G1 期细胞是首选的供体细胞周期时相。
捕获G0ö G1 期细胞常用的方法有: 饥饿法(包括血清饥饿和亮氨酸饥饿)、细胞周期阻断剂(包括nocodazo l, ro scovit ine, benomyl,aph idico lin 和dem ich ilo ) 处理法、高汇合度法和摇落法。
应用这些方法已成功地获得各种家畜和小鼠等体细胞的核移植胚胎移植后出生的后代。
Poo thapp illai[19 ]比较了这两种时相对体细胞核移植胚胎后期发育的贡献, 发现G0 期细胞不如G1 期作供体效果好。
在Jonathan[1 ]的试验中, 无论用来自同一基因型的成年还是胎儿细胞做供体, 重构胚的发育率都是相似的, 但血清饥饿可以明显的增加胎儿细胞核移植胚胎发育到囊胚的数量。
与之相反,Kǘhho lzer[20 ]的实验证明血清饥饿不能提高卵裂率和囊胚率, 该试验同时证明不仅不同的细胞周期时相(G0 和G1 期)细胞所得到的克隆胚胎的发育率不同, 而且来源于同一细胞系的不同细胞克隆核移植胚的体外发育率也有差异。
现已证明M 期细胞也可以被用来做核移植, 但是所得怀孕母鼠的胎盘重明显增加, 剖检发现胎盘结构明显异常[21 ]。
Cibelli[6 ]也认为处于活跃分裂期细胞均可作为供体细胞, 但该试验中有56%的细胞为二倍体, 这就不能排除细胞仍然处于G0 期的可能性。
从目前的研究来看, 似乎应用处于各个细胞时相的细胞都能得到克隆动物, 但还没有一种伴随核移植动物出生的细胞周期专一性标记物来证明核移植所得后代来源于某一个特定细胞时相[18 ]。
因此深入研究供体细胞类型, 细胞周期, 同步化处理方式,以及细胞的倍增时间等在核移植胚胎发育过程中所起的作用显得异常重要。
3核移植技术存在的问题尽管体细胞核移植仅仅经过了 6 年的时间, 取得了一定的成就, 但是总的核移植效率和转基因效果并不很理想, 例如牛核移植胚能够发育到桑椹胚和囊胚的比率在5%~65%之间, 胚胎移植出生率在0%~83%之间, 生后一周死亡率也在0%~100%之间(以上统计结果因核移植出生动物所属的实验室不同而有差异) ; 绵羊和牛的核移植效率差不多; 山羊核移植胚胎移植时间早, 故无试验统计数据, 但山羊的胚胎发育异常和生后死亡情况也与牛羊相似; 猪的核移植似乎比较难, 至今仅见有2~3例[4, 18, 22 ]报道, 而且其核移植胚胎移植后的出生率仅为1%。
绵羊、牛、山羊和猪胎儿成纤维细胞核移植胚平均只有0 . 5%~2%能发育完全并出生, 而且出生的胎儿同样存在着发育不良而死亡的情况。
因此, 有必要在今后深入研究转基因核移植程序中的每一步骤的精确性, 研究克隆动物的围产期发育异常的机理, 更进一步地研究该技术对克隆动物的健康、活力、数量遗传特性和生殖能力的影响[23 ]。
2002 年7 月,《自然遗传》杂志发表了一篇题为"破译克隆牛初生死亡奥秘"的论文, 文中指出, 出生后早死的克隆母牛, 其X 染色体基因不能正常表达, 可能是它们致死的主要原因[24 ]。
这一重大研究突破在国际科学界产生了强烈反响, 表明我们对于克隆健康的动物迈出了坚实的一步, 这一重要发现对改进克隆技术, 提高治疗性克隆的可行性, 创造出具有正常功能的细胞型有重要指参考文献:所谓细胞核移植技术,就是将供体细胞核移入除去核的卵母细胞中,使后者不经过精子穿透等有性过程即无性繁殖即可被激活、分裂并发育成新个体,使得核供体的基因得到完全复制。
以供体核的来源不同可分为胚细胞核移植与体细胞核移植两种。
【哺乳动物核移植技术研究进展】哺乳动物核移植是将外源的一个细胞核与一个去核卵母细胞结合,产生遗传上同质的动物的技术。
它在动物育种、制备转基因动物、基因治疗及器官移植等方面具有重大的作用。
具体方法『1 供体核的获得』供体核可以是早期胚胎细胞、胚胎千细胞和体细胞。
早期都采用合子核到64细胞期的胚胎细胞核质体分裂球作供体细胞核,80年代开始,随着胚胎干细胞(embr yo stem cells,ES)的建立和对其研究的深入,人们对胚胎干细胞在核移植方面的应用前景寄予厚望,但ES建系太困难,仅在小鼠上获得成功。
Teruhiko Wakayama 等利用ES系克隆小鼠,结果有29%的重构胚在体外能发育到囊胚阶段,移植给假孕小鼠有8%胚胎附植并产下小鼠。
1997年Dolly羊的出现,开始了体细胞的核移植,并发展很快。
1.1 胚细胞用0.2%链霉蛋白酶预处理胚胎,溶去胚胎的胶膜及透明带,分离出单个卵裂球。
消化透明带的时间是影响卵裂球质量的重要因素,作用时间短,透明带不能充分消化,卵裂球不易获得;作用时间长,则影响到卵质膜,容易破裂,在操作时容易失败。
因此,在分离卵裂球时应在解剖镜下监视透明带的消化过程,当透明带变薄,膨胀适度时就应移出,再用适当口径的吸管吹打使之分离。
另外,苏格兰学者Campbell等显微分离胚盘细胞并在体外进行缺血饥饿传代培养,诱使细胞处于“静止”状态,以便调整染色体结构,从而有助于核的重组与发育,他们使用这种方法建立了绵羊TNT4细胞系,该细胞形态类似于胚胎干细胞,但更扁平、上皮化。
1.2 体细胞最早用青蛙肠粘膜上皮细胞获得了后代。
Wilmut等用绵羊乳腺细胞获得Dolly羊。
美国夏威夷大学Ryuzo Yanagimachi教授领导的一个国际科研小组于1998年以小鼠卵丘细胞为核供体,采用吸移管注入,利用机械和化学激活方式进行细胞的融合,成功培育三代克隆小鼠。